पॉज़िट्रॉन उत्सर्जन टोमोग्राफी का उपयोग करके एक प्रयोगात्मक ऑटोइम्यून एन्सेफलोमाइलाइटिस माउस मॉडल में इमेजिंग सीडी 19 ⁺ बी कोशिकाएं

यह तकनीक केंद्रीय तंत्रिका तंत्र में बी कोशिकाओं के विवो वितरण और गतिशीलता को स्पष्ट करने के लिए पीईटी इमेजिंग का उपयोग करती है। हमारा दृष्टिकोण न्यूरोलॉजिकल रोगों का अध्ययन करने के लिए फायदेमंद है, जहां प्रभावित रीढ़ की हड्डी विश्लेषण को अधिक चुनौतीपूर्ण बनाती है। तो हमारी तकनीक के कुछ मुख्य फायदे हैं।

सबसे पहले, हमने पैन बी सेल बायोमार्कर को ट्रैक करने के लिए एक नया उपकरण बनाया है जो हमें बी सेल उपसमुच्चय की एक श्रृंखला को पकड़ने और उन्हें विवो में कल्पना करने की अनुमति देता है। दूसरे, हमारी रीढ़ की हड्डी विश्लेषण विधि इस क्षेत्र में पीईटी संकेतों के अत्यधिक सटीक और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य परिमाणीकरण को सक्षम बनाती है। हमारी तकनीक के बारे में महान बात यह है कि यह रोग-अज्ञेयवादी है।

इसका उपयोग किसी भी परिदृश्य में प्रीक्लिनिकल से नैदानिक पीईटी इमेजिंग तक किया जा सकता है, जहां बी कोशिकाएं, और / या रीढ़ की हड्डी रुचि रखते हैं। रेडियोलेबलिंग और एंटीबॉडी को माउस में इंजेक्ट करने के 18 से 24 घंटे बाद, आंखों पर आई जेल लगाकर माउस को स्कैनिंग के लिए तैयार करें। सुनिश्चित करें कि चार-माउस स्कैनिंग बिस्तर 1.5 से 2% तक आइसोफ्लुरेन सेट के साथ एक हीटिंग पैड से लैस है, माउस को स्कैनिंग बेड पर लापरवाह स्थिति में रखें, और रीढ़ को सीधा करने के लिए धीरे से माउस पूंछ खींचें।

एक बार जब माउस लापरवाह स्थिति में होता है, तो सांस लेने से गति को कम करने के लिए सिर और पेट पर नरम माइक्रोस्कोप टेप के साथ इसे सुरक्षित रूप से टेप करें। एक प्रयोगशाला नोटबुक में प्रत्येक माउस के लिए स्कैनिंग स्थिति का रिकॉर्ड बनाएं। पहले समूह को सुरक्षित करने के बाद, बिस्तर बंद करें, और सीटी स्कैन चलाकर बिस्तर प्लेसमेंट की जांच करें।

सीटी सेंटर फील्ड ऑफ व्यू पर क्लिक करें, और एक बार बिस्तर की स्थिति में होने के बाद, प्लेसमेंट सही है यह सुनिश्चित करने के लिए सीटी टेस्ट स्कैन चलाएं। बिस्तर की स्थिति संतोषजनक होने तक दोहराएं। अध्ययन के शेष भाग के लिए सही बिस्तर प्लेसमेंट को चिह्नित करने के लिए स्कैनर बिस्तर पर एक छोटा सफेद टेप रखें।

मोशन कंट्रोलर मेनू खोलें, और चूहों को पीईटी रिंग में ले जाने के लिए पीईटी सेंटर फील्ड ऑफ व्यू पर क्लिक करें। एक बार जब बिस्तर पीईटी रिंग में होता है, तो रन पर क्लिक करके स्कैनिंग अनुक्रम शुरू करें, और स्कैनर के स्वचालित रूप से पीईटी स्कैन को पूरा करने की प्रतीक्षा करें, और सीटी अधिग्रहण के लिए पीईटी रिंग से सीटी में जाएं। चूंकि प्रयोगात्मक ऑटोइम्यून एन्सेफलोमाइलाइटिस, या ईएई, चूहों ने रोग की प्रगति के कारण रीढ़ की वक्रता का उच्चारण किया है, उनकी पीठ पर उन्हें स्कैन करने से रीढ़ को सीधा करने में मदद मिलती है।

जानवर के पृष्ठीय पक्ष के नीचे एक चीरा लगाएं, और रीढ़ की हड्डी के स्तंभ को उजागर करने के लिए त्वचा और फर को हटा दें। गर्दन पर रीढ़ की हड्डी के स्तंभ के माध्यम से तीन अनुप्रस्थ विमानों के साथ काटें, सीधे पसली पिंजरे के नीचे, और श्रोणि के शीर्ष पर काठ को ग्रीवा और वक्ष क्षेत्रों से अलग करने के लिए। दो टुकड़े, काठ और ग्रीवा वक्ष प्राप्त करने के लिए खंडित रीढ़ की हड्डी के स्तंभ को सावधानीपूर्वक हटा दें।

फिर रीढ़ की हड्डी के स्तंभ को श्रोणि छोर से सावधानीपूर्वक ट्रिम करके काठ की रीढ़ की हड्डी के स्तंभ को अलग करें जब तक कि काठ की रीढ़ की हड्डी दिखाई न दे। काठ की रीढ़ की हड्डी को निष्कासित करने के लिए, पीबीएस से भरे स्लिप-टिप सिरिंज का उपयोग करें और अंगूठे और फोरफिंगर का उपयोग करके सिरिंज और रीढ़ की हड्डी के स्तंभ के बीच एक सील बनाएं। रीढ़ की हड्डी को एक शोषक पैड पर निष्कासित करने के लिए धीरे से पीबीएस को सिरिंज के माध्यम से धक्का दें, और ग्रीवा की तरफ से सिरिंज डालकर ग्रीवा वक्ष रीढ़ की हड्डी के लिए दोहराएं।

रीढ़ की हड्डी के ऊतकों को गामा गिनती ट्यूब में रखें। सूखे वजन को रिकॉर्ड करें, और यह सुनिश्चित करने के लिए पीबीएस जोड़ें कि ऊतक सूखने से बचने के लिए ट्यूब के निचले हिस्से में है। गिनती के लिए तैयार होने तक ट्यूब को बर्फ पर रखें।

रीढ़ की हड्डी में रुचि के क्षेत्रों का विश्लेषण शुरू करने के लिए, नेविगेशन मेनू से 3 डी रीजन ऑफ इंटरेस्ट टूल खोलें। रुचि के क्षेत्र हेडर के तहत, रुचि के छह क्षेत्र, रुचि के काठ क्षेत्र, रुचि के ग्रीवा वक्ष क्षेत्र, काठ के कंकाल, वक्ष कंकाल, काठ की रीढ़ की हड्डी, वक्ष रीढ़ की हड्डी बनाने के लिए मेनू के निचले भाग में प्लस चिह्न का उपयोग करें। पीईटी सिग्नल से दृश्य हस्तक्षेप से बचने के लिए, पीईटी को बंद करने के लिए एफ 3 पर क्लिक करें।

इंटरेस्ट टूल ऑपरेटर के 3 डी क्षेत्र के शीर्ष पर जाएं, और 3 डी पेंट मोड, और इरोड / पतला मेनू खोलने के लिए कर्सर प्रतीक के दाईं ओर ठोस बिंदु पर क्लिक करें। गोले का चयन करें, और आकार को 20 पिक्सेल में बदलें। इसी तरह, प्लस पांच पर पतला सेट करें।

आगे बढ़ने से पहले, मेनू के निचले भाग पर जाएं, और सुनिश्चित करें कि रुचि के काठ क्षेत्र का चयन किया गया है। सीटी पर, रीढ़ की हड्डी के स्तंभ के एल 6 कशेरुक का पता लगाएं। एल 6 से ऊपर एक कशेरुका से शुरू करते हुए, कूल्हों के ऊपर पांच कशेरुकाओं पर रुचि का एक मोटा काठ क्षेत्र खींचें।

फिर रुचि के ग्रीवा वक्ष क्षेत्र पर स्विच करें, और खोपड़ी के आधार पर रीढ़ के शेष हिस्से का पता लगाएं। रुचि के सामान्यीकृत क्षेत्रों को खींचने के बाद, ऑपरेटर के शीर्ष पर जाएं, और विभाजन एल्गोरिदम मेनू का चयन करें। ड्रॉपडाउन मेनू से, ओत्सु थ्रेशोल्डिंग का चयन करें, फिर इनपुट के लिए रुचि के काठ के क्षेत्र का चयन करें, और सुनिश्चित करें कि मेनू के निचले भाग में काठ का कंकाल चुना गया है।

छवि के बगल में ड्रॉपडाउन मेनू में, सुनिश्चित करें कि सीटी स्कैन का चयन किया गया है, जिसे यहां संख्या शून्य द्वारा इंगित किया गया है। लागू करें पर क्लिक करें, और ग्रीवा वक्ष क्षेत्र और वक्ष कंकाल के लिए प्रक्रिया दोहराएं। रुचि के कंकाल क्षेत्रों को बनाने के लिए ओत्सु थ्रेशोल्डिंग का उपयोग करने के बाद, नेविगेशन मेनू पर लौटें, और रुचि के क्षेत्र को हटा दें, या उन्हें छिपाने के लिए रुचि के मोटे काठ और ग्रीवा वक्ष क्षेत्रों दोनों के लिए एच कॉलम की जांच करें।

रुचि के दोनों कंकाल क्षेत्रों के लिए I स्तंभ को चिह्नित करें, इसलिए उन्हें संपादित नहीं किया जा सकता है। अंत में, रुचि उपकरण ऑपरेटर के 3 डी क्षेत्र के शीर्ष पर लौटें, और रुचि के रीढ़ की हड्डी के क्षेत्रों को आकर्षित करने के लिए 3 डी पेंट मेनू पर जाएं। फिर से क्षेत्र उपकरण का चयन करें, और काठ और वक्ष दोनों के लिए कंकाल के भीतर रीढ़ की हड्डी का पता लगाएं, यह सुनिश्चित करते हुए कि मेनू के निचले भाग में रुचि का सही क्षेत्र चुना गया है।

रुचि के किसी भी क्षेत्र को मिटाने के लिए, कमांड / कंट्रोल पर क्लिक करें और मिटाए जाने वाले हिस्से पर आकर्षित करें। सभी तीन विमानों से रुचि के रीढ़ की हड्डी क्षेत्र की जांच करें ताकि यह सुनिश्चित हो सके कि रीढ़ की हड्डी के स्तंभ के बाहर रुचि का कोई क्षेत्र नहीं खींचा गया है। यदि पीईटी सिग्नल बंद कर दिया गया था, तो पीईटी को वापस चालू करने के लिए रीढ़ की हड्डी के क्षेत्रों को खींचने के बाद एफ 3 दबाएं, या दृश्य नियंत्रक का चयन करें, और पीईटी बार पर क्लिक करें।

नेविगेशन मेनू पर वापस जाएँ. तालिका दिखाने के लिए ग्रिड आइकन पर क्लिक करें। तालिका को स्प्रेडशीट सॉफ़्टवेयर में कॉपी करें, और फ़ाइल सहेजें।

पीईटी इमेजिंग ने भोले चूहों की तुलना में ईएई चूहों के मस्तिष्क और वक्ष रीढ़ की हड्डी में ऊंचा रेडियोट्रैसर बाइंडिंग का पता लगाया। एक्स विवो गामा गिनती ने काठ और ग्रीवा वक्ष रीढ़ की हड्डी के खंडों और भोले की तुलना में ईएई चूहों के मस्तिष्क दोनों में बंधन में वृद्धि देखी। पूर्व विवो ऑटोरेडियोग्राफी छवियों ने भोले चूहों की तुलना में ईएई चूहों के मस्तिष्क, सेरिबैलम और वेंट्रिकल्स में विशेष रूप से मस्तिष्क वर्गों में रेडियोट्रैसर बाइंडिंग में वृद्धि देखी।

इसी तरह, भोले रीढ़ की हड्डी की तुलना में ईएई चूहों के ग्रीवा वक्ष और काठ रीढ़ की हड्डी दोनों खंडों में एक बढ़ी हुई रेडियोट्रैसर बाइंडिंग देखी गई। पीईटी इमेजिंग और गामा गिनती के बाद, हम आणविक जीव विज्ञान तकनीकों, जैसे फ्लो साइटोमेट्री और इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री के माध्यम से पीईटी सिग्नल और रुचि के लक्ष्य के बीच संबंधों की जांच कर सकते हैं। हमारी तकनीक ने शोधकर्ताओं के लिए स्ट्रोक, मल्टीपल स्केलेरोसिस, अन्य ऑटोइम्यून बीमारियों और कैंसर सहित कई रोग क्षेत्रों में बी कोशिकाओं की भूमिका के बारे में सवाल पूछने का मार्ग प्रशस्त किया है।