Name: using a bipolar electrode to create a temporal lobe epilepsy mouse model by electrical kindling of the amygdala
Uploaded: 2022-06-29T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Using a Bipolar Electrode to Create a Temporal Lobe Epilepsy Mouse Model by Electrical Kindling of the Amygdala at JoVE.com

Forskningen ble støttet av National Natural Science Foundation of China (nr. 82030037, 81871009) og Beijing kommunale helsekommisjon (11000022T000000444685). Vi takker TopEdit (www.topeditsci.com) for språklig hjelp under utarbeidelsen av dette manuskriptet.

Dette eksperimentet ble godkjent av Experimental Animal Ethics Committee of Xuanwu Hospital, Capital Medical University. Alle mus ble holdt i dyrelaboratoriet på Xuanwu Hospital, Capital Medical University. Denne protokollen er delt inn i fire deler. De to første delene introduserer metoden for å bygge elektroden og den elektriske kretsen ved hjelp av en glidering for å koble elektrodene og EEG-opptaks- / stimuleringsutstyret. Den tredje delen beskriver operasjonsmetoden for elektrodeimplantasjon, og den fjerde delen...

<ol>
	<li>Kurita, T., Sakurai, K., Takeda, Y., Horinouchi, T., Kusumi, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Very+long-term+outcome+of+non-surgically+treated+patients+with+temporal+lobe+epilepsy+with+hippocampal+sclerosis:+A+retrospective+study.">Very long-term outcome of non-surgically treated patients with temporal lobe epilepsy with hippocampal sclerosis: A retrospective study.</a> PLoS One. 11 (7), 0159464 (2016).</li><li>Choy, M., Duffy, B. A., Lee, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optogenetic+study+of+networks+in+epilepsy.">Optogenetic study of networks in epilepsy.</a> Journal of Neuroscience Research. 95 (12), 2325-2335 (2017).</li><li>Aroniadou-Anderjaska, V., Fritsch, B., Qashu, F., Braga, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathology+and+pathophysiology+of+the+amygdala+in+epileptogenesis+and+epilepsy.">Pathology and pathophysiology of the amygdala in epileptogenesis and epilepsy.</a> Epilepsy Research. 78 (2-3), 102-116 (2008).</li><li>Smith, P. D., McLean, K. J., Murphy, M. A., Turnley, A. M., Cook, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Seizures,+not+hippocampal+neuronal+death,+provoke+neurogenesis+in+a+mouse+rapid+electrical+amygdala+kindling+model+of+seizures.">Seizures, not hippocampal neuronal death, provoke neurogenesis in a mouse rapid electrical amygdala kindling model of seizures.</a> Neuroscience. 136 (2), 405-415 (2005).</li><li>Reyes, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amygdala+enlargement:+Temporal+lobe+epilepsy+subtype+or+nonspecific+finding.">Amygdala enlargement: Temporal lobe epilepsy subtype or nonspecific finding.</a> Epilepsy Research. 132, 34-40 (2017).</li><li>Fan, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnosis+and+surgical+treatment+of+non-lesional+temporal+lobe+epilepsy+with+unilateral+amygdala+enlargement.">Diagnosis and surgical treatment of non-lesional temporal lobe epilepsy with unilateral amygdala enlargement.</a> Neurological Sciences. 42 (6), 2353-2361 (2021).</li><li>Dhir, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pentylenetetrazol+(PTZ)+kindling+model+of+epilepsy.">Pentylenetetrazol (PTZ) kindling model of epilepsy.</a> Current Protocols in Neuroscience. , 37 (2012).</li><li>Van Erum, J., Van Dam, D., De Deyn, P. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PTZ-induced+seizures+in+mice+require+a+revised+Racine+scale.">PTZ-induced seizures in mice require a revised Racine scale.</a> Epilepsy &amp; Behavior. 95, 51-55 (2019).</li><li>Carriero, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+guinea+pig+model+of+mesial+temporal+lobe+epilepsy+following+nonconvulsive+status+epilepticus+induced+by+unilateral+intrahippocampal+injection+of+kainic+acid.">A guinea pig model of mesial temporal lobe epilepsy following nonconvulsive status epilepticus induced by unilateral intrahippocampal injection of kainic acid.</a> Epilepsia. 53 (11), 1917-1927 (2012).</li><li>Levesque, M., Avoli, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+kainic+acid+model+of+temporal+lobe+epilepsy.">The kainic acid model of temporal lobe epilepsy.</a> Neuroscience Biobehavioral Reviews. 37, 2887-2899 (2013).</li><li>Fujita, A., Ota, M., Kato, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Urinary+volatile+metabolites+of+amygdala-kindled+mice+reveal+novel+biomarkers+associated+with+temporal+lobe+epilepsy.">Urinary volatile metabolites of amygdala-kindled mice reveal novel biomarkers associated with temporal lobe epilepsy.</a> Scientific Reports. 9 (1), 10586 (2019).</li><li>Li, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+spatiotemporal+dynamics+of+phase+synchronization+during+epileptogenesis+in+amygdala-kindling+mice.">The spatiotemporal dynamics of phase synchronization during epileptogenesis in amygdala-kindling mice.</a> PLoS One. 11 (4), 0153897 (2016).</li><li>Wang, Y., Wei, P., Yan, F., Luo, Y., Zhao, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+epilepsy:+A+phenotype-oriented+review.">Animal models of epilepsy: A phenotype-oriented review.</a> Aging and Disease. 13 (1), 215-231 (2022).</li><li>Fallah, M. S., Dlugosz, L., Scott, B. W., Thompson, M. D., Burnham, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antiseizure+effects+of+the+cannabinoids+in+the+amygdala-kindling+model.">Antiseizure effects of the cannabinoids in the amygdala-kindling model.</a> Epilepsia. 62 (9), 2274-2282 (2021).</li><li>Chipika, R. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amygdala+pathology+in+amyotrophic+lateral+sclerosis+and+primary+lateral+sclerosis.">Amygdala pathology in amyotrophic lateral sclerosis and primary lateral sclerosis.</a> Journal of the Neurological Sciences. 417, 117039 (2020).</li><li>Kuchukhidze, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emotional+recognition+in+patients+with+mesial+temporal+epilepsy+associated+with+enlarged+amygdala.">Emotional recognition in patients with mesial temporal epilepsy associated with enlarged amygdala.</a> Frontiers in Neurology. 12, 803787 (2021).</li><li>Soper, C., Wicker, E., Kulick, C. V., N'Gouemo, P., Forcelli, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optogenetic+activation+of+superior+colliculus+neurons+suppresses+seizures+originating+in+diverse+brain+networks.">Optogenetic activation of superior colliculus neurons suppresses seizures originating in diverse brain networks.</a> Neurobiology of Disease. 87, 102-115 (2016).</li><li>Devinsky, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epilepsy.">Epilepsy.</a> Nature Reviews Disease Primers. 4, 18024 (2018).</li><li>Zhang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interaction+between+thalamus+and+hippocampus+in+termination+of+amygdala-kindled+seizures+in+mice.">Interaction between thalamus and hippocampus in termination of amygdala-kindled seizures in mice.</a> Computational and Mathematical Methods in Medicine. 2016, 9580724 (2016).</li><li>Ghotbedin, Z., Janahmadi, M., Mirnajafi-Zadeh, J., Behzadi, G., Semnanian, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrical+low+frequency+stimulation+of+the+kindling+site+preserves+the+electrophysiological+properties+of+the+rat+hippocampal+CA1+pyramidal+neurons+from+the+destructive+effects+of+amygdala+kindling:+the+basis+for+a+possible+promising+epilepsy+therapy.">Electrical low frequency stimulation of the kindling site preserves the electrophysiological properties of the rat hippocampal CA1 pyramidal neurons from the destructive effects of amygdala kindling: the basis for a possible promising epilepsy therapy.</a> Brain Stimulation. 6 (4), 515-523 (2013).</li><li>Hristova, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Medial+septal+GABAergic+neurons+reduce+seizure+duration+upon+optogenetic+closed-loop+stimulation.">Medial septal GABAergic neurons reduce seizure duration upon optogenetic closed-loop stimulation.</a> Brain. 144 (5), 1576-1589 (2021).</li></ol>

Epilepsi er en gruppe sykdommer med flere manifestasjoner og ulike årsaker18; Det skal bemerkes at ingen enkelt modell kan brukes for alle typer epilepsi, og forskere må velge en passende modell for deres spesifikke studie. Denne studien introduserer en av de mest tilgjengelige metodene for elektrodefabrikasjon. Ulike deler av denne metoden kan justeres for å tilpasse seg ulike eksperimentelle forhold.
Denne metoden benytter elektroder med både stimulerende og oppta...

Temporallappsepilepsi (TLE) er den mest utbredte typen epilepsi og har høy risiko for konvertering til medikamentresistent epilepsi. Kirurgi, som selektiv amygdalohippocampectomy, er en effektiv behandling for TLE, og epileptogenese og ictogenese av sykdommen er fortsatt under utredning 1,2. Patogenese av TLE har vist seg å forekomme ikke bare i hippocampus, men også i stor utstrekning i amygdala 3,4. For eksempel har både amygdala sklerose og amygdala utvidelse blitt hyppig rapportert som opprinnelsen til TLE anfall 5,6. Betydningen av amygdala kan ikke undervurderes; En amygdalamodell er essensiell for studiet av epileptogenese, og det haster med en tydelig illustrasjon av denne modellen.
Flere tilnærminger har blitt foreslått for å indusere anfall i dyremodeller. Tidligere ble krampestillende legemidler injisert intraperitonealt på et tidlig stadium7. Selv om denne metoden var praktisk, var lokalisasjonen av epileptiske foci usikker. Med utviklingen av stereotaktisk teknologi og et detaljert dyrehjerneatlas ble intrakraniell legemiddelinjeksjon brukt for å løse problemet med lokalisering8. Manglende intervensjon ved alvorlige anfall i akuttfasen medførte imidlertid høy dødelighet, og kroniske spontane anfall ble ledsaget av problemet med ustabil interiktal- og anfallsfrekvens 9,10. Til slutt ble den elektriske tenningsmetoden utviklet; Denne metoden stimulerer periodisk bestemte hjernegrupper flere ganger, slik at anfall kan induseres med sikker kontroll over både plasseringen og starttiden11.
En fordel med denne metoden er at den intrakraniale implantasjonen av elektroder er minimalt invasiv12. Videre er alvorlighetsgraden av anfallet kontrollerbar ved avslutning av stimuli, noe som reduserer dødeligheten forårsaket av anfallene. Disse endringene løste manglene i de tidligere tilnærmingene. Spesielt kan denne modellen tilstrekkelig etterligne menneskelige anfall og er spesielt egnet for studier av status epilepticus (SE) på grunn av sin evne til å indusere SE raskt13. Det kan også brukes til screening av antiepileptisk legemiddel14 og i studier på epilepsimekanismen. Til slutt er det velkjent at amygdala er nært forbundet med minnemodulering, belønningsbehandling og følelser15. Forstyrrelser i disse mentale funksjonene oppstår ofte hos epileptiske pasienter, og dermed kan amygdala epilepsimodellen være et bedre valg for å studere emosjonelle problemer ved epilepsi16.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 488-conjugated Donkey anti-Rabbit IgG</td>
			<td>invitrogen</td>
			<td>A-21206</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>c-Fos antibody</td>
			<td></td>
			<td>ab222699</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cranial drill</td>
			<td>SANS</td>
			<td>SA302</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dental cement</td>
			<td>NISSIN</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EEG recording and stimulation equipment</td>
			<td>Neuracle Technology (Changzhou) Co., Ltd</td>
			<td>NSHHFS-210803</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>lead-free tin wire</td>
			<td>BAKON</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pin header/Female header</td>
			<td>XIANMISI</td>
			<td></td>
			<td>spacing of 1.27 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silver wire</td>
			<td>A-M systems</td>
			<td>786000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slip ring</td>
			<td>Senring Electronics Co.,Ltd</td>
			<td>SNM008-04</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tungsten wire</td>
			<td>A-M systems</td>
			<td>796000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ultrafine multi-stand wire</td>
			<td>Shenzhen Chengxing wire and cable</td>
			<td>UL10064-FEP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>welding equipment</td>
			<td>BAKON</td>
			<td>BK881</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

using a bipolar electrode to create a temporal lobe epilepsy mouse model by electrical kindling of the amygdala

Amygdala er en av de vanligste opprinnelsene til anfall, og amygdala musemodellen er viktig for illustrasjonen av epilepsi. Imidlertid har få studier beskrevet den eksperimentelle protokollen i detalj. Dette papiret illustrerer hele prosessen med amygdala elektrisk tenning epilepsi modell gjør, med innføring av en metode for bipolar elektrode fabrikasjon. Denne elektroden kan både stimulere og registrere, og redusere hjerneskade forårsaket av implantering av separate elektroder for stimulering og opptak. For langtidsopptak av elektroencefalogram (EEG) ble glideringer brukt til å eliminere rekordavbrudd forårsaket av kabelfloker og fall av.
Etter periodisk stimulering (60 Hz, 1 s hvert 15. minutt) av basolateral amygdala (AP: 1,67 mm, L: 2,7 mm, V: 4,9 mm) i 19,83 ± 5,742 ganger, ble full tenning observert hos seks mus (definert som induksjon av tre kontinuerlige grad V-episoder klassifisert etter Racines skala). Intrakranial EEG ble registrert gjennom hele kindlingprosessen, og det ble observert en epileptisk utflod i amygdala på 20-70 s etter opptenning. Derfor er dette en robust protokoll for modellering av epilepsi med utspring i amygdala, og metoden er egnet til å avdekke amygdalaens rolle ved temporallappsepilepsi. Denne forskningen bidrar til fremtidige studier av mekanismene bak mesial temporallappsepilepsi og nye antiepileptogene legemidler.

Elektroden og kretsen gjør at EEG kan registreres og fungere som en stimulering (figur 1); Dette oppsettet unngår kompleksiteten ved å implantere, registrere og stimulere elektroder separat og minimerer skade på hjernevevet. Påføringen av glideringer tillater elektrodetilkobling med alle typer enheter.
Vi utførte elektrodeimplantasjonskirurgi på seks friske voksne mannlige C57BL/6-mus, og elektrisk stimulering ble utført 2 uker etter operasjonen. Det atfe...

Watch this Scientific Journal Video about Using a Bipolar Electrode to Create a Temporal Lobe Epilepsy Mouse Model by Electrical Kindling of the Amygdala at JoVE.com

Using a Bipolar Electrode to Create a Temporal Lobe Epilepsy Mouse Model by Electrical Kindling of the Amygdala

Amygdala spiller en nøkkelrolle i temporallappsepilepsi, som stammer fra og forplanter seg fra denne strukturen. Denne artikkelen gir en detaljert beskrivelse av fabrikasjon av dype hjerneelektroder med både opptaks- og stimulerende funksjoner. Den introduserer en modell av medial temporallappsepilepsi som stammer fra amygdala.

Ved hjelp av en bipolar elektrode for å lage en temporal lobe epilepsi musemodell ved elektrisk tenning av amygdala

The amygdala is one of the most common origins of seizures, and the amygdala mouse model is essential for the illustration of epilepsy. However, few ...

Denne protokollen foreslo en modell for epilepsi med amygdala som opprinnelse. Det baner vei for undersøkelsen av mesial temporale lobe strukturer. Denne modellen kan tolkes som grunnlaget for eksperimentet.Siden denne protokollen er en billig og effektiv metode, kan den utføres raskt i de fleste laboratorier. Demonstrere prosedyren vil være Yongchang Lu, en videreutdanning i vårt laboratorium. Begynn med å samle de forberedte komponentene som starter med to centimeter lange stykker Teflon-belagt wolframtråd med en bjørnediameter på 76,2 mikrometer.Ett stykke sølvtråd med en bjørnediameter på 127 mikrometer av samme lengde og ett sett med to ganger to målte taupinner. Bruk en lighter til å brenne den ene enden av hver wolframtråd for å fjerne fem millimeter av isolasjonsbelegget. Skrell en del av ultrafin flertrådstråd.Pakk ut fra bunnen til den øvre enden, hvor det begynner å bli mørkt, fortsett til toppen. Kombiner denne superfine ledningen og wolframtråden ved å klemme den ene enden og forsiktig vri den andre, slik at de to materialene enkelt kan flettes sammen. Trekk forsiktig for å sikre at ledningene er tett innpakket og kutt av overflødig superfin ledning.Prøv å holde wolframtråden rett gjennom hele prosessen. Fest taustiften til klemmen på sveisebordet med den lengre siden av pinnene vendt utover. Bruk sprøytenålen til å plukke opp litt loddepasta og påfør den på pinnene.Varm sveisepistolen til 320 grader Celsius. Smelt og smør litt blyfri tinntråd med fakkelspissen. Overlapp den øvre enden av wolframtråden med en nål av taupinnene og bruk loddet på fakkelen for å binde wolframtråden til tappen.Sveis en annen wolframtråd og en annen sølvtråd til taustiften på samme måte slik at hver ledning tilsvarer en nål. Klipp to varmekrympbare rør litt lengre enn den øvre enden av wolframtråden. Sett dem på loddeskjøten av to wolframtråder, slik at den ledende delen er helt dekket i røret, slik at kretsen av de to wolframtrådene ikke plasseres i serie.Fjern elektroden fra sveisebordklemmen og hold elektroden forsiktig med store tanger, da det er lett for elektroder å miste formen ved oppvarming av det krympbare røret. Bruk en god varmeledningsevne klemme med litt mer kraft. Slå på luftkanalen og varme til en temperatur på 320 grader Celsius er nådd.Blås det varmekrympbare røret i flere sekunder til det er strammet. Forsterk elektroden med smeltelim. Hold de to wolframtrådene og vri dem sammen, hold endene fra hverandre.Trim de vridde wolframtrådene til omtrent 10 millimeter i lengden, slik at separasjonen i enden ikke overstiger 0,5 millimeter. Kontroller elektrodene med en multimeter ved å plassere en stang på multimeteret på den usveisede siden av taupinnene og forsiktig berøre enden av wolframtråd eller sølvtråd til den andre stangen. Kontrollerer om kretsen er jevn.Kontroller at linjene ikke er plassert i serie. Fjern fem millimeter av isolasjonshuden i hver ende for å eksponere metalltråden inni. Legg til en del varmekrympbare slanger til hver starttråd.Sveis hver ledning med EEG-enhetens kontaktplugg. Krymp det varmekrympbare røret med varm luft. Legg til en del av varmekrympbart rør til hver rotortråd.Skru de ledende delene av de røde og oransje ledningene sammen og sveis dem til en skjøt og toppteksten for å passe til taustiften. Sveis de to andre ledningene på overskriften til hver skjøt. Vei musen.Når musen er fullt bedøvet, barberer du håret fra øyet til øreområdet med en barberhøvel. Fest musen på den stereotaksiske rammen. Sett de fremre øvre tennene inn i snittstangen og sett inn begge ørestengene til like dybder i ørene.Påfør erytromycin øyesalve til øynene for å forhindre tørrhet og blindhet forårsaket av sterkt lys under operasjonen. Desinfiser operasjonsområdet minst tre ganger med vekslende vattpinner av iodophor og 75%alkohol. Lag et langsgående snitt for å fullstendig eksponere det kirurgiske området eller lage et trekantet snitt så lenge det eksponerer de fremre og bakre fontanellene og elektrodeimplanteringsstedene.Rull et lite stykke bomull til en ball og fukt den med 3% hydrogenperoksid. Fjern det myke vevet som er festet til skallen ved å gni forsiktig det eksponerte området med en liten bomullsdott til den fremre og bakre fontanellen er sett. Juster de fremre og bakre høydene slik at den fremre og bakre fontanellen er horisontal.Betrakt posisjonen til den fremre fontanellen som aksenes opprinnelse. Fest en skrue i rustfritt stål til venstre lillehjerneskalle. Still inn koordinatene for amygdala-tenningen fra bregmaen og juster den stereotaksiske enheten for å finne dette stedet og merke det.Bor et hull på marsjstedet med et skallebor på 0,5 millimeter diameter. Fest elektrodene til lokaliseringsstangen til den stereotaksiske enheten. Plasser elektroden vertikalt over hullet og slipp posisjonen til minus 4,9 millimeter sakte.Fest sølvtråden rundt skruen tre ganger. Pass på at du ikke rister elektrodelegemet under drift. Bland dental sement og forsiktig påføre den på elektroden og hodeskalleoverflaten.Når tannsementen herdes, modifiser utsiden til sementen som omslutter den faste elektroden blir til en kjegle. Slipp deretter elektroden fra den stereotaksiske enheten. Fjern musen og legg den tilbake i buret.Holder den atskilt fra de andre musene. Sett musen i en tilpasset boks med glidende kabler som forbinder elektroden på musens hode og EEG-enheten. Kjør kabelen gjennom et hull i bokslokket og juster lengden som er igjen i esken slik at musen kan bevege seg fritt.Slå på EEG-enheten og sørg for at den fungerer som den skal. Still inn stimulatorparametrene til å levere monofasiske kvadratbølgepulser på ett millisekund ved 60 hertz i en togvarighet på ett sekund i 10 stimuleringssykluser. Start med en strømintensitet på 50 mikroampere for den første stimuleringen.Overvåk EEG for etter utladning preget av høyfrekvente pigger. Hvis ingen etter utslipp observeres, legg 25 mikroampere til neste stimulus og fortsett denne prosessen hvert 10. minutt til en etter utslipp er observert og varer fem sekunder. Stimuler musen med den bestemte strømintensiteten hvert 15. minutt, ikke mer enn 20 ganger om dagen.Overvåk atferdsresponsene på stimulansen. Elektrodeimplantasjonskirurgien ble utført på seks friske voksne menn, C57 svarte 6 mus, og elektrisk stimulering ble utført to uker etter operasjonen. Det atferdsmessige anfallsnivået økte gradvis med antall stimuli som økte og antall stimuli som kreves for fullstendig tenning ble registrert.EEG etter utslipp varte i fem til 15 sekunder. Deretter intensiverte de intrakranielle spontane utslippene og atferdssymptomer begynte. Anfallsvarigheten var vanligvis mindre enn ett minutt, noe som reduserer risikoen for død av alvorlige kramper som resulterer i apné.Uttrykket av c-Fos i hjernevevet ble påvist ved immunhistokjemi to timer etter fullstendig opptenning. Resultatene viser at uttrykket av c-Fos i den ipsilaterale amygdala økte signifikant, og verifiserte muligheten for denne modellen. Separasjonen av wolframtrådender bør ikke overstige en halv millimeter, ellers kommer den ikke gjennom hjernehullet.Lengden på elektroden bør ikke være for lang, ellers vil det påvirke aktiviteten til mus.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Identification of Olfactory Volatiles using Gas Chromatography-Multi-unit Recordings (GCMR) in the Insect Antennal Lobe

Identification of Olfactory Volatiles using Gas Chromatography-Multi-unit Recordings GCMR in the Insect Antennal Lobe

Identifisering av Olfactory Flyktige ved hjelp av gasskromatografi-Multi-unit Recordings (GCMR) i Insekt antennal Lobe

All  organisms inhabit a world full of sensory stimuli that determine their  behavioral and physiological response to their environment. Olfaction is ...

Trypsin Digest Protocol to Analyze the Retinal Vasculature of a Mouse Model

Trypsin Digest protokollen til Analyser Retinal blodkar av en mus modell

Trypsin digest is the gold standard method to analyze the retinal vasculature 1-5. It allows visualization of the entire network of complex ...

A Comprehensive Protocol for Manual Segmentation of the Medial Temporal Lobe Structures

En omfattende protokoll for manuell segmentering av den mediale tinninglappen Structures

The present paper describes a comprehensive protocol for manual tracing of the set of brain regions comprising the medial temporal lobe (MTL): amygdala, ...

Pentylenetetrazole-Induced Kindling Mouse Model

Pentylenetetrazole-indusert Kindling musemodell

Pentylenetetrazole (PTZ) is a GABA-A receptor antagonist. An intraperitoneal injection of PTZ into an animal induces an acute, severe seizure at a high ...

The Power of Interstimulus Interval for the Assessment of Temporal Processing in Rodents

Kraften i Interstimulus intervall for vurdering av timelige behandling i gnagere

Temporal processing deficits have been implicated as a potential elemental dimension of higher-level cognitive processes, commonly observed in ...

Behavioral And Physiological Analysis In A Zebrafish Model Of Epilepsy

Atferds- og fysiologisk analyse i en sebrafiskmodell av epilepsi

Epilepsy represents one of the most common neurological disorders, affecting an estimated 50 million people worldwide. Recent advances in genetic research ...

Successful In vivo Calcium Imaging with a Head-Mount Miniaturized Microscope in the Amygdala of Freely Behaving Mouse

Vellykket In vivo kalsiumavbildning med et hode-Mount Miniatyrisert mikroskop i Amygdala av fritt oppfører seg mus

In vivo real-time monitoring of neuronal activities in freely moving animals is one of key approaches to link neuronal activity to behavior. For this ...

A Behavioral Screen for Heat-Induced Seizures in Mouse Models of Epilepsy

En atferdsskjerm for varmeinduserte anfall i musemodeller av epilepsi

Transgenic mouse models have proved to be powerful tools in studying various aspects of human neurological disorders, including epilepsy. The ...

Preparation and Implantation of Electrodes for Electrically Kindling VGAT-Cre Mice to Generate a Model for Temporal Lobe Epilepsy

It was discovered that electrical kindling of VGAT-Cre mice led to the spontaneous motor and electrographic seizures. A recent paper focused on how unique ...

Registration of Calcium Transients in Mouse Neuromuscular Junction with High Temporal Resolution using Confocal Microscopy

Registrering av kalsiumtransienter i mus Neuromuscular Junction med høy temporal oppløsning ved bruk av konfokal mikroskopi

Estimation of the presynaptic calcium level is a key task in studying synaptic transmission since calcium entry into the presynaptic cell triggers a ...