Name: in vitro selection of aptamers to differentiate infectious from non-infectious viruses
Uploaded: 2022-09-07T12:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In Vitro Selection of Aptamers to Differentiate Infectious from Non-Infectious Viruses at JoVE.com

Мы хотели бы поблагодарить г-жу Лауру М. Купер и д-ра Лицзюнь Ронга из Иллинойского университета в Чикаго за предоставление образцов псевдовируса, используемых в этом протоколе (SARS-CoV-2, SARS-CoV-1, H5N1), а также д-ра Альваро Эрнандеса и д-ра Криса Райта из Центра ДНК-услуг Биотехнологического центра Роя Дж. и многие члены группы Lu, которые помогли нам с селекцией in vitro и методами характеристики аптамеров. Эта работа была поддержана грантом RAPID от Национального научного фонда (CBET 20-29215) и начальным грантом от Института устойчивого развития, энергетики и окружающей среды Университета Иллинойса в Урбана-Шампейн и Института Иллинойс-JITRI (JITRI 23965). A.S.P. благодарит Латиноамериканское братство PEW за финансовую поддержку. Мы также благодарим Фонд Роберта А. Уэлча (грант F-0020) за поддержку исследовательской программы группы Лу в Техасском университете в Остине.

1. Приготовление реагентов и буферов
<ol><li>Приготовьте 10x трис-борат ЭДТА (10x TBE), добавив 0,9 М трис-основания, 0,9 М борной кислоты, 20 мМ ЭДТА (динатриевая соль) и деионизированную воду до конечного объема 1 л. Перемешивайте до тех пор, пока все компоненты не растворятся.</li>
	<li>Приготов...

SELEX позволяет не только идентифицировать аптамеры с высоким сродством, в диапазоне pM-nM 22,43,44,45, но и с высокой и перестраиваемой селективностью. Воспользовавшись встречным отбором, можно получить аптамеров со сложной...

Вирусные инфекции оказывают огромное влияние на экономику и общество во всем мире, что становится все более очевидным в связи с недавней пандемией COVID-19. Своевременная и точная диагностика имеет первостепенное значение в лечении вирусных инфекций при предотвращении распространения вирусов среди здоровых людей. Несмотря на то, что было разработано множество методов обнаружения вирусов, таких как ПЦР-тесты1,2 и иммуноанализы3, большинство используемых в настоящее время методов не способны определить, действительно ли обнаруженный вирус заразен или нет. Это связано с тем, что наличие компонентов вируса само по себе, таких как вирусная нуклеиновая кислота или белки, не указывает на присутствие интактного инфекционного вируса, и уровни этих биомаркеров показали плохую корреляцию с инфекционностью 4,5,6. Например, вирусная РНК, обычно используемая для текущих тестов на COVID-19 на основе ПЦР, имеет очень низкие уровни на ранних стадиях инфекции, когда пациент заразен, в то время как уровень РНК часто все еще очень высок, когда пациенты выздоровели от инфекции и больше не заразны 7,8. Вирусный белок или антигенные биомаркеры следуют аналогичной тенденции, но обычно появляются даже позже, чем вирусная РНК, и, таким образом, еще менее прогностируют инфекционность 6,9. Чтобы устранить это ограничение, были разработаны некоторые методы, которые могут информировать о статусе инфекционности вируса, но основаны на методах микробиологии клеточных культур, которые требуют длительного времени (дни или недели) для получения результатов 4,10. Таким образом, разработка новых датчиков, которые могут информировать о заразности клинических образцов или образцов окружающей среды, может избежать задержек в лечении и дальнейшего распространения вируса. Тем не менее, очень немногие методы могут получить чувствительные молекулы, которые могут распознавать интактный инфекционный вирион и отличать его от того же вируса, который был признан незаразным.
В этом контексте аптамеры особенно хорошо подходят в качестве уникального биомолекулярного инструмента11,12,13,14. Аптамеры представляют собой короткие одноцепочечные молекулы ДНК или РНК со специфической нуклеотидной последовательностью, которая позволяет им формировать специфическую 3D-конформацию для распознавания мишени с высоким сродством и селективностью15,16. Они получены с помощью комбинаторного процесса отбора, называемого систематической эволюцией лигандов путем экспоненциального обогащения (SELEX), также известного как отбор in vitro, который проводится в пробирках с большой библиотекой случайной выборки ДНК из 10 14-10 15 последовательностей17,18,19. В каждом раунде этого итеративного процесса пул ДНК сначала подвергается давлению отбора путем инкубации с мишенью в желаемых условиях. Любые последовательности, которые не связаны с целью, затем удаляются, оставляя только те немногие последовательности, которые могут связываться при данных условиях. Наконец, последовательности, которые были выбраны на предыдущем шаге, амплифицироваются с помощью ПЦР, обогащая популяцию пула желаемыми функциональными последовательностями для следующего раунда отбора, и процесс повторяется. Когда активность пула отбора достигает плато (обычно после 8-15 раундов), библиотека анализируется с помощью секвенирования ДНК для выявления выигрышных последовательностей, проявляющих наибольшее сродство.
SELEX обладает уникальными преимуществами, которые могут быть использованы для повышения селективности по отношению к другим аналогичным мишеням 20,21, например, по инфекционному статусу вируса22. Во-первых, для селекции можно использовать широкий спектр различных типов мишеней, от малых молекул и белков до целых патогенов и клеток16. Таким образом, для получения аптамера, который связывается с инфекционным вирусом, в качестве мишени может быть использован интактный вирус вместо вирусного поверхностного белка19. Whole virus SELEX позволяет подбирать аптамеры, которые специфически связываются с нативным состоянием вируса, без необходимости разрушения вируса. Во-вторых, SELEX может быть адаптирован для удаления конкурирующих мишеней 21,23, таких как другие аналогичные вирусы или неинфекционные инактивированные вирусы, с использованием этапов встречного отбора в каждом раунде отбора22. Во время этапов отбора счетчиков пул ДНК подвергается воздействию мишеней, для которых связывание нежелательно, и любые последовательности, которые связываются, отбрасываются.
В этой работе мы приводим протокол, который в целом может быть применен для выбора аптамеров, которые связываются с инфекционным вирусом, но не с тем же вирусом, который был сделан неинфекционным с помощью конкретного метода дезинфекции, или с другими родственными вирусами. Этот метод позволяет получать распознавающие агенты на основе функциональных различий поверхности вируса, которые не нужно знать заранее, и, таким образом, дает дополнительное преимущество для обнаружения вновь появившихся патогенов или для недостаточно изученных заболеваний.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>10% Ammonium persulfate (APS)</td>
			<td>BioRad</td>
			<td>1610700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100% Ethanol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>E7023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1x PBS without calcium &#38; magnesium</td>
			<td>Corning</td>
			<td>21-040-CM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>40% acrylamide/bisacrylamide (29:1) solution</td>
			<td>BioRad</td>
			<td>1610146</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agencourt AMPure XP Beads</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>A63880</td>
			<td>DNA clean-up beads - Section 7.2.2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amicon Ultra-0.5 Centrifugal Filter Unit</td>
			<td>Merck</td>
			<td>UFC501024</td>
			<td>cut-off 10 kDa</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amicon Ultra-0.5 Centrifugal Filter Unit</td>
			<td>Merck</td>
			<td>UFC510024</td>
			<td>cut-off 100 kDa</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Boric Acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>100165</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C1000 Touch Thermal Cycler with Dual 48/48 Fast Reaction Module</td>
			<td>BioRad</td>
			<td>1851148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium Chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C4901</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CFX Connect Real-Time PCR Detection System</td>
			<td>BioRad</td>
			<td>1855201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital Dry Baths/Block Heaters</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>88870001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dynabeads MyOne Streptavidin C1</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>65001</td>
			<td>streptavidin-modified magnetic beads - Section 4.9</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA disodium salt</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>324503</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf Safe-Lock microcentrifuge tubes</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T9661</td>
			<td>1.5 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lenti-X p24 Rapid Titer Kit</td>
			<td>Takara Bio USA, Inc.</td>
			<td>632200</td>
			<td>Lentivirus quantification kit - Section 3.3.2.1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MagJET Separation Rack, 12 x 1.5 mL tube</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>MR02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M8266</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microseal &#39;B&#39; PCR Plate Sealing Film, adhesive, optical</td>
			<td>BioRad</td>
			<td>MSB1001</td>
			<td>non-UV absorbing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mini-PROTEAN Tetra Cell for Ready Gel Precast Gels</td>
			<td>BioRad</td>
			<td>1658004EDU</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mini-PROTEAN Short Plates</td>
			<td>BioRad</td>
			<td>1653308</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mini-PROTEAN Spacer Plates with 0.75 mm Integrated Spacers</td>
			<td>BioRad</td>
			<td>1653310</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Molecular Biology Grade Water</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>51200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multiplate 96-Well PCR Plates, high profile, unskirted, clear</td>
			<td>BioRad</td>
			<td>MLP9611</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nanodrop One</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>ND-ONE-W</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OneTaq DNA Polymerase</td>
			<td>New England BioLab</td>
			<td>M0480S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ovation Ultralow v2 + UDI</td>
			<td>Tecan</td>
			<td>0344NB-A01</td>
			<td>High-troughput sequencing library preparation kit - Section 7.2.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PIPETMAN G (100-1000 &#181;L, 20-200 &#181;L, 2-20 &#181;L and 0.2-2 &#181;L)</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>F144059M, F144058M, F144056M, F144054M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Purifier Logic+ Class II, Type A2 Biosafety Cabinets</td>
			<td>Labconco</td>
			<td>4261</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Qubit dsDNA BR Assay Kit</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>Q32850</td>
			<td>fluorescence-based&#160; dsDNA quantification&#160; kit - Section 7.2.3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SHARP Classic Low Retention Pipet Tips (10 uL, 200 uL, 1000 uL)</td>
			<td>Thomas Scientific</td>
			<td>1158U43, 1159M44, 1158U40</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium acetate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S2889</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S7653</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sorvall Legend Micro 17R Microcentrifuge</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>75002440</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SsoFast EvaGreen Supermix</td>
			<td>BioRad</td>
			<td>1725201</td>
			<td>qPCR mastermix - Section 6.2.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris(hydroxymethyl)aminomethane</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T1503</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tubes and Ultra Clear Caps, strips of 8</td>
			<td>USA scientific</td>
			<td>AB1183</td>
			<td>PCR tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Urea</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>U5128</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vitro selection of aptamers to differentiate infectious from non-infectious viruses

Вирусные инфекции оказывают серьезное влияние на общество; Большинство методов обнаружения испытывают трудности с определением того, является ли обнаруженный вирус заразным, что приводит к задержкам в лечении и дальнейшему распространению вируса. Разработка новых датчиков, которые могут информировать о заразности клинических образцов или образцов окружающей среды, позволит решить эту нерешенную задачу. Однако очень немногие методы могут получить чувствительные молекулы, которые могут распознавать интактный инфекционный вирус и отличать его от того же вируса, который был сделан неинфекционным методами дезинфекции. Здесь мы описываем протокол выбора аптамеров, которые могут различать инфекционные вирусы и неинфекционные вирусы, используя систематическую эволюцию лигандов путем экспоненциального обогащения (SELEX). Мы воспользуемся двумя особенностями SELEX. Во-первых, SELEX может быть адаптирован для удаления конкурирующих целей, таких как неинфекционные вирусы или другие подобные вирусы, с помощью встречного отбора. Кроме того, весь вирус может быть использован в качестве мишени для SELEX вместо, например, вирусного поверхностного белка. Цельный вирус SELEX позволяет подбирать аптамеры, которые связываются конкретно с нативным состоянием вируса, без необходимости разрушения вируса. Таким образом, этот метод позволяет получать агенты распознавания на основе функциональных различий на поверхности патогенов, которые не нужно знать заранее.

Поскольку ДНК-аптамеры могут быть получены с использованием SELEX в пробирке15, эта стратегия SELEX была тщательно разработана, чтобы включить как положительные этапы отбора к интактному, цельному инфекционному вирусу (т.е. сохранить молекулы ДНК, которые связываются с инфекцио...

Watch this Scientific Journal Video about In Vitro Selection of Aptamers to Differentiate Infectious from Non-Infectious Viruses at JoVE.com

In Vitro Selection of Aptamers to Differentiate Infectious from Non-Infectious Viruses

Мы предоставляем протокол, который обычно может применяться к отдельным аптамерам, которые связываются только с инфекционными вирусами, а не с вирусами, которые стали неинфекционными с помощью метода дезинфекции, или с любыми другими подобными вирусами. Это открывает возможность определения инфекционного статуса в портативных и экспресс-тестах.

Отбор аптамеров in vitro для дифференциации инфекционных вирусов от неинфекционных

Virus infections have a major impact on society; most methods of detection have difficulties in determining whether a detected virus is infectious, ...

Этот протокол описывает, как выбрать ДНК-аптамеры, которые могут различать инфекционные вирусы и неинфекционные вирусы, чтобы получить чувствительную молекулу, способную информировать об инфекционности клинических образцов или образцов окружающей среды. Этот метод может быть применен для получения селективных аптамеров для многих других вирусов, включая новые вирусы, поскольку он не требует предварительного знания структур или последовательностей вируса. Этот метод позволяет разрабатывать аптамерные датчики для клинической диагностики и мониторинга окружающей среды инфекционных вирусов, чтобы определить, заразен ли кто-то или метод дезинфекции окружающей среды работает должным образом.Отбор может быть сложным процессом, особенно для тех, кто в нем новичок. Важно оптимизировать условия ПЦР и следить за ходом отбора с помощью кПЦР. Продемонстрировать процедуру будет Маркос Грамахо, аспирант из моей лаборатории.Для начала разработайте исходную одноцепочечную библиотеку или библиотеку SS-ДНК и праймеры. Получение олиго ДНК из коммерческих источников с помощью стандартной обессоливающей очистки. Очистите библиотеку SS-ДНК и праймеры на 10%-ном денатурирующем электрофорезе в полиакриламидном геле с последующим осаждением этанола.Далее получают исходный раствор инфекционных и неинфекционных вирусов или готовят их так, как описано в текстовой рукописи. Для денатурации библиотеки SS-ДНК смешайте 10 микролитров 100-микромолярной библиотеки SS-ДНК с 240 микролитрами буфера SELEX. Нагрейте смесь при температуре 95 градусов Цельсия в течение 15 минут в сухой ванне, затем поместите трубку на лед на 15 минут.Смешайте 250 микролитров библиотеки SS-ДНК в буфере SELEX с 50 микролитрами инфекционного вируса для положительного отбора. Инкубировать в течение двух часов при комнатной температуре. Затем добавьте 400 микролитров одной миллимолярной последовательности T20 в фильтр объемом 0,5 миллилитра, чтобы заблокировать неспецифические участки.Выдерживайте фильтры в течение 30 минут. Центрифугируйте фильтр при 14 000 G в течение 10 минут, чтобы удалить раствор Т20. Затем трижды промойте фильтр буфером SELEX, чтобы удалить излишки последовательностей T20.Затем добавьте смесь инфекционных вирусов библиотеки SS-DNA в заблокированный фильтр мощностью 100 килодальтон и центрифугу для промывки несвязанных последовательностей. Трижды промойте фильтр, добавив 400 микролитров буфера SELEX и центрифугирование. Держите фракцию в фильтре и отбрасывайте проточную.Для элюирования связанных последовательностей замените сборную пробирку центрифужного фильтра и добавьте в фильтр 300 микролитров буфера SELEX, содержащего восемь моляров мочевины. Нагрейте фильтр до 95 градусов Цельсия в течение 15 минут, затем центрифугу для сбора проточного потока, содержащего элюированные последовательности. После этого промойте материалы 10% отбеливателем.Затем добавьте раствор инфекционного вируса SS-ДНК, собранный на предыдущем этапе, в заблокированный фильтр мощностью 10 килодальтон, центрифугу при 14 000 г в течение 15 минут и откажитесь от проточного потока. Трижды промойте фильтр 300 микролитрами буфера SELEX, чтобы удалить мочевину центрифугированием, и выбросьте проточный. Восстановите раствор в фильтре, перевернув его вверх дном в чистой сборной трубке и центрифугируя в течение пяти минут.Измерьте конечный объем восстановленного раствора с помощью пипетки и пометьте его как образец раунда 1А. Возьмите 90% образца раунда 1А в качестве шаблона в первом раунде и запустите ПЦР в оптимизированных условиях. Чтобы восстановить SS-ДНК с использованием магнитных шариков, модифицированных стрептавидином, или МБ, разделите продукт на аликвоты по 50 микролитров и добавьте их в микроцентрифужные пробирки, содержащие 50 микролитров МБ. Инкубируйте пробирку в течение 30 минут при легком перемешивании при комнатной температуре.Затем поместите трубку на магнитную стойку, чтобы изолировать MB и удалить надосадочную жидкость пипеткой. Промойте MB дважды, добавив в тюбик 200 микролитров связующего и промывочного буфера. Затем снимите трубку с магнитной стойки и постучите по ней, прежде чем снова суспендировать MB до однородного раствора путем пипетки.Снова поместите трубку на магнитную стойку и удалите надосадочную жидкость. После второй стирки ресуспендируйте MB в 100 микролитрах буфера SELEX и нагревайте раствор при температуре 95 градусов Цельсия в течение 10 минут. Немедленно поместите пробирку в магнитную стойку и соберите надосадочную жидкость, содержащую пул SS-ДНК.Повторите этот шаг восстановления, добавив 50 микролитров буфера SELEX. Измерьте окончательный объем извлеченной фракции и обозначьте его как Round 1X. Для денатурации пула SS-ДНК возьмите 60% образца Round 1X и смешайте его с 50 микролитрами буфера SELEX.Нагрейте образец в сухой ванне, затем поместите пробирку на лед на 15 минут. Затем смешайте денатурированный пул SS-ДНК в буфере SELEX с 50 микролитрами каждого вируса в качестве этапа контротбора и инкубируйте в течение одного часа при комнатной температуре. После блокировки неспецифических участков в центрифужных фильтрах добавьте смесь денатурированного пула SS-ДНК, инкубированного с вирусным раствором, в заблокированный фильтр мощностью 100 килодальтон.Центрифугируйте фильтр при 14 000 G в течение 10 минут и собирайте проточку. Возьмите 300 микролитров фракции и смешайте с 50 микролитрами инфекционного вируса, содержащего 100 миллионов копий на миллилитр. Инкубировать в течение двух часов при комнатной температуре.Приготовьте стандартную мастер-смесь для кПЦР и разведения очищенной библиотеки SS-ДНК, как описано в тексте. Запустите qPCR, чтобы определить пороговый цикл. После прогона используйте стандартную кривую для количественной оценки количества SS-ДНК в раунде 1A и раунде 1X.Затем рассчитайте выход элюирования как связанное количество ДНК, деленное на исходное количество ДНК, и постройте график зависимости выхода элюирования от круглого числа. Наконец, постройте кривые плавления для разных раундов. Для виртуализации с высокой пропускной способностью выберите подходящий коммерчески доступный комплект.Подготовьте несколько пулов раундов выборки, представляющих высокое, среднее и низкое обогащение, а также окончательный пул, используя разные пары индексов в адаптерах для каждого пула. Затем отправьте подготовленную окончательную библиотеку в центр секвенирования. Для анализа секвенирования последовательности были демультиплексированы средством секвенирования.Удалите адаптеры виртуализации и праймеры выделения с помощью программы командной строки Cutadapt. Затем используйте программу FASTX-Toolkit для удаления некачественных последовательностей. Затем объедините файлы последовательностей в обратном направлении с файлами в прямом направлении с помощью функции дополнения FASTX-Toolkit FASTX_reverse_ в файлах обратного направления.Затем используйте встроенную программу CAT, чтобы объединить файлы в один файл. Используйте набор инструментов анализа FASTAptamer для анализа обогащения последовательностей в различных пулах выборки. Во-первых, чтобы использовать функции FASTAptamer count и FASTAptamer cluster для группировки похожих последовательностей в кластеры.Затем используйте функцию обогащения FASTAptamer для получения информации об обогащении последовательностей и кластеров. Определите последовательности аптамеров-кандидатов на основе информации об обогащении, полученной в результате анализа последовательностей. Выберите несколько последовательностей аптамеров и выполните первоначальный скрининг с помощью анализа связывания.В этом анализе кПЦР использовалась для мониторинга прогресса SELEX инфекционных аптамеров SARS-CoV-2. Выход элюирования первоначально увеличивался с каждым раундом SELEX и выравнивался в восьмом и девятом раундах. Сравнивая кривые плавления, наблюдался сдвиг от пика при высокой температуре плавления от 77 до 79 градусов по Цельсию.Более того, в последних двух раундах наблюдался пик при низкой температуре плавления. Показано относительное количество чтений на миллион для секвенированного SARS2 AR10, полученного в последовательных раундах отбора. Предсказанная структура SARS2 AR10 показала структурированную вторичную структуру, содержащую область стволовой петли, которая может быть вовлечена в распознавание вируса.После того, как аптамеры получены, они могут быть включены в электрические оптики, другой тип датчиков, для разработки портального и быстрого теста на обнаружение вирусов, который может информировать о вирусной заразности. Мы предполагаем, что может быть получен аптамер, специфичный для различных вариантов или стереотипов вируса, что позволит быстро отслеживать варианты, которые представляют наибольшую угрозу для общества.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Visualizing Proteins and Macromolecular Complexes by Negative Stain EM: from Grid Preparation to Image Acquisition

Визуализация белков и макромолекулярных комплексов по Отрицательные пятна EM: от сетки Подготовка к Image Acquisition

Single particle electron microscopy (EM), of both negative stained or frozen hydrated biological samples, has become a versatile tool in structural ...

Design of a Cyclic Pressure Bioreactor for the Ex Vivo Study of Aortic Heart Valves

Design of a Cyclic Pressure Bioreactor for the Ex Vivo Study of Aortic Heart Valves

Дизайн Циклические биореактора давление для Ex Vivo Изучение аортального клапанов сердца

The aortic valve, located between the left ventricle and the aorta, allows for unidirectional blood flow, preventing backflow into the ventricle. Aortic ...

Utilization of Microscale Silicon Cantilevers to Assess Cellular Contractile Function In Vitro

Utilization of Microscale Silicon Cantilevers to Assess Cellular Contractile Function In Vitro

Использование микромасштабных кремниевые зонды для оценки Сотовый сократительной функции<em&gt; In Vitro</em

The development of more predictive and biologically relevant in vitro assays is predicated on the advancement of versatile cell culture systems which ...

Eye Irritation Test (EIT) for Hazard Identification of Eye Irritating Chemicals using Reconstructed Human Cornea-like Epithelial (RhCE) Tissue Model

Eye Irritation Test EIT for Hazard Identification of Eye Irritating Chemicals using Reconstructed Human Cornea-like Epithelial RhCE Tissue Model

Раздражение глаз тест (СПЭ) для идентификации опасности глазных Раздражает химических веществ с использованием реконструированного человеческой роговицы, как Эпителиальный (RHCE) тканей Модель

To comply with the Seventh Amendment to the EU Cosmetics Directive and EU REACH legislation, validated non-animal alternative methods for reliable and ...

Development of an In Vitro Ocular Platform to Test Contact Lenses

Development of an In Vitro Ocular Platform to Test Contact Lenses

Развитие<em&gt; In Vitro</em&gt; Глазной Платформа для тестирования Контактные линзы

Currently, in vitro evaluations of contact lenses (CLs) for drug delivery are typically performed in large volume vials,1-6 which fail to mimic ...

An In Vitro Organ Culture Model of the Murine Intervertebral Disc

An In Vitro Organ Culture Model of the Murine Intervertebral Disc

<em&gt; In Vitro</em&gt; Орган культуры Модель мышиной межпозвонкового диска

Intervertebral disc (IVD) degeneration is a significant contributor to low back pain. The IVD is a fibrocartilaginous joint that serves to transmit and ...

Synthesis of Infectious Bacteriophages in an E. coli-based Cell-free Expression System

Synthesis of Infectious Bacteriophages in an E. coli-based Cell-free Expression System

Синтез инфекционных бактериофагов в E. coli-на основе свободных клеток выражение системы

A new generation of cell-free transcription-translation (TXTL) systems, engineered to have a greater versatility and modularity, provide novel ...

Advanced 3D Liver Models for In vitro Genotoxicity Testing Following Long-Term Nanomaterial Exposure

Расширенные 3D модели печени для тестирования генотоксичности in vitro после долгосрочного воздействия наноматериалов

Due to the rapid development and implementation of a diverse array of engineered nanomaterials (ENM), exposure to ENM is inevitable and the development of ...

Single-Cell Optical Action Potential Measurement in Human Induced Pluripotent Stem Cell-Derived Cardiomyocytes

Измерение потенциала оптического действия одной клетки в кардиомиоцитах, полученных из человеческих плюрипотентных стволовых клеток

Conventional intracellular microelectrode techniques to quantify cardiomyocyte electrophysiology are extremely complex, labor intensive, and typically ...