Name: using a bipolar electrode to create a temporal lobe epilepsy mouse model by electrical kindling of the amygdala
Uploaded: 2022-06-29T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Using a Bipolar Electrode to Create a Temporal Lobe Epilepsy Mouse Model by Electrical Kindling of the Amygdala at JoVE.com

Forskningen stöddes av National Natural Science Foundation of China (nr 82030037, 81871009) och Pekings kommunala hälsokommission (11000022T000000444685). Vi tackar TopEdit (www.topeditsci.com) för dess språkliga hjälp under utarbetandet av detta manuskript.

Detta experiment godkändes av den experimentella djuretiska kommittén vid Xuanwu Hospital, Capital Medical University. Alla möss hölls i djurlaboratoriet på Xuanwu Hospital, Capital Medical University. Detta protokoll är uppdelat i fyra delar. De två första delarna introducerar metoden att bygga elektroden och den elektriska kretsen med hjälp av en släpring för att ansluta elektroderna och EEG-inspelnings- / stimuleringsutrustningen. Den tredje delen beskriver operationsmetoden för elektrodimplantation, och d...

<ol>
	<li>Kurita, T., Sakurai, K., Takeda, Y., Horinouchi, T., Kusumi, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Very+long-term+outcome+of+non-surgically+treated+patients+with+temporal+lobe+epilepsy+with+hippocampal+sclerosis:+A+retrospective+study.">Very long-term outcome of non-surgically treated patients with temporal lobe epilepsy with hippocampal sclerosis: A retrospective study.</a> PLoS One. 11 (7), 0159464 (2016).</li><li>Choy, M., Duffy, B. A., Lee, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optogenetic+study+of+networks+in+epilepsy.">Optogenetic study of networks in epilepsy.</a> Journal of Neuroscience Research. 95 (12), 2325-2335 (2017).</li><li>Aroniadou-Anderjaska, V., Fritsch, B., Qashu, F., Braga, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathology+and+pathophysiology+of+the+amygdala+in+epileptogenesis+and+epilepsy.">Pathology and pathophysiology of the amygdala in epileptogenesis and epilepsy.</a> Epilepsy Research. 78 (2-3), 102-116 (2008).</li><li>Smith, P. D., McLean, K. J., Murphy, M. A., Turnley, A. M., Cook, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Seizures,+not+hippocampal+neuronal+death,+provoke+neurogenesis+in+a+mouse+rapid+electrical+amygdala+kindling+model+of+seizures.">Seizures, not hippocampal neuronal death, provoke neurogenesis in a mouse rapid electrical amygdala kindling model of seizures.</a> Neuroscience. 136 (2), 405-415 (2005).</li><li>Reyes, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amygdala+enlargement:+Temporal+lobe+epilepsy+subtype+or+nonspecific+finding.">Amygdala enlargement: Temporal lobe epilepsy subtype or nonspecific finding.</a> Epilepsy Research. 132, 34-40 (2017).</li><li>Fan, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnosis+and+surgical+treatment+of+non-lesional+temporal+lobe+epilepsy+with+unilateral+amygdala+enlargement.">Diagnosis and surgical treatment of non-lesional temporal lobe epilepsy with unilateral amygdala enlargement.</a> Neurological Sciences. 42 (6), 2353-2361 (2021).</li><li>Dhir, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pentylenetetrazol+(PTZ)+kindling+model+of+epilepsy.">Pentylenetetrazol (PTZ) kindling model of epilepsy.</a> Current Protocols in Neuroscience. , 37 (2012).</li><li>Van Erum, J., Van Dam, D., De Deyn, P. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PTZ-induced+seizures+in+mice+require+a+revised+Racine+scale.">PTZ-induced seizures in mice require a revised Racine scale.</a> Epilepsy &amp; Behavior. 95, 51-55 (2019).</li><li>Carriero, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+guinea+pig+model+of+mesial+temporal+lobe+epilepsy+following+nonconvulsive+status+epilepticus+induced+by+unilateral+intrahippocampal+injection+of+kainic+acid.">A guinea pig model of mesial temporal lobe epilepsy following nonconvulsive status epilepticus induced by unilateral intrahippocampal injection of kainic acid.</a> Epilepsia. 53 (11), 1917-1927 (2012).</li><li>Levesque, M., Avoli, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+kainic+acid+model+of+temporal+lobe+epilepsy.">The kainic acid model of temporal lobe epilepsy.</a> Neuroscience Biobehavioral Reviews. 37, 2887-2899 (2013).</li><li>Fujita, A., Ota, M., Kato, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Urinary+volatile+metabolites+of+amygdala-kindled+mice+reveal+novel+biomarkers+associated+with+temporal+lobe+epilepsy.">Urinary volatile metabolites of amygdala-kindled mice reveal novel biomarkers associated with temporal lobe epilepsy.</a> Scientific Reports. 9 (1), 10586 (2019).</li><li>Li, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+spatiotemporal+dynamics+of+phase+synchronization+during+epileptogenesis+in+amygdala-kindling+mice.">The spatiotemporal dynamics of phase synchronization during epileptogenesis in amygdala-kindling mice.</a> PLoS One. 11 (4), 0153897 (2016).</li><li>Wang, Y., Wei, P., Yan, F., Luo, Y., Zhao, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+epilepsy:+A+phenotype-oriented+review.">Animal models of epilepsy: A phenotype-oriented review.</a> Aging and Disease. 13 (1), 215-231 (2022).</li><li>Fallah, M. S., Dlugosz, L., Scott, B. W., Thompson, M. D., Burnham, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antiseizure+effects+of+the+cannabinoids+in+the+amygdala-kindling+model.">Antiseizure effects of the cannabinoids in the amygdala-kindling model.</a> Epilepsia. 62 (9), 2274-2282 (2021).</li><li>Chipika, R. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amygdala+pathology+in+amyotrophic+lateral+sclerosis+and+primary+lateral+sclerosis.">Amygdala pathology in amyotrophic lateral sclerosis and primary lateral sclerosis.</a> Journal of the Neurological Sciences. 417, 117039 (2020).</li><li>Kuchukhidze, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emotional+recognition+in+patients+with+mesial+temporal+epilepsy+associated+with+enlarged+amygdala.">Emotional recognition in patients with mesial temporal epilepsy associated with enlarged amygdala.</a> Frontiers in Neurology. 12, 803787 (2021).</li><li>Soper, C., Wicker, E., Kulick, C. V., N'Gouemo, P., Forcelli, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optogenetic+activation+of+superior+colliculus+neurons+suppresses+seizures+originating+in+diverse+brain+networks.">Optogenetic activation of superior colliculus neurons suppresses seizures originating in diverse brain networks.</a> Neurobiology of Disease. 87, 102-115 (2016).</li><li>Devinsky, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epilepsy.">Epilepsy.</a> Nature Reviews Disease Primers. 4, 18024 (2018).</li><li>Zhang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interaction+between+thalamus+and+hippocampus+in+termination+of+amygdala-kindled+seizures+in+mice.">Interaction between thalamus and hippocampus in termination of amygdala-kindled seizures in mice.</a> Computational and Mathematical Methods in Medicine. 2016, 9580724 (2016).</li><li>Ghotbedin, Z., Janahmadi, M., Mirnajafi-Zadeh, J., Behzadi, G., Semnanian, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrical+low+frequency+stimulation+of+the+kindling+site+preserves+the+electrophysiological+properties+of+the+rat+hippocampal+CA1+pyramidal+neurons+from+the+destructive+effects+of+amygdala+kindling:+the+basis+for+a+possible+promising+epilepsy+therapy.">Electrical low frequency stimulation of the kindling site preserves the electrophysiological properties of the rat hippocampal CA1 pyramidal neurons from the destructive effects of amygdala kindling: the basis for a possible promising epilepsy therapy.</a> Brain Stimulation. 6 (4), 515-523 (2013).</li><li>Hristova, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Medial+septal+GABAergic+neurons+reduce+seizure+duration+upon+optogenetic+closed-loop+stimulation.">Medial septal GABAergic neurons reduce seizure duration upon optogenetic closed-loop stimulation.</a> Brain. 144 (5), 1576-1589 (2021).</li></ol>

Epilepsi är en grupp sjukdomar med flera manifestationer och olika orsaker18; Det bör noteras att ingen enskild modell kan användas för alla typer av epilepsi, och forskare måste välja en lämplig modell för sin specifika studie. Den aktuella studien introducerar en av de mest tillgängliga metoderna för elektrodtillverkning. Olika delar av denna metod kan justeras för att anpassa sig till olika experimentella förhållanden.
Denna metod använder elektroder me...

Tinninglobsepilepsi (TLE) är den vanligaste typen av epilepsi och löper stor risk att omvandlas till läkemedelsresistent epilepsi. Kirurgi, såsom selektiv amygdalohippocampektomi, är en effektiv behandling för TLE, och epileptogenesen och iktogenesen av sjukdomen är fortfarande under utredning 1,2. Patogenes av TLE har visat sig förekomma inte bara i hippocampus utan även i stor utsträckning i amygdala 3,4. Till exempel har både amygdala skleros och amygdalaförstoring ofta rapporterats som ursprunget till TLE-anfall 5,6. Betydelsen av amygdala kan inte underskattas; En amygdalamodell är nödvändig för studier av epileptogenes, och en tydlig illustration av denna modell är brådskande.
Flera tillvägagångssätt har föreslagits för att framkalla anfall i djurmodeller. Tidigare injicerades konvulsiva läkemedel intraperitonealt i ett tidigt skede7. Även om denna metod var bekväm var placeringen av epileptiska foci osäker. Med utvecklingen av stereotaktisk teknik och en detaljerad djurhjärnatlas applicerades intrakraniell läkemedelsinjektion för att lösa lokaliseringsproblemet8. Brist på intervention för svåra anfall under det akuta skedet resulterade emellertid i en hög dödlighet, och kroniska spontana anfall åtföljdes av problemet med instabil interiktal och anfallsfrekvens 9,10. Slutligen utvecklades den elektriska tändningsmetoden; Denna metod stimulerar regelbundet specifika hjärnregioner flera gånger, vilket gör att anfall kan induceras med bestämd kontroll av både platsen och starttiden11.
En fördel med denna metod är att den intrakraniella implantationen av elektroder är minimalt invasiv12. Dessutom kan svårighetsgraden av anfallet kontrolleras genom att stimuli upphör, vilket minskar dödligheten orsakad av anfallen. Dessa förändringar löste bristerna i de tidigare tillvägagångssätten. I synnerhet kan denna modell på ett adekvat sätt efterlikna mänskliga anfall och är särskilt lämplig för studier av status epilepticus (SE) på grund av dess förmåga att inducera SE snabbt13. Det kan också användas för antiepileptisk läkemedelsscreening14 och i studier om epilepsimekanismen. Slutligen är det välkänt att amygdala är nära förknippad med minnesmodulering, belöningsbehandling och känslor15. Störningar i dessa mentala funktioner uppträder ofta hos epileptiska patienter och därför kan amygdala epilepsimodellen vara ett bättre val för att studera känslomässiga problem vid epilepsi16.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 488-conjugated Donkey anti-Rabbit IgG</td>
			<td>invitrogen</td>
			<td>A-21206</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>c-Fos antibody</td>
			<td></td>
			<td>ab222699</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cranial drill</td>
			<td>SANS</td>
			<td>SA302</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dental cement</td>
			<td>NISSIN</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EEG recording and stimulation equipment</td>
			<td>Neuracle Technology (Changzhou) Co., Ltd</td>
			<td>NSHHFS-210803</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>lead-free tin wire</td>
			<td>BAKON</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pin header/Female header</td>
			<td>XIANMISI</td>
			<td></td>
			<td>spacing of 1.27 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silver wire</td>
			<td>A-M systems</td>
			<td>786000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slip ring</td>
			<td>Senring Electronics Co.,Ltd</td>
			<td>SNM008-04</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tungsten wire</td>
			<td>A-M systems</td>
			<td>796000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ultrafine multi-stand wire</td>
			<td>Shenzhen Chengxing wire and cable</td>
			<td>UL10064-FEP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>welding equipment</td>
			<td>BAKON</td>
			<td>BK881</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

using a bipolar electrode to create a temporal lobe epilepsy mouse model by electrical kindling of the amygdala

Amygdala är ett av de vanligaste ursprungen till anfall, och amygdalamusmodellen är avgörande för illustrationen av epilepsi. Få studier har dock beskrivit experimentprotokollet i detalj. Denna artikel illustrerar hela processen för amygdala elektrisk tändning epilepsi modell tillverkning, med införandet av en metod för bipolär elektrod tillverkning. Denna elektrod kan både stimulera och spela in, vilket minskar hjärnskador orsakade av implantering av separata elektroder för stimulering och inspelning. För långvarig elektroencefalogram (EEG) inspelning användes släpringar för att eliminera rekordavbrott orsakade av kabeltrassel och faller av.
Efter periodisk stimulering (60 Hz, 1 s var 15:e minut) av den basolaterala amygdalan (AP: 1,67 mm, L: 2,7 mm, V: 4,9 mm) under 19,83 ± 5,742 gånger, observerades full tändning hos sex möss (definierat som induktion av tre kontinuerliga grad V-episoder klassificerade enligt Racines skala). Ett intrakraniellt EEG registrerades under hela tändningsprocessen, och en epileptisk urladdning i amygdala som varade 20-70 s observerades efter tändning. Därför är detta ett robust protokoll för modellering av epilepsi som härrör från amygdala, och metoden är lämplig för att avslöja amygdalas roll i temporallobepilepsi. Denna forskning bidrar till framtida studier av mekanismerna bakom mesial tinninglobsepilepsi och nya antiepileptogena läkemedel.

Elektroden och kretsen gör det möjligt att registrera EEG och fungera som en stimulering (figur 1); Denna inställning undviker komplexiteten att implantera, registrera och stimulera elektroder separat och minimerar skador på hjärnvävnaden. Appliceringen av släpringar möjliggör elektrodanslutning med alla typer av enheter.
Vi utförde elektrodimplantationskirurgi på sex friska vuxna manliga C57BL / 6-möss och elektrisk stimulering utfördes 2 veckor efte...

Watch this Scientific Journal Video about Using a Bipolar Electrode to Create a Temporal Lobe Epilepsy Mouse Model by Electrical Kindling of the Amygdala at JoVE.com

Using a Bipolar Electrode to Create a Temporal Lobe Epilepsy Mouse Model by Electrical Kindling of the Amygdala

Amygdala spelar en nyckelroll i temporallobepilepsi, som har sitt ursprung i och sprider sig från denna struktur. Denna artikel ger en detaljerad beskrivning av tillverkningen av djupa hjärnelektroder med både registrerande och stimulerande funktioner. Det introducerar en modell av medial temporallobepilepsi som härrör från amygdala.

Använda en bipolär elektrod för att skapa en temporallobepilepsimusmodell genom elektrisk tändning av amygdala

The amygdala is one of the most common origins of seizures, and the amygdala mouse model is essential for the illustration of epilepsy. However, few ...

Detta protokoll föreslog en modell av epilepsi med amygdala som ursprung. Det banar väg för undersökningen av mesiala temporallobstrukturer. Denna modell kan tolkas som grunden för experimentet.Eftersom detta protokoll är en billig och effektiv metod så kan den utföras snabbt i de flesta laboratorier. Att demonstrera förfarandet kommer att vara Yongchang Lu, en doktorand i vårt laboratorium. Börja med att samla de förberedda komponenterna, börja med två centimeter långa bitar av teflonbelagd volframtråd med en björndiameter på 76,2 mikrometer.En bit silvertråd med en björndiameter på 127 mikrometer av samma längd och en uppsättning av två gånger två mätade repstift. Använd en tändare för att bränna ena änden av varje volframtråd för att ta bort fem millimeter av isoleringsbeläggningen. Skala en sektion av ultrafin flertrådig tråd.Packa upp från botten till den övre änden där det börjar bli mörkt och fortsätter till toppen. Kombinera denna superfina tråd och volframtråden genom att klämma ena änden och försiktigt vrida den andra, så att de två materialen enkelt kan sammanfogas. Dra försiktigt för att säkerställa att ledningarna är tätt lindade och skär av överflödig superfin tråd.Försök att hålla volframtråden rak under hela processen. Fäst repstiftet på klämman på svetsbordet med stiftens längre sida utåt. Använd sprutnålen för att plocka upp lite lödpasta och applicera den på stiften.Värm brännaren till 320 grader Celsius. Smält och smeta lite blyfri tenntråd med ficklampans spets. Överlappa den övre änden av volframtråden med en nål av repstiften och använd lodet på facklan för att binda volframtråden till stiftet.Svetsa en annan volframtråd och en annan silvertråd till repstiftet på samma sätt så att varje tråd motsvarar en nål. Skär två värmekrympbara rör något längre än den övre änden av volframtråden. Sätt dem på lödfogen av två volframtrådar så att den ledande delen är helt täckt i röret så att kretsen för de två volframtrådarna inte placeras i serie.Ta bort elektroden från svetsbordsklämman och håll elektroden försiktigt med en tång eftersom det är lätt för elektroderna att tappa formen vid uppvärmning av det krympbara röret. Använd en bra värmeledningsklämma med lite mer kraft. Slå på luftkanalen och värm tills en temperatur på 320 grader Celsius uppnås.Blås det värmekrympbara röret i flera sekunder tills det dras åt. Förstärk elektroden med smältlim. Håll de två volframtrådarna och vrid dem ihop, håll ändarna isär.Trimma de tvinnade volframtrådarna till cirka 10 millimeter i längd så att separationen i ändarna inte överstiger 0,5 millimeter. Kontrollera elektroderna med en multimeter genom att placera en stång på multimetern på den osvetsade sidan av repstiften och försiktigt vidröra änden av volframtråd eller silvertråd till den andra stången. Kontrollera om kretsen är jämn.Se till att linjerna inte är placerade i serie. Dra av fem millimeter av isoleringshuden i varje ände för att exponera metalltråden inuti. Lägg till en sektion av värmekrympbar slang till varje starttråd.Svetsa varje tråd med EEG-enhetens kontaktkontakt. Krymp det värmekrympbara röret med varm luft. Lägg till en sektion av värmekrympbart rör till varje rotortråd.Skruva ihop de ledande delarna av de röda och orange trådarna och svetsa dem till en fog och huvudet för att passa repstiftet. Svetsa de andra två ledningarna på huvudet till varje fog. Väg musen.När musen är helt bedövad, raka hår från ögat till öronområdet med en rakhyvel. Fixa musen på den stereotaxiska ramen. Sätt de främre övre tänderna i snittstången och sätt in båda öronstängerna på lika djup i öronen.Applicera erytromycin ögonsalva i ögonen för att förhindra torrhet och blindhet orsakad av starkt ljus under operationen. Desinficera det kirurgiska området minst tre gånger med alternerande swabs av jodofor och 75% alkohol. Gör ett längsgående snitt för att helt exponera det kirurgiska området eller gör ett triangulärt snitt så länge det exponerar de främre och bakre fontanellerna och elektrodimplanteringsställena.Rulla en liten bit bomull till en boll och blöt den med 3% väteperoxid. Ta bort mjukvävnaden som är fäst vid skallen genom att försiktigt gnugga det exponerade området med en liten bomullstuss tills den främre och bakre fontanellen ses. Justera de främre och bakre höjderna så att den främre och bakre fontanellen är horisontell.Tänk på att positionen för den främre fontanellen är axlarnas ursprung. Fäst en rostfri skruv på vänster cerebellär skalle. Ställ in koordinaterna för amygdala-tändningen från bregma och justera den stereotaxiska enheten för att hitta denna plats och markera den.Borra ett hål på marschplatsen med en skalleborr med en diameter på 0,5 millimeter. Fäst elektroderna på lokaliseringsstången på den stereotaxiska enheten. Placera elektroden vertikalt ovanför hålet och släpp positionen till minus 4,9 millimeter långsamt.Linda silvertråden runt skruven tre gånger. Var försiktig så att du inte skakar elektrodkroppen under drift. Blanda tandcement och applicera det försiktigt på elektroden och skalleytan.När tandcementet härdar, modifiera utsidan tills cementet som omsluter den fasta elektroden förvandlas till en kon. Släpp sedan elektroden från den stereotaxiska enheten. Ta bort musen och sätt tillbaka den i buren.Håll den åtskild från de andra mössen. Lägg musen i en anpassad låda med glidkablar som ansluter elektroden på musens huvud och EEG-enheten. Dra kabeln genom ett hål i lådans lock och justera längden kvar i lådan så att musen kan röra sig fritt.Slå på EEG-enheten och se till att den fungerar korrekt. Ställ in stimulatorparametrarna för att leverera monofasiska fyrkantsvågpulser på en millisekund vid 60 hertz under en sekunds tågtid under 10 stimuleringscykler. Börja med en strömintensitet på 50 mikroampere för den första stimuleringen.Övervaka EEG för efter urladdning som kännetecknas av högfrekventa spikar. Om ingen efter urladdning observeras tillsätt 25 mikroampere till nästa stimulans och fortsätt denna process var 10: e minut tills en efter urladdning observeras och varar i fem sekunder. Stimulera musen med den bestämda strömintensiteten var 15: e minut, inte mer än 20 gånger om dagen.Övervaka beteendemässiga svar på stimulansen. Elektrodimplantationsoperationen utfördes på sex friska vuxna män C57 svarta 6 möss och elektrisk stimulering utfördes två veckor efter operationen. Beteendenivån ökade gradvis med antalet stimuli som ökade och antalet stimuli som krävdes för fullständig tändning registrerades.EEG efter urladdningar varade fem till 15 sekunder. Därefter intensifierades de intrakraniella spontana urladdningarna och beteendemässiga symptom började. Anfallstiden var vanligtvis mindre än en minut vilket minskar risken för dödsfall från svåra kramper som resulterar i apné.Uttrycket av c-Fos i hjärnvävnaden detekterades genom immunhistokemi två timmar efter fullständig tändning. Resultaten visar att uttrycket av c-Fos i ipsilateral amygdala signifikant ökade vilket verifierar genomförbarheten av denna modell. Separationen av volframtrådändar bör inte överstiga halv millimeter annars kommer den inte att komma igenom hjärnhålet.Elektrodens längd bör inte vara för lång annars påverkar det mössens aktivitet.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Identification of Olfactory Volatiles using Gas Chromatography-Multi-unit Recordings (GCMR) in the Insect Antennal Lobe

Identification of Olfactory Volatiles using Gas Chromatography-Multi-unit Recordings GCMR in the Insect Antennal Lobe

Identifiering av Olfactory Flyktiga med gaskromatografi-Multi-enhet inspelningar (GCMR) i Insect antenn Lobe

All  organisms inhabit a world full of sensory stimuli that determine their  behavioral and physiological response to their environment. Olfaction is ...

Trypsin Digest Protocol to Analyze the Retinal Vasculature of a Mouse Model

Trypsin Digest protokollet för att analysera den Retinal kärlsystemet av en musmodell

Trypsin digest is the gold standard method to analyze the retinal vasculature 1-5. It allows visualization of the entire network of complex ...

A Comprehensive Protocol for Manual Segmentation of the Medial Temporal Lobe Structures

En omfattande protokoll för manuell segmentering av den mediala temporalloben strukturer

The present paper describes a comprehensive protocol for manual tracing of the set of brain regions comprising the medial temporal lobe (MTL): amygdala, ...

Pentylenetetrazole-Induced Kindling Mouse Model

Pentylenetetrazole-inducerad Kindling musmodell

Pentylenetetrazole (PTZ) is a GABA-A receptor antagonist. An intraperitoneal injection of PTZ into an animal induces an acute, severe seizure at a high ...

The Power of Interstimulus Interval for the Assessment of Temporal Processing in Rodents

Kraften i Interstimulus intervall för bedömning av Temporal bearbetning i gnagare

Temporal processing deficits have been implicated as a potential elemental dimension of higher-level cognitive processes, commonly observed in ...

Behavioral And Physiological Analysis In A Zebrafish Model Of Epilepsy

Beteendemässig och fysiologisk analys i en zebrafiskmodell av epilepsi

Epilepsy represents one of the most common neurological disorders, affecting an estimated 50 million people worldwide. Recent advances in genetic research ...

Successful In vivo Calcium Imaging with a Head-Mount Miniaturized Microscope in the Amygdala of Freely Behaving Mouse

Framgångsrik in vivo kalciumavbildning med ett huvudmonterat miniatyriserat mikroskop i Amygdala av fritt beter sig mus

In vivo real-time monitoring of neuronal activities in freely moving animals is one of key approaches to link neuronal activity to behavior. For this ...

A Behavioral Screen for Heat-Induced Seizures in Mouse Models of Epilepsy

En beteendeskärm för värmeinducerade anfall i musmodeller av epilepsi

Transgenic mouse models have proved to be powerful tools in studying various aspects of human neurological disorders, including epilepsy. The ...

Preparation and Implantation of Electrodes for Electrically Kindling VGAT-Cre Mice to Generate a Model for Temporal Lobe Epilepsy

It was discovered that electrical kindling of VGAT-Cre mice led to the spontaneous motor and electrographic seizures. A recent paper focused on how unique ...

Registration of Calcium Transients in Mouse Neuromuscular Junction with High Temporal Resolution using Confocal Microscopy

Registrering av kalciumtransienter i musens neuromuskulära korsning med hög tidsupplösning med konfokalmikroskopi

Estimation of the presynaptic calcium level is a key task in studying synaptic transmission since calcium entry into the presynaptic cell triggers a ...