Name: standardized rat coronary ring preparation and real-time recording of dynamic tension changes along vessel diameter
Uploaded: 2022-06-16T14:50:00
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Questo lavoro è stato supportato dal progetto Key R&D del Sichuan Provincial Science and Technology Plan (2022YFS0438), dalla National Natural Science Foundation of China (82104533), dalla China Postdoctoral Science Foundation (2020M683273) e dal Science & Technology Department of Sichuan Province (2021YJ0175).

Il protocollo animale è stato rivisto e approvato dal Comitato di gestione dell'Università di medicina tradizionale cinese di Chengdu (record n. 2021-11). Per il presente studio sono stati utilizzati ratti maschi di Sprague Dawley (SD) (260-300 g, 8-10 settimane di età). I ratti erano tenuti in una camera per animali ed erano liberi di bere e mangiare durante l'esperimento.
1. Preparazione della soluzione
<ol><li>Preparare la soluzione salina fisiologica (PSS) sciogliendo...

<ol>
	<li>Malakar, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+on+coronary+artery+disease,+its+risk+factors,+and+therapeutics.">A review on coronary artery disease, its risk factors, and therapeutics.</a> Journal of Cellular Physiology. 234 (10), 16812-16823 (2019).</li><li>Murray, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=national+age-sex+specific+all-cause+and+cause-specific+mortality+for+240+causes+of+death,+1990-2013:+A+systematic+analysis+for+the+global+burden+of+disease+Study+2013.">national age-sex specific all-cause and cause-specific mortality for 240 causes of death, 1990-2013: A systematic analysis for the global burden of disease Study 2013.</a> The Lancet. 385 (9963), 117-171 (2015).</li><li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adenosine+and+adenosine+receptor-mediated+action+in+coronary+microcirculation.">Adenosine and adenosine receptor-mediated action in coronary microcirculation.</a> Basic Research in Cardiology. 116 (1), 22 (2021).</li><li>Allaqaband, H., Gutterman, D. D., Kadlec, A. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physiological+consequences+of+coronary+arteriolar+dysfunction+and+its+influence+on+cardiovascular+disease.">Physiological consequences of coronary arteriolar dysfunction and its influence on cardiovascular disease.</a> Physiology. 33 (5), 338-347 (2018).</li><li>Minelli, S., Minelli, P., Montinari, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reflections+on+atherosclerosis:+Lesson+from+the+past+and+future+research+directions.">Reflections on atherosclerosis: Lesson from the past and future research directions.</a> Journal of Multidisciplinary Healthcare. 13, 621-633 (2020).</li><li>Alvarez-Alvarez, M. M., Zanetti, D., Carreras-Torres, R., Moral, P., Athanasiadis, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+survey+of+sub-saharan+gene+flow+into+the+mediterranean+at+risk+loci+for+coronary+artery+disease.">A survey of sub-saharan gene flow into the mediterranean at risk loci for coronary artery disease.</a> European Journal of Human Genetics. 25 (4), 472-476 (2017).</li><li>LaCombe, P., Tariq, M. A., Lappin, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physiology,+Afterload+Reduction.">Physiology, Afterload Reduction.</a> StatPearls [Internet]. , (2022).</li><li>Gutterman, D. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+human+microcirculation:+regulation+of+flow+and+beyond.">The human microcirculation: regulation of flow and beyond.</a> Circulation Research. 118 (1), 157-172 (2016).</li><li>Wang, G., Li, F., Hou, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complementary+and+alternative+therapies+for+stable+angina+pectoris+of+coronary+heart+disease:+A+protocol+for+systematic+review+and+network+meta-analysis.">Complementary and alternative therapies for stable angina pectoris of coronary heart disease: A protocol for systematic review and network meta-analysis.</a> Medicine. 101 (7), 28850 (2022).</li><li>Markousis-Mavrogenis, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coronary+microvascular+disease:+the+&amp;#34;meeting+point&amp;#34;+of+cardiology.">Coronary microvascular disease: the &amp;#34;meeting point&amp;#34; of cardiology.</a> European Journal of Clinical Investigation. 52 (5), 13737 (2021).</li><li>Allison, B. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fetal+in+vivo+continuous+cardiovascular+function+during+chronic+hypoxia.">Fetal in vivo continuous cardiovascular function during chronic hypoxia.</a> The Journal of Physiology. 594 (5), 1247-1264 (2016).</li><li>Wenceslau, C. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guidelines+for+the+measurement+of+vascular+function+and+structure+in+isolated+arteries+and+veins.">Guidelines for the measurement of vascular function and structure in isolated arteries and veins.</a> American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 321 (1), 77-111 (2021).</li><li>Liu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+Ca2++handling+for+the+regulation+of+vasoconstriction+between+rat+coronary+and+renal+arteries.">Comparison of Ca2+ handling for the regulation of vasoconstriction between rat coronary and renal arteries.</a> Journal of Vascular Research. 56 (4), 191-203 (2019).</li><li>Sun, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isometric+contractility+measurement+of+the+mouse+mesenteric+artery+using+wire+myography.">Isometric contractility measurement of the mouse mesenteric artery using wire myography.</a> Journal of Visualized Experiments. (138), e58064 (2018).</li><li>Guo, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coronary+hypercontractility+to+acidosis+owes+to+the+greater+activity+of+TMEM16A/ANO1+in+the+arterial+smooth+muscle+cells.">Coronary hypercontractility to acidosis owes to the greater activity of TMEM16A/ANO1 in the arterial smooth muscle cells.</a> Biomedicine &amp; Pharmacotherapy. 139, 111615 (2021).</li><li>Ping, N. N., Cao, L., Xiao, X., Li, S., Cao, Y. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+determination+of+optimal+initial+tension+in+rat+coronary+artery+using+wire+myography.">The determination of optimal initial tension in rat coronary artery using wire myography.</a> Physiological Research. 63 (1), 143-146 (2014).</li><li>Niccoli, G., Scalone, G., Lerman, A., Crea, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coronary+microvascular+obstruction+in+acute+myocardial+infarction.">Coronary microvascular obstruction in acute myocardial infarction.</a> European Heart Journal. 37 (13), 1024-1033 (2016).</li><li>Mumma, B., Flacke, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+diagnostic+and+therapeutic+strategies+in+microvascular+angina.">Current diagnostic and therapeutic strategies in microvascular angina.</a> Current Emergency and Hospital Medicine Reports. 3 (1), 30-37 (2015).</li><li>Lanza, G. A., Parrinello, R., Figliozzi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Management+of+microvascular+angina+pectoris.">Management of microvascular angina pectoris.</a> American Journal of Cardiovascular Drugs. 14 (1), 31-40 (2014).</li><li>Zhu, T. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beneficial+effects+of+intracoronary+tirofiban+bolus+administration+following+upstream+intravenous+treatment+in+patients+with+ST-elevation+myocardial+infarction+undergoing+primary+percutaneous+coronary+intervention:+The+ICT-AMI+study.">Beneficial effects of intracoronary tirofiban bolus administration following upstream intravenous treatment in patients with ST-elevation myocardial infarction undergoing primary percutaneous coronary intervention: The ICT-AMI study.</a> International Journal of Cardiology. 165 (3), 437-443 (2013).</li><li>Huang, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Restoration+of+coronary+flow+in+patients+with+no-reflow+after+primary+coronary+intervention+of+acute+myocardial+infarction+(RECOVER).">Restoration of coronary flow in patients with no-reflow after primary coronary intervention of acute myocardial infarction (RECOVER).</a> American Heart Journal. 164 (3), 394-401 (2012).</li><li>Fu, W. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anti-atherosclerosis+and+cardio-protective+effects+of+the+Angong+Niuhuang+Pill+on+a+high+fat+and+vitamin+D3+induced+rodent+model+of+atherosclerosis.">Anti-atherosclerosis and cardio-protective effects of the Angong Niuhuang Pill on a high fat and vitamin D3 induced rodent model of atherosclerosis.</a> Journal of Ethnopharmacology. 195, 118-126 (2017).</li><li>Li, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chinese+medicine+She-Xiang-Xin-Tong-Ning,+containing+moschus,+corydalis+and+ginseng,+protects+from+myocardial+ischemia+injury+via+angiogenesis.">Chinese medicine She-Xiang-Xin-Tong-Ning, containing moschus, corydalis and ginseng, protects from myocardial ischemia injury via angiogenesis.</a> The American Journal of Chinese Medicine. 48 (1), 107-126 (2020).</li><li>Wu, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three+dimensional+reconstruction+of+coronary+artery+stents+from+optical+coherence+tomography:+Experimental+validation+and+clinical+feasibility.">Three dimensional reconstruction of coronary artery stents from optical coherence tomography: Experimental validation and clinical feasibility.</a> Scientific Reports. 11 (1), 1-15 (2021).</li><li>Liu, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Janus-like+role+of+fibroblast+growth+factor+2+in+arteriosclerotic+coronary+artery+disease:+Atherogenesis+and+angiogenesis.">Janus-like role of fibroblast growth factor 2 in arteriosclerotic coronary artery disease: Atherogenesis and angiogenesis.</a> Atherosclerosis. 229 (1), 10-17 (2013).</li><li>Hu, G., Li, X., Zhang, S., Wang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Association+of+rat+thoracic+aorta+dilatation+by+astragaloside+IV+with+the+generation+of+endothelium-derived+hyperpolarizing+factors+and+nitric+oxide,+and+the+blockade+of+Ca2++channels.">Association of rat thoracic aorta dilatation by astragaloside IV with the generation of endothelium-derived hyperpolarizing factors and nitric oxide, and the blockade of Ca2+ channels.</a> Biomedical reports. 5 (1), 27-34 (2016).</li><li>Guo, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anticonstriction+effect+of+MCA+in+rats+by+danggui+buxue+decoction.">Anticonstriction effect of MCA in rats by danggui buxue decoction.</a> Frontiers in Pharmacology. 12, 749915 (2021).</li><li>Jing, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Apigenin+relaxes+rat+intrarenal+arteries,+depresses+Ca2+-activated+Cl&#8722;+currents+and+augments+voltage-dependent+K++currents+of+the+arterial+smooth+muscle+cells.">Apigenin relaxes rat intrarenal arteries, depresses Ca2+-activated Cl&#8722; currents and augments voltage-dependent K+ currents of the arterial smooth muscle cells.</a> Biomedicine &amp; Pharmacotherapy. 115, 108926 (2019).</li></ol>

Il disturbo della microcircolazione coronarica, che coinvolge una vasta gamma di pazienti con CAD, è stato gradualmente riconosciuto e ha riguardato le basi per un'adeguata perfusione del miocardio. Considerando le gravi complicanze della malattia coronarica improvvisa e delle malattie cardiovascolari, la prevenzione e il trattamento tempestivi dei farmaci sono estremamente importanti per un individuo clinico con CAD17. Inevitabilmente, la segretezza dell'anatomia coronarica e la complessità del...

La malattia coronarica (CAD) è stata ampiamente riconosciuta e preoccupata come una malattia cardiovascolare tipica e rappresentativa, essendo la principale causa di morte sia nei paesi sviluppati che in quelli in via di sviluppo 1,2. Come via di afflusso di sangue e ossigeno per la normale funzione fisiologica cardiaca, il sangue circolante entra e nutre il cuore attraverso due arterie coronarie principali e una rete vascolare del sangue sulla superficie del miocardio 3,4. I depositi di colesterolo e grasso nelle arterie coronarie interrompono l'afflusso di sangue del cuore e la violenta risposta infiammatoria del sistema vascolare, causando aterosclerosi, angina stabile, angina instabile, infarto miocardico o morte cardiaca improvvisa 5,6. In risposta alla stenosi patologica delle arterie coronarie, il battito cardiaco fisiologico accelerato compensatorio soddisfa l'afflusso di sangue del cuore stesso o degli organi vitali del corpo aumentando la produzione del ventricolo sinistro7. Se la stenosi coronarica prolungata non viene alleviata in tempo, in alcune aree del cuorepossono svilupparsi nuovi vasi sanguigni estesi. Allo stato attuale, il trattamento clinico della CAD adotta spesso trombolisi farmacologica o trombolisi meccanica chirurgica e un bypass vascolare bionico esogeno con farmaci frequenti e grande disabilità chirurgica9. Pertanto, l'indagine funzionale dell'attività fisiologica dell'arteria coronaria è ancora una svolta urgente per le malattie cardiovascolari10.
Non ci sono mezzi tecnici disponibili per rilevare l'attività fisiologica coronarica, ad eccezione dei sistemi di telemetria wireless, che possono registrare dinamicamente la pressione coronarica in vivo , la tensione vascolare, la saturazione di ossigeno nel sangue e i valori di pH11. Pertanto, considerando la segretezza e la complessità delle arterie coronarie, l'identificazione accurata e l'isolamento delle arterie coronarie sono senza dubbio le scelte migliori per esplorare molteplici meccanismi di CAD in vitro4.
Un sistema multimilografo di serie, in particolare un rilevatore di tensione microvascolare a micrografia a filo (vedi Tabella dei materiali), è un dispositivo commerciabile molto maturo per la registrazione in vitro di cambiamenti di tensione tissutale di piccoli tubi vascolari, linfatici e bronchiali con le caratteristiche di alta precisione e registrazione dinamica continua12. Il suddetto sistema è stato ampiamente utilizzato per registrare in vitro le caratteristiche di tensione tissutale di strutture di cavità con diametri da 60 μm a 10 mm. Le caratteristiche di riscaldamento continuo della piattaforma della micrografia a filo compensano in gran parte la stimolazione dell'ambiente esterno avverso. Nel frattempo, gli input costanti della miscela di gas e i valori di pH ci consentono di ottenere dati più accurati sulla tensione vascolare in uno stato fisiologico simile13. Tuttavia, considerando la complessità della localizzazione anatomica delle arterie coronarie di ratto (Figura 1), il suo isolamento ha lasciato perplessi e limitato l'esplorazione del meccanismo di malattie cardiovascolari diversificate e lo sviluppo di farmaci. Pertanto, il presente protocollo introduce in dettaglio la posizione anatomica e il processo di separazione dell'arteria coronaria del ratto, seguito dalla misurazione della tensione sulla piattaforma della micrografiaa filo 14.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Apigenin</td>
			<td>Sangon Biotech Co., Ltd., Shanghai, China</td>
			<td>150731</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td>Sangon Biotech Co., Ltd., Shanghai, China</td>
			<td>A501330</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-glucose</td>
			<td>Sangon Biotech Co., Ltd., Shanghai, China</td>
			<td>A610219</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Xiya Reagent Co., Ltd., Shandong, China</td>
			<td>S3872</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>Sangon Biotech Co., Ltd., Shanghai, China</td>
			<td>A100395</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KH2PO4</td>
			<td>Sangon Biotech Co., Ltd., Shanghai, China</td>
			<td>A100781</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LabChart Professional version 8.3&#160;</td>
			<td>ADInstruments, Australia</td>
			<td>&#8212;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgCl2&#183;6H2O</td>
			<td>Sangon Biotech Co., Ltd., Shanghai, China</td>
			<td>A100288</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multi myograph system&#160;</td>
			<td>Danish Myo Technology, Aarhus, Denmark</td>
			<td>620M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Sangon Biotech Co., Ltd., Shanghai, China</td>
			<td>A100241</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaHCO3</td>
			<td>Sangon Biotech Co., Ltd., Shanghai, China</td>
			<td>A100865</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Steel wires</td>
			<td>Danish Myo Technology, Aarhus, Denmark</td>
			<td>400447</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>U46619</td>
			<td>Sigma, USA</td>
			<td>D8174</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

standardized rat coronary ring preparation and real-time recording of dynamic tension changes along vessel diameter

Come evento chiave delle malattie del sistema cardiovascolare, la malattia coronarica (CAD) è stata ampiamente considerata come il principale colpevole di aterosclerosi, infarto miocardico e angina pectoris, che minacciano seriamente la vita e la salute delle persone in tutto il mondo. Tuttavia, come registrare le caratteristiche biomeccaniche dinamiche dei vasi sanguigni isolati ha a lungo sconcertato le persone. Nel frattempo, il posizionamento preciso e l'isolamento delle arterie coronarie per misurare i cambiamenti di tensione vascolare dinamica in vitro sono diventati una tendenza nello sviluppo di farmaci CAD. Il presente protocollo descrive l'identificazione macroscopica e la separazione microscopica delle arterie coronarie di ratto. La funzione di contrazione e dilatazione dell'anello coronarico lungo il diametro del vaso è stata monitorata utilizzando il sistema multi miografo stabilito. I protocolli standardizzati e programmati di misurazione della tensione dell'anello coronarico, dal campionamento all'acquisizione dei dati, migliorano enormemente la ripetibilità dei dati sperimentali, garantendo l'autenticità dei record di tensione vascolare dopo interventi fisiologici, patologici e farmacologici.

Le arterie coronarie di ratto anatomicamente posizionate e nascoste in profondità nel tessuto miocardico non sono state facilmente riconosciute. Confrontando le arterie coronarie degli esseri umani (Figura 1A) e dei ratti (Figura 1B), è stata condotta una separazione rapida e accurata delle arterie coronarie di ratto secondo il processo di campionamento in Figura 2. Dopo aver localizzato con precisione il padiglione auricolare des...

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Standardized Rat Coronary Ring Preparation and Real-Time Recording of Dynamic Tension Changes Along Vessel Diameter

Il presente protocollo descrive la tecnica del miografo a filo per misurare la reattività vascolare dell'arteria coronaria del ratto.

Preparazione standardizzata dell'anello coronarico di ratto e registrazione in tempo reale delle variazioni di tensione dinamica lungo il diametro del vaso

As a key event of cardiovascular system diseases, coronary artery disease (CAD) has been widely regarded as the main culprit of atherosclerosis, ...

Questo protocollo introduce in dettaglio la localizzazione, la separazione e la fissazione dell'anello muscolare delle arterie coronarie del ratto. Fornire un nuovo metodo per i meccanismi, l'esplorazione e il trattamento di varie malattie cardiovascolari. Il sistema è adatto per la registrazione stabile dei cambiamenti dinamici della tensione arteriosa in vitro, leggendo in diametro da 60 micrometri a 10 millimetri.Suggeriamo che i principianti dovrebbero prima comprendere con precisione la posizione anatomica di ciascun vaso e possono iniziare con vasi leggermente più grandi come l'arteria toracica e l'arteria mesenterica. Dopo aver dissociato e rimosso il cuore, iniziare drenando il sangue residuo da tutte le camere cardiache spremendo leggermente con una pinza di plastica medica. Posizionare rapidamente il cuore pre-elaborato in una capsula di Petri contenente il 95% di ossigeno e il 5% di soluzione salina fisiologica satura di anidride carbonica a quattro gradi Celsius, con un valore di pH di 7,40.Per identificare con precisione la posizione anatomica delle arterie coronarie, regolare la postura del cuore isolato al microscopio ottico secondo il diagramma schematico. Tagliare le cavità ventricolari sinistra e destra lungo il setto interfiriale dalla radice dell'arteria polmonare con forbici chirurgiche e pinzette. Per dissociare le arterie coronarie sinistra e destra dal tessuto miocardico, sezionare il ventricolo destro sotto un microscopio anatomico ottico per esporre a fondo il ramo dell'arteria coronaria destra.Quindi identificare la posizione dell'arteria coronaria sinistra ruotando il tessuto cardiaco di 45 gradi in senso orario. Dopo aver rimosso il tessuto miocardico appiccicoso circostante, discernere esplicitamente le arterie coronarie sinistra e destra pulsanti. Separare immediatamente le arterie coronarie nel mezzo e immergere completamente nella soluzione salina fisiologica a quattro gradi Celsius.Acquisire un anello arterioso di circa due millimetri tagliando verticalmente l'arteria staccata con forbici anatomiche per registrare la tensione vascolare sotto diversi stimoli. Preparare due fili di acciaio inossidabile di due centimetri e pre-immergere in soluzione salina fisiologica a quattro gradi Celsius satura di 95% di ossigeno e 5% di anidride carbonica. Passare entrambi i fili parallelamente attraverso l'anello arterioso insieme alla direzione del vaso sotto un microscopio anatomico ottico e con fili di uguale lunghezza esposti ad entrambe le estremità della cavità vascolare.Fissare l'anello arterioso con il filo d'acciaio davanti e dietro nella vasca da bagno della micrografia del filo riempita con soluzione salina fisiologica gorgogliante con il 95% di ossigeno e il 5% di anidride carbonica. Ruotare la manopola a vite orizzontale per una spaziatura anteriore e posteriore appropriata in modo che i due fili siano orizzontali e l'anello arterioso sia in uno stato naturale di rilassamento. Dopo aver installato il bagno DMT sull'apparato termostatico, aprire il software di acquisizione dati per assicurarsi che sia stato registrato il segnale del percorso corrispondente.Impostare i parametri. Ottenere la tensione iniziale ottimale dell'anello arterioso applicando una tensione ragionevole lungo il diametro del vaso. A questo punto, impostare il valore di tensione vascolare visualizzato su zero.Successivamente, applicare uno stimolo di impulso di Tre Milli Newton all'anello arterioso ruotando l'asse a spirale del bagno. Fare clic sul pannello LCD per impostarlo su zero milli Newton e mantenerlo per un'ora. Dopo l'incubazione per un'ora in tampone di soluzione salina fisiologica satura di ossigeno a 37 gradi Celsius pH 7,40, impostare nuovamente il valore di tensione su zero milli Newton sul pannello di controllo della tensione della micrografia a filo.Eseguire l'attività contrattile dell'anello coronarico con la tecnica del miografo a filo e convalidare in tre operazioni separate stimolando con 60 millimolari di soluzione di ioni di potassio per 10 minuti ciascuna. Dopo ogni stimolazione, lavare il bagno con la soluzione salina fisiologica satura di ossigeno fino a quando il tono vascolare ritorna al suo stato iniziale. Aggiungere 0,3 micromolari U46619 a bagno e osservare per 10 minuti.Aggiungere un'apigenina micromolare e osservare gli effetti vascolari. Quando la dilatazione raggiunge un plateau, aggiungi la concentrazione successiva. Aggiungere un'apigenina micromolare alla soluzione di pre-restringimento di potassio 60 millimolare per osservare l'effetto vascolare.Quando la dilatazione raggiunge un plateau, aggiungi la concentrazione successiva. Aggiungere 28 millimolari di ioni di potassio all'anello vascolare a riposo. Quando la contrazione raggiunge un plateau, aggiungi la concentrazione successiva.Aggiungere 0,01 micromolari U46619 all'anello vascolare a riposo. Quando la contrazione raggiunge un plateau, aggiungi la concentrazione successiva. Dopo che una tensione iniziale di Newton di tre milli è stata applicata all'anello arterioso, la sua tensione ha superato più di due milli Newton applicando una concentrazione di ioni di potassio 60 millimolari in parallelo tre volte.Così le procedure di cui sopra avevano portato ad un anello coronarico isolato con un'eccellente attività fisiologica. La concentrazione cumulativa di ioni di potassio o U46619 è stata aggiunta al bagno di DMT620M, con conseguente aumento dipendente dalla concentrazione del tono vascolare in vitro. La successiva concentrazione di ione potassio o U46619 è stata aggiunta quando l'effetto vasocostrizione ha raggiunto un plateau.Per gli anelli coronarici isolati ristretti dallo ione potassio e dall'U46619, il farmaco di prova apigenina ha causato vasodilatazione in modo sorprendentemente dipendente dalla concentrazione. Il cuore viene sezionato lungo il setto ventricolare dalla radice dell'arteria polmonare, esponendo e separando l'anello muscolare coronarico di due millimetri. Seguendo questa procedura, possiamo registrare la tensione vascolare nei microvasi retinici, nella funzione renale, nell'arteria renale e nell'arteria cerebrale media.Una regione dinamica da 60 micrometri a 10 millimetri.

Research

JoVE Journal

Medicine

X-ray Dose Reduction through Adaptive Exposure in Fluoroscopic Imaging

X-ray riduzione della dose in caso di esposizione Adaptive in Imaging fluoroscopici

X-ray fluoroscopy is widely used for image guidance during cardiac intervention. However, radiation dose in these procedures can be high, and this is a ...

Ricerca

Medicina

Retrograde Perfusion and Filling of Mouse Coronary Vasculature as Preparation for Micro Computed Tomography Imaging

Perfusione retrograda e riempimento del sistema vascolare coronarico mouse come preparazione per la Micro Computed Tomography Imaging

Visualization of the vasculature is becoming increasingly important for understanding many different disease states. While several techniques exist for ...

Real-time Digital Imaging of Leukocyte-endothelial Interaction in Ischemia-reperfusion Injury (IRI) of the Rat Cremaster Muscle

Real-time Digital Imaging of Leukocyte-endothelial Interaction in Ischemia-reperfusion Injury IRI of the Rat Cremaster Muscle

In tempo reale Imaging digitale di leucociti-endotelio in ischemia-riperfusione (IRI) del muscolo Cremaster Rat

Ischemia-reperfusion injury (IRI) has been implicated in a large array of pathological conditions such as cerebral stroke, myocardial infarction, ...

2-Vessel Occlusion/Hypotension: A Rat Model of Global Brain Ischemia

2-occlusione di vasi / Ipotensione: un modello di ratto di Global Ischemia cerebrale

Cardiac arrest followed by resuscitation often results in dramatic brain damage caused by ischemia and subsequent reperfusion of the brain. Global brain ...

Movement Retraining using Real-time Feedback of Performance

Movimento Riqualificazione con feedback in tempo reale delle prestazioni

Any modification of movement - especially movement patterns that have been honed over a number of years - requires re-organization of the neuromuscular ...

Cerebrospinal Fluid MicroRNA Profiling Using Quantitative Real Time PCR

Liquido cerebrospinale MicroRNA profiling Utilizzando quantitativa Real Time PCR

MicroRNAs (miRNAs) constitute a potent layer of gene regulation by guiding RISC to target sites located on mRNAs and, consequently, by modulating their ...

Chemotherapy-induced Vascular Toxicity - Real-time In vivo Imaging of Vessel Impairment

Chemotherapy-induced Vascular Toxicity - Real-time In vivo Imaging of Vessel Impairment

Chemioterapia-indotta vascolare Tossicità - in tempo reale<em&gt; In vivo</em&gt; Imaging di Vessel Impairment

Certain classes of chemotherapies may exert acute vascular changes that may progress into long-term conditions that may predispose the patient to an ...

Real-time Cytotoxicity Assays in Human Whole Blood

In tempo reale citotossicità saggi in Human Sangue intero

A live cell-based whole blood cytotoxicity assay (WCA) that allows access to temporal information of the overall cell cytotoxicity is developed with ...

Cavernous Nerve Stimulation and Recording of Intracavernous Pressure in a Rat

Stimolazione del nervo cavernoso e registrazione della pressione intracavernosa in un ratto

The stimulation of the cavernous nerve (CN) and measurement of intracavernous pressure (ICP) have been used extensively to test and evaluate therapies for ...

Real-time Pressure-volume Analysis of Acute Myocardial Infarction in Mice

Analisi in tempo reale pressione-volume di infarto miocardico acuto nei topi

Acute myocardial infarction can lead to acute heart failure and cardiogenic shock. The evaluation of hemodynamics is critical for the evaluation of any ...