Name: a standardized liquid biopsy preanalytical protocol for downstream circulating-free dna applications
Uploaded: 2022-09-16T13:40:00
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Wir danken dem Biomedical Research Network in Cancer (CIBERONC) für die Unterstützung und den folgenden Projektzuschuss: LB CIBERONC PLATFORM: CIBERONC Plattform zur Standardisierung und Förderung der Flüssigbiopsie. PI Rodrigo Toledo, (CIBERONC), 2019-2021.

Die vorherige ethische Genehmigung wurde von den teilnehmenden Zentren vor der Entnahme von Blutproben eingeholt. Die folgenden Protokolle zur Serum- und Plasmaisolierung wurden in Übereinstimmung mit den ethischen Grundsätzen für die biomedizinische Forschung durchgeführt.
HINWEIS: Vorherige Überlegungen vor Beginn des Protokolls finden Sie hier. Für die Verwendung menschlicher Proben in der biomedizinischen Forschung ist eine vorherige ethische Genehmigung mit der entsprechenden Einver...

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	<li>Alix-Panabi&#232;res, C., Pantel, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+applications+of+circulating+tumor+cells+and+circulating+tumor+DNA+as+liquid+biopsy.">Clinical applications of circulating tumor cells and circulating tumor DNA as liquid biopsy.</a> Cancer Discovery. 6 (5), 479-491 (2016).</li><li>Zhou, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+of+exosomes+as+liquid+biopsy+in+clinical+diagnosis.">Application of exosomes as liquid biopsy in clinical diagnosis.</a> Signal Transduction and Targeted Therapy. 5 (1), 144 (2020).</li><li>Bettegowda, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liquid+biopsies:+Genotyping+circulating+tumor+DNA.">Liquid biopsies: Genotyping circulating tumor DNA.</a> Nature Medicine. 4 (6), (2014).</li><li>Heitzer, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recommendations+for+a+practical+implementation+of+circulating+tumor+DNA+mutation+testing+in+metastatic+non-small-cell+lung+cancer.">Recommendations for a practical implementation of circulating tumor DNA mutation testing in metastatic non-small-cell lung cancer.</a> ESMO Open. 7 (2), 100399 (2022).</li><li>Gennari, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ESMO+Clinical+Practice+Guideline+for+the+diagnosis,+staging+and+treatment+of+patients+with+metastatic+breast+cancer.">ESMO Clinical Practice Guideline for the diagnosis, staging and treatment of patients with metastatic breast cancer.</a> Annals of Oncology: Official Journal of the European Society for Medical Oncology. 32 (12), 1475-1495 (2021).</li><li>Van Buren, T., Arwatz, G., Smits, A. 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Clinical Oncology. 18 (5), 297-312 (2021).</li><li>Sidstedt, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+mechanisms+of+hemoglobin,+immunoglobulin+G,+and+whole+blood+in+digital+and+real-time+PCR.">Inhibition mechanisms of hemoglobin, immunoglobulin G, and whole blood in digital and real-time PCR.</a> Analytical and Bioanalytical Chemistry. 410 (10), 2569-2583 (2018).</li><li>Maass, K. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+sampling+to+sequencing:+A+liquid+biopsy+pre-analytic+workflow+to+maximize+multi-layer+genomic+information+from+a+single+tube.">From sampling to sequencing: A liquid biopsy pre-analytic workflow to maximize multi-layer genomic information from a single tube.</a> Cancers. 13 (12), 3002 (2021).</li><li>Greytak, S. 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G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Minimum+technical+data+elements+for+liquid+biopsy+data+submitted+to+public+databases.">Minimum technical data elements for liquid biopsy data submitted to public databases.</a> Clinical Pharmacology and Therapeutics. 107 (4), 730-734 (2020).</li><li>De Mattos-Arruda, L., Siravegna, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+to+use+liquid+biopsies+to+treat+patients+with+cancer.">How to use liquid biopsies to treat patients with cancer.</a> ESMO Open. 6 (2), 100060 (2021).</li></ol>

Die Flüssigbiopsie hat zahlreiche potenzielle Anwendungen zu verschiedenen Zeiten während der Behandlung von Krebs. Erstens, bei der Diagnose, um molekulare Marker des Tumors zu identifizieren, die auf das Vorhandensein einer potenziellen Tumorläsion hindeuten würden, die klinisch weiter untersucht werden könnte. Zweitens während der Behandlung zur Echtzeitüberwachung der Krankheit, zur Beurteilung der molekularen Reaktion der Behandlung, zur klonalen Evolution und zur Früherkennung von Krankheitsrückfällen ode...

Der Begriff "Flüssigbiopsie" wurde 20101 als das Vorhandensein von Molekülen (z. B. Protein, Desoxyribonukleinsäure (DNA), Ribonukleinsäure (RNA)), Zellen oder extrazellulären Vesikeln (z. B. Exosomen) im Blut und anderen Körperflüssigkeiten definiert, die aus dem Primärtumor stammen. Die Verwendung von Flüssigbiopsieproben hat die translationale onkologische Forschung revolutioniert, da Gewebebiopsien, die zu einem bestimmten Zeitpunkt auf eine bestimmte Region beschränkt sind, aufgrund der Tumorheterogenität relevante Klone übersehen können. Darüber hinaus spielt die Flüssigbiopsie eine relevante Rolle bei Tumorarten, bei denen Primärgewebe knapp oder nicht zugänglich ist, da sie eine invasive Biopsie vermeiden kann, wodurch Kosten und Risiken für Patienten reduziert werden. Darüber hinaus entwickeln sich die molekularen Eigenschaften des Tumors hauptsächlich aufgrund des Therapiedrucks ständig weiter, und Flüssigbiopsieproben können die klonale Dynamik des Tumors erfassen, da sie longitudinal, in verschiedenen klinischen und therapeutischen Zeiten der Krankheit wie Ausgangswert, bei der Behandlung, beim besten Ansprechen und beim Fortschreiten der Krankheit oder sogar davor entnommen werden können. Das Konzept der "Echtzeit-Flüssigbiopsie" bedeutet, dass dynamische Veränderungen im Tumor in Echtzeit überwacht werden können, was eine Präzisionsmedizin bei dieser Krankheit ermöglicht. Die Flüssigbiopsie hat zahlreiche potenzielle Anwendungen in der Klinik, darunter Screening und Früherkennung von Krebs, Echtzeitüberwachung von Krankheiten, Erkennung von minimalen Resterkrankungen, Untersuchung von Mechanismen zur Behandlungsresistenz und Stratifizierung von Patienten auf der therapeutischen Ebene1. Die Früherkennung von Krankheitsrezidiven und -progression ist bei vielen Tumorarten ein ungedeckter klinischer Bedarf und ein Schlüsselfaktor für die Steigerung des Überlebens und der Lebensqualität von Krebspatienten. Routinemäßigen Bildgebungsmodalitäten und löslichen Tumormarkern fehlt möglicherweise die für diese Aufgabe erforderliche Sensitivität und / oder Spezifität. Daher werden in der Klinik dringend neuartige prädiktive Marker benötigt, etwa auf Basis zirkulierender freier Nukleinsäuren.
Die Arten von Proben, die für Flüssigbiopsiestudien verwendet werden, umfassen, sind aber nicht beschränkt auf Blut-, Urin-, Speichel- und Stuhlproben. Andere tumorspezifische Proben können Zellaspirate, Zerebrospinalflüssigkeit, Pleuraflüssigkeit, Zysten- und Aszitesflüssigkeit, Sputum und Pankreassaft2 sein. Die ehemaligen Flüssigkeiten können verschiedene Arten von krebsabgeleiteten Materialien, zirkulierende Tumorzellen (CTC) oder Fragmente wie Exosomen und zellfreie zirkulierende Tumor-DNA (ctDNA) enthalten. Nukleinsäuren können in extrazellulären Vesikeln (EVs) verkapselt oder aufgrund von Zelltod und -schäden in Körperflüssigkeiten freigesetzt werden. Zirkulierende freie DNA (cfDNA) wird hauptsächlich aus apoptotischen oder nekrotischen Zellen in den Blutkreislauf freigesetzt und ist bei allen Individuen vorhanden, wobei sie bei entzündlichen oder onkologischen Erkrankungen erhöhte Spiegel aufweist3. Exosomen sind kleine extrazelluläre Vesikel (~ 30-150 nm), die von Zellen mit Nukleinsäuren, Proteinen und Lipiden sezerniert werden. Diese Vesikel sind Teil des interzellulären Kommunikationsnetzwerks und kommen häufig in vielen Arten von Körperflüssigkeitenvor 2. Die Nukleinsäuren, die in EVs eingeschlossen sind, sind vor der rauen Umgebung in Körperflüssigkeiten geschützt und bieten somit eine robustere Möglichkeit, diese Moleküle in der Flüssigbiopsieumgebung zu untersuchen.
Insgesamt sind die Konzentrationen zirkulierender Nukleinsäuren in Flüssigbiopsieproben sehr niedrig, weshalb für den Nachweis empfindliche Methoden wie digitale PCR oder Next-Generation-Sequencing (NGS) erforderlich sind. Das präanalytische Management der Probe ist entscheidend, um die Blutzelllyse und die Freisetzung intakter DNA zu verhindern, was zu einer Kontamination der cfDNA mit der genomischen DNA führt. Darüber hinaus ist bei der Probenentnahme darauf zu achten, dass Inhibitoren enzymbasierter Analysemethoden nicht vorhanden sind.
Hier stellen wir eine standardisierte Methode zur Entnahme und Lagerung von Plasma- und Serumproben vor, die ein entscheidender erster Schritt für flüssigbiopsiebasierte Downstream-Anwendungen einschließlich zirkulierender Nukleinsäureanalysen ist.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1.5 mL Eppendorf tubes</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>0030 120.086</td>
			<td>Any standard tubes/equipment can be used</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 mL serological disposable pipettes</td>
			<td>BIOFIL</td>
			<td>GSP010010</td>
			<td>Any standard tubes/equipment can be used</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 mL Vacutainer K2 EDTA tube</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>367525</td>
			<td>These tubes can be used for plasma collection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL polypropylene centrifuge tubes</td>
			<td>BIOFIL</td>
			<td>CFT411150</td>
			<td>Any standard tubes/equipment can be used</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3.5 mL BD Vacutainer tube without anticoagulant</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>368965</td>
			<td>Either 8.5 or 3.5 mL tubes can be used for serum collection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4 mL polypropylene cryogenic vial, round bottom, self-standing</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430662</td>
			<td>Any standard tubes/equipment can be used</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4 mL Vacutainer K2 EDTA tube</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>367864</td>
			<td>These tubes can be used for plasma collection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4200 TapeStation System</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>G2991BA</td>
			<td>Several quantification methods are available with a&#160; specific application for cfDNA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 mL serological disposable pipettes</td>
			<td>BIOFIL</td>
			<td>GSP010005</td>
			<td>Any standard tubes/equipment can be used</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>8.5 mL BD Vacutainer tube without anticoagulant</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>366468</td>
			<td>Either 8.5 or 3.5 mL tubes can be used for serum collection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge, capable of ~3000 x g with a swing bucket rotor</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>Sorvall ST 16 &#160;10688725</td>
			<td>Any standard tubes/equipment can be used</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Freezer storage boxes for 1&#8211;4 mLcryogenic vials</td>
			<td>Corning</td>
			<td>431120</td>
			<td>These boxes are needed when using 4 mL vials for storage</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>p1000 pipette tips</td>
			<td>CORNING</td>
			<td>4809</td>
			<td>Any standard tubes/equipment can be used</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>55114</td>
			<td>Any commercially available kit that is specific for cfDNA isolation can be used with this blood prcessing protocol.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Streck&#160;Cell-Free DNA BCT CE tubes 10 mL</td>
			<td>Streck</td>
			<td>218997</td>
			<td>These tubes can be used for plasma collection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Temperature Freezer (-80 &#176;C)</td>
			<td>ESCO</td>
			<td>2180104</td>
			<td>Any standard tubes/equipment can be used</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a standardized liquid biopsy preanalytical protocol for downstream circulating-free dna applications

Der Begriff Liquid Biopsy (LB) bezieht sich auf Moleküle wie Proteine, DNA, RNA, Zellen oder extrazelluläre Vesikel im Blut und anderen Körperflüssigkeiten, die aus dem Primär- und / oder metastasierenden Tumor stammen. LB hat sich zu einer tragenden Säule in der translationalen Forschung entwickelt und hat begonnen, Teil der klinischen Onkologiepraxis zu werden, die eine minimal-invasive Alternative zur soliden Biopsie bietet. Das LB ermöglicht die Echtzeitüberwachung eines Tumors über eine minimal-invasive Probenextraktion, wie z.B. Blut. Die Anwendungen umfassen die Krebsfrüherkennung, die Nachsorge von Patienten zur Erkennung des Krankheitsverlaufs, die Beurteilung der minimalen Resterkrankung und die mögliche Identifizierung der molekularen Progression und des Resistenzmechanismus. Um eine zuverlässige Analyse dieser Proben zu erreichen, die in der Klinik gemeldet werden kann, sollten die präanalytischen Verfahren sorgfältig abgewogen und strikt befolgt werden. Probensammlung, -qualität und -speicherung sind entscheidende Schritte, die ihre Nützlichkeit in nachgelagerten Anwendungen bestimmen. Hier stellen wir standardisierte Protokolle aus unserem Flüssigbiopsie-Arbeitsmodul zur Entnahme, Verarbeitung und Lagerung von Plasma- und Serumproben für die nachgeschaltete Flüssigbiopsieanalyse auf Basis zirkulierender DNA vor. Die hier vorgestellten Protokolle erfordern eine Standardausrüstung und sind flexibel genug, um in den meisten Laboratorien, die sich auf biologische Verfahren konzentrieren, angewendet zu werden.

Nach Zentrifugation der Blutröhrchen ohne Antikoagulans erscheint die obere Phase blassgelb und entspricht der Serumfraktion (Abbildung 2). Dieser Bruchteil wird sorgfältig entfernt und zur späteren Analyse aliquotiert.
Hämolyse kann entweder in der Plasma- oder Serumfraktion vorhanden sein, und die obere Phase hat ein rötliches Aussehen, was auf das Vorhandensein und den Grad der Hämolyse hinweist (Abbildung 3).
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A Standardized Liquid Biopsy Preanalytical Protocol for Downstream Circulating-Free DNA Applications

Die Flüssigbiopsie hat unseren Ansatz für translationale Onkologiestudien revolutioniert, wobei die Probenentnahme, -qualität und -lagerung entscheidende Schritte für ihre erfolgreiche klinische Anwendung sind. Hier beschreiben wir ein standardisiertes und validiertes Protokoll für nachgelagerte zirkulatorfreie DNA-Anwendungen, das in den meisten translationalen Forschungslabors angewendet werden kann.

Ein standardisiertes präanalytisches Flüssigbiopsieprotokoll für nachgeschaltete zirkulatorfreie DNA-Anwendungen

The term liquid biopsy (LB) refers to molecules such as proteins, DNA, RNA, cells, or extracellular vesicles in blood and other bodily fluids that ...

Dies ist ein Standardprotokoll für die Verarbeitung und Lagerung von Blutproben für nachgeschaltete Flüssigbiopsieanwendungen auf Basis zirkulierender freier DNA. Dies ist das erste veröffentlichte Standardprotokoll, obwohl die Technik seit einigen Jahren verwendet wird. Es ist leicht zu folgen mit Standardausrüstung, die in den meisten translationalen oder wissenschaftlichen Laboratorien verfügbar ist.Das Protokoll kann von allen Labormitarbeitern durchgeführt werden. Das Protokoll hilft, die Art und Weise, wie wir Proben sammeln und lagern, zu standardisieren, was sich letztendlich auf die Klinik auswirkt und die Variabilität zwischen verschiedenen Zentren reduziert, die die gleiche oder eine ähnliche nachgelagerte Analyse durchführen, bei der Präzision von größter Bedeutung ist. Diese Methode ist besonders nützlich in der onkologischen Forschung und auch in klinischen Anwendungen.Es kann jedoch auch bei anderen Nicht-Krebserkrankungen angewendet werden, bei denen auch die Flüssigbiopsie verwendet wird. Nachdem die Blutprobe zentrifugiert wurde, kann es schwierig sein zu wissen, wie viel Plasma oder Serum entfernt werden muss, aber die Einhaltung dieser spezifischen Richtlinien wird dabei helfen. Der Rest des Protokolls ist sehr einfach zu befolgen, mit begrenzter Erfahrung im Labor.Jorge, ein Techniker aus unserem Labor, demonstriert das Verfahren. Um zu beginnen, zentrifugieren Sie das Röhrchen mit frischem Blut bei Raumtemperatur für 10 Minuten bei 1600 mal g, wobei die maximale Pause angewendet wird. Entfernen Sie das Röhrchen vorsichtig aus der Zentrifuge.Die obere Phase des Serumüberstands erscheint klar und gelblich. Überprüfen Sie, ob die Probe Anzeichen einer Hämolyse aufweist, und notieren Sie gegebenenfalls das Vorhandensein einer Hämolyse. In einer Biosicherheitswerkbank der Klasse II wird das Serum als 250-Mikroliter-Aliquots in Sammelröhrchen überführt.Die Aliquots müssen korrekt gekennzeichnet sein. Gefrieren Sie das Serum sofort aufrecht in der Aufbewahrungsbox bei minus 80 Grad Celsius und notieren Sie den Zeitpunkt der Probenlagerung. Stellen Sie sicher, dass die Proben innerhalb des erforderlichen Zeitrahmens von vier Stunden verarbeitet wurden.Zentrifugieren Sie das EDTA-Röhrchen bei Raumtemperatur für 10 Minuten bei 1600 mal g, wobei die maximale Pause angewendet wird. Nach der Zentrifugation erscheint der Plasmaüberstand klar und gelblich. Überprüfen Sie, ob die Probe Anzeichen einer Hämolyse aufweist, und übertragen Sie das Plasma mit einer serologischen Einwegpipette in ein 15-Milliliter-Zentrifugenröhrchen, ohne die Zellschicht zu stören.Lassen Sie ein kleines Restvolumen an Plasma über der Zellschicht bei etwa fünf Millimetern. Wenn eine Hämolyse beobachtet wird, verwerfen Sie die Probe zur weiteren Analyse. Zentrifugieren Sie das Plasma und ein 15-Milliliter-Zentrifugenröhrchen, um alle verbleibenden intakten Blutzellen aus dem ersten Zentrifugationsschritt zu entfernen.Entfernen Sie vorsichtig das Röhrchen aus der Zentrifuge, nicht das Zellpellet am Boden des Röhrchens, und übertragen Sie ein bis vier Milliliter Plasma mit einer serologischen Einwegpipette auf ein bis vier Milliliter Polypropylen-Kryobios oder Eppendorfs. Ein Restvolumen des Plasmas muss am Boden des Röhrchens belassen werden, um eine Verunreinigung des Plasmas mit Blutzellen zu vermeiden. Gefrieren Sie das Plasma sofort aufrecht in der Aufbewahrungsbox bei minus 80 Grad Celsius und notieren Sie den Zeitpunkt der Probenlagerung.Stellen Sie sicher, dass die Proben korrekt gekennzeichnet sind und innerhalb des erforderlichen Zeitrahmens von vier Stunden verarbeitet wurden. Sammeln Sie die Zellschicht mit einem P1000 und einer gefilterten Spitze und übertragen Sie sie in ein Zwei-Milliliter-Röhrchen. Sofort einfrieren und bei minus 80 Grad Celsius lagern.Ein Beispiel für eine qualitativ hochwertige cfDNA-Extraktion, die für nachgelagerte Anwendungen verwendet werden kann, wird hier gezeigt, während dieses grafische Bild ein Beispiel für eine ungeeignete Probe mit einem hohen Grad an genomischer Kontamination darstellt. Die Plasma- oder Serumfraktion muss eine gelbe Farbe haben. Dies kann je nach Probe variieren.Proben mit Hämolyse sollten verworfen werden. Achten Sie darauf, beim Entfernen der Plasmafraktion kein Zellpellet zu entfernen. Dieses Protokoll kann auch für andere nukleinsäurebasierte und Proteinanwendungen verwendet werden, wie z.B. den Nachweis von nicht-kodierenden RNAs oder Proteinen in Serum- und Plasmaproben unter Verwendung von Immundetektionstechniken.Dies ist eine sehr Standardtechnik, die in vielen Laboratorien verwendet wird. Dieses Protokoll hilft Forschern zu standardisieren, wie wir unsere Analysen durchführen, da dies ein entscheidender Aspekt ist, der für zukünftige klinische Anwendungen notwendig ist.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

A Protocol for Rapid Post-mortem Cell Culture of Diffuse Intrinsic Pontine Glioma (DIPG)

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Ein Protokoll für schnelle Post-mortem-Zellkultur von Diffuse Intrinsic Ponsgliom (DIPG)

Diffuse Intrinsic Pontine Glioma (DIPG) is a childhood brainstem tumor that carries a universally fatal prognosis. Because surgical resection is not a ...

Forschung

Krebsforschung

MicroRNA Based Liquid Biopsy: The Experience of the Plasma miRNA Signature Classifier (MSC) for Lung Cancer Screening

MicroRNA Based Liquid Biopsy: The Experience of the Plasma miRNA Signature Classifier MSC for Lung Cancer Screening

MicroRNA Based Flüssigbiopsie: Die Erfahrung der Plasma MiRNA Signatur Klassifikator (MSC) für Lung Cancer Screening

The development of a minimally invasive test, such as liquid biopsy, for early lung cancer detection in its preclinical phase is crucial to improve the ...

Target Cell Pre-enrichment and Whole Genome Amplification for Single Cell Downstream Characterization

Ziel Zelle Voranreicherung und ganze Genome Amplifikation für einzelne Zelle nachgelagerten Charakterisierung

Rare target cells can be isolated from a high background of non-target cells using antibodies specific for surface proteins of target cells. A recently ...

Moving Upwards: A Simple and Flexible In Vitro Three-dimensional Invasion Assay Protocol

Moving Upwards: A Simple and Flexible In Vitro Three-dimensional Invasion Assay Protocol

Nach oben bewegen: Eine einfache und Flexible In-vitro- dreidimensionale Invasion Assay Protokoll

Although 3D invasion assays have been developed, the challenge remains to study cells without affecting the integrity of their microenvironment. ...

Characterizing DNA Repair Processes at Transient and Long-lasting Double-strand DNA Breaks by Immunofluorescence Microscopy

Charakterisierung von DNA-Reparaturprozesse bei Transienten und langlebige Doppel-Strang DNA-Brüchen durch Immunfluoreszenz-Mikroskopie

The repair of double-stranded breaks (DSBs) in DNA is a highly coordinated process, necessitating the formation and resolution of multi-protein repair ...

Evaluation of the Feasibility, Safety, and Accuracy of an Intraoperative High-intensity Focused Ultrasound Device for Treating Liver Metastases

Bewertung der Machbarkeit, Sicherheit und Genauigkeit einer intraoperativen hochintensive fokussiert Ultraschall-Gerät zur Behandlung von Lebermetastasen

Today, the only potentially curative option in patients with colorectal liver metastases is surgery. However, liver resection is feasible in less than 20% ...

Longitudinal Intravital Imaging of Brain Tumor Cell Behavior in Response to an Invasive Surgical Biopsy

Längsschnitt-Intravital-Bildgebung des Hirntumorzellverhaltens als Reaktion auf eine invasive chirurgische Biopsie

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Micromanipulation of Circulating Tumor Cells for Downstream Molecular Analysis and Metastatic Potential Assessment

Mikromanipulation von zirkulierenden Tumorzellen für die nachgelagerte Molekulare Analyse und die metastasierende Potenzialbewertung

Blood-borne metastasis accounts for&#160;most cancer-related deaths and involves circulating tumor cells (CTCs) that are successful in establishing new ...

Immunofluorescence Imaging of DNA Damage and Repair Foci in Human Colon Cancer Cells

Immunfluoreszenz Bildgebung von DNA-Schäden und Reparatur-Fozien in menschlichen Darmkrebszellen

The purpose of the manuscript is to provide a step-by-step protocol for performing immunofluorescence microscopy to study the radiation-induced DNA damage ...

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Automatisiertes Dissektionsprotokoll zur Tumoranreicherung in Geweben mit niedrigem Tumorgehalt

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