Name: using a bipolar electrode to create a temporal lobe epilepsy mouse model by electrical kindling of the amygdala
Uploaded: 2022-06-29T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Using a Bipolar Electrode to Create a Temporal Lobe Epilepsy Mouse Model by Electrical Kindling of the Amygdala at JoVE.com

Исследование было поддержано Национальным фондом естественных наук Китая (No 82030037, 81871009) и Пекинской муниципальной комиссией по здравоохранению (11000022T000000444685). Мы благодарим TopEdit (www.topeditsci.com) за лингвистическую помощь при подготовке этой рукописи.

Этот эксперимент был одобрен Комитетом по этике экспериментальных животных больницы Сюаньу Столичного медицинского университета. Все мыши содержались в лаборатории на животных больницы Сюаньу Столичного медицинского университета. Этот протокол разделен на четыре части. Первые две ?...

<ol>
	<li>Kurita, T., Sakurai, K., Takeda, Y., Horinouchi, T., Kusumi, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Very+long-term+outcome+of+non-surgically+treated+patients+with+temporal+lobe+epilepsy+with+hippocampal+sclerosis:+A+retrospective+study.">Very long-term outcome of non-surgically treated patients with temporal lobe epilepsy with hippocampal sclerosis: A retrospective study.</a> PLoS One. 11 (7), 0159464 (2016).</li><li>Choy, M., Duffy, B. A., Lee, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optogenetic+study+of+networks+in+epilepsy.">Optogenetic study of networks in epilepsy.</a> Journal of Neuroscience Research. 95 (12), 2325-2335 (2017).</li><li>Aroniadou-Anderjaska, V., Fritsch, B., Qashu, F., Braga, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathology+and+pathophysiology+of+the+amygdala+in+epileptogenesis+and+epilepsy.">Pathology and pathophysiology of the amygdala in epileptogenesis and epilepsy.</a> Epilepsy Research. 78 (2-3), 102-116 (2008).</li><li>Smith, P. D., McLean, K. J., Murphy, M. A., Turnley, A. M., Cook, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Seizures,+not+hippocampal+neuronal+death,+provoke+neurogenesis+in+a+mouse+rapid+electrical+amygdala+kindling+model+of+seizures.">Seizures, not hippocampal neuronal death, provoke neurogenesis in a mouse rapid electrical amygdala kindling model of seizures.</a> Neuroscience. 136 (2), 405-415 (2005).</li><li>Reyes, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amygdala+enlargement:+Temporal+lobe+epilepsy+subtype+or+nonspecific+finding.">Amygdala enlargement: Temporal lobe epilepsy subtype or nonspecific finding.</a> Epilepsy Research. 132, 34-40 (2017).</li><li>Fan, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnosis+and+surgical+treatment+of+non-lesional+temporal+lobe+epilepsy+with+unilateral+amygdala+enlargement.">Diagnosis and surgical treatment of non-lesional temporal lobe epilepsy with unilateral amygdala enlargement.</a> Neurological Sciences. 42 (6), 2353-2361 (2021).</li><li>Dhir, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pentylenetetrazol+(PTZ)+kindling+model+of+epilepsy.">Pentylenetetrazol (PTZ) kindling model of epilepsy.</a> Current Protocols in Neuroscience. , 37 (2012).</li><li>Van Erum, J., Van Dam, D., De Deyn, P. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PTZ-induced+seizures+in+mice+require+a+revised+Racine+scale.">PTZ-induced seizures in mice require a revised Racine scale.</a> Epilepsy &amp; Behavior. 95, 51-55 (2019).</li><li>Carriero, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+guinea+pig+model+of+mesial+temporal+lobe+epilepsy+following+nonconvulsive+status+epilepticus+induced+by+unilateral+intrahippocampal+injection+of+kainic+acid.">A guinea pig model of mesial temporal lobe epilepsy following nonconvulsive status epilepticus induced by unilateral intrahippocampal injection of kainic acid.</a> Epilepsia. 53 (11), 1917-1927 (2012).</li><li>Levesque, M., Avoli, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+kainic+acid+model+of+temporal+lobe+epilepsy.">The kainic acid model of temporal lobe epilepsy.</a> Neuroscience Biobehavioral Reviews. 37, 2887-2899 (2013).</li><li>Fujita, A., Ota, M., Kato, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Urinary+volatile+metabolites+of+amygdala-kindled+mice+reveal+novel+biomarkers+associated+with+temporal+lobe+epilepsy.">Urinary volatile metabolites of amygdala-kindled mice reveal novel biomarkers associated with temporal lobe epilepsy.</a> Scientific Reports. 9 (1), 10586 (2019).</li><li>Li, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+spatiotemporal+dynamics+of+phase+synchronization+during+epileptogenesis+in+amygdala-kindling+mice.">The spatiotemporal dynamics of phase synchronization during epileptogenesis in amygdala-kindling mice.</a> PLoS One. 11 (4), 0153897 (2016).</li><li>Wang, Y., Wei, P., Yan, F., Luo, Y., Zhao, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+epilepsy:+A+phenotype-oriented+review.">Animal models of epilepsy: A phenotype-oriented review.</a> Aging and Disease. 13 (1), 215-231 (2022).</li><li>Fallah, M. S., Dlugosz, L., Scott, B. W., Thompson, M. D., Burnham, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antiseizure+effects+of+the+cannabinoids+in+the+amygdala-kindling+model.">Antiseizure effects of the cannabinoids in the amygdala-kindling model.</a> Epilepsia. 62 (9), 2274-2282 (2021).</li><li>Chipika, R. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amygdala+pathology+in+amyotrophic+lateral+sclerosis+and+primary+lateral+sclerosis.">Amygdala pathology in amyotrophic lateral sclerosis and primary lateral sclerosis.</a> Journal of the Neurological Sciences. 417, 117039 (2020).</li><li>Kuchukhidze, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emotional+recognition+in+patients+with+mesial+temporal+epilepsy+associated+with+enlarged+amygdala.">Emotional recognition in patients with mesial temporal epilepsy associated with enlarged amygdala.</a> Frontiers in Neurology. 12, 803787 (2021).</li><li>Soper, C., Wicker, E., Kulick, C. V., N'Gouemo, P., Forcelli, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optogenetic+activation+of+superior+colliculus+neurons+suppresses+seizures+originating+in+diverse+brain+networks.">Optogenetic activation of superior colliculus neurons suppresses seizures originating in diverse brain networks.</a> Neurobiology of Disease. 87, 102-115 (2016).</li><li>Devinsky, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epilepsy.">Epilepsy.</a> Nature Reviews Disease Primers. 4, 18024 (2018).</li><li>Zhang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interaction+between+thalamus+and+hippocampus+in+termination+of+amygdala-kindled+seizures+in+mice.">Interaction between thalamus and hippocampus in termination of amygdala-kindled seizures in mice.</a> Computational and Mathematical Methods in Medicine. 2016, 9580724 (2016).</li><li>Ghotbedin, Z., Janahmadi, M., Mirnajafi-Zadeh, J., Behzadi, G., Semnanian, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrical+low+frequency+stimulation+of+the+kindling+site+preserves+the+electrophysiological+properties+of+the+rat+hippocampal+CA1+pyramidal+neurons+from+the+destructive+effects+of+amygdala+kindling:+the+basis+for+a+possible+promising+epilepsy+therapy.">Electrical low frequency stimulation of the kindling site preserves the electrophysiological properties of the rat hippocampal CA1 pyramidal neurons from the destructive effects of amygdala kindling: the basis for a possible promising epilepsy therapy.</a> Brain Stimulation. 6 (4), 515-523 (2013).</li><li>Hristova, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Medial+septal+GABAergic+neurons+reduce+seizure+duration+upon+optogenetic+closed-loop+stimulation.">Medial septal GABAergic neurons reduce seizure duration upon optogenetic closed-loop stimulation.</a> Brain. 144 (5), 1576-1589 (2021).</li></ol>

Эпилепсия – это группа заболеваний с множественными проявлениями и разнообразными причинами18; Следует отметить, что ни одна модель не может быть использована для всех типов эпилепсии, и исследователи должны выбрать подходящую модель для своего конкретного исследования. ...

Височная эпилепсия (TLE) является наиболее распространенным типом эпилепсии и имеет высокий риск превращения в лекарственно-устойчивую эпилепсию. Хирургическое вмешательство, такое как селективная миндалевидное тело, является эффективным методом лечения TLE, а эпилептогенез и ихтогенез заболевания все еще исследуются 1,2. Было показано, что патогенез TLE происходит не только в гиппокампе, но и в миндалине 3,4. Например, как склероз миндалевидного тела, так и увеличение миндалевидного тела часто сообщаются как о происхождении судорог TLE 5,6. Важность миндалевидного тела нельзя недооценивать; Миндалевидное тело имеет важное значение для изучения эпилептогенеза, и срочно необходима четкая иллюстрация этой модели.
Было предложено несколько подходов для индукции судорог на животных моделях. В прошлом противосудорожные препараты вводили внутрибрюшинно на ранней стадии7. Хотя этот метод был удобен, расположение эпилептических очагов было неопределенным. С развитием стереотаксических технологий и подробного атласа мозга животных для решения проблемы локализации стало применяться внутричерепное введение препарата8. Однако отсутствие вмешательства при тяжелых припадках в острой стадии приводило к высокой смертности, а хронические спонтанные припадки сопровождались проблемой нестабильной межприступной частоты и частоты приступов 9,10. Наконец, был разработан метод электрической растопки; Этот метод периодически стимулирует определенные области мозга несколько раз, позволяя вызывать судороги с определенным контролем как местоположения, так и времени начала11.
Преимуществом этого метода является то, что внутричерепная имплантация электродов является малоинвазивной12. Кроме того, тяжесть припадка можно контролировать путем прекращения раздражителей, что снижает смертность, вызванную судорогами. Эти изменения устранили недостатки предыдущих подходов. Примечательно, что эта модель может адекватно имитировать судороги человека и особенно подходит для изучения эпилептического статуса (SE) из-за ее способности быстро индуцировать SE13. Он также может быть использован для скрининга противоэпилептических препаратов14 и в исследованиях механизма эпилепсии. Наконец, хорошо известно, что миндалевидное тело тесно связано с модуляцией памяти, обработкой вознаграждения и эмоциями15. Расстройства этих психических функций часто встречаются у пациентов с эпилепсией, и, таким образом, модель миндалевидного тела эпилепсии может быть лучшим выбором для изучения эмоциональных проблем при эпилепсии16.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 488-conjugated Donkey anti-Rabbit IgG</td>
			<td>invitrogen</td>
			<td>A-21206</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>c-Fos antibody</td>
			<td></td>
			<td>ab222699</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cranial drill</td>
			<td>SANS</td>
			<td>SA302</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dental cement</td>
			<td>NISSIN</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EEG recording and stimulation equipment</td>
			<td>Neuracle Technology (Changzhou) Co., Ltd</td>
			<td>NSHHFS-210803</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>lead-free tin wire</td>
			<td>BAKON</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pin header/Female header</td>
			<td>XIANMISI</td>
			<td></td>
			<td>spacing of 1.27 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silver wire</td>
			<td>A-M systems</td>
			<td>786000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slip ring</td>
			<td>Senring Electronics Co.,Ltd</td>
			<td>SNM008-04</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tungsten wire</td>
			<td>A-M systems</td>
			<td>796000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ultrafine multi-stand wire</td>
			<td>Shenzhen Chengxing wire and cable</td>
			<td>UL10064-FEP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>welding equipment</td>
			<td>BAKON</td>
			<td>BK881</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

using a bipolar electrode to create a temporal lobe epilepsy mouse model by electrical kindling of the amygdala

Миндалевидное тело является одним из наиболее распространенных источников судорог, и модель миндалевидного тела у мыши необходима для иллюстрации эпилепсии. Тем не менее, лишь немногие исследования подробно описали экспериментальный протокол. В данной работе проиллюстрирован весь процесс создания модели эпилепсии при электрическом разжигании миндалевидного тела с внедрением метода изготовления биполярных электродов. Этот электрод может как стимулировать, так и записывать, уменьшая травму головного мозга, вызванную имплантацией отдельных электродов для стимуляции и записи. Для длительной записи электроэнцефалограммы (ЭЭГ) использовались контактные кольца для устранения прерывания записи, вызванного спутыванием и падением кабеля.
После периодической стимуляции (60 Гц, 1 с каждые 15 мин) базолатеральной миндалины (AP: 1,67 мм, L: 2,7 мм, V: 4,9 мм) в течение 19,83 ± 5,742 раза, полное растопление наблюдалось у шести мышей (определяемое как индукция трех непрерывных эпизодов V степени, классифицированных по шкале Расина). На протяжении всего процесса растопки регистрировалась внутричерепная ЭЭГ, а после растопки наблюдался эпилептический разряд в миндалине продолжительностью 20-70 с. Таким образом, это надежный протокол моделирования эпилепсии, происходящей из миндалевидного тела, и метод подходит для выявления роли миндалевидного тела в височной эпилепсии. Это исследование способствует будущим исследованиям механизмов мезиальной височной эпилепсии и новых противоэпилептогенных препаратов.

Электрод и схема позволяют регистрировать ЭЭГ и функционировать как стимуляция (рис. 1); Эта установка позволяет избежать сложностей имплантации записывающих и стимулирующих электродов по отдельности и сводит к минимуму повреждение тканей мозга. Применение контактных...

Watch this Scientific Journal Video about Using a Bipolar Electrode to Create a Temporal Lobe Epilepsy Mouse Model by Electrical Kindling of the Amygdala at JoVE.com

Using a Bipolar Electrode to Create a Temporal Lobe Epilepsy Mouse Model by Electrical Kindling of the Amygdala

Миндалевидное тело играет ключевую роль в височной эпилепсии, которая возникает и распространяется из этой структуры. В этой статье приведено подробное описание изготовления глубоких электродов мозга, обладающих как записывающей, так и стимулирующей функциями. Он представляет модель медиальной височной эпилепсии, происходящей из миндалевидного тела.

Использование биполярного электрода для создания модели мышиной эпилепсии височной доли путем электрического растопления миндалевидного тела

The amygdala is one of the most common origins of seizures, and the amygdala mouse model is essential for the illustration of epilepsy. However, few ...

В этом протоколе была предложена модель эпилепсии с миндалевидным телом в качестве источника. Это открывает путь к исследованию мезиальных структур височной доли. Эта модель может быть интерпретирована как основа эксперимента.Поскольку этот протокол является недорогим и эффективным методом, он может быть быстро выполнен в большинстве лабораторий. Продемонстрирует процедуру Юнчан Лу, аспирант нашей лаборатории. Начните со сбора заранее подготовленных компонентов, начиная с двухсантиметровых кусков вольфрамовой проволоки с тефлоновым покрытием и диаметром подшипника 76,2 микрометра.Один кусок серебряной проволоки с диаметром медведя 127 микрометров одинаковой длины и один набор из двух на два калиброванных веревочных штифта. Используйте зажигалку, чтобы сжечь один конец каждой вольфрамовой проволоки, чтобы удалить пять миллиметров изоляционного покрытия. Отсоедините отрезок ультратонкой многожильной проволоки.Разверните снизу к верхнему концу, где начинает темнеть, продолжая движение вверх. Объедините эту сверхтонкую проволоку и вольфрамовую проволоку, зажав один конец и осторожно скрутив другой, что позволит двум материалам легко переплетаться вместе. Осторожно потяните, чтобы провода были плотно обмотаны, и отрежьте лишнюю сверхтонкую проволоку.Старайтесь, чтобы вольфрамовая проволока была прямой на протяжении всего процесса. Закрепите тросовый штифт на зажиме на сварочном столе более длинной стороной штифтов наружу. Используйте иглу шприца, чтобы набрать немного паяльной пасты и нанести ее на штифты.Нагрейте сварочную горелку до 320 градусов Цельсия. Расплавьте и намажьте наконечником горелки бессвинцовую оловянную проволоку. Перекройте верхний конец вольфрамовой проволоки одной иглой веревочных штифтов и используйте припой на горелке, чтобы прикрепить вольфрамовую проволоку к штифту.Таким же образом приварите к веревочному штифту еще одну вольфрамовую проволоку и еще одну серебряную проволоку так, чтобы каждая проволока соответствовала игле. Отрежьте две термоусадочные трубки чуть длиннее верхнего конца вольфрамовой проволоки. Поместите их на паяное соединение двух вольфрамовых проводов, убедившись, что проводящая часть полностью покрыта трубкой, чтобы цепь двух вольфрамовых проводов не была размещена последовательно.Снимите электрод с зажима сварочного стола и осторожно удерживайте электрод большими плоскогубцами, так как электроды легко теряют свою форму при нагревании термоусадочной трубки. Используйте зажим с хорошей теплопроводностью с немного большим усилием. Включите воздуховод и нагревайте до тех пор, пока не будет достигнута температура 320 градусов по Цельсию.Продуйте термоусадочную трубку в течение нескольких секунд, пока она не затянется. Укрепите электрод клеем-расплавом. Возьмитесь за две вольфрамовые проволоки и скрутите их вместе, держа их концы друг от друга.Обрежьте скрученные вольфрамовые провода примерно до 10 миллиметров в длину так, чтобы расстояние на концах не превышало 0,5 миллиметра. Проверьте электроды мультиметром, поместив один стержень мультиметра на несваренную сторону штифтов каната и осторожно прикоснувшись концом вольфрамовой проволоки или серебряной проволоки к другому стержню. Проверка плавности цепи.Следите за тем, чтобы линии не располагались последовательно. Снимите по пять миллиметров изоляционной оболочки с каждого конца, чтобы обнажить металлическую проволоку внутри. Добавьте отрезок термоусадочной трубки к каждому стартовому проводу.Приварите каждый провод к штекеру разъема устройства ЭЭГ. Сожмите термоусадочную трубку горячим воздухом. Добавьте отрезок термоусадочной трубки к каждому проводу ротора.Прикрутите проводящие части красного и оранжевого проводов вместе и приварите их к стыку и коллектору, чтобы они соответствовали тросовому штифту. Приварите два других провода на коллекторе к каждому стыку. Взвесьте мышь.Когда мышь полностью обезболит, сбрейте бритвой волосы от глаз до ушей. Зафиксируйте мышь на стереотаксической рамке. Вставьте передние верхние зубы в резцовую планку и вставьте обе ушные планки на одинаковую глубину в уши.Нанесите эритромициновую глазную мазь на глаза, чтобы предотвратить сухость и слепоту, вызванные ярким светом во время операции. Продезинфицируйте операционную область не менее трех раз чередующимися тампонами йодофора и 75%-ного спирта. Сделайте продольный разрез, чтобы полностью обнажить операционную область, или сделайте треугольный разрез, если он обнажает передние и задние роднички и места имплантации электродов.Скатайте небольшой кусочек ваты в шарик и смочите его 3%-ной перекисью водорода. Удалите мягкие ткани, прикрепленные к черепу, осторожно потерев открытую область небольшим ватным тампоном, пока не будут видны передний и задний родничок. Отрегулируйте переднюю и заднюю высоту так, чтобы передний и задний родничок были горизонтальными.Считайте, что положение переднего родничка является началом осей. Закрепите винт из нержавеющей стали на левом черепе мозжечка. Установите координаты для растопки миндалевидного тела от брегмы и настройте стереотаксическое устройство, чтобы найти это место и отметить его.Просверлите отверстие на месте марша сверлом черепа диаметром 0,5 миллиметра. Закрепите электроды на установочном стержне стереотаксического устройства. Поместите электрод вертикально над отверстием и медленно опустите положение до минус 4,9 миллиметра.Трижды оберните серебряную проволоку вокруг винта. Следите за тем, чтобы корпус электрода не трясся во время работы. Смешайте зубной цемент и аккуратно нанесите его на электрод и поверхность черепа.Когда зубной цемент затвердеет, модифицируйте его снаружи до тех пор, пока цемент, окружающий неподвижный электрод, не превратится в конус. Затем отпустите электрод от стереотаксического устройства. Извлеките мышь и поместите ее обратно в клетку.Держите его отдельно от других мышей. Поместите мышь в индивидуальную коробку с скользящими кабелями, соединяющими электрод на голове мыши и устройство ЭЭГ. Пропустите кабель через отверстие в крышке коробки и отрегулируйте длину, оставшуюся в коробке, чтобы мышь могла свободно двигаться.Включите устройство ЭЭГ и убедитесь, что оно работает правильно. Установите параметры стимулятора таким образом, чтобы он выдавал одномиллисекундные монофазные прямоугольные импульсы с частотой 60 герц в течение одной секунды в течение 10 циклов стимуляции. Начните с силы тока 50 микроампер для первой стимуляции.Следите за ЭЭГ после выписки, характеризующейся высокочастотными всплесками. Если после разряда не наблюдается, добавьте 25 микроампер к следующему стимулу и продолжайте этот процесс каждые 10 минут до тех пор, пока не наступит послеразрядный разряд, который продлится пять секунд. Стимулируйте мышь определенной интенсивностью тока каждые 15 минут, не более 20 раз в день.Следите за поведенческими реакциями на стимул. Операция по имплантации электродов была проведена шести здоровым взрослым самцам C57 черных мышей 6, а электростимуляция была проведена через две недели после операции. Уровень поведенческих припадков постепенно увеличивался с увеличением количества стимулов и регистрировалось количество стимулов, необходимых для полного растопки.ЭЭГ после разрядов длилась от пяти до 15 секунд. Затем интракраниальные спонтанные выделения усилились и начались поведенческие симптомы. Продолжительность припадка обычно составляла менее одной минуты, что снижает риск смерти от сильных судорог, приводящих к апноэ.Экспрессия c-Fos в мозговой ткани была обнаружена с помощью иммуногистохимии через два часа после полного растопки. Результаты показывают, что экспрессия c-Fos в ипсилатеральной миндалине значительно увеличилась, что подтверждает осуществимость этой модели. Расстояние между концами вольфрамовой проволоки не должно превышать полумиллиметров, иначе она не попадет через отверстие мозга.Длина электрода не должна быть слишком большой, иначе это повлияет на активность мышей.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Identification of Olfactory Volatiles using Gas Chromatography-Multi-unit Recordings (GCMR) in the Insect Antennal Lobe

Identification of Olfactory Volatiles using Gas Chromatography-Multi-unit Recordings GCMR in the Insect Antennal Lobe

Определение летучих Обонятельные с помощью газовой хроматографии-Multi-единицы Recordings (ГКХ) в усиков насекомого Lobe

All  organisms inhabit a world full of sensory stimuli that determine their  behavioral and physiological response to their environment. Olfaction is ...

Trypsin Digest Protocol to Analyze the Retinal Vasculature of a Mouse Model

Трипсин Digest протокола для анализа сосудистой сети сетчатки модели мыши

Trypsin digest is the gold standard method to analyze the retinal vasculature 1-5. It allows visualization of the entire network of complex ...

A Comprehensive Protocol for Manual Segmentation of the Medial Temporal Lobe Structures

Комплексная Протокол о ручном Сегментация медиальных отделов височных долей структур

The present paper describes a comprehensive protocol for manual tracing of the set of brain regions comprising the medial temporal lobe (MTL): amygdala, ...

Pentylenetetrazole-Induced Kindling Mouse Model

Модель Pentylenetetrazole индуцированной растопку мыши

Pentylenetetrazole (PTZ) is a GABA-A receptor antagonist. An intraperitoneal injection of PTZ into an animal induces an acute, severe seizure at a high ...

The Power of Interstimulus Interval for the Assessment of Temporal Processing in Rodents

Мощность Interstimulus интервала для оценки временных обработки грызунов

Temporal processing deficits have been implicated as a potential elemental dimension of higher-level cognitive processes, commonly observed in ...

Behavioral And Physiological Analysis In A Zebrafish Model Of Epilepsy

Поведенческий и физиологический анализ в модели эпилепсии рыбок данио

Epilepsy represents one of the most common neurological disorders, affecting an estimated 50 million people worldwide. Recent advances in genetic research ...

Successful In vivo Calcium Imaging with a Head-Mount Miniaturized Microscope in the Amygdala of Freely Behaving Mouse

Успешная визуализация кальция In vivo с миниатюрным микроскопом Head-Mount в миндале свободно ведя себя мышью

In vivo real-time monitoring of neuronal activities in freely moving animals is one of key approaches to link neuronal activity to behavior. For this ...

A Behavioral Screen for Heat-Induced Seizures in Mouse Models of Epilepsy

Поведенческий экран для тепловых припадков в мышиных моделях эпилепсии

Transgenic mouse models have proved to be powerful tools in studying various aspects of human neurological disorders, including epilepsy. The ...

Preparation and Implantation of Electrodes for Electrically Kindling VGAT-Cre Mice to Generate a Model for Temporal Lobe Epilepsy

It was discovered that electrical kindling of VGAT-Cre mice led to the spontaneous motor and electrographic seizures. A recent paper focused on how unique ...

Registration of Calcium Transients in Mouse Neuromuscular Junction with High Temporal Resolution using Confocal Microscopy

Регистрация переходных процессов кальция в нервно-мышечном соединении мыши с высоким временным разрешением с помощью конфокальной микроскопии

Estimation of the presynaptic calcium level is a key task in studying synaptic transmission since calcium entry into the presynaptic cell triggers a ...