Name: using a bipolar electrode to create a temporal lobe epilepsy mouse model by electrical kindling of the amygdala
Uploaded: 2022-06-29T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Using a Bipolar Electrode to Create a Temporal Lobe Epilepsy Mouse Model by Electrical Kindling of the Amygdala at JoVE.com

Araştırma, Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (No. 82030037, 81871009) ve Pekin Belediye Sağlık Komisyonu (11000022T000000444685) tarafından desteklenmiştir. TopEdit'e (www.topeditsci.com) bu makalenin hazırlanması sırasındaki dilbilimsel yardımları için teşekkür ederiz.

Bu deney, Başkent Tıp Üniversitesi, Xuanwu Hastanesi Deneysel Hayvan Etik Kurulu tarafından onaylandı. Tüm fareler Başkent Tıp Üniversitesi, Xuanwu Hastanesi'nin hayvan laboratuvarında tutuldu. Bu protokol dört bölüme ayrılmıştır. İlk iki bölüm, elektrotları ve EEG kayıt / stimülasyon ekipmanını bağlamak için bir kontak halkası kullanarak elektrot ve elektrik devresini oluşturma yöntemini tanıtmaktadır. Üçüncü bölümde elektrot implantasyonunun operasyon yöntemi, dördüncü bölümd...

<ol>
	<li>Kurita, T., Sakurai, K., Takeda, Y., Horinouchi, T., Kusumi, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Very+long-term+outcome+of+non-surgically+treated+patients+with+temporal+lobe+epilepsy+with+hippocampal+sclerosis:+A+retrospective+study.">Very long-term outcome of non-surgically treated patients with temporal lobe epilepsy with hippocampal sclerosis: A retrospective study.</a> PLoS One. 11 (7), 0159464 (2016).</li><li>Choy, M., Duffy, B. A., Lee, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optogenetic+study+of+networks+in+epilepsy.">Optogenetic study of networks in epilepsy.</a> Journal of Neuroscience Research. 95 (12), 2325-2335 (2017).</li><li>Aroniadou-Anderjaska, V., Fritsch, B., Qashu, F., Braga, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathology+and+pathophysiology+of+the+amygdala+in+epileptogenesis+and+epilepsy.">Pathology and pathophysiology of the amygdala in epileptogenesis and epilepsy.</a> Epilepsy Research. 78 (2-3), 102-116 (2008).</li><li>Smith, P. D., McLean, K. J., Murphy, M. A., Turnley, A. M., Cook, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Seizures,+not+hippocampal+neuronal+death,+provoke+neurogenesis+in+a+mouse+rapid+electrical+amygdala+kindling+model+of+seizures.">Seizures, not hippocampal neuronal death, provoke neurogenesis in a mouse rapid electrical amygdala kindling model of seizures.</a> Neuroscience. 136 (2), 405-415 (2005).</li><li>Reyes, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amygdala+enlargement:+Temporal+lobe+epilepsy+subtype+or+nonspecific+finding.">Amygdala enlargement: Temporal lobe epilepsy subtype or nonspecific finding.</a> Epilepsy Research. 132, 34-40 (2017).</li><li>Fan, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnosis+and+surgical+treatment+of+non-lesional+temporal+lobe+epilepsy+with+unilateral+amygdala+enlargement.">Diagnosis and surgical treatment of non-lesional temporal lobe epilepsy with unilateral amygdala enlargement.</a> Neurological Sciences. 42 (6), 2353-2361 (2021).</li><li>Dhir, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pentylenetetrazol+(PTZ)+kindling+model+of+epilepsy.">Pentylenetetrazol (PTZ) kindling model of epilepsy.</a> Current Protocols in Neuroscience. , 37 (2012).</li><li>Van Erum, J., Van Dam, D., De Deyn, P. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PTZ-induced+seizures+in+mice+require+a+revised+Racine+scale.">PTZ-induced seizures in mice require a revised Racine scale.</a> Epilepsy &amp; Behavior. 95, 51-55 (2019).</li><li>Carriero, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+guinea+pig+model+of+mesial+temporal+lobe+epilepsy+following+nonconvulsive+status+epilepticus+induced+by+unilateral+intrahippocampal+injection+of+kainic+acid.">A guinea pig model of mesial temporal lobe epilepsy following nonconvulsive status epilepticus induced by unilateral intrahippocampal injection of kainic acid.</a> Epilepsia. 53 (11), 1917-1927 (2012).</li><li>Levesque, M., Avoli, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+kainic+acid+model+of+temporal+lobe+epilepsy.">The kainic acid model of temporal lobe epilepsy.</a> Neuroscience Biobehavioral Reviews. 37, 2887-2899 (2013).</li><li>Fujita, A., Ota, M., Kato, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Urinary+volatile+metabolites+of+amygdala-kindled+mice+reveal+novel+biomarkers+associated+with+temporal+lobe+epilepsy.">Urinary volatile metabolites of amygdala-kindled mice reveal novel biomarkers associated with temporal lobe epilepsy.</a> Scientific Reports. 9 (1), 10586 (2019).</li><li>Li, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+spatiotemporal+dynamics+of+phase+synchronization+during+epileptogenesis+in+amygdala-kindling+mice.">The spatiotemporal dynamics of phase synchronization during epileptogenesis in amygdala-kindling mice.</a> PLoS One. 11 (4), 0153897 (2016).</li><li>Wang, Y., Wei, P., Yan, F., Luo, Y., Zhao, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+epilepsy:+A+phenotype-oriented+review.">Animal models of epilepsy: A phenotype-oriented review.</a> Aging and Disease. 13 (1), 215-231 (2022).</li><li>Fallah, M. S., Dlugosz, L., Scott, B. W., Thompson, M. D., Burnham, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antiseizure+effects+of+the+cannabinoids+in+the+amygdala-kindling+model.">Antiseizure effects of the cannabinoids in the amygdala-kindling model.</a> Epilepsia. 62 (9), 2274-2282 (2021).</li><li>Chipika, R. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amygdala+pathology+in+amyotrophic+lateral+sclerosis+and+primary+lateral+sclerosis.">Amygdala pathology in amyotrophic lateral sclerosis and primary lateral sclerosis.</a> Journal of the Neurological Sciences. 417, 117039 (2020).</li><li>Kuchukhidze, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emotional+recognition+in+patients+with+mesial+temporal+epilepsy+associated+with+enlarged+amygdala.">Emotional recognition in patients with mesial temporal epilepsy associated with enlarged amygdala.</a> Frontiers in Neurology. 12, 803787 (2021).</li><li>Soper, C., Wicker, E., Kulick, C. V., N'Gouemo, P., Forcelli, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optogenetic+activation+of+superior+colliculus+neurons+suppresses+seizures+originating+in+diverse+brain+networks.">Optogenetic activation of superior colliculus neurons suppresses seizures originating in diverse brain networks.</a> Neurobiology of Disease. 87, 102-115 (2016).</li><li>Devinsky, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epilepsy.">Epilepsy.</a> Nature Reviews Disease Primers. 4, 18024 (2018).</li><li>Zhang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interaction+between+thalamus+and+hippocampus+in+termination+of+amygdala-kindled+seizures+in+mice.">Interaction between thalamus and hippocampus in termination of amygdala-kindled seizures in mice.</a> Computational and Mathematical Methods in Medicine. 2016, 9580724 (2016).</li><li>Ghotbedin, Z., Janahmadi, M., Mirnajafi-Zadeh, J., Behzadi, G., Semnanian, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrical+low+frequency+stimulation+of+the+kindling+site+preserves+the+electrophysiological+properties+of+the+rat+hippocampal+CA1+pyramidal+neurons+from+the+destructive+effects+of+amygdala+kindling:+the+basis+for+a+possible+promising+epilepsy+therapy.">Electrical low frequency stimulation of the kindling site preserves the electrophysiological properties of the rat hippocampal CA1 pyramidal neurons from the destructive effects of amygdala kindling: the basis for a possible promising epilepsy therapy.</a> Brain Stimulation. 6 (4), 515-523 (2013).</li><li>Hristova, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Medial+septal+GABAergic+neurons+reduce+seizure+duration+upon+optogenetic+closed-loop+stimulation.">Medial septal GABAergic neurons reduce seizure duration upon optogenetic closed-loop stimulation.</a> Brain. 144 (5), 1576-1589 (2021).</li></ol>

Epilepsi, birden fazla belirtisi ve çeşitli nedenleri olan bir grup hastalıktır18; Tüm epilepsi türleri için tek bir modelin kullanılamayacağı ve araştırmacıların kendi özel çalışmaları için uygun bir model seçmeleri gerektiği belirtilmelidir. Bu çalışma, elektrot üretiminin en erişilebilir yöntemlerinden birini tanıtmaktadır. Bu yöntemin çeşitli bölümleri, farklı deneysel koşullara uyum sağlamak için ayarlanabilir.
Bu yöntem, hem...

Temporal lob epilepsisi (TLE) en sık görülen epilepsi türüdür ve ilaca dirençli epilepsiye dönüşme riski yüksektir. Selektif amigdalohipokampektomi gibi cerrahi, TLE'nin etkili bir tedavisidir ve hastalığın epileptogenezi ve iktogenezi hala araştırılmaktadır 1,2. TLE'nin patogenezinin sadece hipokampusta değil, amigdalada da yaygın olarak görüldüğü gösterilmiştir 3,4. Örneğin, hem amigdala skleroz hem de amigdala büyümesi sıklıkla TLE nöbetlerinin kökenleri olarak bildirilmiştir 5,6. Amigdala'nın önemi küçümsenemez; Epileptogenezin incelenmesi için bir amigdala modeli gereklidir ve bu modelin açık bir örneğine acilen ihtiyaç vardır.
Hayvan modellerinde nöbetleri indüklemek için çeşitli yaklaşımlar önerilmiştir. Geçmişte, konvülsan ilaçlar erken evre7'de intraperitoneal olarak enjekte edildi. Bu yöntem uygun olmasına rağmen, epileptik odakların yeri belirsizdi. Stereotaktik teknolojinin gelişmesi ve detaylı bir hayvan beyin atlası ile lokalizasyon problemini çözmek için kafa içi ilaç enjeksiyonu uygulanmıştır8. Bununla birlikte, akut evrede şiddetli nöbetlere müdahale edilmemesi yüksek mortalite oranına neden olmuş ve kronik spontan nöbetlere kararsız interiktal ve nöbet sıklığı 9,10 sorunu eşlik etmiştir. Son olarak, elektrikli çırpma yöntemi geliştirildi; Bu yöntem periyodik olarak belirli beyin bölgelerini birkaç kez uyarır ve nöbetlerin hem yerin hem de başlangıç zamanının kesin kontrolü ile indüklenmesini sağlar11.
Bu yöntemin bir avantajı, elektrotların intrakraniyal implantasyonunun minimal invazivolmasıdır 12. Ayrıca, nöbetin şiddeti, uyaranların sonlandırılmasıyla kontrol edilebilir ve nöbetlerin neden olduğu mortaliteyi azaltır. Bu değişiklikler önceki yaklaşımların eksikliklerini çözdü. Özellikle, bu model insan nöbetlerini yeterince taklit edebilir ve SE'yi hızlı bir şekilde indükleme kabiliyeti nedeniyle status epileptikus (SE) çalışması için özellikle uygundur13. Ayrıca anti-epileptik ilaç taraması14 için ve epilepsi mekanizması üzerine çalışmalarda da kullanılabilir. Son olarak, amigdala'nın hafıza modülasyonu, ödül işleme ve duygu15 ile yakından ilişkili olduğu iyi bilinmektedir. Bu zihinsel fonksiyonların bozukluklarına epileptik hastalarda sıklıkla rastlanır ve bu nedenle amigdala epilepsi modeli, epilepsideki duygusal sorunları incelemek için daha iyi bir seçim olabilir16.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 488-conjugated Donkey anti-Rabbit IgG</td>
			<td>invitrogen</td>
			<td>A-21206</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>c-Fos antibody</td>
			<td></td>
			<td>ab222699</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cranial drill</td>
			<td>SANS</td>
			<td>SA302</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dental cement</td>
			<td>NISSIN</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EEG recording and stimulation equipment</td>
			<td>Neuracle Technology (Changzhou) Co., Ltd</td>
			<td>NSHHFS-210803</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>lead-free tin wire</td>
			<td>BAKON</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pin header/Female header</td>
			<td>XIANMISI</td>
			<td></td>
			<td>spacing of 1.27 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silver wire</td>
			<td>A-M systems</td>
			<td>786000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slip ring</td>
			<td>Senring Electronics Co.,Ltd</td>
			<td>SNM008-04</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tungsten wire</td>
			<td>A-M systems</td>
			<td>796000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ultrafine multi-stand wire</td>
			<td>Shenzhen Chengxing wire and cable</td>
			<td>UL10064-FEP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>welding equipment</td>
			<td>BAKON</td>
			<td>BK881</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

using a bipolar electrode to create a temporal lobe epilepsy mouse model by electrical kindling of the amygdala

Amigdala, nöbetlerin en yaygın kökenlerinden biridir ve amigdala fare modeli, epilepsinin gösterilmesi için gereklidir. Bununla birlikte, az sayıda çalışma deneysel protokolü ayrıntılı olarak tanımlamıştır. Bu yazıda, bipolar elektrot üretimi yönteminin tanıtılmasıyla amigdala elektriksel çıra epilepsi modeli yapımının tüm süreci gösterilmektedir. Bu elektrot hem uyarabilir hem de kaydedebilir, böylece stimülasyon ve kayıt için ayrı elektrotların implante edilmesinin neden olduğu beyin hasarını azaltabilir. Uzun süreli elektroensefalogram (EEG) kayıt amacıyla, kablo karmaşalarının ve düşmenin neden olduğu kayıt kesintisini ortadan kaldırmak için kontak halkaları kullanılmıştır.
Bazolateral amigdala'nın (AP: 1.67 mm, L: 2.7 mm, V: 4.9 mm) 19.83 ± 5.742 kez periyodik olarak uyarılmasından sonra (60 Hz, her 15 dakikada 1 sn), altı farede tam çıra gözlendi (Racine'in ölçeğine göre sınıflandırılan üç sürekli derece V bölümünün indüksiyonu olarak tanımlandı). Tüm çıra işlemi boyunca intrakraniyal EEG kaydedildi ve çıralama sonrası amigdala'da 20-70 s süren epileptik akıntı gözlendi. Bu nedenle, bu, amigdala kaynaklı epilepsiyi modellemek için sağlam bir protokoldür ve yöntem, temporal lob epilepsisinde amigdala'nın rolünü ortaya çıkarmak için uygundur. Bu araştırma, mesial temporal lob epilepsisinin mekanizmaları ve yeni antiepileptojenik ilaçlar üzerine gelecekteki çalışmalara katkıda bulunmaktadır.

Elektrot ve devre, EEG'nin kaydedilmesini ve bir stimülasyon olarak işlev görmesini sağlar (Şekil 1); Bu kurulum, kayıt ve uyarıcı elektrotların ayrı ayrı implante edilmesinin karmaşıklığını önler ve beyin dokusuna verilen hasarı en aza indirir. Kontak halkalarının uygulanması, her türlü cihazla elektrot bağlantısına izin verir.
Altı sağlıklı yetişkin erkek C57BL/6 fareye elektrot implantasyon ameliyatı yaptık ve ameliyattan 2 haf...

Watch this Scientific Journal Video about Using a Bipolar Electrode to Create a Temporal Lobe Epilepsy Mouse Model by Electrical Kindling of the Amygdala at JoVE.com

Using a Bipolar Electrode to Create a Temporal Lobe Epilepsy Mouse Model by Electrical Kindling of the Amygdala

Amigdala, bu yapıdan kaynaklanan ve yayılan temporal lob epilepsisinde önemli bir rol oynar. Bu makale, hem kayıt hem de uyarıcı işlevlere sahip derin beyin elektrotlarının üretiminin ayrıntılı bir açıklamasını sunmaktadır. Amigdala kaynaklı medial temporal lob epilepsisinin bir modelini sunar.

Amigdala'nın Elektriksel Çırası ile Temporal Lob Epilepsi Fare Modeli Oluşturmak için Bipolar Elektrot Kullanma

The amygdala is one of the most common origins of seizures, and the amygdala mouse model is essential for the illustration of epilepsy. However, few ...

Bu protokol, kökeni amigdala olan bir epilepsi modeli önerdi. Mesial temporal lob yapılarının araştırılmasına zemin hazırlar. Bu model deneyin temeli olarak yorumlanabilir.Bu protokol düşük maliyetli ve verimli bir yöntem olduğundan, laboratuvarların çoğunda hızlı bir şekilde gerçekleştirilebilir. Prosedürü gösteren, laboratuvarımızda yüksek lisans yapan Yongchang Lu olacak. 76.2 mikrometre ayı çapına sahip iki santimetre uzunluğundaki Teflon kaplı tungsten tel parçalarından başlayarak önceden hazırlanmış bileşenleri toplayarak başlayın.Aynı uzunlukta 127 mikrometre ayı çapına sahip bir gümüş tel parçası ve iki x iki ölçülü ip pimlerinden oluşan bir set. İzolasyon kaplamasının beş milimetresini çıkarmak için her tungsten telin bir ucunu yakmak için bir çakmak kullanın. Ultra ince çok telli telin bir bölümünü soyun.Alttan üst uca doğru açın, burada üste doğru devam ederek karanlık olmaya başlar. Bu süper ince teli ve tungsten teli, bir ucunu sıkıştırarak ve diğerini hafifçe bükerek birleştirin ve iki malzemenin kolayca birbirine dolanması sağlansın. Tellerin sıkıca sarıldığından emin olmak için yavaşça çekin ve fazla süper ince teli kesin.İşlem boyunca tungsten telini düz tutmaya çalışın. Halat pimini, pimlerin uzun tarafı dışa bakacak şekilde kaynak tablasındaki kelepçeye sabitleyin. Bazı lehim macunlarını almak ve pimlere uygulamak için şırınga iğnesini kullanın.Kaynak torcunu 320 santigrat dereceye ısıtın. Meşale ucu ile kurşunsuz bir miktar kalay teli eritin ve sürün. Tungsten telinin üst ucunu ip pimlerinin bir iğnesiyle örtüşürün ve tungsten telini pime bağlamak için meşale üzerindeki lehimi kullanın.Halat pimine başka bir tungsten tel ve başka bir gümüş teli aynı şekilde kaynaklayın, böylece her tel bir iğneye karşılık gelir. Isı ile büzülebilen iki tüpü tungsten telinin üst ucundan biraz daha uzun kesin. İletken parçanın tüpün içinde tamamen kaplanmasını sağlamak için iki tungsten telin lehim eklemine koyun, böylece iki tungsten telin devresi seri olarak yerleştirilmez.Elektrodu kaynak masası kelepçesinden çıkarın ve büzülebilir tüpü ısıtırken elektrotların şeklini kaybetmesi kolay olduğundan elektrodu büyük penselerle yavaşça tutun. Biraz daha fazla kuvvete sahip iyi bir termal iletkenlik kelepçesi kullanın. Hava kanalını açın ve 320 santigrat derece sıcaklığa ulaşana kadar ısıtın.Isı ile büzülebilen tüpü sıkılana kadar birkaç saniye üfleyin. Elektrodu sıcak eriyik yapıştırıcı ile güçlendirin. İki tungsten teli tutun ve uçlarını birbirinden ayrı tutarak bir araya getirin.Bükülmüş tungsten telleri yaklaşık 10 milimetre uzunluğa kadar kesin, böylece uçlardaki ayırma 0,5 milimetreyi geçmez. Halat pimlerinin kaynaksız tarafına multi-metrenin bir çubuğunu yerleştirerek ve tungsten telinin veya gümüş telin ucuna diğer çubuğa hafifçe dokunarak elektrotları bir multi-metre ile kontrol edin. Devrenin pürüzsüz olup olmadığını kontrol etme.Çizgilerin seri olarak yerleştirilmediğinden emin olun. İçindeki metal teli açığa çıkarmak için her iki uçtaki yalıtım derisinin beş milimetresini soyun. Her marş teline bir parça ısı ile büzülebilir boru ekleyin.Her kabloyu EEG aygıt konektörü fişi ile kaynaklayın. Isıl büzülebilir tüpü sıcak hava ile küçültün. Her rotor teline bir parça ısı ile büzülebilir tüp ekleyin.Kırmızı ve turuncu tellerin iletken parçalarını birbirine vidalayın ve ip pimine uyacak şekilde bir bağlantıya ve başlığa kaynak yapın. Başlıktaki diğer iki teli her bir bağlantıya kaynaklayın. Fareyi tartın.Fare tamamen uyuşturulduğunda, saçları gözden kulak bölgesine tıraş ederek tıraş edin. Fareyi stereotaksik çerçeveye sabitleyin. Ön üst dişleri kesici çubuğa yerleştirin ve her iki kulak çubuğunu da kulaklara eşit derinlikte yerleştirin.Ameliyat sırasında parlak ışığın neden olduğu kuruluk ve körlüğü önlemek için gözlere eritromisin göz merhemi uygulayın. Cerrahi bölgeyi alternatif iyodofor çubukları ve% 75 alkol ile en az üç kez dezenfekte edin. Cerrahi alanı tamamen açığa çıkarmak için uzunlamasına bir kesi yapın veya ön ve arka fontaneller ve elektrot implante bölgelerini açığa çıkardığı sürece üçgen bir kesi yapın.Küçük bir pamuk parçasını bir topun içine yuvarlayın ve% 3 hidrojen peroksit ile ıslatın. Ön ve arka fontanel görülene kadar açıkta kalan bölgeyi küçük bir pamuk topu ile hafifçe ovalayarak kafatasına bağlı yumuşak dokuyu çıkarın. Ön ve arka yükseklikleri, ön ve arka fontanel yatay olacak şekilde ayarlayın.Ön fontanelin konumunun eksenlerin kökeni olduğunu düşünün. Sol serebellar kafatasına paslanmaz çelik bir vida sabitleyin. Amigdala çırasının koordinatlarını bregma'dan ayarlayın ve stereotaksik cihazı bu noktayı bulmak ve işaretlemek için ayarlayın.0,5 milimetre çapında kafatası matkabıyla yürüyüş noktasında bir delik açın. Elektrotları stereotaksik cihazın konumlandırma çubuğuna sabitleyin. Elektrodu dikey olarak deliğin üzerine yerleştirin ve konumu yavaşça eksi 4,9 milimetreye bırakın.Gümüş teli vidanın etrafına üç kez sarın. Çalışma sırasında elektrot gövdesini sallamamaya özen göstermek. Diş çimentosunu karıştırın ve elektrot ve kafatası yüzeyine nazikçe uygulayın.Diş çimentosu sertleştiğinde, sabit elektrodu çevreleyen çimento bir koniye dönüşene kadar dışını değiştirin. Ardından elektrodu stereotaksik cihazdan serbest bırakın. Fareyi çıkarın ve tekrar kafese yerleştirin.Diğer farelerden ayrı tutmak. Fareyi, elektrodu farenin kafasına ve EEG cihazına bağlayan kaygan kablolarla özelleştirilmiş bir kutuya koyun. Kabloyu kutu kapağındaki bir delikten geçirin ve farenin serbestçe hareket etmesini sağlamak için kutuda kalan uzunluğu ayarlayın.EEG cihazını açın ve düzgün çalıştığından emin olun. Stimülatör parametrelerini, 10 stimülasyon döngüsü için bir saniyelik bir tren süresi boyunca 60 hertz'de bir milisaniyelik monofazik kare dalga darbeleri verecek şekilde ayarlayın. İlk stimülasyon için 50 mikroamperlik bir akım yoğunluğu ile başlayın.EEG'yi, yüksek frekanslı ani artışlarla karakterize edilen deşarj sonrası için izleyin. Akıntı gözlenmezse, bir sonraki uyarana 25 mikroamper ekleyin ve bir sonraki deşarj gözlenene ve beş saniye sürene kadar her 10 dakikada bir bu işleme devam edin. Fareyi her 15 dakikada bir, günde en fazla 20 kez belirlenen akım yoğunluğuyla uyarın.Uyarana verilen davranışsal tepkileri izleyin. Elektrot implantasyon ameliyatı altı sağlıklı yetişkin erkek C57 siyah 6 fareye ve elektriksel stimülasyon ameliyattan iki hafta sonra yapıldı. Davranışsal nöbet seviyesi, uyaran sayısının artmasıyla birlikte giderek artmış ve tam çıra için gerekli uyaran sayısı kaydedilmiştir.Taburcu olduktan sonra EEG beş ila 15 saniye sürdü. Daha sonra intrakraniyal spontan akıntılar yoğunlaştı ve davranışsal semptomlar başladı. Nöbet süresi genellikle bir dakikadan azdı ve bu da apne ile sonuçlanan ciddi konvülsiyonlardan ölüm riskini azaltır.Beyin dokusundaki c-Fos ekspresyonu, tam çıralamadan iki saat sonra immünohistokimya ile tespit edildi. Sonuçlar, ipsilateral amigdaladaki c-Fos ekspresyonunun, bu modelin fizibilitesini doğrulayarak önemli ölçüde arttığını göstermektedir. Tungsten tel uçlarının ayrılması yarım milimetreyi geçmemelidir, aksi takdirde beyin deliğinden geçmez.Elektrotun uzunluğu çok uzun olmamalıdır, aksi takdirde farelerin aktivitesini etkiler.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Identification of Olfactory Volatiles using Gas Chromatography-Multi-unit Recordings (GCMR) in the Insect Antennal Lobe

Identification of Olfactory Volatiles using Gas Chromatography-Multi-unit Recordings GCMR in the Insect Antennal Lobe

Böcek antennal Lob Gaz Kromatografisi-Multi-ünite Recordings (GCMR) kullanarak Olfaktör Uçuculuk tanımlanması

All  organisms inhabit a world full of sensory stimuli that determine their  behavioral and physiological response to their environment. Olfaction is ...

Trypsin Digest Protocol to Analyze the Retinal Vasculature of a Mouse Model

Tripsin Digest Protokolü Fare Modeli Retina damarları Analiz

Trypsin digest is the gold standard method to analyze the retinal vasculature 1-5. It allows visualization of the entire network of complex ...

A Comprehensive Protocol for Manual Segmentation of the Medial Temporal Lobe Structures

Medial Temporal Lob Yapıların El segmentasyonu için Kapsamlı Protokolü

The present paper describes a comprehensive protocol for manual tracing of the set of brain regions comprising the medial temporal lobe (MTL): amygdala, ...

Pentylenetetrazole-Induced Kindling Mouse Model

Pentylenetetrazole kaynaklı çıra fare modeli

Pentylenetetrazole (PTZ) is a GABA-A receptor antagonist. An intraperitoneal injection of PTZ into an animal induces an acute, severe seizure at a high ...

The Power of Interstimulus Interval for the Assessment of Temporal Processing in Rodents

Interstimulus Aralık kemirgenler zamansal işleme değerlendirilmesi için güç

Temporal processing deficits have been implicated as a potential elemental dimension of higher-level cognitive processes, commonly observed in ...

Behavioral And Physiological Analysis In A Zebrafish Model Of Epilepsy

Zebra balığı epilepsi modelinde davranışsal ve fizyolojik analiz

Epilepsy represents one of the most common neurological disorders, affecting an estimated 50 million people worldwide. Recent advances in genetic research ...

Successful In vivo Calcium Imaging with a Head-Mount Miniaturized Microscope in the Amygdala of Freely Behaving Mouse

Özgürce Davranan Farenin Amigdalasında Kafaya Monte Minyatür Mikroskop ile Başarılı In vivo Kalsiyum Görüntüleme

In vivo real-time monitoring of neuronal activities in freely moving animals is one of key approaches to link neuronal activity to behavior. For this ...

A Behavioral Screen for Heat-Induced Seizures in Mouse Models of Epilepsy

Epilepsinin Fare Modellerinde Isıya Bağlı Nöbetler İçin Davranışsal Bir Ekran

Transgenic mouse models have proved to be powerful tools in studying various aspects of human neurological disorders, including epilepsy. The ...

Preparation and Implantation of Electrodes for Electrically Kindling VGAT-Cre Mice to Generate a Model for Temporal Lobe Epilepsy

It was discovered that electrical kindling of VGAT-Cre mice led to the spontaneous motor and electrographic seizures. A recent paper focused on how unique ...

Registration of Calcium Transients in Mouse Neuromuscular Junction with High Temporal Resolution using Confocal Microscopy

Konfokal Mikroskopi Kullanılarak Fare Nöromüsküler Kavşağında Yüksek Zamansal Çözünürlükte Kalsiyum Geçici Maddelerinin Kaydı

Estimation of the presynaptic calcium level is a key task in studying synaptic transmission since calcium entry into the presynaptic cell triggers a ...