Name: a standardized liquid biopsy preanalytical protocol for downstream circulating-free dna applications
Uploaded: 2022-09-16T13:40:00
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우리는 그들의 지원과 다음과 같은 프로젝트 보조금에 대한 암 생물 의학 연구 네트워크 (CIBERONC)에 감사드립니다 : LB CIBERONC PLATFORM : CIBERONC 플랫폼 액체 생검의 표준화 및 홍보. PI 로드리고 톨레도, (CIBERONC), 2019-2021.

혈액 샘플을 추출하기 전에 참여 센터에서 사전 윤리적 승인을 받았습니다. 혈청 및 혈장 분리를 위한 다음의 프로토콜은 생물의학 연구를 위한 윤리적 원리에 따라 수행되었다.
참고: 프로토콜을 시작하기 전에 미리 고려해야 할 사항이 여기에 나와 있습니다. 생물 의학 연구에서 인간 샘플을 사용하려면 사전 윤리적 승인이 필요하며 해당 정보에 입각 한 동의가 필요합니다...

<ol>
	<li>Alix-Panabi&#232;res, C., Pantel, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+applications+of+circulating+tumor+cells+and+circulating+tumor+DNA+as+liquid+biopsy.">Clinical applications of circulating tumor cells and circulating tumor DNA as liquid biopsy.</a> Cancer Discovery. 6 (5), 479-491 (2016).</li><li>Zhou, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+of+exosomes+as+liquid+biopsy+in+clinical+diagnosis.">Application of exosomes as liquid biopsy in clinical diagnosis.</a> Signal Transduction and Targeted Therapy. 5 (1), 144 (2020).</li><li>Bettegowda, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liquid+biopsies:+Genotyping+circulating+tumor+DNA.">Liquid biopsies: Genotyping circulating tumor DNA.</a> Nature Medicine. 4 (6), (2014).</li><li>Heitzer, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recommendations+for+a+practical+implementation+of+circulating+tumor+DNA+mutation+testing+in+metastatic+non-small-cell+lung+cancer.">Recommendations for a practical implementation of circulating tumor DNA mutation testing in metastatic non-small-cell lung cancer.</a> ESMO Open. 7 (2), 100399 (2022).</li><li>Gennari, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ESMO+Clinical+Practice+Guideline+for+the+diagnosis,+staging+and+treatment+of+patients+with+metastatic+breast+cancer.">ESMO Clinical Practice Guideline for the diagnosis, staging and treatment of patients with metastatic breast cancer.</a> Annals of Oncology: Official Journal of the European Society for Medical Oncology. 32 (12), 1475-1495 (2021).</li><li>Van Buren, T., Arwatz, G., Smits, A. 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Clinical Oncology. 18 (5), 297-312 (2021).</li><li>Sidstedt, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+mechanisms+of+hemoglobin,+immunoglobulin+G,+and+whole+blood+in+digital+and+real-time+PCR.">Inhibition mechanisms of hemoglobin, immunoglobulin G, and whole blood in digital and real-time PCR.</a> Analytical and Bioanalytical Chemistry. 410 (10), 2569-2583 (2018).</li><li>Maass, K. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+sampling+to+sequencing:+A+liquid+biopsy+pre-analytic+workflow+to+maximize+multi-layer+genomic+information+from+a+single+tube.">From sampling to sequencing: A liquid biopsy pre-analytic workflow to maximize multi-layer genomic information from a single tube.</a> Cancers. 13 (12), 3002 (2021).</li><li>Greytak, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Harmonizing+cell-free+DNA+collection+and+processing+practices+through+evidence-based+guidance.">Harmonizing cell-free DNA collection and processing practices through evidence-based guidance.</a> Clinical Cancer Research: An Official Journal of the American Association for Cancer Research. 26 (13), 3104-3109 (2020).</li><li>Trigg, R. M., Martinson, L. J., Parpart-Li, S., Shaw, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factors+that+influence+quality+and+yield+of+circulating-free+DNA:+A+systematic+review+of+the+methodology+literature.">Factors that influence quality and yield of circulating-free DNA: A systematic review of the methodology literature.</a> Heliyon. 4 (7), 00699 (2018).</li><li>Boissier, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+centrifuge+brake+impacts+neither+routine+coagulation+assays+nor+platelet+count+in+platelet-poor+plasma.">The centrifuge brake impacts neither routine coagulation assays nor platelet count in platelet-poor plasma.</a> Clinical Chemistry and Laboratory Medicine. 58 (9), 185-188 (2020).</li><li>Johansson, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Considerations+and+quality+controls+when+analyzing+cell-free+tumor+DNA.">Considerations and quality controls when analyzing cell-free tumor DNA.</a> Biomolecular Detection and Quantification. 17, 100078 (2019).</li><li>Casas-Arozamena, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genomic+profiling+of+uterine+aspirates+and+cfDNA+as+an+integrative+liquid+biopsy+strategy+in+endometrial+cancer.">Genomic profiling of uterine aspirates and cfDNA as an integrative liquid biopsy strategy in endometrial cancer.</a> Journal of Clinical Medicine. 9 (2), 585 (2020).</li><li>Alcoceba, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liquid+biopsy:+a+non-invasive+approach+for+Hodgkin+lymphoma+genotyping.">Liquid biopsy: a non-invasive approach for Hodgkin lymphoma genotyping.</a> British Journal of Haematology. 195 (4), 542-551 (2021).</li><li>Szpechcinski, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell-free+DNA+levels+in+plasma+of+patients+with+non-small-cell+lung+cancer+and+inflammatory+lung+disease.">Cell-free DNA levels in plasma of patients with non-small-cell lung cancer and inflammatory lung disease.</a> British Journal of Cancer. 113 (3), 476-483 (2015).</li><li>Earl, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Somatic+mutation+profiling+in+the+liquid+biopsy+and+clinical+analysis+of+hereditary+and+familial+pancreatic+cancer+cases+reveals+kras+negativity+and+a+longer+overall+survival.">Somatic mutation profiling in the liquid biopsy and clinical analysis of hereditary and familial pancreatic cancer cases reveals kras negativity and a longer overall survival.</a> Cancers. 13 (7), 1612 (2021).</li><li>Lampignano, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multicenter+evaluation+of+circulating+cell-free+DNA+extraction+and+downstream+analyses+for+the+development+of+standardized+(pre)analytical+work+flows.">Multicenter evaluation of circulating cell-free DNA extraction and downstream analyses for the development of standardized (pre)analytical work flows.</a> Clinical Chemistry. 66 (1), 149-160 (2020).</li><li>Febbo, P. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Minimum+technical+data+elements+for+liquid+biopsy+data+submitted+to+public+databases.">Minimum technical data elements for liquid biopsy data submitted to public databases.</a> Clinical Pharmacology and Therapeutics. 107 (4), 730-734 (2020).</li><li>De Mattos-Arruda, L., Siravegna, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+to+use+liquid+biopsies+to+treat+patients+with+cancer.">How to use liquid biopsies to treat patients with cancer.</a> ESMO Open. 6 (2), 100060 (2021).</li></ol>

액체 생검은 암 관리 중 다른 시간에 수많은 잠재적 인 응용 프로그램을 가지고 있습니다. 첫째, 진단에서 임상적으로 더 조사될 수 있는 잠재적인 종양 병변의 존재를 시사하는 종양 분자 마커를 동정한다. 둘째, 질병의 실시간 모니터링을 위한 치료 동안, 치료 분자 반응의 평가, 클론 진화, 및 질병 재발 또는 치료 저항성의 조기 검출. 마지막으로, 외과 적 치료 후, 최소한의 잔류 질환의 검출을?...

용어 "액체 생검"은 2010년1 차 종양으로부터 기원되는 혈액 및 다른 체액에서 분자(예를 들어, 단백질, 데옥시리보핵산(DNA), 리보핵산(RNA)), 세포밖 소포(예를 들어, 엑소좀)의 존재로서 정의되었다. 액체 생검 샘플의 사용은 특정 순간에 특정 영역으로 제한된 조직 생검이 종양 이질성으로 인해 관련 클론을 놓칠 수 있기 때문에 번역 종양학 연구에 혁명을 일으켰습니다. 또한, 액체 생검은 침습적 생검을 피할 수 있기 때문에 원발성 조직이 부족하거나 접근할 수 없는 종양 유형에서 관련 역할을 하며, 이는 환자의 비용과 위험을 감소시킬 수 있기 때문이다. 더욱이, 종양 분자 특성은 주로 치료 압력으로 인해 끊임없이 진화하고 있으며, 액체 생검 샘플은 기준선, 치료, 최상의 반응, 질병 진행 또는 심지어 전과 같은 질병의 다른 임상 및 치료 시간에서 종적으로, 복용 할 수 있기 때문에 종양 클론 역학을 포착 할 수 있습니다. "실시간 액체 생검"의 개념은 종양의 동적 변화를 실시간으로 모니터링 할 수 있으므로이 질병에서 정밀 의학을 가능하게한다는 것을 의미합니다. 액체 생검은 암의 스크리닝 및 조기 발견, 질병의 실시간 모니터링, 최소 잔류 질환의 검출, 치료 저항성에 대한 메커니즘 연구 및 치료 수준1에서 환자의 계층화를 포함하여 클리닉에서 수많은 잠재적 인 응용 프로그램을 가지고 있습니다. 질병 재발 및 진행의 조기 발견은 많은 종양 유형에서 충족되지 않은 임상 적 요구이며 암 환자의 생존과 삶의 질을 높이는 핵심 요소입니다. 일상적인 영상화 방식 및 가용성 종양 마커는 이 작업에 필요한 민감도 및/또는 특이성이 부족할 수 있다. 따라서, 신규한 예측 마커는 순환하는 유리 핵산에 기초한 것들과 같은 클리닉에서 긴급하게 필요하다.
액체 생검 연구에 사용되는 샘플의 유형은 혈액, 소변, 타액 및 대변 샘플을 포함하지만 이에 국한되지 않습니다. 다른 종양-특이적 샘플은 세포 아스피레이트, 뇌척수액, 흉막액, 낭종 및 복수액, 객담, 및 췌장 주스2일 수 있다. 전액은 상이한 유형의 암 유래 물질, 순환 종양 세포 (CTC), 또는 엑소좀 및 무세포 순환 종양 DNA (ctDNA)와 같은 단편을 함유할 수 있다. 핵산은 세포밖 소포(EVs)에 캡슐화되거나 세포 사멸 및 손상으로 인해 체액으로 방출될 수 있다. 순환 자유 DNA (cfDNA)는 주로 사멸 또는 괴사 세포로부터 혈류로 방출되며 모든 개체에 존재하며 염증성 또는 종양학 질환에서 증가 된 수준을 보여줍니다3. 엑소좀은 핵산, 단백질 및 지질을 포함하는 세포에 의해 분비되는 작은 세포밖 소포 (∼30-150 nm)이다. 이 소포는 세포 간 통신 네트워크의 일부를 형성하며 일반적으로 많은 유형의 체액에서 발견됩니다2. EV 내부에 둘러싸인 핵산은 체액 내의 가혹한 환경으로부터 보호되므로 액체 생검 설정에서 이러한 분자를 연구하는보다 강력한 방법을 제공합니다.
전반적으로, 액체 생검 샘플에서 순환 핵산의 수준은 매우 낮기 때문에 디지털 PCR 또는 차세대 시퀀싱 (NGS)과 같은 검출에 민감한 방법이 필요합니다. 샘플의 사전 분석 관리는 혈액 세포 용해 및 손상되지 않은 DNA의 방출을 방지하여 cfDNA와 게놈 DNA의 오염을 일으키는 데 중요합니다. 또한, 효소 기반 분석 방법의 억제제의 존재를 피하기 위해 샘플을 추출 할 때주의해야합니다.
여기서 우리는 혈장 및 혈청 샘플의 수집 및 저장을위한 표준화 된 방법을 제시하며, 이는 순환 핵산 분석을 포함한 액체 생검 기반 하류 적용을위한 중요한 첫 번째 단계입니다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1.5 mL Eppendorf tubes</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>0030 120.086</td>
			<td>Any standard tubes/equipment can be used</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 mL serological disposable pipettes</td>
			<td>BIOFIL</td>
			<td>GSP010010</td>
			<td>Any standard tubes/equipment can be used</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 mL Vacutainer K2 EDTA tube</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>367525</td>
			<td>These tubes can be used for plasma collection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL polypropylene centrifuge tubes</td>
			<td>BIOFIL</td>
			<td>CFT411150</td>
			<td>Any standard tubes/equipment can be used</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3.5 mL BD Vacutainer tube without anticoagulant</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>368965</td>
			<td>Either 8.5 or 3.5 mL tubes can be used for serum collection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4 mL polypropylene cryogenic vial, round bottom, self-standing</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430662</td>
			<td>Any standard tubes/equipment can be used</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4 mL Vacutainer K2 EDTA tube</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>367864</td>
			<td>These tubes can be used for plasma collection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4200 TapeStation System</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>G2991BA</td>
			<td>Several quantification methods are available with a&#160; specific application for cfDNA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 mL serological disposable pipettes</td>
			<td>BIOFIL</td>
			<td>GSP010005</td>
			<td>Any standard tubes/equipment can be used</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>8.5 mL BD Vacutainer tube without anticoagulant</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>366468</td>
			<td>Either 8.5 or 3.5 mL tubes can be used for serum collection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge, capable of ~3000 x g with a swing bucket rotor</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>Sorvall ST 16 &#160;10688725</td>
			<td>Any standard tubes/equipment can be used</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Freezer storage boxes for 1&#8211;4 mLcryogenic vials</td>
			<td>Corning</td>
			<td>431120</td>
			<td>These boxes are needed when using 4 mL vials for storage</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>p1000 pipette tips</td>
			<td>CORNING</td>
			<td>4809</td>
			<td>Any standard tubes/equipment can be used</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>55114</td>
			<td>Any commercially available kit that is specific for cfDNA isolation can be used with this blood prcessing protocol.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Streck&#160;Cell-Free DNA BCT CE tubes 10 mL</td>
			<td>Streck</td>
			<td>218997</td>
			<td>These tubes can be used for plasma collection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Temperature Freezer (-80 &#176;C)</td>
			<td>ESCO</td>
			<td>2180104</td>
			<td>Any standard tubes/equipment can be used</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a standardized liquid biopsy preanalytical protocol for downstream circulating-free dna applications

액체 생검 (LB)이라는 용어는 단백질, DNA, RNA, 세포 또는 혈액 및 원발성 및 / 또는 전이성 종양에서 유래 한 다른 체액의 세포 밖 소포와 같은 분자를 의미합니다. LB는 번역 연구의 주류로 부상했으며 임상 종양학 실습의 일부가되기 시작하여 고형 생검에 대한 최소 침습적 대안을 제공합니다. LB는 혈액과 같은 최소 침습적 샘플 추출을 통해 종양을 실시간으로 모니터링 할 수 있습니다. 응용 분야에는 조기 암 검출, 질병 진행 검출을위한 환자 추적 관찰, 최소 잔류 질환의 평가, 분자 진행 및 내성 메커니즘의 잠재적 인 확인이 포함됩니다. 클리닉에서보고 할 수있는 이러한 샘플에 대한 신뢰할 수있는 분석을 달성하기 위해서는 사전 분석 절차를 신중하게 고려하고 엄격하게 따라야합니다. 샘플 수집, 품질 및 스토리지는 다운스트림 응용 프로그램에서의 유용성을 결정하는 중요한 단계입니다. 여기에서는 순환이 없는 DNA를 기반으로 하는 다운스트림 액체 생검 분석을 위해 혈장 및 혈청 샘플을 수집, 처리 및 저장하기 위한 액체 생검 작업 모듈의 표준화된 프로토콜을 제시합니다. 여기에 제시된 프로토콜은 표준 장비를 필요로하며 생물학적 절차에 중점을 둔 대부분의 실험실에 적용 할 수있을만큼 유연합니다.

항응고제 없이 혈액관을 원심분리한 후, 상층부는 옅은 노란색으로 나타나며 혈청 분획에 해당한다(도 2). 이 분획은 조심스럽게 제거되고 후속 분석을 위해 분취됩니다.
용혈은 혈장 또는 혈청 분획 중 하나에 존재할 수 있으며, 상상은 용혈의 존재 및 정도를 나타내는 붉은 외관을 가질 것이다 (그림 3).
EDTA 튜...

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A Standardized Liquid Biopsy Preanalytical Protocol for Downstream Circulating-Free DNA Applications

액체 생검은 종양학 번역 연구에 대한 우리의 접근 방식에 혁명을 일으켰으며, 샘플 수집, 품질 및 보관은 성공적인 임상 적용을위한 중요한 단계입니다. 여기에서는 대부분의 번역 연구 실험실에 적용 할 수있는 다운스트림 순환 프리 DNA 응용 프로그램에 대한 표준화되고 검증 된 프로토콜을 설명합니다.

다운스트림 순환 프리 DNA 응용을 위한 표준화된 액체 생검 사전 분석 프로토콜

The term liquid biopsy (LB) refers to molecules such as proteins, DNA, RNA, cells, or extracellular vesicles in blood and other bodily fluids that ...

이것은 순환하는 자유 DNA를 기반으로 하는 다운스트림 액체 생검 애플리케이션을 위한 혈액 샘플의 처리 및 저장을 위한 표준 프로토콜입니다. 이 기술은 몇 년 동안 사용되어 왔지만 이것은 출판 된 최초의 표준 프로토콜입니다. 대부분의 중개 또는 과학 실험실에서 사용할 수 있는 표준 장비로 쉽게 따를 수 있습니다.프로토콜은 모든 실험실 직원이 수행 할 수 있습니다. 이 프로토콜은 샘플을 수집하고 저장하는 방법을 표준화하는 데 도움이되며, 이는 궁극적으로 클리닉에 영향을 미치고 정밀도가 가장 중요한 동일하거나 유사한 다운 스트림 분석을 수행하는 여러 센터 간의 변동성을 줄입니다. 이 방법은 종양학 연구 및 임상 응용 분야에서 특히 유용합니다.그러나 액체 생검이 사용되는 다른 비암 질환에도 적용될 수 있습니다. 혈액 샘플을 원심분리한 후 제거할 혈장이나 혈청의 양을 아는 것은 어려울 수 있지만 이 특정 지침을 따르면 도움이 됩니다. 나머지 프로토콜은 실험실에서의 제한된 경험으로 따르기가 매우 쉽습니다.절차를 시연하는 것은 우리 실험실의 기술자 인 호르헤 (Jorge)가 될 것입니다. 시작하려면 신선한 혈액이 들어있는 튜브를 실온에서 1600 회 g에서 10 분 동안 원심 분리하고 최대 휴식을 취하십시오. 원심 분리기에서 튜브를 조심스럽게 제거하십시오.혈청 상청액의 상부 단계는 투명하고 황색을 띠게됩니다. 샘플에 용혈 징후가 있는지 확인하고 적절한 경우 용혈 유무를 기록합니다. Class II 생물안전 캐비닛에서 혈청을 250마이크로리터 분취량으로 수집 튜브로 옮깁니다.부분 표본에는 올바르게 레이블이 지정되어야 합니다. 즉시 혈청을 섭씨 영하 80도에서 보관 상자에 똑바로 얼리고 샘플 보관 시간을 기록합니다. 샘플이 필요한 4시간 내에 처리되었는지 확인합니다.EDTA 튜브를 실온에서 1600회 g에서 10분 동안 원심분리하고 최대 브레이크를 적용합니다. 원심분리 후, 혈장 상청액은 투명하고 황색을 띠게 될 것이다. 샘플에 용혈 징후가 있는지 확인하고 일회용 혈청 피펫을 사용하여 세포층을 방해하지 않고 혈장을 15 밀리리터 원심 분리 튜브로 옮깁니다.세포층 위에 약 5 밀리미터의 작은 잔류 혈장 부피를 남겨 둡니다. 용혈이 관찰되면 추가 분석을 위해 샘플을 폐기하십시오. 혈장을 원심분리 및 15-밀리리터 원심분리 튜브로 원심분리하여 제1 원심분리 단계로부터 이월된 임의의 잔류된 온전한 혈액 세포를 제거한다.튜브 바닥의 셀 펠릿이 아닌 원심분리기에서 튜브를 조심스럽게 제거하고 일회용 혈청학적 피펫을 사용하여 1-4밀리리터의 혈장을 1-4밀리리터의 폴리프로필렌 극저온 바이오스 또는 Eppendorfs로 옮깁니다. 혈장이 혈액 세포로 오염되는 것을 피하기 위해 튜브 바닥에 잔류량의 혈장을 남겨 두어야합니다. 즉시 저장 상자에 플라즈마를 섭씨 영하 80도에서 똑바로 얼리고 샘플 보관 시간을 기록합니다.샘플에 레이블이 올바르게 지정되고 필요한 4시간 내에 처리되었는지 확인합니다. P1000을 사용하여 세포층을 수집하고 여과 된 팁을 2 밀리리터 튜브로 옮깁니다. 즉시 냉동하여 섭씨 영하 80도에서 보관하십시오.다운스트림 애플리케이션에 사용할 수 있는 고품질 cfDNA 추출의 예가 여기에 나와 있는 반면, 이 그래픽 이미지는 게놈 오염 수준이 높은 부적합한 샘플의 예를 나타냅니다. 혈장 또는 혈청 분획은 노란색이어야합니다. 이는 개별 샘플에 따라 다를 수 있습니다.용혈 된 샘플은 폐기해야합니다. 혈장 분획을 제거할 때 세포 펠릿을 제거하지 않도록 주의하십시오. 이 프로토콜은 면역 검출 기술을 사용하여 혈청 및 혈장 샘플에서 비코딩 RNA 또는 단백질의 검출과 같은 다른 핵산 기반 및 단백질 애플리케이션에도 사용할 수 있습니다.이것은 많은 실험실에서 사용되는 매우 표준적인 기술입니다. 이 프로토콜은 연구자가 분석을 수행하는 방법을 표준화하는 데 도움이 되며, 이는 향후 임상 응용 분야에 필요한 중요한 측면입니다.

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Evaluation of the Feasibility, Safety, and Accuracy of an Intraoperative High-intensity Focused Ultrasound Device for Treating Liver Metastases

간 전이 치료를 위한 초음파 장치 타당성, 안전, 그리고 자가 고 강도의 정확도의 평가 초점을 맞춘

Today, the only potentially curative option in patients with colorectal liver metastases is surgery. However, liver resection is feasible in less than 20% ...

Longitudinal Intravital Imaging of Brain Tumor Cell Behavior in Response to an Invasive Surgical Biopsy

침략적인 외과 생검에 응하여 뇌종양 세포 행동의 경도 내 활력 화상 진찰

Biopsies are standard of care for cancer treatment and are clinically beneficial as they allow solid tumor diagnosis, prognosis, and personalized ...

Micromanipulation of Circulating Tumor Cells for Downstream Molecular Analysis and Metastatic Potential Assessment

하류 분자 분석 및 전이성 전위 평가를 위한 순환 종양 세포의 미세 조작

Blood-borne metastasis accounts for&#160;most cancer-related deaths and involves circulating tumor cells (CTCs) that are successful in establishing new ...

Immunofluorescence Imaging of DNA Damage and Repair Foci in Human Colon Cancer Cells

인간 결장 암 세포에 있는 DNA 손상 및 복구 Foci의 면역 형광 화상 진찰

The purpose of the manuscript is to provide a step-by-step protocol for performing immunofluorescence microscopy to study the radiation-induced DNA damage ...

Automated Dissection Protocol for Tumor Enrichment in Low Tumor Content Tissues

낮은 종양 함량 조직에서 종양 농축을 위한 자동화된 해부 프로토콜

Tumor enrichment in low tumor content tissues, those below 20% tumor content depending on the method, is required to generate quality data reproducibly ...