Name: using a bipolar electrode to create a temporal lobe epilepsy mouse model by electrical kindling of the amygdala
Uploaded: 2022-06-29T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Using a Bipolar Electrode to Create a Temporal Lobe Epilepsy Mouse Model by Electrical Kindling of the Amygdala at JoVE.com

Forskningen blev støttet af National Natural Science Foundation of China (nr. 82030037, 81871009) og Beijing Municipal Health Commission (11000022T000000444685). Vi takker TopEdit (www.topeditsci.com) for dets sproglige bistand under udarbejdelsen af dette manuskript.

Dette forsøg blev godkendt af den eksperimentelle dyreetiske komité på Xuanwu Hospital, Capital Medical University. Alle mus blev opbevaret i dyrelaboratoriet på Xuanwu Hospital, Capital Medical University. Denne protokol er opdelt i fire dele. De to første dele introducerer metoden til opbygning af elektroden og det elektriske kredsløb ved hjælp af en slæbering til at forbinde elektroderne og EEG-optagelses- / stimuleringsudstyret. Den tredje del beskriver driftsmetoden for elektrodeimplantation, og den fjerde d...

<ol>
	<li>Kurita, T., Sakurai, K., Takeda, Y., Horinouchi, T., Kusumi, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Very+long-term+outcome+of+non-surgically+treated+patients+with+temporal+lobe+epilepsy+with+hippocampal+sclerosis:+A+retrospective+study.">Very long-term outcome of non-surgically treated patients with temporal lobe epilepsy with hippocampal sclerosis: A retrospective study.</a> PLoS One. 11 (7), 0159464 (2016).</li><li>Choy, M., Duffy, B. A., Lee, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optogenetic+study+of+networks+in+epilepsy.">Optogenetic study of networks in epilepsy.</a> Journal of Neuroscience Research. 95 (12), 2325-2335 (2017).</li><li>Aroniadou-Anderjaska, V., Fritsch, B., Qashu, F., Braga, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathology+and+pathophysiology+of+the+amygdala+in+epileptogenesis+and+epilepsy.">Pathology and pathophysiology of the amygdala in epileptogenesis and epilepsy.</a> Epilepsy Research. 78 (2-3), 102-116 (2008).</li><li>Smith, P. D., McLean, K. J., Murphy, M. A., Turnley, A. M., Cook, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Seizures,+not+hippocampal+neuronal+death,+provoke+neurogenesis+in+a+mouse+rapid+electrical+amygdala+kindling+model+of+seizures.">Seizures, not hippocampal neuronal death, provoke neurogenesis in a mouse rapid electrical amygdala kindling model of seizures.</a> Neuroscience. 136 (2), 405-415 (2005).</li><li>Reyes, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amygdala+enlargement:+Temporal+lobe+epilepsy+subtype+or+nonspecific+finding.">Amygdala enlargement: Temporal lobe epilepsy subtype or nonspecific finding.</a> Epilepsy Research. 132, 34-40 (2017).</li><li>Fan, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnosis+and+surgical+treatment+of+non-lesional+temporal+lobe+epilepsy+with+unilateral+amygdala+enlargement.">Diagnosis and surgical treatment of non-lesional temporal lobe epilepsy with unilateral amygdala enlargement.</a> Neurological Sciences. 42 (6), 2353-2361 (2021).</li><li>Dhir, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pentylenetetrazol+(PTZ)+kindling+model+of+epilepsy.">Pentylenetetrazol (PTZ) kindling model of epilepsy.</a> Current Protocols in Neuroscience. , 37 (2012).</li><li>Van Erum, J., Van Dam, D., De Deyn, P. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PTZ-induced+seizures+in+mice+require+a+revised+Racine+scale.">PTZ-induced seizures in mice require a revised Racine scale.</a> Epilepsy &amp; Behavior. 95, 51-55 (2019).</li><li>Carriero, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+guinea+pig+model+of+mesial+temporal+lobe+epilepsy+following+nonconvulsive+status+epilepticus+induced+by+unilateral+intrahippocampal+injection+of+kainic+acid.">A guinea pig model of mesial temporal lobe epilepsy following nonconvulsive status epilepticus induced by unilateral intrahippocampal injection of kainic acid.</a> Epilepsia. 53 (11), 1917-1927 (2012).</li><li>Levesque, M., Avoli, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+kainic+acid+model+of+temporal+lobe+epilepsy.">The kainic acid model of temporal lobe epilepsy.</a> Neuroscience Biobehavioral Reviews. 37, 2887-2899 (2013).</li><li>Fujita, A., Ota, M., Kato, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Urinary+volatile+metabolites+of+amygdala-kindled+mice+reveal+novel+biomarkers+associated+with+temporal+lobe+epilepsy.">Urinary volatile metabolites of amygdala-kindled mice reveal novel biomarkers associated with temporal lobe epilepsy.</a> Scientific Reports. 9 (1), 10586 (2019).</li><li>Li, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+spatiotemporal+dynamics+of+phase+synchronization+during+epileptogenesis+in+amygdala-kindling+mice.">The spatiotemporal dynamics of phase synchronization during epileptogenesis in amygdala-kindling mice.</a> PLoS One. 11 (4), 0153897 (2016).</li><li>Wang, Y., Wei, P., Yan, F., Luo, Y., Zhao, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+epilepsy:+A+phenotype-oriented+review.">Animal models of epilepsy: A phenotype-oriented review.</a> Aging and Disease. 13 (1), 215-231 (2022).</li><li>Fallah, M. S., Dlugosz, L., Scott, B. W., Thompson, M. D., Burnham, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antiseizure+effects+of+the+cannabinoids+in+the+amygdala-kindling+model.">Antiseizure effects of the cannabinoids in the amygdala-kindling model.</a> Epilepsia. 62 (9), 2274-2282 (2021).</li><li>Chipika, R. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amygdala+pathology+in+amyotrophic+lateral+sclerosis+and+primary+lateral+sclerosis.">Amygdala pathology in amyotrophic lateral sclerosis and primary lateral sclerosis.</a> Journal of the Neurological Sciences. 417, 117039 (2020).</li><li>Kuchukhidze, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emotional+recognition+in+patients+with+mesial+temporal+epilepsy+associated+with+enlarged+amygdala.">Emotional recognition in patients with mesial temporal epilepsy associated with enlarged amygdala.</a> Frontiers in Neurology. 12, 803787 (2021).</li><li>Soper, C., Wicker, E., Kulick, C. V., N'Gouemo, P., Forcelli, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optogenetic+activation+of+superior+colliculus+neurons+suppresses+seizures+originating+in+diverse+brain+networks.">Optogenetic activation of superior colliculus neurons suppresses seizures originating in diverse brain networks.</a> Neurobiology of Disease. 87, 102-115 (2016).</li><li>Devinsky, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epilepsy.">Epilepsy.</a> Nature Reviews Disease Primers. 4, 18024 (2018).</li><li>Zhang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interaction+between+thalamus+and+hippocampus+in+termination+of+amygdala-kindled+seizures+in+mice.">Interaction between thalamus and hippocampus in termination of amygdala-kindled seizures in mice.</a> Computational and Mathematical Methods in Medicine. 2016, 9580724 (2016).</li><li>Ghotbedin, Z., Janahmadi, M., Mirnajafi-Zadeh, J., Behzadi, G., Semnanian, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrical+low+frequency+stimulation+of+the+kindling+site+preserves+the+electrophysiological+properties+of+the+rat+hippocampal+CA1+pyramidal+neurons+from+the+destructive+effects+of+amygdala+kindling:+the+basis+for+a+possible+promising+epilepsy+therapy.">Electrical low frequency stimulation of the kindling site preserves the electrophysiological properties of the rat hippocampal CA1 pyramidal neurons from the destructive effects of amygdala kindling: the basis for a possible promising epilepsy therapy.</a> Brain Stimulation. 6 (4), 515-523 (2013).</li><li>Hristova, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Medial+septal+GABAergic+neurons+reduce+seizure+duration+upon+optogenetic+closed-loop+stimulation.">Medial septal GABAergic neurons reduce seizure duration upon optogenetic closed-loop stimulation.</a> Brain. 144 (5), 1576-1589 (2021).</li></ol>

Epilepsi er en gruppe af sygdomme med flere manifestationer og forskellige årsager18; Det skal bemærkes, at ingen enkelt model kan bruges til alle typer epilepsi, og forskere skal vælge en passende model til deres specifikke undersøgelse. Denne undersøgelse introducerer en af de mest tilgængelige metoder til elektrodefremstilling. Forskellige dele af denne metode kan justeres for at tilpasse sig forskellige eksperimentelle forhold.
Denne metode anvender elektroder...

Temporal lobe epilepsi (TLE) er den mest udbredte type epilepsi og har en høj risiko for omdannelse til lægemiddelresistent epilepsi. Kirurgi, såsom selektiv amygdalohippocampektomi, er en effektiv behandling for TLE, og sygdommens epileptogenese og ictogenese undersøges stadig 1,2. Patogenese af TLE har vist sig at forekomme ikke kun i hippocampus, men også i vid udstrækning i amygdala 3,4. For eksempel er både amygdala sklerose og amygdala udvidelsen ofte blevet rapporteret som oprindelsen til TLE anfald 5,6. Betydningen af amygdala kan ikke undervurderes; En amygdala-model er afgørende for studiet af epileptogenese, og der er et presserende behov for en klar illustration af denne model.
Flere tilgange er blevet foreslået for at fremkalde anfald i dyremodeller. Tidligere blev konvulsive lægemidler injiceret intraperitonealt i et tidligt stadium7. Selvom denne metode var praktisk, var placeringen af epileptiske foci usikker. Med udviklingen af stereotaktisk teknologi og et detaljeret dyrehjerneatlas blev intrakraniel lægemiddelinjektion anvendt til at løse problemet med lokalisering8. Imidlertid resulterede manglende intervention for alvorlige anfald i det akutte stadium i en høj dødelighed, og kroniske spontane anfald blev ledsaget af problemet med ustabil interictal og anfaldsfrekvens 9,10. Endelig blev den elektriske tændingsmetode udviklet; Denne metode stimulerer periodisk specifikke hjerneområder flere gange, hvilket gør det muligt at fremkalde anfald med bestemt kontrol af både placering og begyndelsestid11.
En fordel ved denne metode er, at den intrakranielle implantation af elektroder er minimalt invasiv12. Desuden kan sværhedsgraden af anfaldet kontrolleres ved ophør af stimuli, hvilket reducerer dødeligheden forårsaget af anfaldene. Disse ændringer løste manglerne i de tidligere tilgange. Især kan denne model tilstrækkeligt efterligne humane anfald og er især velegnet til undersøgelse af status epilepticus (SE) på grund af dens evne til hurtigt at inducere SE13. Det kan også bruges til screening af antiepileptiske lægemidler14 og i undersøgelser af epilepsimekanismen. Endelig er det velkendt, at amygdala er tæt forbundet med hukommelsesmodulering, belønningsbehandling og følelser15. Forstyrrelser i disse mentale funktioner forekommer ofte hos epileptiske patienter, og derfor kan amygdala epilepsimodellen være et bedre valg til at studere følelsesmæssige problemer i epilepsi16.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 488-conjugated Donkey anti-Rabbit IgG</td>
			<td>invitrogen</td>
			<td>A-21206</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>c-Fos antibody</td>
			<td></td>
			<td>ab222699</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cranial drill</td>
			<td>SANS</td>
			<td>SA302</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dental cement</td>
			<td>NISSIN</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EEG recording and stimulation equipment</td>
			<td>Neuracle Technology (Changzhou) Co., Ltd</td>
			<td>NSHHFS-210803</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>lead-free tin wire</td>
			<td>BAKON</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pin header/Female header</td>
			<td>XIANMISI</td>
			<td></td>
			<td>spacing of 1.27 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silver wire</td>
			<td>A-M systems</td>
			<td>786000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slip ring</td>
			<td>Senring Electronics Co.,Ltd</td>
			<td>SNM008-04</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tungsten wire</td>
			<td>A-M systems</td>
			<td>796000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ultrafine multi-stand wire</td>
			<td>Shenzhen Chengxing wire and cable</td>
			<td>UL10064-FEP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>welding equipment</td>
			<td>BAKON</td>
			<td>BK881</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

using a bipolar electrode to create a temporal lobe epilepsy mouse model by electrical kindling of the amygdala

Amygdala er en af de mest almindelige årsager til anfald, og amygdala musemodellen er afgørende for illustrationen af epilepsi. Imidlertid har få undersøgelser beskrevet den eksperimentelle protokol i detaljer. Dette papir illustrerer hele processen med amygdala elektrisk antænding epilepsi modelfremstilling, med introduktionen af en metode til bipolær elektrode fabrikation. Denne elektrode kan både stimulere og registrere, hvilket reducerer hjerneskade forårsaget af implantering af separate elektroder til stimulering og optagelse. Til langsigtede elektroencefalogram (EEG) optagelsesformål blev glideringe brugt til at eliminere rekordafbrydelsen forårsaget af kabelsammenfiltring og fald af.
Efter periodisk stimulering (60 Hz, 1 s hvert 15. minut) af den basolaterale amygdala (AP: 1,67 mm, L: 2,7 mm, V: 4,9 mm) i 19,83 ± 5,742 gange blev der observeret fuld tænding hos seks mus (defineret som induktion af tre kontinuerlige grad V-episoder klassificeret efter Racines skala). Et intrakranielt EEG blev registreret gennem hele antændingsprocessen, og en epileptisk udledning i amygdalaen, der varede 20-70 s, blev observeret efter antænding. Derfor er dette en robust protokol til modellering af epilepsi, der stammer fra amygdala, og metoden er egnet til at afsløre amygdalas rolle i temporal lobe epilepsi. Denne forskning bidrager til fremtidige undersøgelser af mekanismerne i mesial temporal lobe epilepsi og nye antiepileptogene lægemidler.

Elektroden og kredsløbet gør det muligt at registrere EEG og fungere som en stimulering (figur 1); Denne opsætning undgår kompleksiteten ved implantering, optagelse og stimulering af elektroder separat og minimerer skader på hjernevævet. Anvendelsen af glideringe tillader elektrodeforbindelse med alle typer enheder.
Vi udførte elektrodeimplantationskirurgi på seks raske voksne C57BL/6-hanmus, og elektrisk stimulering blev udført 2 uger efter operationen. ...

Watch this Scientific Journal Video about Using a Bipolar Electrode to Create a Temporal Lobe Epilepsy Mouse Model by Electrical Kindling of the Amygdala at JoVE.com

Using a Bipolar Electrode to Create a Temporal Lobe Epilepsy Mouse Model by Electrical Kindling of the Amygdala

Amygdala spiller en central rolle i temporal lobe epilepsi, som stammer fra og formerer sig fra denne struktur. Denne artikel giver en detaljeret beskrivelse af fremstillingen af dybe hjerneelektroder med både registrerende og stimulerende funktioner. Det introducerer en model af medial temporal lobe epilepsi, der stammer fra amygdala.

Brug af en bipolær elektrode til at skabe en temporal lobe epilepsi musemodel ved elektrisk tænding af amygdala

The amygdala is one of the most common origins of seizures, and the amygdala mouse model is essential for the illustration of epilepsy. However, few ...

Denne protokol foreslog en model af epilepsi med amygdala som oprindelse. Det baner vejen for undersøgelsen af mesial temporal lobe strukturer. Denne model kunne fortolkes som grundlaget for eksperimentet.Da denne protokol er en billig og effektiv metode, så den kan udføres hurtigt i de fleste laboratorier. Demonstration af proceduren vil være Yongchang Lu, en postgraduate i vores laboratorium. Begynd med at samle de forberedte komponenter, der starter med to centimeter lange stykker teflonbelagt wolframtråd med en bjørndiameter på 76,2 mikrometer.Et stykke sølvtråd med en bjørndiameter på 127 mikrometer af samme længde og et sæt på to gange to målte rebstifter. Brug en lighter til at brænde den ene ende af hver wolframtråd for at fjerne fem millimeter af isoleringsbelægningen. Skræl en sektion af ultrafin flerstrenget ledning.Pak ud fra bunden til den øvre ende, hvor det begynder at blive mørkt og fortsætter til toppen. Kombiner denne superfine ledning og wolframtråden ved at klemme den ene ende og forsigtigt dreje den anden, så de to materialer let kan flettes sammen. Træk forsigtigt for at sikre, at ledningerne er tæt pakket ind og skær den overskydende superfine ledning af.Prøv at holde wolframtråden lige gennem hele processen. Fastgør rebstiften til klemmen på svejsebordet med den lange side af stifterne vendt udad. Brug kanylen til at samle loddepasta op og påfør den på stifterne.Opvarm svejsebrænderen til 320 grader Celsius. Smelt og smør noget blyfri tintråd med fakkelspidsen. Overlap den øvre ende af wolframtråden med en nål af rebstifterne og brug loddet på faklen til at binde wolframtråden til stiften.Svejs en anden wolframtråd og en anden sølvtråd til rebstiften på samme måde, så hver ledning svarer til en nål. Skær to varmekrympbare rør lidt længere end den øvre ende af wolframtråden. Sæt dem på loddeforbindelsen af to wolframtråde, og sørg for, at den ledende del er fuldt dækket i røret, således at kredsløbet for de to wolframtråde ikke placeres i serie.Fjern elektroden fra svejsebordets klemme, og hold forsigtigt elektroden med en stor tang, da det er let for elektroder at miste deres form, når det krympelige rør opvarmes. Brug en god varmeledningsevne klemme med lidt mere kraft. Tænd for luftkanalen og opvarm, indtil en temperatur på 320 grader Celsius er nået.Blæs det varmekrympbare rør i flere sekunder, indtil det er strammet. Forstærk elektroden med smelteklæbemiddel. Hold de to wolframtråde og drej dem sammen og hold enderne fra hinanden.Trim de snoede wolframtråde til ca. 10 millimeter i længden, så adskillelsen i enderne ikke overstiger 0,5 millimeter. Kontroller elektroderne med et multimeter ved at placere en stang på multimeteret på den usvejsede side af rebstifterne og forsigtigt røre enden af wolframtråd eller sølvtråd til den anden stang. Kontrollerer, om kredsløbet er glat.Sørg for, at linjerne ikke er placeret i serie. Skræl fem millimeter af isoleringshuden i hver ende for at udsætte metaltråden indeni. Tilføj en sektion af varmekrympbare slanger til hver starttråd.Svejs hver ledning med EEG-enhedens stikstik. Krymp det varmekrympbare rør med varm luft. Tilføj en sektion af varmekrympbart rør til hver rotortråd.Skru de ledende dele af de røde og orange ledninger sammen og svejs dem til en samling og skærebordet, så det passer til rebstiften. Svejs de to andre ledninger på overskriften til hver samling. Vej musen.Når musen er fuldt bedøvet, barberer du hår fra øjet til øreområdet med en barbermaskine. Fastgør musen på den stereotaksiske ramme. Sæt de forreste øvre tænder i forænderstangen og indsæt begge ørestænger til lige dybder i ørerne.Påfør erythromycin øjensalve til øjnene for at forhindre tørhed og blindhed forårsaget af stærkt lys under operationen. Desinficere det kirurgiske område mindst tre gange med skiftevis vatpinde af iodophor og 75% alkohol. Lav et langsgående snit for fuldt ud at udsætte det kirurgiske område eller lav et trekantet snit, så længe det udsætter de forreste og bageste fontaneller og elektrodeimplanteringssteder.Rul et lille stykke bomuld til en kugle og våd det med 3% hydrogenperoxid. Fjern blødt væv, der er fastgjort til kraniet, ved forsigtigt at gnide det udsatte område med en lille vatrondel, indtil den forreste og bageste fontanelle ses. Juster den forreste og bageste højde, så den forreste og bageste fontanelle er vandret.Overvej placeringen af den forreste fontanelle at være oprindelsen af akserne. Fastgør en rustfri stålskrue til venstre cerebellar kraniet. Indstil koordinaterne for amygdala-tændingen fra bregmaen, og juster den stereotaksiske enhed for at lokalisere dette sted og markere det.Bor et hul på marchstedet med en kraniebor på 0,5 millimeter i diameter. Fastgør elektroderne til lokaliseringsstangen på den stereotaksiske enhed. Placer elektroden lodret over hullet og slip positionen langsomt til minus 4,9 millimeter.Sæt sølvtråden rundt om skruen tre gange. Pas på ikke at ryste elektrodelegemet under drift. Bland tandcement og påfør det forsigtigt på elektroden og kraniets overflade.Når tandcementen hærder, skal du ændre ydersiden, indtil cementen, der omslutter den faste elektrode, bliver til en kegle. Slip derefter elektroden fra den stereotaxiske enhed. Fjern musen og læg den tilbage i buret.Hold det adskilt fra de andre mus. Sæt musen i en tilpasset kasse med slipperkabler, der forbinder elektroden på musens hoved og EEG-enheden. Før kablet gennem et hul i kassens låg, og juster længden tilbage i kassen, så musen kan bevæge sig frit.Tænd for EEG-enheden, og sørg for, at den fungerer korrekt. Indstil stimulatorparametrene til at levere et millisekund monofasiske kvadratbølgeimpulser ved 60 hertz i et sekunds togvarighed i 10 stimuleringscyklusser. Start med en strømintensitet på 50 mikroampere til den første stimulering.Overvåg EEG for efter afladning karakteriseret ved højfrekvente spidser. Hvis der ikke observeres nogen efter afladning, tilsættes 25 mikroampere til den næste stimulus og fortsætter denne proces hvert 10. minut, indtil en efter afladning observeres og varer fem sekunder. Stimuler musen med den bestemte strømintensitet hvert 15. minut, ikke mere end 20 gange om dagen.Overvåg adfærdsmæssige reaktioner på stimulus. Elektrodeimplantationsoperationen blev udført på seks raske voksne mænd, C57 sorte 6 mus, og elektrisk stimulering blev udført to uger efter operationen. Det adfærdsmæssige anfaldsniveau steg gradvist, idet antallet af stimuli steg, og antallet af stimuli, der kræves til fuldstændig tænding, blev registreret.EEG efter udledninger varede fem til 15 sekunder. Derefter intensiverede de intrakranielle spontane udledninger, og adfærdsmæssige symptomer begyndte. Anfaldets varighed var normalt mindre end et minut, hvilket reducerer risikoen for død fra alvorlige kramper, der resulterer i apnø.Ekspressionen af c-Fos i hjernevævet blev påvist ved immunhistokemi to timer efter fuldstændig tænding. Resultaterne viser, at ekspressionen af c-Fos i den ipsilaterale amygdala signifikant øgede verifikationen af gennemførligheden af denne model. Adskillelsen af wolframtrådender bør ikke overstige en halv millimeter, ellers kommer den ikke gennem hjernehullet.Elektrodens længde bør ikke være for lang, ellers vil det påvirke musens aktivitet.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Identification of Olfactory Volatiles using Gas Chromatography-Multi-unit Recordings (GCMR) in the Insect Antennal Lobe

Identification of Olfactory Volatiles using Gas Chromatography-Multi-unit Recordings GCMR in the Insect Antennal Lobe

Identifikation af olfaktoriske Flygtige stoffer ved hjælp af gaskromatografi-Multi-unit Recordings (GCMR) i Insect Antennal Lobe

All  organisms inhabit a world full of sensory stimuli that determine their  behavioral and physiological response to their environment. Olfaction is ...

Trypsin Digest Protocol to Analyze the Retinal Vasculature of a Mouse Model

Trypsin Digest protokol Analyser Retinal kar en musemodel

Trypsin digest is the gold standard method to analyze the retinal vasculature 1-5. It allows visualization of the entire network of complex ...

A Comprehensive Protocol for Manual Segmentation of the Medial Temporal Lobe Structures

En omfattende protokol for manuel segmentering af Medial temporallap Structures

The present paper describes a comprehensive protocol for manual tracing of the set of brain regions comprising the medial temporal lobe (MTL): amygdala, ...

Pentylenetetrazole-Induced Kindling Mouse Model

Pentylenetetrazole-induceret Kindling musemodel

Pentylenetetrazole (PTZ) is a GABA-A receptor antagonist. An intraperitoneal injection of PTZ into an animal induces an acute, severe seizure at a high ...

The Power of Interstimulus Interval for the Assessment of Temporal Processing in Rodents

Kraften i Interstimulus Interval for vurdering af tidsmæssige forarbejdes i Rodents

Temporal processing deficits have been implicated as a potential elemental dimension of higher-level cognitive processes, commonly observed in ...

Behavioral And Physiological Analysis In A Zebrafish Model Of Epilepsy

Adfærdsmæssige og fysiologiske analyse i en zebrafisk model af epilepsi

Epilepsy represents one of the most common neurological disorders, affecting an estimated 50 million people worldwide. Recent advances in genetic research ...

Successful In vivo Calcium Imaging with a Head-Mount Miniaturized Microscope in the Amygdala of Freely Behaving Mouse

Vellykket In vivo Calcium Imaging med en Head-Mount Miniaturized Mikroskop i Amygdala af frit opfører Mus

In vivo real-time monitoring of neuronal activities in freely moving animals is one of key approaches to link neuronal activity to behavior. For this ...

A Behavioral Screen for Heat-Induced Seizures in Mouse Models of Epilepsy

En adfærdsmæssig skærm for varmeinducerede anfald i musemodeller af epilepsi

Transgenic mouse models have proved to be powerful tools in studying various aspects of human neurological disorders, including epilepsy. The ...

Preparation and Implantation of Electrodes for Electrically Kindling VGAT-Cre Mice to Generate a Model for Temporal Lobe Epilepsy

It was discovered that electrical kindling of VGAT-Cre mice led to the spontaneous motor and electrographic seizures. A recent paper focused on how unique ...

Registration of Calcium Transients in Mouse Neuromuscular Junction with High Temporal Resolution using Confocal Microscopy

Registrering af calciumtransienter i musens neuromuskulære krydsning med høj tidsmæssig opløsning ved hjælp af konfokal mikroskopi

Estimation of the presynaptic calcium level is a key task in studying synaptic transmission since calcium entry into the presynaptic cell triggers a ...