Name: using a bipolar electrode to create a temporal lobe epilepsy mouse model by electrical kindling of the amygdala
Uploaded: 2022-06-29T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Using a Bipolar Electrode to Create a Temporal Lobe Epilepsy Mouse Model by Electrical Kindling of the Amygdala at JoVE.com

Het onderzoek werd ondersteund door de National Natural Science Foundation of China (nr. 82030037, 81871009) en de Beijing Municipal Health Commission (11000022T0000000444685). Wij danken TopEdit (www.topeditsci.com) voor haar taalkundige hulp bij de voorbereiding van dit manuscript.

Dit experiment werd goedgekeurd door de Experimental Animal Ethics Committee van het Xuanwu Hospital, Capital Medical University. Alle muizen werden gehouden in het dierenlaboratorium van het Xuanwu-ziekenhuis, Capital Medical University. Dit protocol is verdeeld in vier delen. De eerste twee delen introduceren de methode voor het bouwen van de elektrode en het elektrische circuit met behulp van een sleepring om de elektroden en de EEG-opname- / stimulatieapparatuur aan te sluiten. Het derde deel beschrijft de operatieme...

<ol>
	<li>Kurita, T., Sakurai, K., Takeda, Y., Horinouchi, T., Kusumi, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Very+long-term+outcome+of+non-surgically+treated+patients+with+temporal+lobe+epilepsy+with+hippocampal+sclerosis:+A+retrospective+study.">Very long-term outcome of non-surgically treated patients with temporal lobe epilepsy with hippocampal sclerosis: A retrospective study.</a> PLoS One. 11 (7), 0159464 (2016).</li><li>Choy, M., Duffy, B. A., Lee, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optogenetic+study+of+networks+in+epilepsy.">Optogenetic study of networks in epilepsy.</a> Journal of Neuroscience Research. 95 (12), 2325-2335 (2017).</li><li>Aroniadou-Anderjaska, V., Fritsch, B., Qashu, F., Braga, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathology+and+pathophysiology+of+the+amygdala+in+epileptogenesis+and+epilepsy.">Pathology and pathophysiology of the amygdala in epileptogenesis and epilepsy.</a> Epilepsy Research. 78 (2-3), 102-116 (2008).</li><li>Smith, P. D., McLean, K. J., Murphy, M. A., Turnley, A. M., Cook, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Seizures,+not+hippocampal+neuronal+death,+provoke+neurogenesis+in+a+mouse+rapid+electrical+amygdala+kindling+model+of+seizures.">Seizures, not hippocampal neuronal death, provoke neurogenesis in a mouse rapid electrical amygdala kindling model of seizures.</a> Neuroscience. 136 (2), 405-415 (2005).</li><li>Reyes, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amygdala+enlargement:+Temporal+lobe+epilepsy+subtype+or+nonspecific+finding.">Amygdala enlargement: Temporal lobe epilepsy subtype or nonspecific finding.</a> Epilepsy Research. 132, 34-40 (2017).</li><li>Fan, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnosis+and+surgical+treatment+of+non-lesional+temporal+lobe+epilepsy+with+unilateral+amygdala+enlargement.">Diagnosis and surgical treatment of non-lesional temporal lobe epilepsy with unilateral amygdala enlargement.</a> Neurological Sciences. 42 (6), 2353-2361 (2021).</li><li>Dhir, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pentylenetetrazol+(PTZ)+kindling+model+of+epilepsy.">Pentylenetetrazol (PTZ) kindling model of epilepsy.</a> Current Protocols in Neuroscience. , 37 (2012).</li><li>Van Erum, J., Van Dam, D., De Deyn, P. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PTZ-induced+seizures+in+mice+require+a+revised+Racine+scale.">PTZ-induced seizures in mice require a revised Racine scale.</a> Epilepsy &amp; Behavior. 95, 51-55 (2019).</li><li>Carriero, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+guinea+pig+model+of+mesial+temporal+lobe+epilepsy+following+nonconvulsive+status+epilepticus+induced+by+unilateral+intrahippocampal+injection+of+kainic+acid.">A guinea pig model of mesial temporal lobe epilepsy following nonconvulsive status epilepticus induced by unilateral intrahippocampal injection of kainic acid.</a> Epilepsia. 53 (11), 1917-1927 (2012).</li><li>Levesque, M., Avoli, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+kainic+acid+model+of+temporal+lobe+epilepsy.">The kainic acid model of temporal lobe epilepsy.</a> Neuroscience Biobehavioral Reviews. 37, 2887-2899 (2013).</li><li>Fujita, A., Ota, M., Kato, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Urinary+volatile+metabolites+of+amygdala-kindled+mice+reveal+novel+biomarkers+associated+with+temporal+lobe+epilepsy.">Urinary volatile metabolites of amygdala-kindled mice reveal novel biomarkers associated with temporal lobe epilepsy.</a> Scientific Reports. 9 (1), 10586 (2019).</li><li>Li, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+spatiotemporal+dynamics+of+phase+synchronization+during+epileptogenesis+in+amygdala-kindling+mice.">The spatiotemporal dynamics of phase synchronization during epileptogenesis in amygdala-kindling mice.</a> PLoS One. 11 (4), 0153897 (2016).</li><li>Wang, Y., Wei, P., Yan, F., Luo, Y., Zhao, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+epilepsy:+A+phenotype-oriented+review.">Animal models of epilepsy: A phenotype-oriented review.</a> Aging and Disease. 13 (1), 215-231 (2022).</li><li>Fallah, M. S., Dlugosz, L., Scott, B. W., Thompson, M. D., Burnham, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antiseizure+effects+of+the+cannabinoids+in+the+amygdala-kindling+model.">Antiseizure effects of the cannabinoids in the amygdala-kindling model.</a> Epilepsia. 62 (9), 2274-2282 (2021).</li><li>Chipika, R. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amygdala+pathology+in+amyotrophic+lateral+sclerosis+and+primary+lateral+sclerosis.">Amygdala pathology in amyotrophic lateral sclerosis and primary lateral sclerosis.</a> Journal of the Neurological Sciences. 417, 117039 (2020).</li><li>Kuchukhidze, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emotional+recognition+in+patients+with+mesial+temporal+epilepsy+associated+with+enlarged+amygdala.">Emotional recognition in patients with mesial temporal epilepsy associated with enlarged amygdala.</a> Frontiers in Neurology. 12, 803787 (2021).</li><li>Soper, C., Wicker, E., Kulick, C. V., N'Gouemo, P., Forcelli, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optogenetic+activation+of+superior+colliculus+neurons+suppresses+seizures+originating+in+diverse+brain+networks.">Optogenetic activation of superior colliculus neurons suppresses seizures originating in diverse brain networks.</a> Neurobiology of Disease. 87, 102-115 (2016).</li><li>Devinsky, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epilepsy.">Epilepsy.</a> Nature Reviews Disease Primers. 4, 18024 (2018).</li><li>Zhang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interaction+between+thalamus+and+hippocampus+in+termination+of+amygdala-kindled+seizures+in+mice.">Interaction between thalamus and hippocampus in termination of amygdala-kindled seizures in mice.</a> Computational and Mathematical Methods in Medicine. 2016, 9580724 (2016).</li><li>Ghotbedin, Z., Janahmadi, M., Mirnajafi-Zadeh, J., Behzadi, G., Semnanian, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrical+low+frequency+stimulation+of+the+kindling+site+preserves+the+electrophysiological+properties+of+the+rat+hippocampal+CA1+pyramidal+neurons+from+the+destructive+effects+of+amygdala+kindling:+the+basis+for+a+possible+promising+epilepsy+therapy.">Electrical low frequency stimulation of the kindling site preserves the electrophysiological properties of the rat hippocampal CA1 pyramidal neurons from the destructive effects of amygdala kindling: the basis for a possible promising epilepsy therapy.</a> Brain Stimulation. 6 (4), 515-523 (2013).</li><li>Hristova, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Medial+septal+GABAergic+neurons+reduce+seizure+duration+upon+optogenetic+closed-loop+stimulation.">Medial septal GABAergic neurons reduce seizure duration upon optogenetic closed-loop stimulation.</a> Brain. 144 (5), 1576-1589 (2021).</li></ol>

Epilepsie is een groep ziekten met meerdere manifestaties en diverse oorzaken18; Opgemerkt moet worden dat geen enkel model kan worden gebruikt voor alle soorten epilepsie en dat onderzoekers een geschikt model moeten selecteren voor hun specifieke studie. De huidige studie introduceert een van de meest toegankelijke methoden voor elektrodefabricage. Verschillende onderdelen van deze methode kunnen worden aangepast aan verschillende experimentele omstandigheden.
Deze me...

Temporale kwab epilepsie (TLE) is de meest voorkomende vorm van epilepsie en heeft een hoog risico op omzetting in geneesmiddelresistente epilepsie. Chirurgie, zoals selectieve amygdalohippocampectomie, is een effectieve behandeling voor TLE en de epileptogenese en ictogenese van de ziekte worden nog onderzocht 1,2. Pathogenese van TLE blijkt niet alleen in de hippocampus voor te komen, maar ook uitgebreid in de amygdala 3,4. Bijvoorbeeld, zowel amygdala sclerose en amygdala vergroting zijn vaak gemeld als de oorsprong van TLE aanvallen 5,6. Het belang van de amygdala is niet te onderschatten; Een amygdala-model is essentieel voor de studie van epileptogenese en een duidelijke illustratie van dit model is dringend nodig.
Er zijn verschillende benaderingen voorgesteld om aanvallen in diermodellen te induceren. In het verleden werden convulsieve geneesmiddelen intraperitoneaal geïnjecteerd in een vroeg stadium7. Hoewel deze methode handig was, was de locatie van epileptische foci onzeker. Met de ontwikkeling van stereotactische technologie en een gedetailleerde dierenhersenatlas werd intracraniële medicijninjectie toegepast om het probleem van lokalisatie op te lossen8. Een gebrek aan interventie voor ernstige aanvallen tijdens de acute fase resulteerde echter in een hoog sterftecijfer en chronische spontane aanvallen gingen gepaard met het probleem van onstabiele interictale en aanvalsfrequentie 9,10. Ten slotte werd de elektrische aanmaakhoutmethode ontwikkeld; Deze methode stimuleert periodiek specifieke hersengebieden meerdere keren, waardoor aanvallen kunnen worden geïnduceerd met duidelijke controle over zowel de locatie als de aanvangstijd11.
Een voordeel van deze methode is dat de intracraniale implantatie van elektroden minimaal invasief is12. Bovendien is de ernst van de aanval beheersbaar door de beëindiging van de stimuli, waardoor de mortaliteit veroorzaakt door de aanvallen wordt verminderd. Deze veranderingen losten de tekortkomingen van de vorige benaderingen op. Met name kan dit model menselijke aanvallen adequaat nabootsen en is het vooral geschikt voor de studie van status epilepticus (SE) vanwege het vermogen om SE snel te induceren13. Het kan ook worden gebruikt voor anti-epileptica screening14 en in studies over het mechanisme van epilepsie. Ten slotte is het bekend dat de amygdala nauw verbonden is met geheugenmodulatie, beloningsverwerking en emotie15. Stoornissen van deze mentale functies worden vaak aangetroffen bij epileptische patiënten en daarom kan het amygdala-epilepsiemodel een betere keuze zijn voor het bestuderen van emotionele problemen bij epilepsie16.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 488-conjugated Donkey anti-Rabbit IgG</td>
			<td>invitrogen</td>
			<td>A-21206</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>c-Fos antibody</td>
			<td></td>
			<td>ab222699</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cranial drill</td>
			<td>SANS</td>
			<td>SA302</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dental cement</td>
			<td>NISSIN</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EEG recording and stimulation equipment</td>
			<td>Neuracle Technology (Changzhou) Co., Ltd</td>
			<td>NSHHFS-210803</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>lead-free tin wire</td>
			<td>BAKON</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pin header/Female header</td>
			<td>XIANMISI</td>
			<td></td>
			<td>spacing of 1.27 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silver wire</td>
			<td>A-M systems</td>
			<td>786000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slip ring</td>
			<td>Senring Electronics Co.,Ltd</td>
			<td>SNM008-04</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tungsten wire</td>
			<td>A-M systems</td>
			<td>796000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ultrafine multi-stand wire</td>
			<td>Shenzhen Chengxing wire and cable</td>
			<td>UL10064-FEP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>welding equipment</td>
			<td>BAKON</td>
			<td>BK881</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

using a bipolar electrode to create a temporal lobe epilepsy mouse model by electrical kindling of the amygdala

De amygdala is een van de meest voorkomende oorzaken van aanvallen en het amygdala-muismodel is essentieel voor de illustratie van epilepsie. Weinig studies hebben het experimentele protocol echter in detail beschreven. Dit artikel illustreert het hele proces van het maken van amygdala elektrische aanmaakhoutjes epilepsiemodellen, met de introductie van een methode van bipolaire elektrodefabricage. Deze elektrode kan zowel stimuleren als opnemen, waardoor hersenletsel wordt verminderd dat wordt veroorzaakt door het implanteren van afzonderlijke elektroden voor stimulatie en opname. Voor langdurige elektro-encefalogram (EEG) opnamedoeleinden werden slipringen gebruikt om de recordonderbreking veroorzaakt door kabelklitten en vallen te elimineren.
Na periodieke stimulatie (60 Hz, 1 s om de 15 min) van de basolaterale amygdala (AP: 1,67 mm, L: 2,7 mm, V: 4,9 mm) gedurende 19,83 ± 5,742 keer, werd volledige aanmaakhout waargenomen bij zes muizen (gedefinieerd als inductie van drie continue graad V-episodes geclassificeerd door de schaal van Racine). Een intracraniaal EEG werd geregistreerd gedurende het gehele aanmaakhoutproces en een epileptische afscheiding in de amygdala van 20-70 s werd waargenomen na aanmaakhout. Daarom is dit een robuust protocol voor het modelleren van epilepsie afkomstig van de amygdala en is de methode geschikt voor het onthullen van de rol van de amygdala bij temporale kwab epilepsie. Dit onderzoek draagt bij aan toekomstige studies naar de mechanismen van mesiale temporale kwab epilepsie en nieuwe anti-epileptogene geneesmiddelen.

De elektrode en het circuit maken het mogelijk om het EEG te registreren en te functioneren als een stimulatie (figuur 1); Deze opstelling vermijdt de complexiteit van het afzonderlijk implanteren, opnemen en stimuleren van elektroden en minimaliseert schade aan het hersenweefsel. De toepassing van sleepringen maakt elektrodeverbinding met alle soorten apparaten mogelijk.
We voerden elektrode-implantatiechirurgie uit op zes gezonde volwassen mannelijke C57BL / 6-m...

Watch this Scientific Journal Video about Using a Bipolar Electrode to Create a Temporal Lobe Epilepsy Mouse Model by Electrical Kindling of the Amygdala at JoVE.com

Using a Bipolar Electrode to Create a Temporal Lobe Epilepsy Mouse Model by Electrical Kindling of the Amygdala

De amygdala speelt een sleutelrol bij temporale kwab epilepsie, die ontstaat in en zich voortplant vanuit deze structuur. Dit artikel geeft een gedetailleerde beschrijving van de fabricage van diepe hersenelektroden met zowel opname- als stimulerende functies. Het introduceert een model van mediale temporale kwab epilepsie afkomstig van de amygdala.

Een bipolaire elektrode gebruiken om een temporale kwab epilepsiemuismodel te maken door elektrische aanmaakhoutjes van de amygdala

The amygdala is one of the most common origins of seizures, and the amygdala mouse model is essential for the illustration of epilepsy. However, few ...

Dit protocol stelde een model van epilepsie voor met amygdala als oorsprong. Het effent de weg naar het onderzoek van mesiale temporale kwabstructuren. Dit model kan worden geïnterpreteerd als de basis van het experiment.Omdat dit protocol een goedkope en efficiënte methode is, kan het in de meeste laboratoria snel worden uitgevoerd. De procedure wordt gedemonstreerd door Yongchang Lu, een postgraduaat in ons laboratorium. Begin met het verzamelen van de vooraf voorbereide componenten, te beginnen met twee centimeter lange stukken teflon-gecoate wolfraamdraad met een beerdiameter van 76,2 micrometer.Eén stuk zilverdraad met een berendiameter van 127 micrometer van dezelfde lengte en één set van twee bij twee touwpennen. Gebruik een aansteker om het ene uiteinde van elke wolfraamdraad te branden om vijf millimeter van de isolatiecoating te verwijderen. Schil een stuk ultrafijn meerstrengs draad.Pak uit van de onderkant naar de bovenkant waar het donker begint te worden en doorloopt naar de bovenkant. Combineer deze superfijne draad en de wolfraamdraad door het ene uiteinde te knijpen en het andere voorzichtig te draaien, waardoor de twee materialen gemakkelijk met elkaar kunnen worden verstrengeld. Trek er voorzichtig aan om ervoor te zorgen dat de draden strak zijn omwikkeld en knip de overtollige superfijne draad af.Probeer de wolfraamdraad gedurende het hele proces recht te houden. Bevestig de touwpen aan de klem op de lastafel met de langere kant van de pennen naar buiten gericht. Gebruik de naald van de spuit om wat soldeerpasta op te pakken en op de pinnen aan te brengen.Verwarm de lastoorts tot 320 graden Celsius. Smelt en smeer wat loodvrij tindraad in met de toortspunt. Overlap het bovenste uiteinde van de wolfraamdraad met één naald van de touwpennen en gebruik het soldeer op de toorts om de wolfraamdraad aan de pen te binden.Las een andere wolfraamdraad en nog een zilverdraad op dezelfde manier aan de touwpen, zodat elke draad overeenkomt met een naald. Knip twee krimpkousen iets langer dan het bovenste uiteinde van de wolfraamdraad. Plaats ze op de soldeerverbinding van twee wolfraamdraden en zorg ervoor dat het geleidende deel volledig in de buis is bedekt, zodat het circuit van de twee wolfraamdraden niet in serie wordt geplaatst.Verwijder de elektrode uit de lastafelklem en houd de elektrode voorzichtig vast met een grote tang, omdat het gemakkelijk is voor elektroden om hun vorm te verliezen bij het verwarmen van de krimpbare buis. Gebruik een goede thermische geleidbaarheidsklem met iets meer kracht. Zet het luchtkanaal aan en verwarm tot een temperatuur van 320 graden Celsius is bereikt.Blaas de krimpkous enkele seconden door totdat deze is vastgedraaid. Versterk de elektrode met smeltlijm. Houd de twee wolfraamdraden vast en draai ze samen, waarbij ze hun uiteinden uit elkaar houden.Knip de gedraaide wolfraamdraden bij tot ongeveer 10 millimeter lang, zodat de scheiding aan de uiteinden niet groter is dan 0,5 millimeter. Controleer de elektroden met een multimeter door één staaf van de multimeter aan de ongelaste kant van de touwpennen te plaatsen en het uiteinde van wolfraamdraad of zilverdraad voorzichtig aan te raken aan de andere staaf. Controleren of het circuit soepel is.Zorg ervoor dat de lijnen niet in serie worden geplaatst. Verwijder vijf millimeter van de isolatiehuid aan elk uiteinde om de metalen draad binnenin bloot te leggen. Voeg een gedeelte van krimpbare buizen toe aan elke startdraad.Las elke draad met de stekker van de EEG-apparaatconnector. Verklein de krimpbare buis met hete lucht. Voeg een deel van de krimpkous toe aan elke rotordraad.Schroef de geleidende delen van de rode en oranje draden aan elkaar en last ze aan een verbinding en de kop om op de touwpen te passen. Las de andere twee draden op de kop aan elke verbinding. Weeg de muis.Wanneer de muis volledig verdoofd is, scheer je haar van het oog naar het oorgebied met een scheermes. Bevestig de muis op het stereotaxische frame. Plaats de voorste boventanden in de snijtand en steek beide oorbalken tot gelijke diepte in de oren.Breng erytromycine oogzalf aan op de ogen om droogheid en blindheid veroorzaakt door fel licht tijdens de operatie te voorkomen. Desinfecteer het operatiegebied ten minste drie keer met afwisselende wattenstaafjes jodofor en 75% alcohol. Maak een longitudinale incisie om het chirurgische gebied volledig bloot te leggen of maak een driehoekige incisie zolang deze de voorste en achterste fontanellen en elektrode-implantatieplaatsen blootlegt.Rol een klein stukje katoen in een bal en maak het nat met 3% waterstofperoxide. Verwijder het zachte weefsel dat aan de schedel is bevestigd door zachtjes over het blootgestelde gebied te wrijven met een klein watje totdat de voorste en achterste fontanel worden gezien. Stel de voorste en achterste hoogte zo in dat de voorste en achterste fontanel horizontaal zijn.Beschouw de positie van de voorste fontanel als de oorsprong van de assen. Bevestig een roestvrijstalen schroef aan de linker cerebellaire schedel. Stel de coördinaten in voor de amygdala aanmaakhout van de bregma en pas het stereotaxische apparaat aan om deze plek te lokaliseren en te markeren.Boor een gat op de marsplek met een schedelboor met een diameter van 0,5 millimeter. Bevestig de elektroden aan de lokalisatiestaaf van het stereotaxische apparaat. Plaats de elektrode verticaal boven het gat en laat de positie langzaam zakken tot min 4,9 millimeter.Wikkel het zilverdraad driemaal om de schroef. Zorg ervoor dat het elektrodelichaam tijdens het gebruik niet schudt. Meng tandcement en breng het voorzichtig aan op de elektrode en het schedeloppervlak.Wanneer het tandcement uithardt, wijzigt u de buitenkant totdat het cement dat de vaste elektrode omsluit in een kegel verandert. Laat vervolgens de elektrode los van het stereotaxische apparaat. Verwijder de muis en plaats deze terug in de kooi.Houd het gescheiden van de andere muizen. Plaats de muis in een aangepaste doos met pantoffelkabels die de elektrode op de kop van de muis en het EEG-apparaat verbinden. Laat de kabel door een gat in het deksel van de doos lopen en pas de lengte van de linker in de doos aan zodat de muis vrij kan bewegen.Schakel het EEG-apparaat in en zorg ervoor dat het correct werkt. Stel de stimulatorparameters in om monofasische blokgolfpulsen van één milliseconde af te geven bij 60 hertz voor een treinduur van één seconde gedurende 10 stimulatiecycli. Begin met een huidige intensiteit van 50 microampère voor de eerste stimulatie.Controleer het EEG voor na ontlading gekenmerkt door hoogfrequente pieken. Als er geen na ontlading wordt waargenomen, voeg dan 25 microampère toe aan de volgende stimulus en ga door met dit proces om de 10 minuten totdat een na ontlading wordt waargenomen en vijf seconden duurt. Stimuleer de muis met de vastgestelde stroomintensiteit elke 15 minuten, niet meer dan 20 keer per dag.Monitor de gedragsreacties op de stimulus. De elektrode-implantatieoperatie werd uitgevoerd op zes gezonde volwassen mannetjes, C57 zwarte 6-muizen en elektrische stimulatie werd twee weken na de operatie uitgevoerd. Het niveau van de gedragsaanvallen nam geleidelijk toe met het aantal stimuli dat toenam en het aantal stimuli dat nodig was voor volledige aanmaakhoutjes werd geregistreerd.Het EEG na ontlading duurde vijf tot 15 seconden. Toen werden de intracraniële spontane ontladingen geïntensiveerd en begonnen de gedragssymptomen. De duur van de aanval was meestal minder dan een minuut, wat het risico op overlijden door ernstige convulsies die resulteren in apneu vermindert.De expressie van c-Fos in het hersenweefsel werd twee uur na volledige aanmaakhoutering gedetecteerd door immunohistochemie. De resultaten tonen aan dat de expressie van c-Fos in de ipsilaterale amygdala de haalbaarheid van dit model aanzienlijk verhoogde. De scheiding van wolfraamdraaduiteinden mag niet groter zijn dan een halve millimeter, anders komt het niet door het hersengat.De lengte van de elektrode mag niet te lang zijn, anders heeft dit invloed op de activiteit van muizen.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Identification of Olfactory Volatiles using Gas Chromatography-Multi-unit Recordings (GCMR) in the Insect Antennal Lobe

Identification of Olfactory Volatiles using Gas Chromatography-Multi-unit Recordings GCMR in the Insect Antennal Lobe

Identificatie van Olfactorische Vluchtige stoffen met behulp van gaschromatografie-en meergezins-Recordings (GCMR) in de Insect antennaal Lobe

All  organisms inhabit a world full of sensory stimuli that determine their  behavioral and physiological response to their environment. Olfaction is ...

Trypsin Digest Protocol to Analyze the Retinal Vasculature of a Mouse Model

Trypsine Digest Protocol bij het netvlies Vasculature van een muismodel Analyseer

Trypsin digest is the gold standard method to analyze the retinal vasculature 1-5. It allows visualization of the entire network of complex ...

A Comprehensive Protocol for Manual Segmentation of the Medial Temporal Lobe Structures

Een uitgebreide protocol voor handmatige segmentatie van de mediale temporale lob Structures

The present paper describes a comprehensive protocol for manual tracing of the set of brain regions comprising the medial temporal lobe (MTL): amygdala, ...

Pentylenetetrazole-Induced Kindling Mouse Model

Pentylenetetrazole-geïnduceerde aanmaakhout muismodel

Pentylenetetrazole (PTZ) is a GABA-A receptor antagonist. An intraperitoneal injection of PTZ into an animal induces an acute, severe seizure at a high ...

The Power of Interstimulus Interval for the Assessment of Temporal Processing in Rodents

De kracht van Interstimulus Interval voor de beoordeling van Temporal Processing in knaagdieren

Temporal processing deficits have been implicated as a potential elemental dimension of higher-level cognitive processes, commonly observed in ...

Behavioral And Physiological Analysis In A Zebrafish Model Of Epilepsy

Gedrags- en fysiologische analyse in een zebravismodel van epilepsie

Epilepsy represents one of the most common neurological disorders, affecting an estimated 50 million people worldwide. Recent advances in genetic research ...

Successful In vivo Calcium Imaging with a Head-Mount Miniaturized Microscope in the Amygdala of Freely Behaving Mouse

Succesvolle In vivo Calcium Imaging met een Head-Mount Miniaturized Microscope in de Amygdala van Freely Behaving Mouse

In vivo real-time monitoring of neuronal activities in freely moving animals is one of key approaches to link neuronal activity to behavior. For this ...

A Behavioral Screen for Heat-Induced Seizures in Mouse Models of Epilepsy

Een gedragsscherm voor door hitte geïnduceerde aanvallen in muismodellen van epilepsie

Transgenic mouse models have proved to be powerful tools in studying various aspects of human neurological disorders, including epilepsy. The ...

Preparation and Implantation of Electrodes for Electrically Kindling VGAT-Cre Mice to Generate a Model for Temporal Lobe Epilepsy

It was discovered that electrical kindling of VGAT-Cre mice led to the spontaneous motor and electrographic seizures. A recent paper focused on how unique ...

Registration of Calcium Transients in Mouse Neuromuscular Junction with High Temporal Resolution using Confocal Microscopy

Registratie van calciumtransiënten in de neuromusculaire overgang van de muis met een hoge temporele resolutie met behulp van confocale microscopie

Estimation of the presynaptic calcium level is a key task in studying synaptic transmission since calcium entry into the presynaptic cell triggers a ...