Name: using a bipolar electrode to create a temporal lobe epilepsy mouse model by electrical kindling of the amygdala
Uploaded: 2022-06-29T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Using a Bipolar Electrode to Create a Temporal Lobe Epilepsy Mouse Model by Electrical Kindling of the Amygdala at JoVE.com

A pesquisa foi apoiada pela Fundação Nacional de Ciências Naturais da China (No. 82030037, 81871009) e pela Comissão Municipal de Saúde de Pequim (11000022T000000444685). Agradecemos à TopEdit (www.topeditsci.com) por sua assistência linguística durante a preparação deste manuscrito.

Este experimento foi aprovado pelo Comitê de Ética em Animais Experimentais do Hospital Xuanwu da Capital Medical University. Todos os ratos foram mantidos no laboratório de animais do Hospital Xuanwu, Capital Medical University. Este protocolo está dividido em quatro partes. As duas primeiras partes introduzem o método de construção do eletrodo e do circuito elétrico usando um anel deslizante para conectar os eletrodos e o equipamento de gravação / estimulação de EEG. A terceira parte descreve o método de o...

<ol>
	<li>Kurita, T., Sakurai, K., Takeda, Y., Horinouchi, T., Kusumi, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Very+long-term+outcome+of+non-surgically+treated+patients+with+temporal+lobe+epilepsy+with+hippocampal+sclerosis:+A+retrospective+study.">Very long-term outcome of non-surgically treated patients with temporal lobe epilepsy with hippocampal sclerosis: A retrospective study.</a> PLoS One. 11 (7), 0159464 (2016).</li><li>Choy, M., Duffy, B. A., Lee, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optogenetic+study+of+networks+in+epilepsy.">Optogenetic study of networks in epilepsy.</a> Journal of Neuroscience Research. 95 (12), 2325-2335 (2017).</li><li>Aroniadou-Anderjaska, V., Fritsch, B., Qashu, F., Braga, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathology+and+pathophysiology+of+the+amygdala+in+epileptogenesis+and+epilepsy.">Pathology and pathophysiology of the amygdala in epileptogenesis and epilepsy.</a> Epilepsy Research. 78 (2-3), 102-116 (2008).</li><li>Smith, P. D., McLean, K. J., Murphy, M. A., Turnley, A. M., Cook, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Seizures,+not+hippocampal+neuronal+death,+provoke+neurogenesis+in+a+mouse+rapid+electrical+amygdala+kindling+model+of+seizures.">Seizures, not hippocampal neuronal death, provoke neurogenesis in a mouse rapid electrical amygdala kindling model of seizures.</a> Neuroscience. 136 (2), 405-415 (2005).</li><li>Reyes, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amygdala+enlargement:+Temporal+lobe+epilepsy+subtype+or+nonspecific+finding.">Amygdala enlargement: Temporal lobe epilepsy subtype or nonspecific finding.</a> Epilepsy Research. 132, 34-40 (2017).</li><li>Fan, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnosis+and+surgical+treatment+of+non-lesional+temporal+lobe+epilepsy+with+unilateral+amygdala+enlargement.">Diagnosis and surgical treatment of non-lesional temporal lobe epilepsy with unilateral amygdala enlargement.</a> Neurological Sciences. 42 (6), 2353-2361 (2021).</li><li>Dhir, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pentylenetetrazol+(PTZ)+kindling+model+of+epilepsy.">Pentylenetetrazol (PTZ) kindling model of epilepsy.</a> Current Protocols in Neuroscience. , 37 (2012).</li><li>Van Erum, J., Van Dam, D., De Deyn, P. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PTZ-induced+seizures+in+mice+require+a+revised+Racine+scale.">PTZ-induced seizures in mice require a revised Racine scale.</a> Epilepsy &amp; Behavior. 95, 51-55 (2019).</li><li>Carriero, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+guinea+pig+model+of+mesial+temporal+lobe+epilepsy+following+nonconvulsive+status+epilepticus+induced+by+unilateral+intrahippocampal+injection+of+kainic+acid.">A guinea pig model of mesial temporal lobe epilepsy following nonconvulsive status epilepticus induced by unilateral intrahippocampal injection of kainic acid.</a> Epilepsia. 53 (11), 1917-1927 (2012).</li><li>Levesque, M., Avoli, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+kainic+acid+model+of+temporal+lobe+epilepsy.">The kainic acid model of temporal lobe epilepsy.</a> Neuroscience Biobehavioral Reviews. 37, 2887-2899 (2013).</li><li>Fujita, A., Ota, M., Kato, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Urinary+volatile+metabolites+of+amygdala-kindled+mice+reveal+novel+biomarkers+associated+with+temporal+lobe+epilepsy.">Urinary volatile metabolites of amygdala-kindled mice reveal novel biomarkers associated with temporal lobe epilepsy.</a> Scientific Reports. 9 (1), 10586 (2019).</li><li>Li, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+spatiotemporal+dynamics+of+phase+synchronization+during+epileptogenesis+in+amygdala-kindling+mice.">The spatiotemporal dynamics of phase synchronization during epileptogenesis in amygdala-kindling mice.</a> PLoS One. 11 (4), 0153897 (2016).</li><li>Wang, Y., Wei, P., Yan, F., Luo, Y., Zhao, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+epilepsy:+A+phenotype-oriented+review.">Animal models of epilepsy: A phenotype-oriented review.</a> Aging and Disease. 13 (1), 215-231 (2022).</li><li>Fallah, M. S., Dlugosz, L., Scott, B. W., Thompson, M. D., Burnham, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antiseizure+effects+of+the+cannabinoids+in+the+amygdala-kindling+model.">Antiseizure effects of the cannabinoids in the amygdala-kindling model.</a> Epilepsia. 62 (9), 2274-2282 (2021).</li><li>Chipika, R. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amygdala+pathology+in+amyotrophic+lateral+sclerosis+and+primary+lateral+sclerosis.">Amygdala pathology in amyotrophic lateral sclerosis and primary lateral sclerosis.</a> Journal of the Neurological Sciences. 417, 117039 (2020).</li><li>Kuchukhidze, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emotional+recognition+in+patients+with+mesial+temporal+epilepsy+associated+with+enlarged+amygdala.">Emotional recognition in patients with mesial temporal epilepsy associated with enlarged amygdala.</a> Frontiers in Neurology. 12, 803787 (2021).</li><li>Soper, C., Wicker, E., Kulick, C. V., N'Gouemo, P., Forcelli, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optogenetic+activation+of+superior+colliculus+neurons+suppresses+seizures+originating+in+diverse+brain+networks.">Optogenetic activation of superior colliculus neurons suppresses seizures originating in diverse brain networks.</a> Neurobiology of Disease. 87, 102-115 (2016).</li><li>Devinsky, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epilepsy.">Epilepsy.</a> Nature Reviews Disease Primers. 4, 18024 (2018).</li><li>Zhang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interaction+between+thalamus+and+hippocampus+in+termination+of+amygdala-kindled+seizures+in+mice.">Interaction between thalamus and hippocampus in termination of amygdala-kindled seizures in mice.</a> Computational and Mathematical Methods in Medicine. 2016, 9580724 (2016).</li><li>Ghotbedin, Z., Janahmadi, M., Mirnajafi-Zadeh, J., Behzadi, G., Semnanian, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrical+low+frequency+stimulation+of+the+kindling+site+preserves+the+electrophysiological+properties+of+the+rat+hippocampal+CA1+pyramidal+neurons+from+the+destructive+effects+of+amygdala+kindling:+the+basis+for+a+possible+promising+epilepsy+therapy.">Electrical low frequency stimulation of the kindling site preserves the electrophysiological properties of the rat hippocampal CA1 pyramidal neurons from the destructive effects of amygdala kindling: the basis for a possible promising epilepsy therapy.</a> Brain Stimulation. 6 (4), 515-523 (2013).</li><li>Hristova, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Medial+septal+GABAergic+neurons+reduce+seizure+duration+upon+optogenetic+closed-loop+stimulation.">Medial septal GABAergic neurons reduce seizure duration upon optogenetic closed-loop stimulation.</a> Brain. 144 (5), 1576-1589 (2021).</li></ol>

A epilepsia é um grupo de doenças com múltiplas manifestações e causas diversas18; deve-se notar que nenhum modelo único pode ser usado para todos os tipos de epilepsia, e os pesquisadores devem selecionar um modelo apropriado para seu estudo específico. O presente estudo apresenta um dos métodos mais acessíveis de fabricação de eletrodos. Várias partes deste método podem ser ajustadas para se adaptar a diferentes condições experimentais.
Este método uti...

A epilepsia do lobo temporal (ELT) é o tipo mais prevalente de epilepsia e tem um alto risco de conversão em epilepsia resistente a medicamentos. A cirurgia, como a amigdalohipocampectomia seletiva, é um tratamento eficaz para a ELT, e a epileptogênese e a ictogênese da doença ainda estão em investigação 1,2. Demonstrou-se que a patogênese da ELT ocorre não apenas no hipocampo, mas também extensivamente na amígdala 3,4. Por exemplo, tanto a esclerose da amígdala quanto o aumento da amígdala têm sido frequentemente relatados como as origens das crises de ELT 5,6. A importância da amígdala não pode ser subestimada; um modelo de amígdala é essencial para o estudo da epileptogênese, e uma ilustração clara desse modelo é urgentemente necessária.
Várias abordagens têm sido propostas para induzir convulsões em modelos animais. No passado, drogas convulsivas eram injetadas por via intraperitoneal em um estágio inicial7. Embora este método fosse conveniente, a localização dos focos epilépticos era incerta. Com o desenvolvimento da tecnologia estereotáxica e um atlas cerebral animal detalhado, a injeção intracraniana de drogas foi aplicada para resolver o problema da localização8. No entanto, a falta de intervenção para crises graves durante o estágio agudo resultou em uma alta taxa de mortalidade, e as crises crônicas espontâneas foram acompanhadas pelo problema da frequência interictal e convulsiva instável 9,10. Finalmente, o método de acendimento elétrico foi desenvolvido; esse método estimula periodicamente regiões específicas do cérebro várias vezes, permitindo que as crises sejam induzidas com controle definitivo tanto da localização quanto do tempo de início11.
Uma vantagem desse método é que o implante intracraniano de eletrodos é minimamente invasivo12. Além disso, a gravidade da convulsão é controlável pelo término dos estímulos, reduzindo a mortalidade causada pelas convulsões. Estas alterações resolveram as deficiências das abordagens anteriores. Notavelmente, esse modelo pode imitar adequadamente as convulsões humanas e é especialmente adequado para o estudo do estado de mal epiléptico (SE) devido à sua capacidade de induzir a AE rapidamente13. Também pode ser usado para triagem de drogas antiepilépticas14 e em estudos sobre o mecanismo da epilepsia. Por fim, sabe-se que a amígdala está intimamente associada à modulação da memória, ao processamento de recompensas e à emoção15. Distúrbios dessas funções mentais são frequentemente encontrados em pacientes epilépticos e, portanto, o modelo de epilepsia da amígdala pode ser uma melhor escolha para o estudo de problemas emocionais na epilepsia16.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 488-conjugated Donkey anti-Rabbit IgG</td>
			<td>invitrogen</td>
			<td>A-21206</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>c-Fos antibody</td>
			<td></td>
			<td>ab222699</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cranial drill</td>
			<td>SANS</td>
			<td>SA302</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dental cement</td>
			<td>NISSIN</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EEG recording and stimulation equipment</td>
			<td>Neuracle Technology (Changzhou) Co., Ltd</td>
			<td>NSHHFS-210803</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>lead-free tin wire</td>
			<td>BAKON</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pin header/Female header</td>
			<td>XIANMISI</td>
			<td></td>
			<td>spacing of 1.27 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silver wire</td>
			<td>A-M systems</td>
			<td>786000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slip ring</td>
			<td>Senring Electronics Co.,Ltd</td>
			<td>SNM008-04</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tungsten wire</td>
			<td>A-M systems</td>
			<td>796000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ultrafine multi-stand wire</td>
			<td>Shenzhen Chengxing wire and cable</td>
			<td>UL10064-FEP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>welding equipment</td>
			<td>BAKON</td>
			<td>BK881</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

using a bipolar electrode to create a temporal lobe epilepsy mouse model by electrical kindling of the amygdala

A amígdala é uma das origens mais comuns de convulsões, e o modelo de rato amígdala é essencial para a ilustração da epilepsia. No entanto, poucos estudos descreveram o protocolo experimental em detalhes. Este artigo ilustra todo o processo de fabricação de modelos de epilepsia de acendimento elétrico da amígdala, com a introdução de um método de fabricação de eletrodos bipolares. Este eletrodo pode estimular e gravar, reduzindo a lesão cerebral causada pela implantação de eletrodos separados para estimulação e gravação. Para fins de registro de eletroencefalograma (EEG) de longo prazo, anéis deslizantes foram usados para eliminar a interrupção do registro causada por emaranhados de cabos e queda.
Após estimulação periódica (60 Hz, 1 s a cada 15 min) da amígdala basolateral (AP: 1,67 mm, L: 2,7 mm, V: 4,9 mm) por 19,83 ± 5,742 vezes, o acendimento completo foi observado em seis camundongos (definido como a indução de três episódios contínuos de grau V classificados pela escala de Racine). Um EEG intracraniano foi registrado durante todo o processo de acendimento e uma descarga epiléptica na amígdala com duração de 20-70 s foi observada após o acendido. Portanto, este é um protocolo robusto para modelar a epilepsia originária da amígdala, e o método é adequado para revelar o papel da amígdala na epilepsia do lobo temporal. Esta pesquisa contribui para estudos futuros sobre os mecanismos da epilepsia do lobo temporal mesial e novas drogas antiepileptogênicas.

O eletrodo e o circuito permitem que o EEG seja registrado e funcione como uma estimulação (Figura 1); essa configuração evita a complexidade de implantar eletrodos de gravação e estimulação separadamente e minimiza os danos ao tecido cerebral. A aplicação de anéis deslizantes permite a conexão de eletrodos com todos os tipos de dispositivos.
Realizamos cirurgia de implante de eletrodo em seis camundongos adultos saudáveis machos C57BL/6, e a estimula...

Watch this Scientific Journal Video about Using a Bipolar Electrode to Create a Temporal Lobe Epilepsy Mouse Model by Electrical Kindling of the Amygdala at JoVE.com

Using a Bipolar Electrode to Create a Temporal Lobe Epilepsy Mouse Model by Electrical Kindling of the Amygdala

A amígdala desempenha um papel fundamental na epilepsia do lobo temporal, que se origina e se propaga a partir dessa estrutura. Este artigo fornece uma descrição detalhada da fabricação de eletrodos cerebrais profundos com funções de gravação e estimulação. Introduz um modelo de epilepsia do lobo temporal medial originária da amígdala.

Usando um eletrodo bipolar para criar um modelo de rato com epilepsia do lobo temporal por acendimento elétrico da amígdala

The amygdala is one of the most common origins of seizures, and the amygdala mouse model is essential for the illustration of epilepsy. However, few ...

Este protocolo propôs um modelo de epilepsia com amígdala como origem. Ele abre o caminho para a investigação das estruturas do lobo temporal mesial. Esse modelo pode ser interpretado como a base do experimento.Como este protocolo é um método de baixo custo e eficiente, pode ser realizado rapidamente na maioria dos laboratórios. Demonstrando o procedimento estará Yongchang Lu, uma pós-graduada em nosso laboratório. Comece por reunir os componentes pré-preparados, começando com pedaços de dois centímetros de comprimento de fio de tungstênio revestido de Teflon com um diâmetro de urso de 76,2 micrômetros.Um pedaço de fio de prata com um diâmetro de urso de 127 micrômetros do mesmo comprimento e um conjunto de dois por dois pinos de corda calibrados. Use um isqueiro para queimar uma extremidade de cada fio de tungstênio para remover cinco milímetros do revestimento de isolamento. Descasque uma seção de fio multi-fio ultrafino.Desembrulhe da parte inferior para a extremidade superior, onde começa a escurecer continuando até o topo. Combine este fio super fino e o fio de tungstênio apertando uma extremidade e torcendo suavemente a outra, permitindo que os dois materiais sejam facilmente entrelaçados. Puxe suavemente para garantir que os fios estejam bem enrolados e corte o excesso de fio super fino.Tente manter o fio de tungstênio reto durante todo o processo. Fixe o pino da corda na braçadeira na mesa de soldadura com o lado mais longo dos pinos virado para fora. Use a agulha da seringa para pegar um pouco de pasta de solda e aplicá-la aos pinos.Aqueça a tocha de soldagem a 320 graus Celsius. Derreta e espalhe um fio de estanho sem chumbo com a ponta da tocha. Sobreponha a extremidade superior do fio de tungstênio com uma agulha dos pinos da corda e use a solda na tocha para ligar o fio de tungstênio ao pino.Solde outro fio de tungstênio e outro fio de prata no pino da corda da mesma maneira para que cada fio corresponda a uma agulha. Corte dois tubos termoencolhíveis um pouco mais longos do que a extremidade superior do fio de tungstênio. Coloque-os na junta de solda de dois fios de tungstênio, garantindo que a parte condutora esteja totalmente coberta no tubo para que o circuito dos dois fios de tungstênio não seja colocado em série.Remova o eletrodo da braçadeira da mesa de soldagem e segure o eletrodo suavemente com um alicate grande, pois é fácil que os eletrodos percam sua forma ao aquecer o tubo encolhível. Use uma boa braçadeira de condutividade térmica com um pouco mais de força. Ligue o duto de ar e aqueça até que uma temperatura de 320 graus Celsius seja atingida.Sopre o tubo termoencolhível por vários segundos até que ele esteja apertado. Reforce o eletrodo com adesivo hot melt. Segure os dois fios de tungstênio e torça-os juntos, mantendo suas extremidades separadas.Aparar os fios de tungstênio torcidos para aproximadamente 10 milímetros de comprimento para que a separação nas extremidades não exceda 0,5 milímetros. Verifique os eletrodos com um multímetro, colocando uma barra do multímetro no lado não soldado dos pinos da corda e tocando suavemente a extremidade do fio de tungstênio ou fio de prata na outra barra. Verificar se o circuito está liso.Certifique-se de que as linhas não sejam colocadas em série. Descasque cinco milímetros da pele de isolamento em cada extremidade para expor o fio de metal no interior. Adicione uma seção de tubulação termoencolhível a cada fio de partida.Solde cada fio com o plugue do conector do dispositivo EEG. Reduza o tubo termoencolhível com ar quente. Adicione uma seção de tubo termoencolhível a cada fio do rotor.Parafuse as partes condutoras dos fios vermelho e laranja e solde-as a uma junta e ao cabeçalho para encaixar o pino da corda. Solde os outros dois fios no conector a cada junta. Pese o mouse.Quando o rato estiver totalmente anestesiado, raspe o cabelo do olho para a área da orelha com uma navalha. Corrija o mouse no quadro estereotáxico. Coloque os dentes superiores da frente na barra incisiva e insira ambas as barras auriculares com profundidades iguais nas orelhas.Aplique pomada ocular eritromicina nos olhos para evitar a secura e cegueira causada pela luz brilhante durante a cirurgia. Desinfetar a área cirúrgica pelo menos três vezes com swabs alternados de iodóforo e álcool a 75%. Faça uma incisão longitudinal para expor totalmente a área cirúrgica ou faça uma incisão triangular, desde que exponha as fontanelas anteriores e posteriores e os locais de implantação de eletrodos.Enrole um pequeno pedaço de algodão em uma bola e molhe-o com 3% de peróxido de hidrogênio. Remova o tecido mole ligado ao crânio esfregando suavemente a área exposta com uma pequena bola de algodão até que a fontanela anterior e posterior seja vista. Ajuste as alturas anterior e posterior para que a fontanela anterior e posterior fique horizontal.Considere a posição da fontanela anterior como a origem dos eixos. Fixe um parafuso de aço inoxidável no crânio cerebelar esquerdo. Defina as coordenadas para a amígdala que se acende a partir do bregma e ajuste o dispositivo estereotáxico para localizar esse ponto e marcá-lo.Faça um furo no local da marcha com uma broca de crânio de 0,5 milímetro de diâmetro. Fixe os eletrodos na haste de localização do dispositivo estereotáxico. Coloque o eletrodo verticalmente acima do orifício e solte a posição para menos 4,9 milímetros lentamente.Enrole o fio de prata ao redor do parafuso três vezes. Tomando cuidado para não agitar o corpo do eletrodo durante a operação. Misture o cimento dentário e aplique-o suavemente na superfície do eletrodo e do crânio.Quando o cimento dentário endurecer, modifique o exterior até que o cimento que envolve o eletrodo fixo se transforme em um cone. Em seguida, solte o eletrodo do dispositivo estereotáxico. Remova o mouse e coloque-o de volta na gaiola.Mantê-lo separado dos outros ratos. Coloque o mouse em uma caixa personalizada com cabos deslizantes conectando o eletrodo na cabeça do mouse e o dispositivo de EEG. Passe o cabo através de um orifício na tampa da caixa e ajuste o comprimento deixado na caixa para permitir que o mouse se mova livremente.Ligue o dispositivo EEG e verifique se ele funciona corretamente. Defina os parâmetros do estimulador para fornecer pulsos de onda quadrada monofásicos de um milissegundo a 60 hertz para uma duração de trem de um segundo por 10 ciclos de estimulação. Comece com uma intensidade de corrente de 50 microamperes para a primeira estimulação.Monitore o EEG para após a descarga caracterizada por picos de alta frequência. Se não for observada uma descarga após a descarga, adicione 25 microamperes ao próximo estímulo e continue este processo a cada 10 minutos até que uma descarga após a descarga seja observada e dure cinco segundos. Estimule o rato com a intensidade de corrente determinada a cada 15 minutos, não mais do que 20 vezes por dia.Monitore as respostas comportamentais ao estímulo. A cirurgia de implantação de eletrodos foi realizada em seis camundongos adultos saudáveis C57 black 6 e a estimulação elétrica foi realizada duas semanas após a cirurgia. O nível de convulsão comportamental aumentou gradualmente com o aumento do número de estímulos e o número de estímulos necessários para o acendimento completo foi registrado.O EEG após as descargas durou de cinco a 15 segundos. Em seguida, as descargas espontâneas intracranianas se intensificaram e os sintomas comportamentais começaram. A duração da convulsão foi geralmente inferior a um minuto, o que reduz o risco de morte por convulsões graves, resultando em apneia.A expressão de c-Fos no tecido cerebral foi detectada por imuno-histoquímica duas horas após o acendimento completo. Os resultados mostram que a expressão de c-Fos na amígdala ipsilateral aumentou significativamente verificando a viabilidade deste modelo. A separação das extremidades do fio de tungstênio não deve exceder meio milímetro, caso contrário, não passará pelo orifício do cérebro.O comprimento do eletrodo não deve ser muito longo, caso contrário, afetará a atividade dos camundongos.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Identification of Olfactory Volatiles using Gas Chromatography-Multi-unit Recordings (GCMR) in the Insect Antennal Lobe

Identification of Olfactory Volatiles using Gas Chromatography-Multi-unit Recordings GCMR in the Insect Antennal Lobe

Identificação de voláteis olfativas utilizando cromatografia gasosa-Multi-unidade Gravações (GCMR) no lobo antenal Inseto

All  organisms inhabit a world full of sensory stimuli that determine their  behavioral and physiological response to their environment. Olfaction is ...

Neurociência

Trypsin Digest Protocol to Analyze the Retinal Vasculature of a Mouse Model

Tripsina Digest protocolo para analisar a vascularização da retina de um rato modelo

Trypsin digest is the gold standard method to analyze the retinal vasculature 1-5. It allows visualization of the entire network of complex ...

A Comprehensive Protocol for Manual Segmentation of the Medial Temporal Lobe Structures

Um protocolo abrangente para segmentação manual das estruturas do lobo temporal medial

The present paper describes a comprehensive protocol for manual tracing of the set of brain regions comprising the medial temporal lobe (MTL): amygdala, ...

Pentylenetetrazole-Induced Kindling Mouse Model

Inflamação induzida pela mielinização Mouse modelo

Pentylenetetrazole (PTZ) is a GABA-A receptor antagonist. An intraperitoneal injection of PTZ into an animal induces an acute, severe seizure at a high ...

The Power of Interstimulus Interval for the Assessment of Temporal Processing in Rodents

O poder do intervalo de Interstimulus para a avaliação do processamento Temporal em roedores

Temporal processing deficits have been implicated as a potential elemental dimension of higher-level cognitive processes, commonly observed in ...

Behavioral And Physiological Analysis In A Zebrafish Model Of Epilepsy

Análise comportamental e fisiológica em um modelo de zebrafish de epilepsia

Epilepsy represents one of the most common neurological disorders, affecting an estimated 50 million people worldwide. Recent advances in genetic research ...

Successful In vivo Calcium Imaging with a Head-Mount Miniaturized Microscope in the Amygdala of Freely Behaving Mouse

Imagem de cálcio in vivo bem sucedida com um microscópio miniaturizado de head-mount na Amígdala do Rato Livremente Comportado

In vivo real-time monitoring of neuronal activities in freely moving animals is one of key approaches to link neuronal activity to behavior. For this ...

A Behavioral Screen for Heat-Induced Seizures in Mouse Models of Epilepsy

Uma tela comportamental para convulsões induzidas pelo calor em modelos de epilepsia de mouse

Transgenic mouse models have proved to be powerful tools in studying various aspects of human neurological disorders, including epilepsy. The ...

Preparation and Implantation of Electrodes for Electrically Kindling VGAT-Cre Mice to Generate a Model for Temporal Lobe Epilepsy

It was discovered that electrical kindling of VGAT-Cre mice led to the spontaneous motor and electrographic seizures. A recent paper focused on how unique ...

Registration of Calcium Transients in Mouse Neuromuscular Junction with High Temporal Resolution using Confocal Microscopy

Registro de Transintes de Cálcio na Junção Neuromuscular do Rato com Alta Resolução Temporal utilizando Microscopia Confocal

Estimation of the presynaptic calcium level is a key task in studying synaptic transmission since calcium entry into the presynaptic cell triggers a ...