Name: standardized rat coronary ring preparation and real-time recording of dynamic tension changes along vessel diameter
Uploaded: 2022-06-16T14:50:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Standardized Rat Coronary Ring Preparation and Real-Time Recording of Dynamic Tension Changes Along Vessel Diameter at JoVE.com

Detta arbete stöddes av Key R&D-projektet i Sichuan Provincial Science and Technology Plan (2022YFS0438), National Natural Science Foundation of China (82104533), China Postdoctoral Science Foundation (2020M683273) och Science &Technology Department of Sichuan Province (2021YJ0175).

Djurprotokollet granskades och godkändes av förvaltningskommittén från Chengdu University of Traditional Chinese Medicine (rekord nr 2021-11). Manliga Sprague Dawley (SD) råttor (260-300 g, 8-10 veckor gamla) användes för den aktuella studien. Råttorna hölls i en djurkammare och var fria att dricka och äta under experimentet.
1. Beredning av lösning
<ol><li>Förbered fysiologisk saltlösning (PSS) genom att lösa upp 118 mM NaCl, 4,7 mM K+, 2,5 mM CaCl<...

<ol>
	<li>Malakar, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+on+coronary+artery+disease,+its+risk+factors,+and+therapeutics.">A review on coronary artery disease, its risk factors, and therapeutics.</a> Journal of Cellular Physiology. 234 (10), 16812-16823 (2019).</li><li>Murray, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=national+age-sex+specific+all-cause+and+cause-specific+mortality+for+240+causes+of+death,+1990-2013:+A+systematic+analysis+for+the+global+burden+of+disease+Study+2013.">national age-sex specific all-cause and cause-specific mortality for 240 causes of death, 1990-2013: A systematic analysis for the global burden of disease Study 2013.</a> The Lancet. 385 (9963), 117-171 (2015).</li><li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adenosine+and+adenosine+receptor-mediated+action+in+coronary+microcirculation.">Adenosine and adenosine receptor-mediated action in coronary microcirculation.</a> Basic Research in Cardiology. 116 (1), 22 (2021).</li><li>Allaqaband, H., Gutterman, D. D., Kadlec, A. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physiological+consequences+of+coronary+arteriolar+dysfunction+and+its+influence+on+cardiovascular+disease.">Physiological consequences of coronary arteriolar dysfunction and its influence on cardiovascular disease.</a> Physiology. 33 (5), 338-347 (2018).</li><li>Minelli, S., Minelli, P., Montinari, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reflections+on+atherosclerosis:+Lesson+from+the+past+and+future+research+directions.">Reflections on atherosclerosis: Lesson from the past and future research directions.</a> Journal of Multidisciplinary Healthcare. 13, 621-633 (2020).</li><li>Alvarez-Alvarez, M. M., Zanetti, D., Carreras-Torres, R., Moral, P., Athanasiadis, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+survey+of+sub-saharan+gene+flow+into+the+mediterranean+at+risk+loci+for+coronary+artery+disease.">A survey of sub-saharan gene flow into the mediterranean at risk loci for coronary artery disease.</a> European Journal of Human Genetics. 25 (4), 472-476 (2017).</li><li>LaCombe, P., Tariq, M. A., Lappin, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physiology,+Afterload+Reduction.">Physiology, Afterload Reduction.</a> StatPearls [Internet]. , (2022).</li><li>Gutterman, D. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+human+microcirculation:+regulation+of+flow+and+beyond.">The human microcirculation: regulation of flow and beyond.</a> Circulation Research. 118 (1), 157-172 (2016).</li><li>Wang, G., Li, F., Hou, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complementary+and+alternative+therapies+for+stable+angina+pectoris+of+coronary+heart+disease:+A+protocol+for+systematic+review+and+network+meta-analysis.">Complementary and alternative therapies for stable angina pectoris of coronary heart disease: A protocol for systematic review and network meta-analysis.</a> Medicine. 101 (7), 28850 (2022).</li><li>Markousis-Mavrogenis, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coronary+microvascular+disease:+the+&amp;#34;meeting+point&amp;#34;+of+cardiology.">Coronary microvascular disease: the &amp;#34;meeting point&amp;#34; of cardiology.</a> European Journal of Clinical Investigation. 52 (5), 13737 (2021).</li><li>Allison, B. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fetal+in+vivo+continuous+cardiovascular+function+during+chronic+hypoxia.">Fetal in vivo continuous cardiovascular function during chronic hypoxia.</a> The Journal of Physiology. 594 (5), 1247-1264 (2016).</li><li>Wenceslau, C. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guidelines+for+the+measurement+of+vascular+function+and+structure+in+isolated+arteries+and+veins.">Guidelines for the measurement of vascular function and structure in isolated arteries and veins.</a> American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 321 (1), 77-111 (2021).</li><li>Liu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+Ca2++handling+for+the+regulation+of+vasoconstriction+between+rat+coronary+and+renal+arteries.">Comparison of Ca2+ handling for the regulation of vasoconstriction between rat coronary and renal arteries.</a> Journal of Vascular Research. 56 (4), 191-203 (2019).</li><li>Sun, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isometric+contractility+measurement+of+the+mouse+mesenteric+artery+using+wire+myography.">Isometric contractility measurement of the mouse mesenteric artery using wire myography.</a> Journal of Visualized Experiments. (138), e58064 (2018).</li><li>Guo, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coronary+hypercontractility+to+acidosis+owes+to+the+greater+activity+of+TMEM16A/ANO1+in+the+arterial+smooth+muscle+cells.">Coronary hypercontractility to acidosis owes to the greater activity of TMEM16A/ANO1 in the arterial smooth muscle cells.</a> Biomedicine &amp; Pharmacotherapy. 139, 111615 (2021).</li><li>Ping, N. N., Cao, L., Xiao, X., Li, S., Cao, Y. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+determination+of+optimal+initial+tension+in+rat+coronary+artery+using+wire+myography.">The determination of optimal initial tension in rat coronary artery using wire myography.</a> Physiological Research. 63 (1), 143-146 (2014).</li><li>Niccoli, G., Scalone, G., Lerman, A., Crea, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coronary+microvascular+obstruction+in+acute+myocardial+infarction.">Coronary microvascular obstruction in acute myocardial infarction.</a> European Heart Journal. 37 (13), 1024-1033 (2016).</li><li>Mumma, B., Flacke, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+diagnostic+and+therapeutic+strategies+in+microvascular+angina.">Current diagnostic and therapeutic strategies in microvascular angina.</a> Current Emergency and Hospital Medicine Reports. 3 (1), 30-37 (2015).</li><li>Lanza, G. A., Parrinello, R., Figliozzi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Management+of+microvascular+angina+pectoris.">Management of microvascular angina pectoris.</a> American Journal of Cardiovascular Drugs. 14 (1), 31-40 (2014).</li><li>Zhu, T. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beneficial+effects+of+intracoronary+tirofiban+bolus+administration+following+upstream+intravenous+treatment+in+patients+with+ST-elevation+myocardial+infarction+undergoing+primary+percutaneous+coronary+intervention:+The+ICT-AMI+study.">Beneficial effects of intracoronary tirofiban bolus administration following upstream intravenous treatment in patients with ST-elevation myocardial infarction undergoing primary percutaneous coronary intervention: The ICT-AMI study.</a> International Journal of Cardiology. 165 (3), 437-443 (2013).</li><li>Huang, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Restoration+of+coronary+flow+in+patients+with+no-reflow+after+primary+coronary+intervention+of+acute+myocardial+infarction+(RECOVER).">Restoration of coronary flow in patients with no-reflow after primary coronary intervention of acute myocardial infarction (RECOVER).</a> American Heart Journal. 164 (3), 394-401 (2012).</li><li>Fu, W. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anti-atherosclerosis+and+cardio-protective+effects+of+the+Angong+Niuhuang+Pill+on+a+high+fat+and+vitamin+D3+induced+rodent+model+of+atherosclerosis.">Anti-atherosclerosis and cardio-protective effects of the Angong Niuhuang Pill on a high fat and vitamin D3 induced rodent model of atherosclerosis.</a> Journal of Ethnopharmacology. 195, 118-126 (2017).</li><li>Li, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chinese+medicine+She-Xiang-Xin-Tong-Ning,+containing+moschus,+corydalis+and+ginseng,+protects+from+myocardial+ischemia+injury+via+angiogenesis.">Chinese medicine She-Xiang-Xin-Tong-Ning, containing moschus, corydalis and ginseng, protects from myocardial ischemia injury via angiogenesis.</a> The American Journal of Chinese Medicine. 48 (1), 107-126 (2020).</li><li>Wu, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three+dimensional+reconstruction+of+coronary+artery+stents+from+optical+coherence+tomography:+Experimental+validation+and+clinical+feasibility.">Three dimensional reconstruction of coronary artery stents from optical coherence tomography: Experimental validation and clinical feasibility.</a> Scientific Reports. 11 (1), 1-15 (2021).</li><li>Liu, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Janus-like+role+of+fibroblast+growth+factor+2+in+arteriosclerotic+coronary+artery+disease:+Atherogenesis+and+angiogenesis.">Janus-like role of fibroblast growth factor 2 in arteriosclerotic coronary artery disease: Atherogenesis and angiogenesis.</a> Atherosclerosis. 229 (1), 10-17 (2013).</li><li>Hu, G., Li, X., Zhang, S., Wang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Association+of+rat+thoracic+aorta+dilatation+by+astragaloside+IV+with+the+generation+of+endothelium-derived+hyperpolarizing+factors+and+nitric+oxide,+and+the+blockade+of+Ca2++channels.">Association of rat thoracic aorta dilatation by astragaloside IV with the generation of endothelium-derived hyperpolarizing factors and nitric oxide, and the blockade of Ca2+ channels.</a> Biomedical reports. 5 (1), 27-34 (2016).</li><li>Guo, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anticonstriction+effect+of+MCA+in+rats+by+danggui+buxue+decoction.">Anticonstriction effect of MCA in rats by danggui buxue decoction.</a> Frontiers in Pharmacology. 12, 749915 (2021).</li><li>Jing, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Apigenin+relaxes+rat+intrarenal+arteries,+depresses+Ca2+-activated+Cl&#8722;+currents+and+augments+voltage-dependent+K++currents+of+the+arterial+smooth+muscle+cells.">Apigenin relaxes rat intrarenal arteries, depresses Ca2+-activated Cl&#8722; currents and augments voltage-dependent K+ currents of the arterial smooth muscle cells.</a> Biomedicine &amp; Pharmacotherapy. 115, 108926 (2019).</li></ol>

Störningen av koronar mikrocirkulation, som involverar ett brett spektrum av patienter med CAD, har gradvis erkänts och berört grunden för adekvat myokardiumperfusion. Med tanke på de allvarliga komplikationerna av plötslig kranskärlssjukdom och hjärt-kärlsjukdom är snabb läkemedelsförebyggande och behandling extremt viktigt för en klinisk individ med CAD17. Oundvikligen har hemligheten för kranskärlsanatomi och komplexiteten i dess fysiologiska struktur allvarligt begränsat den ra...

Kranskärlssjukdom (CAD) har varit allmänt erkänd och oroad som en typisk och representativ hjärt-kärlsjukdom, som är den ledande dödsorsaken i både utvecklade länder och utvecklingsländer 1,2. Som en blod- och syretillförselväg för normal hjärtfysiologisk funktion kommer cirkulerande blod in i och ger näring åt hjärtat genom två huvudsakliga kranskärl och ett blodkärlsnätverk på ytan av myokardiet 3,4. Kolesterol- och fettavlagringar i kranskärlen skär av hjärtats blodtillförsel och det våldsamma inflammatoriska svaret i kärlsystemet, vilket orsakar åderförkalkning, stabil angina, instabil angina, hjärtinfarkt eller plötslig hjärtdöd 5,6. Som svar på patologisk stenos i kransartärerna uppfyller kompensationsaccelererad fysiologisk hjärtslag blodtillförseln i hjärtat själv eller vitala organ i kroppen genom att öka utmatningen från vänster ventrikel7. Om långvarig kranskärlsstenos inte lindras i tid kan omfattande nya blodkärl utvecklas i vissa delar av hjärtat8. För närvarande antar den kliniska behandlingen av CAD ofta läkemedelstrombolys eller kirurgisk mekanisk trombolys och en exogen bionisk vaskulär bypass med frekvent medicinering och stor kirurgisk funktionsnedsättning9. Därför är den funktionella undersökningen av kranskärlens fysiologiska aktivitet fortfarande ett brådskande genombrott för hjärt-kärlsjukdomar10.
Det finns inga tillgängliga tekniska medel för att detektera koronar fysiologisk aktivitet, förutom trådlösa telemetrisystem, som dynamiskt kan registrera in vivo kranskärlstryck, vaskulär spänning, syremättnad i blodet och pH-värden11. Därför, med tanke på kranskärlens texturhemlighet och komplexitet, är korrekt identifiering och isolering av kranskärl utan tvekan de bästa valen för att utforska flera mekanismer för CAD in vitro4.
Ett serie multimyografsystem, i synnerhet en mikrovaskulär spänningsdetektor för trådmikrografer (se materialtabell), är en mycket mogen säljbar anordning för registrering av vävnadsspänningsförändringar in vitro av små vaskulära, lymfatiska och bronkialrör med egenskaperna hos hög precision och kontinuerlig dynamisk inspelning12. Det nämnda systemet har använts i stor utsträckning för att registrera in vitro-vävnadsspänningsegenskaper hos hålrumsstrukturer med diametrar på 60 μm till 10 mm. De kontinuerliga uppvärmningsfunktionerna hos plattformen för trådmikrografen kompenserar till stor del stimuleringen av den negativa yttre miljön. Under tiden tillåter de konstanta ingångarna av gasblandningen och pH-värdena oss att erhålla mer exakta vaskulära spänningsdata i ett liknande fysiologiskt tillstånd13. Men med tanke på komplexiteten i anatomisk lokalisering av råtta kranskärl (figur 1) har dess isolering varit förvirrande och begränsat mekanismens utforskning av diversifierad hjärt-kärlsjukdom och läkemedelsutveckling. Därför introducerar detta protokoll den anatomiska platsen och separationsprocessen för råttans kranskärl i detalj, följt av spänningsmätning på plattformen för trådmikrografen14.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Apigenin</td>
			<td>Sangon Biotech Co., Ltd., Shanghai, China</td>
			<td>150731</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td>Sangon Biotech Co., Ltd., Shanghai, China</td>
			<td>A501330</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-glucose</td>
			<td>Sangon Biotech Co., Ltd., Shanghai, China</td>
			<td>A610219</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Xiya Reagent Co., Ltd., Shandong, China</td>
			<td>S3872</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>Sangon Biotech Co., Ltd., Shanghai, China</td>
			<td>A100395</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KH2PO4</td>
			<td>Sangon Biotech Co., Ltd., Shanghai, China</td>
			<td>A100781</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LabChart Professional version 8.3&#160;</td>
			<td>ADInstruments, Australia</td>
			<td>&#8212;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgCl2&#183;6H2O</td>
			<td>Sangon Biotech Co., Ltd., Shanghai, China</td>
			<td>A100288</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multi myograph system&#160;</td>
			<td>Danish Myo Technology, Aarhus, Denmark</td>
			<td>620M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Sangon Biotech Co., Ltd., Shanghai, China</td>
			<td>A100241</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaHCO3</td>
			<td>Sangon Biotech Co., Ltd., Shanghai, China</td>
			<td>A100865</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Steel wires</td>
			<td>Danish Myo Technology, Aarhus, Denmark</td>
			<td>400447</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>U46619</td>
			<td>Sigma, USA</td>
			<td>D8174</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

standardized rat coronary ring preparation and real-time recording of dynamic tension changes along vessel diameter

Som en viktig händelse av hjärt-kärlsjukdomar har kranskärlssjukdom (CAD) allmänt betraktats som den främsta boven i åderförkalkning, hjärtinfarkt och angina pectoris, som allvarligt hotar människors liv och hälsa över hela världen. Men hur man registrerar de dynamiska biomekaniska egenskaperna hos isolerade blodkärl har länge förbryllat människor. Samtidigt har exakt positionering och isolering av kranskärl för att mäta in vitro dynamiska vaskulära spänningsförändringar blivit en trend i CAD-läkemedelsutveckling. Detta protokoll beskriver den makroskopiska identifieringen och mikroskopiska separationen av råtta kranskärl. Sammandragnings- och utvidgningsfunktionen hos kranskärlsringen längs kärldiametern övervakades med hjälp av det etablerade multimyografsystemet. De standardiserade och programmerade protokollen för mätning av kranskärlsringspänning, från provtagning till datainsamling, förbättrar enormt repeterbarheten hos experimentella data, vilket säkerställer äktheten hos vaskulära spänningsregister efter fysiologisk, patologisk och läkemedelsintervention.

Anatomiskt placerade, råtta kranskärl fördelade och dolda djupt i myokardiell vävnad var inte lätt igenkända. Genom att jämföra kranskärlen hos människor (figur 1A) och råttor (figur 1B) genomfördes snabb och exakt separation av råttans kranskärl enligt provtagningsprocessen i figur 2. Efter att exakt ha lokaliserat den högra öronen, lungartären och toppen framifrån under ett optiskt mikroskop dissekerades myokardi...

Watch this Scientific Journal Video about Standardized Rat Coronary Ring Preparation and Real-Time Recording of Dynamic Tension Changes Along Vessel Diameter at JoVE.com

Standardized Rat Coronary Ring Preparation and Real-Time Recording of Dynamic Tension Changes Along Vessel Diameter

Det nuvarande protokollet beskriver trådmyograftekniken för att mäta vaskulär reaktivitet hos råttans kranskärl.

Standardiserad förberedelse av råtta koronarring och realtidsinspelning av dynamiska spänningsförändringar längs kärldiametern

As a key event of cardiovascular system diseases, coronary artery disease (CAD) has been widely regarded as the main culprit of atherosclerosis, ...

Detta protokoll introducerar i detalj lokalisering, separation och muskelringfixering av råtta kranskärl. Tillhandahålla en ny metod för mekanismer, utforskning och behandling av olika hjärt-kärlsjukdomar. Systemet är lämpligt för och stabil registrering av de dynamiska förändringarna av in vitro arteriell spänning, avläsning i diameter från 60 mikrometer till 10 millimeter.Vi föreslår att nybörjare först bör förstå den anatomiska platsen för varje kärl och kan börja med något större kärl som bröstartären och mesenterartären. Efter dissociering och avlägsnande av hjärtat, börja med att tömma det återstående blodet från alla hjärtkamrar genom att lätt klämma med medicinska plasttångar. Placera snabbt det förbehandlade hjärtat i en petriskål som innehåller 95% syre och 5% koldioxidmättad fysiologisk saltlösning vid fyra grader Celsius, med ett pH-värde på 7,40.För att exakt identifiera kransartärernas anatomiska position, justera det isolerade hjärtats hållning under ljusmikroskopet enligt det schematiska diagrammet. Skär vänster och höger ventrikelhålighet längs inter ventrikulär septum från lungartärens rot med kirurgisk sax och pincett. För att dissociera vänster och höger kranskärl från myokardvävnaden, dissekera höger kammare under ett optiskt anatomiskt mikroskop för att noggrant exponera den högra kranskärlsgrenen.Identifiera sedan positionen för den vänstra kransartären genom att rotera hjärtvävnaden 45 grader medurs. Efter att ha tagit bort den omgivande klibbiga myokardvävnaden, urskilja uttryckligen de pulserande vänster och höger kranskärlen. Separera kranskärlen i mitten omedelbart och fördjupa dig helt i fysiologisk saltlösning vid fyra grader Celsius.Skaffa en arteriell ring på cirka två millimeter genom att vertikalt skära den fristående artären med anatomisk sax för att registrera kärlspänningen under olika stimuli. Förbered två två centimeter rostfria ståltrådar och blötlägg i fyra grader Celsius fysiologisk saltlösning mättad med 95% syre och 5% koldioxid. För båda trådarna parallellt genom artärringen tillsammans med kärlets riktning under ett optiskt anatomiskt mikroskop och med ledningar av samma längd exponerade i båda ändarna av kärlhålan.Fäst artärringen med ståltråden fram och bak i trådmikrografens bad fylld med bubblande fysiologisk saltlösning med 95% syre och 5% koldioxid. Vrid den horisontella skruvvredet för ett lämpligt avstånd fram och bak så att de två ledningarna är horisontella och artärringen är i ett naturligt tillstånd av avkoppling. När du har installerat DMT-badet på den termostatiska apparaten öppnar du datainsamlingsprogramvaran för att säkerställa att motsvarande vägsignal spelades in.Ställ in parametrarna. Uppnå den optimala initialspänningen hos artärringen genom att applicera en rimlig spänning längs kärlets diameter. Ställ nu in det visade vaskulära spänningsvärdet till noll.Applicera sedan en tre milli Newton pulsstimulans på artärringen genom att rotera badets spiralaxel. Klicka på LCD-panelen för att ställa in den på noll milli Newton och behåll i en timme. Efter inkubation i en timme i syremättad fysiologisk saltlösningsbuffert vid 37 grader Celsius pH 7,40, ställ in spänningsvärdet till noll milli Newton igen på trådmikrografens spänningskontrollpanel.Utför koronarringens kontraktila aktivitet med trådmyograftekniken och validera i tre separata operationer genom att stimulera med 60 millimolar kaliumjonlösning i 10 minuter vardera. Efter varje stimulering, spola badet med den syremättade fysiologiska saltlösningen tills vaskulär ton återgår till sitt ursprungliga tillstånd. Tillsätt 0,3 mikromolar U46619 för att bada och observera i 10 minuter.Tillsätt ett mikromolärt apigenin och observera vaskulära effekter. När utvidgningen når en platå, lägg till nästa koncentration. Tillsätt en mikromolär apigenin till 60 millimolär kaliumförkrympande lösning för att observera kärleffekten.När utvidgningen når en platå, lägg till nästa koncentration. Tillsätt 28 millimolar kaliumjon till den vilande kärlringen. När sammandragningen når en platå, lägg till nästa koncentration.Tillsätt 0,01 mikromolar U46619 till den vilande kärlringen. När sammandragningen når en platå, lägg till nästa koncentration. Efter att en initial tre milli Newtonspänning applicerades på artärringen översteg dess spänning mer än två milli Newton genom att applicera 60 millimolär kaliumjonkoncentration parallellt tre gånger.Således hade procedurerna ovan resulterat i en isolerad koronarring med utmärkt fysiologisk aktivitet. Kumulativ kaliumjonkoncentration, eller U46619 tillsattes till badet av DMT620M, vilket resulterade i en koncentrationsberoende ökning in vitro vaskulär ton. Nästa koncentration av kaliumjon eller U46619 tillsattes när vasokonstriktionseffekten nådde en platå.För isolerade kranskärlsringar som trängts ihop av kaliumjon och U46619 orsakade testläkemedlet apigenin i vasodilatation på ett överraskande koncentrationsberoende sätt. Hjärtat dissekeras längs ventrikel septum från lungartärens rot, exponerar och separerar två millimeter koronar muskelring. Efter denna procedur kan vi registrera vaskulär spänning i retinala mikrovågor, njurfunktion, njurartär och i mitten av hjärnartären.En regiondynamik från 60 mikrometer till 10 millimeter.

Research

JoVE Journal

Medicine

X-ray Dose Reduction through Adaptive Exposure in Fluoroscopic Imaging

Röntgen Dosjusteringsschema genom Adaptiv Exponering i Fluoroskopiska Imaging

X-ray fluoroscopy is widely used for image guidance during cardiac intervention. However, radiation dose in these procedures can be high, and this is a ...

Retrograde Perfusion and Filling of Mouse Coronary Vasculature as Preparation for Micro Computed Tomography Imaging

Retrograd perfusion och påfyllning av mus kranskärlen som förberedelse för Micro datortomografi Imaging

Visualization of the vasculature is becoming increasingly important for understanding many different disease states. While several techniques exist for ...

Real-time Digital Imaging of Leukocyte-endothelial Interaction in Ischemia-reperfusion Injury (IRI) of the Rat Cremaster Muscle

Real-time Digital Imaging of Leukocyte-endothelial Interaction in Ischemia-reperfusion Injury IRI of the Rat Cremaster Muscle

Real-time Digital bildbehandling av leukocyt-endotel interaktion i ischemi-reperfusionsskada (IRI) i råtta kremastermuskeln

Ischemia-reperfusion injury (IRI) has been implicated in a large array of pathological conditions such as cerebral stroke, myocardial infarction, ...

2-Vessel Occlusion/Hypotension: A Rat Model of Global Brain Ischemia

2-kärlocklusion / Hypotension: En Rat modell för Global hjärnischemi

Cardiac arrest followed by resuscitation often results in dramatic brain damage caused by ischemia and subsequent reperfusion of the brain. Global brain ...

Movement Retraining using Real-time Feedback of Performance

Rörelse Omskolning med feedback i realtid för prestanda

Any modification of movement - especially movement patterns that have been honed over a number of years - requires re-organization of the neuromuscular ...

Cerebrospinal Fluid MicroRNA Profiling Using Quantitative Real Time PCR

Cerebrospinalvätska MikroRNA Profilering Med kvantitativa realtid-PCR

MicroRNAs (miRNAs) constitute a potent layer of gene regulation by guiding RISC to target sites located on mRNAs and, consequently, by modulating their ...

Chemotherapy-induced Vascular Toxicity - Real-time In vivo Imaging of Vessel Impairment

Chemotherapy-induced Vascular Toxicity - Real-time In vivo Imaging of Vessel Impairment

Kemoterapi-inducerad vaskulär toxicitet - Realtids<em&gt; In vivo</em&gt; Avbildning av Vessel Nedskrivningar

Certain classes of chemotherapies may exert acute vascular changes that may progress into long-term conditions that may predispose the patient to an ...

Real-time Cytotoxicity Assays in Human Whole Blood

Realtids cytotoxicitetsanalyser i humant helblod

A live cell-based whole blood cytotoxicity assay (WCA) that allows access to temporal information of the overall cell cytotoxicity is developed with ...

Cavernous Nerve Stimulation and Recording of Intracavernous Pressure in a Rat

Cavernous nervstimulering och inspelning av intrakavernös trycket i en råtta

The stimulation of the cavernous nerve (CN) and measurement of intracavernous pressure (ICP) have been used extensively to test and evaluate therapies for ...

Real-time Pressure-volume Analysis of Acute Myocardial Infarction in Mice

Realtid tryck-volym analys av akut hjärtinfarkt hos möss

Acute myocardial infarction can lead to acute heart failure and cardiogenic shock. The evaluation of hemodynamics is critical for the evaluation of any ...