Name: using a bipolar electrode to create a temporal lobe epilepsy mouse model by electrical kindling of the amygdala
Uploaded: 2022-06-29T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Using a Bipolar Electrode to Create a Temporal Lobe Epilepsy Mouse Model by Electrical Kindling of the Amygdala at JoVE.com

La investigación fue apoyada por la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (No. 82030037, 81871009) y la Comisión Municipal de Salud de Beijing (11000022T000000444685). Agradecemos a TopEdit (www.topeditsci.com) por su asistencia lingüística durante la preparación de este manuscrito.

Este experimento fue aprobado por el Comité de Ética de Animales Experimentales del Hospital Xuanwu, Universidad Médica Capital. Todos los ratones se mantuvieron en el laboratorio de animales del Hospital Xuanwu, Universidad Médica Capital. Este protocolo se divide en cuatro partes. Las dos primeras partes introducen el método de construcción del electrodo y el circuito eléctrico utilizando un anillo colector para conectar los electrodos y el equipo de registro / estimulación de EEG. La tercera parte describe el ...

<ol>
	<li>Kurita, T., Sakurai, K., Takeda, Y., Horinouchi, T., Kusumi, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Very+long-term+outcome+of+non-surgically+treated+patients+with+temporal+lobe+epilepsy+with+hippocampal+sclerosis:+A+retrospective+study.">Very long-term outcome of non-surgically treated patients with temporal lobe epilepsy with hippocampal sclerosis: A retrospective study.</a> PLoS One. 11 (7), 0159464 (2016).</li><li>Choy, M., Duffy, B. A., Lee, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optogenetic+study+of+networks+in+epilepsy.">Optogenetic study of networks in epilepsy.</a> Journal of Neuroscience Research. 95 (12), 2325-2335 (2017).</li><li>Aroniadou-Anderjaska, V., Fritsch, B., Qashu, F., Braga, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathology+and+pathophysiology+of+the+amygdala+in+epileptogenesis+and+epilepsy.">Pathology and pathophysiology of the amygdala in epileptogenesis and epilepsy.</a> Epilepsy Research. 78 (2-3), 102-116 (2008).</li><li>Smith, P. D., McLean, K. J., Murphy, M. A., Turnley, A. M., Cook, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Seizures,+not+hippocampal+neuronal+death,+provoke+neurogenesis+in+a+mouse+rapid+electrical+amygdala+kindling+model+of+seizures.">Seizures, not hippocampal neuronal death, provoke neurogenesis in a mouse rapid electrical amygdala kindling model of seizures.</a> Neuroscience. 136 (2), 405-415 (2005).</li><li>Reyes, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amygdala+enlargement:+Temporal+lobe+epilepsy+subtype+or+nonspecific+finding.">Amygdala enlargement: Temporal lobe epilepsy subtype or nonspecific finding.</a> Epilepsy Research. 132, 34-40 (2017).</li><li>Fan, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnosis+and+surgical+treatment+of+non-lesional+temporal+lobe+epilepsy+with+unilateral+amygdala+enlargement.">Diagnosis and surgical treatment of non-lesional temporal lobe epilepsy with unilateral amygdala enlargement.</a> Neurological Sciences. 42 (6), 2353-2361 (2021).</li><li>Dhir, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pentylenetetrazol+(PTZ)+kindling+model+of+epilepsy.">Pentylenetetrazol (PTZ) kindling model of epilepsy.</a> Current Protocols in Neuroscience. , 37 (2012).</li><li>Van Erum, J., Van Dam, D., De Deyn, P. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PTZ-induced+seizures+in+mice+require+a+revised+Racine+scale.">PTZ-induced seizures in mice require a revised Racine scale.</a> Epilepsy &amp; Behavior. 95, 51-55 (2019).</li><li>Carriero, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+guinea+pig+model+of+mesial+temporal+lobe+epilepsy+following+nonconvulsive+status+epilepticus+induced+by+unilateral+intrahippocampal+injection+of+kainic+acid.">A guinea pig model of mesial temporal lobe epilepsy following nonconvulsive status epilepticus induced by unilateral intrahippocampal injection of kainic acid.</a> Epilepsia. 53 (11), 1917-1927 (2012).</li><li>Levesque, M., Avoli, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+kainic+acid+model+of+temporal+lobe+epilepsy.">The kainic acid model of temporal lobe epilepsy.</a> Neuroscience Biobehavioral Reviews. 37, 2887-2899 (2013).</li><li>Fujita, A., Ota, M., Kato, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Urinary+volatile+metabolites+of+amygdala-kindled+mice+reveal+novel+biomarkers+associated+with+temporal+lobe+epilepsy.">Urinary volatile metabolites of amygdala-kindled mice reveal novel biomarkers associated with temporal lobe epilepsy.</a> Scientific Reports. 9 (1), 10586 (2019).</li><li>Li, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+spatiotemporal+dynamics+of+phase+synchronization+during+epileptogenesis+in+amygdala-kindling+mice.">The spatiotemporal dynamics of phase synchronization during epileptogenesis in amygdala-kindling mice.</a> PLoS One. 11 (4), 0153897 (2016).</li><li>Wang, Y., Wei, P., Yan, F., Luo, Y., Zhao, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+epilepsy:+A+phenotype-oriented+review.">Animal models of epilepsy: A phenotype-oriented review.</a> Aging and Disease. 13 (1), 215-231 (2022).</li><li>Fallah, M. S., Dlugosz, L., Scott, B. W., Thompson, M. D., Burnham, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antiseizure+effects+of+the+cannabinoids+in+the+amygdala-kindling+model.">Antiseizure effects of the cannabinoids in the amygdala-kindling model.</a> Epilepsia. 62 (9), 2274-2282 (2021).</li><li>Chipika, R. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amygdala+pathology+in+amyotrophic+lateral+sclerosis+and+primary+lateral+sclerosis.">Amygdala pathology in amyotrophic lateral sclerosis and primary lateral sclerosis.</a> Journal of the Neurological Sciences. 417, 117039 (2020).</li><li>Kuchukhidze, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emotional+recognition+in+patients+with+mesial+temporal+epilepsy+associated+with+enlarged+amygdala.">Emotional recognition in patients with mesial temporal epilepsy associated with enlarged amygdala.</a> Frontiers in Neurology. 12, 803787 (2021).</li><li>Soper, C., Wicker, E., Kulick, C. V., N'Gouemo, P., Forcelli, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optogenetic+activation+of+superior+colliculus+neurons+suppresses+seizures+originating+in+diverse+brain+networks.">Optogenetic activation of superior colliculus neurons suppresses seizures originating in diverse brain networks.</a> Neurobiology of Disease. 87, 102-115 (2016).</li><li>Devinsky, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epilepsy.">Epilepsy.</a> Nature Reviews Disease Primers. 4, 18024 (2018).</li><li>Zhang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interaction+between+thalamus+and+hippocampus+in+termination+of+amygdala-kindled+seizures+in+mice.">Interaction between thalamus and hippocampus in termination of amygdala-kindled seizures in mice.</a> Computational and Mathematical Methods in Medicine. 2016, 9580724 (2016).</li><li>Ghotbedin, Z., Janahmadi, M., Mirnajafi-Zadeh, J., Behzadi, G., Semnanian, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrical+low+frequency+stimulation+of+the+kindling+site+preserves+the+electrophysiological+properties+of+the+rat+hippocampal+CA1+pyramidal+neurons+from+the+destructive+effects+of+amygdala+kindling:+the+basis+for+a+possible+promising+epilepsy+therapy.">Electrical low frequency stimulation of the kindling site preserves the electrophysiological properties of the rat hippocampal CA1 pyramidal neurons from the destructive effects of amygdala kindling: the basis for a possible promising epilepsy therapy.</a> Brain Stimulation. 6 (4), 515-523 (2013).</li><li>Hristova, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Medial+septal+GABAergic+neurons+reduce+seizure+duration+upon+optogenetic+closed-loop+stimulation.">Medial septal GABAergic neurons reduce seizure duration upon optogenetic closed-loop stimulation.</a> Brain. 144 (5), 1576-1589 (2021).</li></ol>

La epilepsia es un grupo de enfermedades con múltiples manifestaciones y diversas causas18; Cabe señalar que no se puede utilizar un modelo único para todos los tipos de epilepsia, y los investigadores deben seleccionar un modelo apropiado para su estudio específico. El presente estudio presenta uno de los métodos más accesibles de fabricación de electrodos. Varias partes de este método se pueden ajustar para adaptarse a diferentes condiciones experimentales.
Es...

La epilepsia del lóbulo temporal (TLE) es el tipo más prevalente de epilepsia y tiene un alto riesgo de conversión en epilepsia resistente a los medicamentos. La cirugía, como la amigdalohipocampectomía selectiva, es un tratamiento eficaz para la TLE, y la epileptogénesis y la ictogénesis de la enfermedad aún están bajo investigación 1,2. Se ha demostrado que la patogénesis de la TLE ocurre no sólo en el hipocampo sino también extensamente en la amígdala 3,4. Por ejemplo, tanto la esclerosis de la amígdala como el agrandamiento de la amígdala han sido frecuentemente reportados como los orígenes de las convulsiones de TLE 5,6. La importancia de la amígdala no puede ser subestimada; Un modelo de amígdala es esencial para el estudio de la epileptogénesis, y se necesita urgentemente una ilustración clara de este modelo.
Se han propuesto varios enfoques para inducir convulsiones en modelos animales. En el pasado, los fármacos convulsivos se inyectaban por vía intraperitoneal en una etapa temprana7. Aunque este método era conveniente, la ubicación de los focos epilépticos era incierta. Con el desarrollo de la tecnología estereotáctica y un atlas cerebral animal detallado, se aplicó la inyección intracraneal de fármacos para resolver el problema de la localización8. Sin embargo, la falta de intervención para las convulsiones graves durante la etapa aguda resultó en una alta tasa de mortalidad, y las crisis crónicas espontáneas fueron acompañadas por el problema de la frecuencia interictal y convulsiva inestable 9,10. Finalmente, se desarrolló el método de encendido eléctrico; Este método estimula periódicamente regiones específicas del cerebro varias veces, permitiendo que las convulsiones sean inducidas con un control definido tanto de la ubicación como del tiempo de inicio11.
Una ventaja de este método es que la implantación intracraneal de electrodos es mínimamente invasiva12. Además, la gravedad de la convulsión es controlable por la terminación de los estímulos, reduciendo la mortalidad causada por las convulsiones. Estos cambios resolvieron las deficiencias de los enfoques anteriores. En particular, este modelo puede imitar adecuadamente las convulsiones humanas y es especialmente adecuado para el estudio del estado epiléptico (EE) debido a su capacidad para inducir SE rápidamente13. También se puede utilizar para el cribado de fármacos antiepilépticos14 y en estudios sobre el mecanismo de la epilepsia. Finalmente, es bien sabido que la amígdala está estrechamente asociada con la modulación de la memoria, el procesamiento de recompensas y la emoción15. Los trastornos de estas funciones mentales se encuentran a menudo en pacientes epilépticos y, por lo tanto, el modelo de epilepsia de la amígdala puede ser una mejor opción para estudiar los problemas emocionales en la epilepsia16.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 488-conjugated Donkey anti-Rabbit IgG</td>
			<td>invitrogen</td>
			<td>A-21206</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>c-Fos antibody</td>
			<td></td>
			<td>ab222699</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cranial drill</td>
			<td>SANS</td>
			<td>SA302</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dental cement</td>
			<td>NISSIN</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EEG recording and stimulation equipment</td>
			<td>Neuracle Technology (Changzhou) Co., Ltd</td>
			<td>NSHHFS-210803</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>lead-free tin wire</td>
			<td>BAKON</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pin header/Female header</td>
			<td>XIANMISI</td>
			<td></td>
			<td>spacing of 1.27 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silver wire</td>
			<td>A-M systems</td>
			<td>786000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slip ring</td>
			<td>Senring Electronics Co.,Ltd</td>
			<td>SNM008-04</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tungsten wire</td>
			<td>A-M systems</td>
			<td>796000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ultrafine multi-stand wire</td>
			<td>Shenzhen Chengxing wire and cable</td>
			<td>UL10064-FEP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>welding equipment</td>
			<td>BAKON</td>
			<td>BK881</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

using a bipolar electrode to create a temporal lobe epilepsy mouse model by electrical kindling of the amygdala

La amígdala es uno de los orígenes más comunes de las convulsiones, y el modelo de ratón de la amígdala es esencial para la ilustración de la epilepsia. Sin embargo, pocos estudios han descrito el protocolo experimental en detalle. Este artículo ilustra todo el proceso de fabricación de modelos de epilepsia eléctrica de la amígdala, con la introducción de un método de fabricación de electrodos bipolares. Este electrodo puede estimular y grabar, reduciendo la lesión cerebral causada por la implantación de electrodos separados para la estimulación y el registro. Para fines de registro de electroencefalograma (EEG) a largo plazo, se utilizaron anillos colectores para eliminar la interrupción del registro causada por enredos de cables y caídas.
Después de la estimulación periódica (60 Hz, 1 s cada 15 min) de la amígdala basolateral (AP: 1,67 mm, L: 2,7 mm, V: 4,9 mm) durante 19,83 ± 5,742 veces, se observó un encendido completo en seis ratones (definido como la inducción de tres episodios continuos de grado V clasificados por la escala de Racine). Se registró un EEG intracraneal durante todo el proceso de encendido, y se observó una descarga epiléptica en la amígdala que duró 20-70 s después del encendido. Por lo tanto, este es un protocolo robusto para modelar la epilepsia que se origina en la amígdala, y el método es adecuado para revelar el papel de la amígdala en la epilepsia del lóbulo temporal. Esta investigación contribuye a futuros estudios sobre los mecanismos de la epilepsia del lóbulo temporal mesial y nuevos fármacos antiepileptogénicos.

El electrodo y el circuito permiten registrar el EEG y funcionar como una estimulación (Figura 1); Esta configuración evita la complejidad de implantar electrodos de grabación y estimulación por separado y minimiza el daño al tejido cerebral. La aplicación de anillos colectores permite la conexión de electrodos con todo tipo de dispositivos.
Realizamos cirugía de implantación de electrodos en seis ratones machos adultos sanos C57BL / 6, y la estimulación...

Watch this Scientific Journal Video about Using a Bipolar Electrode to Create a Temporal Lobe Epilepsy Mouse Model by Electrical Kindling of the Amygdala at JoVE.com

Using a Bipolar Electrode to Create a Temporal Lobe Epilepsy Mouse Model by Electrical Kindling of the Amygdala

La amígdala juega un papel clave en la epilepsia del lóbulo temporal, que se origina y se propaga a partir de esta estructura. Este artículo proporciona una descripción detallada de la fabricación de electrodos cerebrales profundos con funciones de grabación y estimulación. Introduce un modelo de epilepsia del lóbulo temporal medial que se origina en la amígdala.

Uso de un electrodo bipolar para crear un modelo de ratón con epilepsia del lóbulo temporal mediante el encendido eléctrico de la amígdala

The amygdala is one of the most common origins of seizures, and the amygdala mouse model is essential for the illustration of epilepsy. However, few ...

Este protocolo propuso un modelo de epilepsia con la amígdala como origen. Prepara el camino para la investigación de las estructuras del lóbulo temporal mesial. Este modelo podría interpretarse como la base del experimento.Como este protocolo es un método de bajo costo y eficiente por lo que se puede llevar a cabo rápidamente en la mayoría de los laboratorios. Demostrando el procedimiento estará Yongchang Lu, un postgraduado en nuestro laboratorio. Comience reuniendo los componentes preparados previamente comenzando con piezas de alambre de tungsteno recubierto de teflón de dos centímetros de largo con un diámetro de oso de 76.2 micrómetros.Una pieza de alambre de plata con un diámetro de oso de 127 micrómetros de la misma longitud y un juego de pasadores de cuerda calibrados de dos por dos. Use un encendedor para quemar un extremo de cada alambre de tungsteno para eliminar cinco milímetros del revestimiento aislante. Pele una sección de alambre multihilo ultrafino.Desenvuelva desde la parte inferior hasta el extremo superior donde comienza a oscurecer continuando hacia la parte superior. Combine este alambre súper fino y el alambre de tungsteno pellizcando un extremo y girando suavemente el otro, permitiendo que los dos materiales se entrelazen fácilmente. Tire suavemente para asegurarse de que los cables estén bien envueltos y corte el exceso de alambre súper fino.Trate de mantener el alambre de tungsteno recto durante todo el proceso. Fije el pasador de cuerda a la abrazadera de la mesa de soldadura con el lado más largo de los pasadores hacia afuera. Use la aguja de la jeringa para recoger un poco de pasta de soldadura y aplíquela a los alfileres.Caliente la antorcha de soldadura a 320 grados centígrados. Derrita y unte un poco de alambre de estaño sin plomo con la punta de la antorcha. Superponga el extremo superior del alambre de tungsteno con una aguja de los pasadores de la cuerda y use la soldadura en la antorcha para unir el alambre de tungsteno al pasador.Suelde otro alambre de tungsteno y otro alambre de plata al pasador de cuerda de la misma manera para que cada cable corresponda a una aguja. Corte dos tubos termorretráctiles ligeramente más largos que el extremo superior del alambre de tungsteno. Colóquelos en la junta de soldadura de dos cables de tungsteno asegurándose de que la parte conductora esté completamente cubierta en el tubo para que el circuito de los dos cables de tungsteno no se coloque en serie.Retire el electrodo de la abrazadera de la mesa de soldadura y sostenga el electrodo suavemente con alicates grandes, ya que es fácil que los electrodos pierdan su forma al calentar el tubo retráctil. Utilice una buena abrazadera de conductividad térmica con un poco más de fuerza. Encienda el conducto de aire y caliente hasta alcanzar una temperatura de 320 grados centígrados.Sople el tubo termorretráctil durante varios segundos hasta que esté apretado. Refuerce el electrodo con adhesivo termofusible. Sostenga los dos alambres de tungsteno y gírelos juntos, manteniendo sus extremos separados.Recorte los alambres de tungsteno trenzados a aproximadamente 10 milímetros de longitud para que la separación en los extremos no exceda los 0,5 milímetros. Verifique los electrodos con un multímetro colocando una barra del multímetro en el lado sin soldadura de los pasadores de la cuerda y tocando suavemente el extremo del alambre de tungsteno o alambre de plata con la otra barra. Comprobar si el circuito es liso.Asegúrese de que las líneas no se colocan en serie. Despegue cinco milímetros de la piel de aislamiento en cada extremo para exponer el cable de metal en el interior. Agregue una sección de tubo termorretráctil a cada cable de arranque.Suelde cada cable con el enchufe del conector del dispositivo EEG. Encoge el tubo termorretráctil con aire caliente. Agregue una sección de tubo termorretráctil a cada cable del rotor.Atornille las partes conductoras de los cables rojo y naranja y suéldelas a una junta y al cabezal para que encajen en el pasador de la cuerda. Suelde los otros dos cables del cabezal a cada unión. Pesa el ratón.Cuando el ratón esté completamente anestesiado, afeite el pelo desde el ojo hasta el área de la oreja con una navaja de afeitar. Fije el ratón en el marco estereotáxico. Coloque los dientes superiores frontales en la barra incisiva e inserte ambas barras auriculares a profundidades iguales en las orejas.Aplique ungüento oftálmico de eritromicina en los ojos para prevenir la sequedad y la ceguera causadas por la luz brillante durante la cirugía. Desinfecte el área quirúrgica al menos tres veces con hisopos alternos de yodóforo y alcohol al 75%. Haga una incisión longitudinal para exponer completamente el área quirúrgica o haga una incisión triangular siempre que exponga las fontanelas anteriores y posteriores y los sitios de implantación de electrodos.Enrolle un pequeño trozo de algodón en una bola y humedézcalo con peróxido de hidrógeno al 3%. Retire el tejido blando adherido al cráneo frotando suavemente el área expuesta con una pequeña bola de algodón hasta que se vean las fontanelas anterior y posterior. Ajuste las alturas anterior y posterior para que la fontanela anterior y posterior queden horizontales.Considere que la posición de la fontanela anterior es el origen de los ejes. Fije un tornillo de acero inoxidable al cráneo cerebeloso izquierdo. Establezca las coordenadas para la activación de la amígdala desde el bregma y ajuste el dispositivo estereotáxico para localizar este punto y marcarlo.Perfore un agujero en el punto de marcha con un taladro de cráneo de 0,5 milímetros de diámetro. Fije los electrodos a la varilla de localización del dispositivo estereotáxico. Coloque el electrodo verticalmente sobre el orificio y deje caer la posición a menos 4,9 milímetros lentamente.Envuelva el alambre plateado alrededor del tornillo tres veces. Teniendo cuidado de no sacudir el cuerpo del electrodo durante la operación. Mezcle el cemento dental y aplíquelo suavemente sobre el electrodo y la superficie del cráneo.Cuando el cemento dental se endurezca, modifique el exterior hasta que el cemento que encierra el electrodo fijo se convierta en un cono. Luego suelte el electrodo del dispositivo estereotáxico. Retire el ratón y colóquelo de nuevo en la jaula.Manteniéndolo separado de los otros ratones. Coloque el mouse en una caja personalizada con cables deslizantes que conecten el electrodo en la cabeza del mouse y el dispositivo EEG. Pase el cable a través de un orificio en la tapa de la caja y ajuste la longitud que queda en la caja para permitir que el mouse se mueva libremente.Encienda el dispositivo EEG y asegúrese de que funciona correctamente. Ajuste los parámetros del estimulador para entregar pulsos de onda cuadrada monofásica de un milisegundo a 60 hercios durante una duración del tren de un segundo durante 10 ciclos de estimulación. Comience con una intensidad de corriente de 50 microamperios para la primera estimulación.Controle el EEG para después de la descarga caracterizada por picos de alta frecuencia. Si no se observa después de la descarga, agregue 25 microamperios al siguiente estímulo y continúe este proceso cada 10 minutos hasta que se observe una descarga posterior y dure cinco segundos. Estimule el ratón con la intensidad de corriente determinada cada 15 minutos, no más de 20 veces al día.Monitoree las respuestas conductuales al estímulo. La cirugía de implantación de electrodos se realizó en seis ratones adultos sanos machos C57 negro 6 y la estimulación eléctrica se realizó dos semanas después de la cirugía. El nivel de convulsiones conductuales aumentó gradualmente con el aumento del número de estímulos y se registró el número de estímulos necesarios para la activación completa.El EEG después de las descargas duró de cinco a 15 segundos. Luego, las descargas espontáneas intracraneales se intensificaron y comenzaron los síntomas conductuales. La duración de las convulsiones fue generalmente inferior a un minuto, lo que reduce el riesgo de muerte por convulsiones graves que resultan en apnea.La expresión de c-Fos en el tejido cerebral se detectó mediante inmunohistoquímica dos horas después del encendido completo. Los resultados muestran que la expresión de c-Fos en la amígdala ipsilateral aumentó significativamente verificando la viabilidad de este modelo. La separación de los extremos del alambre de tungsteno no debe exceder los medios milímetros, de lo contrario no atravesará el agujero del cerebro.La longitud del electrodo no debe ser demasiado larga, de lo contrario afectará la actividad de los ratones.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Identification of Olfactory Volatiles using Gas Chromatography-Multi-unit Recordings (GCMR) in the Insect Antennal Lobe

Identification of Olfactory Volatiles using Gas Chromatography-Multi-unit Recordings GCMR in the Insect Antennal Lobe

La identificación de los compuestos volátiles olfativas utilizando cromatografía de gases-de varias unidades Grabaciones (GCMR) en el lóbulo antenal insectos

All  organisms inhabit a world full of sensory stimuli that determine their  behavioral and physiological response to their environment. Olfaction is ...

Investigación

Neurociencias

Trypsin Digest Protocol to Analyze the Retinal Vasculature of a Mouse Model

Tripsina Protocolo Resumen Para analizar la vasculatura de la retina de un modelo de ratón

Trypsin digest is the gold standard method to analyze the retinal vasculature 1-5. It allows visualization of the entire network of complex ...

A Comprehensive Protocol for Manual Segmentation of the Medial Temporal Lobe Structures

Un protocolo integral para la segmentación manual de las estructuras mediales Temporal Lobe

The present paper describes a comprehensive protocol for manual tracing of the set of brain regions comprising the medial temporal lobe (MTL): amygdala, ...

Pentylenetetrazole-Induced Kindling Mouse Model

Modelo murino de inflamación inducida por Pentylenetetrazole

Pentylenetetrazole (PTZ) is a GABA-A receptor antagonist. An intraperitoneal injection of PTZ into an animal induces an acute, severe seizure at a high ...

The Power of Interstimulus Interval for the Assessment of Temporal Processing in Rodents

El poder del Interstimulus intervalo para la evaluación de proceso Temporal en roedores

Temporal processing deficits have been implicated as a potential elemental dimension of higher-level cognitive processes, commonly observed in ...

Behavioral And Physiological Analysis In A Zebrafish Model Of Epilepsy

Análisis conductual y fisiológico en un modelo de epilepsia de pez cebra

Epilepsy represents one of the most common neurological disorders, affecting an estimated 50 million people worldwide. Recent advances in genetic research ...

Successful In vivo Calcium Imaging with a Head-Mount Miniaturized Microscope in the Amygdala of Freely Behaving Mouse

Imágenes de calcio in vivo exitosas con un microscopio miniaturizado head-mount en la amígdala del ratón que se comporta libremente

In vivo real-time monitoring of neuronal activities in freely moving animals is one of key approaches to link neuronal activity to behavior. For this ...

A Behavioral Screen for Heat-Induced Seizures in Mouse Models of Epilepsy

Una prueba conductual para las convulsiones inducidas por el calor en modelos de epilepsia en ratones

Transgenic mouse models have proved to be powerful tools in studying various aspects of human neurological disorders, including epilepsy. The ...

Preparation and Implantation of Electrodes for Electrically Kindling VGAT-Cre Mice to Generate a Model for Temporal Lobe Epilepsy

It was discovered that electrical kindling of VGAT-Cre mice led to the spontaneous motor and electrographic seizures. A recent paper focused on how unique ...

Registration of Calcium Transients in Mouse Neuromuscular Junction with High Temporal Resolution using Confocal Microscopy

Registro de transitorios de calcio en unión neuromuscular de ratón con alta resolución temporal mediante microscopía confocal

Estimation of the presynaptic calcium level is a key task in studying synaptic transmission since calcium entry into the presynaptic cell triggers a ...