Name: drug treatment by central venous catheter in a mouse model of angiotensin ii induced abdominal aortic aneurysm and monitoring by 3d ultrasound
Uploaded: 2022-08-04T13:50:00
Duration: 10 min 9 s
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動物実験へのご協力をいただいたポデッサー教授とエルマイヤー教授のチーム(ウィーン医科大学生物医学研究部・実験動物飼育中核施設)に感謝いたします。AAAトリクローム染色は、モニカ・ワイスとピーター・ペッツェルバウアー教授(ウィーン医科大学皮膚科)によって親切に行われました。この研究はオーストリア科学基金[SFBプロジェクトF 5409-B21]の支援を受けた。マーク・ベイリーは、ブリティッシュ・ハート財団[FS/18/12/33270]の支援を受けています。

<ol>
	<li>Busch, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Translating+mouse+models+of+abdominal+aortic+aneurysm+to+the+translational+needs+of+vascular+surgery.">Translating mouse models of abdominal aortic aneurysm to the translational needs of vascular surgery.</a> JVS-Vascular Science. 2, 219-234 (2021).</li><li>Golledge, J., Krishna, S. M., Wang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+for+abdominal+aortic+aneurysm.">Mouse models for abdominal aortic aneurysm.</a> British Journal of Pharmacology. 179 (5), 792-810 (2022).</li><li>Daugherty, A., Manning, M. W., Cassis, L. 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著者らは開示していない。

Ang-IIモデルは、その低い技術的要求およびヒト疾患3,6に似た特定の特徴のために、AAAの最も一般的に使用されるマウスモデルの1つである。手術時間は1匹あたり約10分であり、皮下ポケットが十分に広く、切開部位から離れて動物の背中に低く置かれている場合、創傷治癒を妨げないように、皮下ポンプ移植はマウスによって十分に許容される。皮膚がポンプの周囲にきつく締まっていると、組織の刺激が起こり、炎症やかさぶたを引き起こし、浸透圧によってポンプの放出メカニズムを潜在的に破壊する可能性があります。動物の犠牲時にポンプに残っていたAng-IIの量を測定すると、Ang-IIが28日間にわたって正常に放出されたかどうかについての洞察が得られます。
Ang-IIモデルは、大動脈瘤と解剖の進行を研究するのに適しており、両方の人間の特徴と類似しているため、最近提案されています6。重要なことに、大動脈拡張をブロックし、リモデリングに影響を与えるために薬物候補を試験することは、現在の臨床的需要と一致するであろう。我々の実験環境では、マウスの絶対大動脈サイズの自然な変動を説明するベースラインに関連して、8日目の125%の体積増加に基づいて、治療開始前に動脈瘤形成のカットオフが定義された。閾値および時点は、組織学における大動脈壁破壊を確認した初期経時変化(データは示さず)に由来し、カテーテル移植前に35%の破裂および56%の観察されたAAAをもたらした。確立された疾患の最小閾値が研究包含のために適用されたが、その後、高い程度の初期大動脈拡張も実験適用性を制限する可能性があることが観察された。8日目までに>200%の体積に急速に進行した動脈瘤は、症例の55%でそのサイズを超えてさらに成長しなかった(図1D)。これは、治療の真の効果を隠す可能性があるため、実験計画およびサンプルサイズの計算中に考慮する必要があります。このモデルの別の側面は、頻繁な大動脈破裂(胸部または腹部)であり、20%〜40%の割合で、主にAng-IIポンプ移植後最初の10日以内に起こる3,18,19。したがって、治療開始を9日目に選択することにより、高い割合の確立された動脈瘤が達成され、頸静脈カテーテル検査は、本質的に実験の終わりまで生存すると予想されるマウスに対して実施された(我々の歴史的対照群の3/24マウスのみが9日目以降に破裂した)、したがって、時間、労力を節約し、 とコスト。
重篤な状態を構成する大動脈破裂とは別に、血管アクセスボタンと浸透圧ポンプを備えたカテーテルの同時移植はマウスによって十分に許容され、手術からの回復後の可動性または行動に顕著な影響はなかった。頸静脈カテーテル法処置は、訓練を受けた研究者のために約30分かかるべきである。(イソフルラン)麻酔への曝露期間は最小限に抑えるべきであり、動物の呼吸数は呼吸抑制を防ぐために注意深く監視されなければならず、これは解決されなければ致命的な結果につながる可能性がある20。カテーテル挿入のために頸静脈を穿刺した後の失血(大口の場合は動物の死につながる)は、頸静脈が頭蓋に適切に結紮されていないか、血管の孤立した領域に供給される側枝が遮断されていない場合に潜在的に起こり得る。その場合、血液漏れが遅くなるか止まるまで綿棒による圧力を穿刺部位に塗布し、カテーテルの挿入と結紮をできるだけ早く行う必要があります。コラーゲン創傷被覆材の小さな小片は、止血を助けるために一時的に利用され得る。
カテーテルの開存性は、カテーテルが静脈またはアクセスボタンから切断されると、薬物が皮下空間に漏れる不適切な薬物送達をもたらすため、最も重要な要因の1つです。カテーテルと金属コネクタの間に最低3mmの重なりがあるという製造業者の勧告に従って、このモデル(2020-2021、n = 73)では、ボタン側のカテーテル切断の1つのケース(ボタンの切開部位から漏れた注入された液体によって示される)のみが記録され、創傷を開き、手術で接続を再確立することによって固定された。さらに、私たちの歴史的なPBS対照群(2/21)では、カテーテル閉塞(注射が不可能になる)、静脈からのカテーテル切断(注射中の首の明らかな腫れによって示される)、または創傷治癒合併症のいずれかのために、約10%のカテーテル開存性障害率が経験されました。これらの問題は、自傷行為、すなわちマウスの傷や咬傷に関連している可能性があります。特に、創傷治癒を妨げる薬物治療は、失敗率を高める可能性がある。開存率を改善するためのトラブルシューティング手順には、静脈に挿入されるカテーテルの長さを長くすること、結紮がカテーテルおよび静脈の周りにしっかりと結び付けられていることを確認すること、および注入中にステップ2.12.10に記載されているように、製造業者の推奨に従って陽圧技術を適用することが含まれる。カテーテル開存性は、さらに、動物の屠殺時に、顕微鏡下での解剖および目視検査によって検証されるべきである。注目すべきは、注射された薬物溶液の1日の量を慎重に考慮する必要があることです。血漿量が血圧を調節するので、注入量はAAA拡張に影響を与える可能性があり、したがって、対照動物はキャリア容積で偽の手順を受ける必要がある。私たちの経験(および未発表の観察結果)に基づいて、1日あたり最大250μLのPBSの許容性は良好であるようです。最後に、ポンプ移植と同様に、移植された血管アクセスボタンの周囲に皮膚刺激が生じ得る。失活組織または壊死組織を伴う炎症が観察される場合、創傷デブリードマンは、生存不能組織を除去することによって実施されるべきであり(壊死組織はしばしば創傷から自然に分離する)、必要に応じて皮膚を縫合すべきである。炎症や壊死が広範囲に及ぶ場合、動物の福祉と人道的なエンドポイントはガイドラインに従って考慮する必要があります。
浸透圧ポンプおよび/またはVASの単一および二重背部移植は、超音波信号を妨げず、超音波ステージ上の適切な位置にマウスを固定することもしなかった。体積測定のために大動脈の3D画像をレンダリングするために12mmを超える157フレームの自動取得は、大動脈が関心領域にわたる干渉から明確であることを確認するだけで済む、簡単で迅速な手順14である。この文脈における1つの落とし穴は、干渉の画像をクリアしようとしている間にトランスデューサに過度の圧力をかけることであり、腹部大動脈の頭蓋端の画像が記録されたときに呼吸数が肋骨の圧迫によって影響を受ける場合、自動測定が中断される可能性がある。直径は、伝統的に、超音波分析を行いながら、オペレータが手動で最大直径の領域を検索することによって、Bモードを使用して取得された画像で測定される。Bモード画像の進歩はEKV画像であり、小さな大動脈運動を解決して、脈動する大動脈の高品質で遅くなった画像を生成することができます。さらに、最大大動脈径は、取得した3Dフレームから決定することができ、157枚の画像は、収縮期に撮影された大動脈の包括的な概要を提供する(設定されたECGトリガーによる)。
結論として、提示されたコンパイルされたプロトコルは、Ang−II誘導AAAのマウスモデルにおける静脈内薬物投与および3D超音波による大動脈サイズモニタリングのための信頼性が高く再現可能なワークフローを提供する。モニタリングと操作の時間点は特定のニーズに合わせて調整することができ、頸静脈カテーテル検査は、静脈注射による特定の物質の送達を必要とする実験セットアップに対して別々に行うことができます。VASは、凝固を防ぐためにカテーテルロック溶液が使用される場合、代わりに反復採血に使用することができる。記載された3D超音波手順は、AAAのエラスターゼまたはCaCl2ベースのマウスモデルにおける急性侮辱時に動脈瘤が発症する腎大動脈を測定するために適合され得る。3D超音波取得は、罹患した大動脈領域および動脈瘤形態の概要を示すという利点を有するが、画像取得はより時間がかかり、したがって、より費用がかかる可能性がある。認識されるべきプロトコルの別の制限は、静脈内注射のために動物を短時間麻酔をかける必要性であるが、腹腔内投与は一般に意識のあるマウスに対して行われる。

腹部大動脈瘤(AAA)は、大動脈壁における炎症性および組織破壊的プロセスによる血管の病理学的拡張であり、最終的に破裂および患者の死につながる可能性がある。外科的AAA修復におけるかなりの成果にもかかわらず、動脈瘤拡張の進行を阻止し、破裂のリスクを潜在的に低下させる保存的薬物治療は、今日まで欠落している。動物モデルは、この疾患の引き金とメディエーターを解明し、治療への新しいアプローチをテストするために開発されました。AAAのマウスモデルは広く適用されており、ヒト組織からのさまざまな観察をカバーしています。それらのパトメカニスティックな違いのために、分子/経路の特定の機能または潜在的な治療薬の有効性を調査するために、しばしば複数のモデルが適用される1,2。AAA誘導の最も一般的に使用されるモデルの中には、アポリポタンパク質E欠損(ApoE KO)マウス3におけるアンジオテンシン−II(Ang−II)投与があり、これは、大動脈壁への急性侮辱からの動脈瘤形成に依存するモデルと比較して、より慢性的な病因を有する4,5。したがって、Ang-IIモデルは疾患の進行をモニタリングするのに特に適しているようであり、代謝および炎症反応に関してヒトAAA疾患によく似ていることが最近示された6。特に、Ang-IIモデルはAAAの発達だけでなく、胸部動脈瘤形成、および壁内血栓形成を伴う大動脈解離も特徴とする。
疾患の開始を予防するのではなく、既に確立されたAAAの進行を標的とすることを目的とした治療は、治療を必要とする既存の状態を有する患者としてより高い翻訳価値を有する可能性がある7,8。同等の実験計画のためには、AAA誘導の前後に大動脈サイズをモニターして疾患発症の閾値を定義し、マウスを治療群に層別化する必要がある。
薬物投与の様式は、それぞれの物質の取り込みおよび安定性に依存する。腹腔内(i.p.)注射は、適用の容易さ、麻酔薬を必要としないこと、および注射量の制約の欠如のために最も頻繁に利用される9。しかし、投与された物質は主に肝門脈循環を介して吸収され、循環に達する前に肝臓代謝を受ける可能性があるため、投与経路を選択する際には薬物動態を考慮する必要があり、初回通過効果に応じて血漿濃度が変化する可能性がある10。静脈内(i.v.)注射は、物質の最高の生物学的利用能をもたらし、反復的なi.v.アクセスの課題は、毎日の投与のためのカテーテルおよび血管アクセスポートの使用によって回避することができる11、12、13。AAA設定に関して、循環中の薬物分布は、定義された濃度での直接動脈瘤曝露を容易にする。
ここでは、浸透圧ポンプの皮下移植を介してAng-IIマウスモデルにAAAを誘導するためのワークフロー、外部頸静脈に挿入されたカテーテルに接続された血管アクセスポートを介した毎日の静脈内薬物治療、ならびに2つの背側インプラントが存在するにもかかわらず3D超音波14 を介して動脈瘤サイズのモニタリングについて記述する。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>4-0 Polysorb sutures</td>
			<td>Covidien</td>
			<td>GL-46-MG</td>
			<td>Braided absorbable suture CV-23 Taper</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-0 Silk sutures</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>639H</td>
			<td>PERMA-HAND Silk</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ALZET 2004 osmotic pumps</td>
			<td>DURECT Corp</td>
			<td>298</td>
			<td>Osmotic mini pumps</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Angiotensin-II</td>
			<td>Bachem</td>
			<td>4006473.0100</td>
			<td>Angiotensin II acetate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aquasonic Clear Ultrasound Transmission Gel</td>
			<td>Parker Labs</td>
			<td>PUSG-0308</td>
			<td>Ultrasound gel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Betadona Wound Spray</td>
			<td>Mundipharma</td>
			<td></td>
			<td>Wound disinfectant spray (povidone-iodine spray)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Betaisodona Solution</td>
			<td>Mundipharma</td>
			<td>15973</td>
			<td>Wound disinfectant solution (povidone-iodine solution)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Catheter for mouse femoral vein/artery</td>
			<td>Instech Laboratories Inc</td>
			<td>C10PU-MFV1301</td>
			<td>1 to 3Fr, 10.5 cm, collar @1.2 cm. Fits 22 G</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hair removal cream</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Handling tool</td>
			<td>Instech Laboratories Inc</td>
			<td>VABMG</td>
			<td>Handling tool for magnetic mouse Vascular Access Buttons</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HYLO NIGHT Eye Oinment</td>
			<td>URSAPHARM</td>
			<td>538922</td>
			<td>Eye lubricant cream</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needles and syringes of various sizes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>1 mL and 5 mL syringes, 27 G and 30 G needles</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Olympus SZ51 Stereo microscope</td>
			<td>Olympus Corporation</td>
			<td></td>
			<td>Dissection and inspection microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PinPort injectors</td>
			<td>Instech Laboratories Inc</td>
			<td>PNP3M-50</td>
			<td>Injector for vascular access button</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protective aluminum cap</td>
			<td>Instech Laboratories Inc</td>
			<td>VABM1C</td>
			<td>Protective aluminum cap for magnetic 1 channel mouse VAB</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Signa Electrode Ultrasound Gel</td>
			<td>Parker Labs</td>
			<td>PE-1560</td>
			<td>Electrode gel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small electric shaver</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surigcal and microsurgical equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suprasorb C</td>
			<td>Lohmann &#38; Rauscher</td>
			<td>20482</td>
			<td>Collagen wound dressing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vascular access button (VAB)</td>
			<td>Instech Laboratories Inc</td>
			<td>VABM1B/22</td>
			<td>Vascular Access Button for mouse, magnetic, 1 channel 22 G, injector</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo 3100 Imaging System</td>
			<td>FUJIFILM VisualSonics Inc</td>
			<td>51073-51</td>
			<td>Ultrasound system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo Lab 5.6.1 software</td>
			<td>FUJIFILM VisualSonics Inc</td>
			<td></td>
			<td>Ultrasound analysis software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo MX550D transducer</td>
			<td>FUJIFILM VisualSonics Inc</td>
			<td></td>
			<td>Linear Array Transducer For Vevo 3100 system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo Mouse Handling Table</td>
			<td>FUJIFILM VisualSonics Inc</td>
			<td>11436</td>
			<td>Mouse heating, mouse core temperature capture and ECG pads for physiological monitoring</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

drug treatment by central venous catheter in a mouse model of angiotensin ii induced abdominal aortic aneurysm and monitoring by 3d ultrasound

腹部大動脈瘤(AAA)の臨床管理には薬学的治療選択肢が欠けているため、動物モデル、特にマウスモデルは、疾患病因の理解を促進し、潜在的な治療標的を同定するために適用される。これらのモデルにおけるAAA増殖をブロックする新規薬物候補物質を試験するには、一般に、実験の時間経過中に薬物投与を繰り返す必要がある。ここでは、AAA誘導、長期治療を容易にするための静脈内カテーテルの挿入、および3D超音波による連続AAAモニタリングのためのコンパイルされたプロトコルについて説明します。動脈瘤は、マウス背部に皮下に移植された浸透圧ミニポンプから28日間にわたってアンジオテンシンII放出によってアポリポタンパク質E(ApoE)欠損マウスにおいて誘導される。続いて、外頸静脈カテーテル検査のための外科的処置が行われ、毎日の静脈内薬物治療または皮下血管アクセスボタンを介した反復採血が可能になる。2つの背側インプラントにもかかわらず、AAA発達のモニタリングは、実験例によって示されるように、大動脈の直径および体積の拡大および動脈瘤形態に関する包括的な情報をもたらす、逐次半自動3D超音波分析によって容易に促進される。

代表的な結果は、ベースライン、8日目、および27日目に超音波によってモニターされた腎上動脈瘤の発症および進行を示す(図1A)。図1Aの27日目大動脈のトリクローム染色(図1B)は、壁郭清および壁内血栓を伴う形成された動脈瘤の形態をさらに示す。大動脈容積(mm3)を12mm14のストレッチにわたって測定し、EKV画像から最大大動脈径を追加的に測定した。ベースラインから8日目までの125%の体積増加の閾値が、初期動脈瘤発症を定義するために設定された。2年間(2020-2021年、n = 157)にわたって収集されたデータに基づいて、このカットオフに従ってAAAを形成できなかった動物はわずか9%でした。しかし、マウスの35%が9日目にカテーテル移植前に大動脈破裂(胸部または腹部)を経験したため、AAA疾患が確立された残りの動物の合計56%が治療群に層別化されることができました(図1C)。注目すべきは、私たちの歴史的なPBSコントロール(n = 21)の中で、動脈瘤はさまざまな程度に発達しました(範囲:128%-314%、8日目のSD大動脈容積増加は199%±55%を意味します)。重要なことに、初期拡張とさらなる疾患進行との間には逆の関係が観察された、すなわち、進行の速い動脈瘤の55%(8日目に>200%の体積成長)は27日目までさらに進行しなかったが、他の動脈瘤の80%(8日目の>125%および<200%の体積成長)は実験の終わりまで拡大し続けた(図1D)。
最近報告された14,17のように、記載された方法は、例えば、確立されたAAAの進行を遮断する際のヒストンシトルリン化阻害剤(GSK484、好中球細胞外トラップ形成の阻害に対する)の治療効果を文書化するために、首尾よく確立され、検証され、および実施されている。ApoE欠損マウスは、皮下移植された浸透圧ポンプにより、28日間にわたってAng-IIを1000ng/kg/minで投与した。動物を、8日目に測定された大動脈容積に基づいてGSK484(0.2μg/g/日)またはPBS処置に1:1で層別化し、9日目に頸静脈カテーテル法処置を受けた。薬物注射は、研究17の終わりまで、マウス体重10μL/gの容量で毎日実施された。図2は、例示的な(n = 2/グループ)超音波結果(絶対および相対体積または直径膨張の経時変化)を示し、GSK484処置がAAA進行を阻害し、動脈瘤が対照マウスにおいて拡大し続けたことを明らかにした。
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64124/64124fig01.jpg"> 図1:3D超音波で検出されたAng-IIマウスモデルにおけるAAA形成と進行 (A)Ang-IIポンプ移植後ベースライン(BL)、8日目(d8)、および27日目(d27)に3D超音波で腎上大動脈をモニターした。体積は、3D再構成画像に基づいて、上腎大動脈の12mmストレッチ(157フレーム)にわたって測定された。最大大動脈径はEKV画像から求めた。(b)マウス屠殺後27日目の大動脈の横切片のトリクローム染色及び臓器採取。大動脈解離の存在はL1/L2(内腔1および内腔2)で示され、壁内血栓は A および Bにおいて*で示される。(C)2年間に亘って収集されたデータセット(n=157)から8日目のAAA(>BLからの大動脈容積増加率)および最初の9日以内(胸部または腹部)の大動脈破裂の発生率。(d)PBS対照処置マウスにおける動脈瘤の初期速期形成(>BLから8日目までの大動脈容積増加>200%)対中程度に成長(<125%および200%大動脈容積増殖)の8日目から27日目までの進行頻度(n=21)。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64124/64124fig01large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64124/64124fig02.jpg"> 図2:血管アクセスボタンを介したGSK484またはPBSの静脈内注射によるAng−IIモデルにおけるAAA進行を遮断するためのヒストンシトルリン化の阻害からの例示的な結果。(B)ベースラインから大動脈容積増加量を算出した(BL=100%)。(C)EKV画像から求めた最大大動脈径。(d)BL. GSK484データから大動脈径成長を計算し、以前に発表された研究から抽出した17。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64124/64124fig02large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>

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Drug Treatment by Central Venous Catheter in a Mouse Model of Angiotensin II Induced Abdominal Aortic Aneurysm and Monitoring by 3D Ultrasound

このプロトコールは、アポリポタンパク質E(ApoE)欠損マウスにおけるアンジオテンシンII放出によって腹部大動脈瘤を誘導するための浸透圧ポンプの連続移植、および反復薬物治療のための頸静脈カテーテルを有する血管アクセスポートの移植を記載する。3D超音波による動脈瘤発達のモニタリングは、背側インプラントにもかかわらず効果的に行われる。

アンジオテンシンII誘発腹部大動脈瘤のマウスモデルにおける中心静脈カテーテルによる薬物治療と3D超音波によるモニタリング

Since pharmaceutical treatment options are lacking in the clinical management of abdominal aortic aneurysm (AAA), animal models, in particular mouse ...

このプロトコルは、確立されたヒト疾患に似た腹部大動脈瘤のマウスモデルと、静脈内カテーテルによる反復治療を組み合わせたものです。動脈瘤の進行を阻止する臨床的必要性に対処するため。このプロトコルは、大動脈瘤の体積と形態の拡大に関する包括的な情報を含む、マウスの動脈瘤の進行を減らすための薬物をテストするための完全なワークフローを提供します。プラス3D超音波。3D超音波は、味覚ベースのマウスモデルで動脈瘤が発生する腎下大動脈を測定するために適合させることができます。頸静脈カテーテル法は、静脈内注射を必要とする任意のセットに利用することができる。12〜14週齢のAPOE欠損メールマウスを麻酔した後、背中の左上の小さな領域を剃り、肩甲骨の上に、10%ポビドンヨード溶液を塗布して剃毛領域を消毒します。背中上部の皮膚を1センチ横切開し、脊髄中央と左肩甲骨線の間にメスを入れます。鉗子で皮膚を持ち上げ、鈍い湾曲したはさみを使用します。左後肢に向かって押して皮下ポケットを作ります。はさみを開き、開いたはさみをカットから引き出してポケットを広げます。ポンプをポケットにそっと挿入し、フローモデレーターを尾に向けて、切開部位から放出されるアンジオテンシン2の潜在的な干渉を最小限に抑えます。次に、4.0吸収性の中断縫合糸で傷を閉じます。血管アクセスシステムを使用する。3つのフランス側を希望の長さに切断し、少なくとも3ミリメートルの重なりで血管アクセスシステムまたはVASの22ゲージの金属コネクタの上にカテーテルを押して、カテーテルを準備します。ポートを保護するために、ボタンにアルミニウムキャップを置きます。麻酔をかけたマウスの腹側の首の右側と背中上部の右側から毛皮を剃ります。次に、ポビドンヨード溶液を塗布して、剃った部分を消毒します。頸静脈の準備のために、右鎖骨の上に首の右側に0.5センチメートルの横方向の超鎖骨皮膚切開を行います。鈍い顕微手術用ピンセットを使用して、結合組織と脂肪を分離し、外頸静脈を露出させます。脂肪中の小さな血管を引き裂かないでください。胸筋に近い5ミリメートルの血管を隔離します。次に、曲げたマイクロピンセットを使用して静脈の下の組織を鈍く解剖し、6.0シルク結紮糸のうち2〜3個を通過します。結紮糸を押し込み、生理食塩水をサイトに追加します。ボタンを埋め込むには、マウスを裏返して腹臥位に置きます。ポビドンヨード溶液を塗布して、剃った部分を消毒します。背中上部に1センチの矢状切開を行い、脊髄中央線と右肩甲骨線の間にメスを入れます。次に、鈍い湾曲したハサミを使用して、鈍い解剖によって切開部位の周りのVASのサイズよりわずかに大きい円形のポケットを作ります。鈍く湾曲したはさみを使用して、はさみをわずかに開いて、首の腹側切開に向かって右肩を頭蓋骨にトンネルします。次に、開いたはさみを引き抜き、さらに押し込まれるときにアクションを繰り返します。トンネルが腹側切開部に到達したら、腹側から背側切開部への外科用クランプを通過します。カテーテルの3つのフレンチエンドをクランプに取り付け、カテーテルをトンネルに通して、腹側頸部切開から外れ、VASが背側切開部に配置されるようにします。次に、VAS外科用フェルト椎間板を背中の切開部に皮下挿入します。ハンドリングツールのフォーク側を使用してカテーテルの開存性チェックを外し、保護アルミニウムキャップを取り外し、磁気端を使用してボタンを保持し、対応するインジェクターに取り付けられた1ミリリットルのシリンジで生理食塩水またはPBSを注入します液体が1つのフレンチエンドから漏れるまで。ポケットのボタンを尾側に押し、VASのフランジの下にあるVAのフェルトディスクの上で皮膚を2つの4つのOH中断された縫合糸で頭蓋で閉じます。静脈カテーテル法の場合は、マウスを仰臥位に戻し、切断面に生理食塩水を一滴加えます。結紮糸を分離し、最初の結紮糸をカテーテルと頸静脈の周りにできるだけ頭蓋的に2〜3ノットで結び、静脈を結紮し、カテーテルを外側に固定します。2番目の結紮糸を胸筋のできるだけ近くに動かします。マイクロハサミを使用して斜めの角度を切り、カテーテルの3〜5ミリメートルが静脈に入るように鋭い端を作成します。次に、生理食塩水で満たされた1ミリリットルの注射器に取り付けられた27ゲージの針を使用して、固定された頭蓋結紮糸を引っ張り、針を静脈と平行に押して、静脈に穴を開けます。次に、固定された頭蓋結紮糸を引っ張り、曲がったピンセットを使用してカテーテルを静脈にスライドさせることで、同様にカテーテルを静脈に挿入します。静脈と揃うまでカテーテルを押します。2番目の結紮糸をカテーテル挿入領域に2〜3ノットで結び、血液漏れがないことを確認します。両方の結紮糸の余分な端をマイクロハサミで切り取り、生理食塩水を一滴加えます。次に、4.0吸収性の中断縫合糸で皮膚を閉じます。前に示したように、マウスに所望の量の阻害剤またはPBS生理食塩水を注射します。シリンジをVASから外している間、プランジャーの正圧を維持します。回復後のマウスを監視します。超音波ソフトウェアを使用して、30DBの画像深度のゲインを9.0ミリメートルに、幅を8.08ミリメートルに設定を調整します。次に、ステージ上の4つの心電図またはECG電極のそれぞれに電気ゲルを滴下し、マウスの四肢をそれらにテープで貼り付けます。温かい超音波ジェルをマウスの腹部に広げ、送信機を下げて腹部に接触させます。大動脈を円形の高速脈動血管として識別します。左腎動脈の位置を特定し、頭蓋骨で最大12ミリメートルの領域を手動で調査して、関心のある領域に干渉がないことを確認します。左腎動脈に戻ります。次に、プローブを動脈から頭蓋上に6ミリメートルに設定します。3D超音波取得の場合、呼吸同期を25%遅延、ウィンドウを50%に設定し、ECGトリガーを50ミリ秒に設定します。3Dオプションから、スキャン距離を11.96ミリメートルに設定し、ステップサイズは0.076ミリメートルに設定します。157フレームを取得したら、画像を保存する前にスクロールして画質を確認します。2D直径取得の場合は、呼吸同期とECGトリガーをオフにし、超腎大動脈の12ミリメートルストレッチで最大の直径を持つ領域を手動で特定します。画面上でBモードを押して、Bモードの画像を取得します。さらに、トランスデューサを動かさずにEKV画像の場合は、同じサイトでシステムの標準設定でEKV画像を取得します。超腎動脈瘤の発症と進行は、ベースライン8日目と27日目に超音波によってモニターされました。27日目の大動脈のトリクローム染色は、壁解離および壁内血栓を伴う形成された動脈瘤の形態を示す。8日目の腹部大動脈瘤またはAAAの発生率および最初の9日以内の大動脈破裂の発生率は、マウスの9%がAAAを形成できなかったことを示した。しかし、マウスの35%がカテーテル移植前に大動脈破裂を経験したため、確立されたAAA疾患を有する残りのマウスの合計56%が治療群への層別化に最小限であった。PBS対照処置マウスにおいて、初期形成の速い動脈瘤と中程度の成長の動脈瘤の初期拡大とさらなる疾患進行との間に逆の関係が観察された。例示的な超音波結果は、GSK 4 84処置がAAA進行を阻害する一方で、動脈瘤がマウスを拡大および制御し続けたことを明らかにした。静脈または血管アクセスボタンからのカテーテルの切断は、動脈瘤部位での未知の薬物濃度で皮下空間への薬物送達をもたらすため、カテーテル開存性が不可欠です。実験の最後にマウスを屠殺すると、水やその他の組織を組織学的に調査し、血液分析を実施して、標的の薬物効果のオンとオフを特徴付けることができます。

Research

JoVE Journal

Medicine

A New Murine Model of Endovascular Aortic Aneurysm Repair

血管内大動脈瘤の修復の新しいマウスモデル

Endovascular aneurysm exclusion is a validated technique to prevent aneurysm rupture. Long-term results highlight technique limitations and new aspects of ...

The Supraclavicular Fossa Ultrasound View for Central Venous Catheter Placement and Catheter Change Over Guidewire

ガイドワイヤ上中心静脈カテーテルの配置およびカテーテルの変更のための鎖骨上窩音波見る

The supraclavicular fossa ultrasound view can be useful for central venous catheter (CVC) placement. Venipuncture of the internal jugular veins (IJV) or ...

Subcutaneous Angiotensin II Infusion using Osmotic Pumps Induces Aortic Aneurysms in Mice

浸透圧を使用して皮下アンジオテンシンII注入は、マウスで誘導大動脈瘤パンプス

Osmotic pumps continuously deliver compounds at a constant rate into small animals.  This article introduces a standard protocol used to induce aortic ...

Reproducible Arterial Denudation Injury by Infrarenal Abdominal Aortic Clamping in a Murine Model

マウスモデルにおける下腹部大動脈クランプすることにより、再現性動脈侵食に起因けが

Percutaneous vascular interventions uniformly result in arterial denudation injuries that subsequently lead to thrombosis and restenosis. These ...

Creation of a Rodent Model of Abdominal Aortic Aneurysm by Blocking Adventitial Vasa Vasorum Perfusion

外ヴァーサ栄養血管の血流をブロックすることにより腹部の大動脈瘤の齧歯動物モデルの作成

The adventitial vasa vasorum (VV) provides oxygen and nourishment to the aortic wall. Hypoxia in the aortic wall can cause enlarged abdominal aortic ...

Quantitative Micro-CT Analysis of Aortopathy in a Mouse Model of &#946;-aminopropionitrile-induced Aortic Aneurysm and Dissection

Quantitative Micro-CT Analysis of Aortopathy in a Mouse Model of ÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â²-aminopropionitrile-induced Aortic Aneurysm and Dissection

Aortopathy β-アミノプロピオニ トリルによる大動脈瘤と解離のマウスモデルでのマイクロ CT 定量分析

Aortic aneurysm and dissection is associated with significant morbidity and mortality in the population and can be highly lethal. While animal models of ...

Ultrasound Imaging of the Thoracic and Abdominal Aorta in Mice to Determine Aneurysm Dimensions

マウス脳動脈瘤のサイズを調べるために胸部、腹部の大動脈の超音波断層像

Contemporary high-resolution ultrasound instruments have sufficient resolution to facilitate the measurement of mouse aortas. These instruments have been ...

A Protocol to Set Up Needle-Free Connector with Positive Displacement on Central Venous Catheter in Intensive Care Unit

集中治療室の中央静脈カテーテルに正の変位を持つ針のないコネクタをセットアップするプロトコル

Needle-free connectors were initially designed and promoted to avoid blood exposure for healthcare workers. Some recent data suggest that the latest ...

Murine Surgical Model of Topical Elastase Induced Descending Thoracic Aortic Aneurysm

局所エラスターゼ誘発下下胸部大動脈瘤のマウス外科モデル

According to the Center for Disease Control, aortic aneurysms (AAs) were considered a leading cause of death in all races and both sexes from 1999-2016. ...

Porcine Model of Infrarenal Abdominal Aortic Aneurysm

尿毛腹部大動脈瘤の豚モデル

Large animal models to study abdominal aortic aneurysms are sparse. The purpose of this model is to create reproducible, clinically significant infrarenal ...