Name: phospholipid mediator induced transformation in three-dimensional cultures
Uploaded: 2022-07-27T14:20:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Phospholipid Mediator Induced Transformation in Three-Dimensional Cultures at JoVE.com

We bedanken de IISER Pune Microscopy Facility voor de toegang tot apparatuur en infrastructuur en ondersteuning voor de experimenten. Deze studie werd ondersteund door een subsidie van het Department of Biotechnology (DBT), Govt. of India (BT/PR8699/MED/30/1018/2013), Science and Engineering Research Board (SERB), Govt. of India (EMR/2016/001974) en deels door IISER, Pune Core funding. A. K. werd gefinancierd door CSIR-SRF fellowship, L.A. werd gefinancierd door DST-INSPIRE fellowship, V.C werd gefinancierd door DBT (BT/PR8699/MED/30/1018/2013).

1. Zaaien van MCF10A-cellen in lrECM
<ol><li>Onderhoud MCF10A-cellen (aanhangende borstepitheelcellen) in het groeimedium. Passeer de cellen om de 4 dagen. OPMERKING: Samenstelling van groeimedium: hoge glucose DMEM zonder natriumpyruvaat dat paardenserum bevat (5%), insuline (10 μg / ml), hydrocortison (0,5 μg / ml), epidermale groeifactor, EGF (20 ng / ml), van choleratoxine (100 ng / ml) en penicilline-streptomycine (100 eenheden / ml) (zie materiaaltabel).</li>
	<li>Ontdooi lr...

Gevestigde op cellijn gebaseerde modellen worden veel gebruikt om het proces van carcinogenese te bestuderen. Monolaagculturen van cellen blijven inzicht geven in de verschillende moleculaire signaalroutes die karakteristieke veranderingen in kankercellen bemiddelen32. Studies naar de rol van bekende oncogenen zoals Ras, Myc en gemuteerde p53 werden voor het eerst gerapporteerd met behulp van monolaagculturen als het modelsysteem 33,34,35,36.</s...

Een groot aantal modellen zijn beschikbaar om de progressie van kanker te bestuderen, elk van hen is uniek en vertegenwoordigt een subtype van deze complexe ziekte. Elk model biedt unieke en waardevolle inzichten in de biologie van kanker en heeft de middelen verbeterd om de werkelijke ziektetoestand na te bootsen. Gevestigde cellijnen die als monolaag zijn gegroeid, hebben waardevolle inzichten opgeleverd in vitale processen in vitro, zoals proliferatie, invasiviteit, migratie en apoptose1. Hoewel tweedimensionale (2D) celcultuur het traditionele hulpmiddel is geweest om de reactie van zoogdiercellen op verschillende omgevingsverstoringen te onderzoeken, lijkt extrapolatie van deze bevindingen om reacties op weefselniveau te voorspellen niet overtuigend genoeg. De belangrijkste beperking van de 2D-culturen is dat de gecreëerde micro-omgeving grotendeels verschilt van die van het borstweefsel zelf2. 2D-cultuur mist de interactie van de cellen met de extracellulaire matrix, die van vitaal belang is voor de groei van elk weefsel. Ook belemmeren trekkrachten die de cel in monolaagculturen ervaart de polariteit van deze cellen, waardoor de celsignalering en het gedrag veranderen 3,4,5. Driedimensionale (3D) kweeksystemen hebben een nieuwe weg geopend op het gebied van kankeronderzoek met hun vermogen om de in vivo omstandigheden in vitro na te bootsen. Veel cruciale micro-omgevingssignalen die verloren gaan in 2D-celcultuur kunnen worden hersteld met behulp van 3D-culturen van lamininerijke extracellulaire matrix (lrECM)6.
Verschillende studies hebben het belang van de tumor micro-omgeving in carcinogenese geïdentificeerd 7,8. Ontstekingsgerelateerde factoren zijn een belangrijk onderdeel van de micro-omgeving. Platelet Activating Factor (PAF) is een fosfolipidemediator die wordt uitgescheiden door verschillende immuuncellen en die meerdere immuunresponsen bemiddelt 9,10. Hoge niveaus van PAF worden uitgescheiden door verschillende borstkankercellijnen en worden geassocieerd met verhoogde proliferatie11. Studies van ons laboratorium hebben aangetoond dat de langdurige aanwezigheid van PAF in acinaire culturen leidt tot de transformatie van borstepitheelcellen12. PAF activeert de PAF-receptor (PAFR) en activeert de PI3K/Akt-signaleringsas13. PAFR wordt ook geassocieerd met EMT, invasie en metastase14.
Het huidige protocol demonstreert een modelsysteem om PAF-geïnduceerde transformatie te bestuderen, met behulp van 3D-culturen van borstepitheelcellen, zoals eerder is beschreven door Chakravarty et al.12. De borstepitheelcellen die op de extracellulaire matrix (3D-culturen) zijn gegroeid, hebben de neiging om gepolariseerde groei-arresteerde sferoïden te vormen. Deze worden acini genoemd en lijken sterk op de acini van borstweefsel, de kleinste functionele eenheid van de borstklier, in vivo15. Deze sferoïden (figuur 1A,B) bestaan uit een monolaag van dicht opeengepakte gepolariseerde epitheelcellen rond een hol lumen en bevestigd aan het keldermembraan (figuur 1C). Dit proces van morfogenese is goed beschreven in literatuur16. Wanneer ze op lrECM worden gezaaid, ondergaan de cellen deling en differentiatie om een cluster van cellen te vormen, die vervolgens vanaf dag 4 polariseren. Op dag 8 bestaan de acini uit een groep gepolariseerde cellen die in direct contact staan met de extracellulaire matrix en een cluster van niet-gepolariseerde cellen ingesloten in de buitenste gepolariseerde cellen, zonder contact met de matrix. Van deze niet-gepolariseerde cellen is bekend dat ze op dag 12 van de cultuur apoptose ondergaan en een hol lumen vormen. Op dag 16 worden groei-arresteerde structuren gevormd16.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64146/64146fig01.jpg"> Figuur 1: Kernen van cellen in acini gekleurd met een kernvlek. (A) 3D-constructie van de acini. (B) Fasecontrastbeeld van MCF10A acini gekweekt op Matrigel gedurende 20 dagen. (C) Het middelste gedeelte toont de aanwezigheid van een hol lumen. Schaalbalk = 20 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64146/64146fig01large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van dit cijfer te bekijken.</a>
In tegenstelling tot 2D-culturen helpen acinarculturen bij het onderscheiden van normale en getransformeerde cellen door middel van schijnbare morfologische veranderingen. Niet-getransformeerde borstepitheelcellen vormen acini met een hol lumen, dat de normale menselijke borst acini nabootst. Deze sferoïden vertonen bij transformatie een verstoorde morfologie die wordt gekenmerkt door een groot verlies van polariteit (een van de kenmerken van kanker), afwezigheid van een lumen of verstoring van het holle lumen (als gevolg van ontwijking van apoptose) die kan worden geïnduceerd als gevolg van deregulatie van verschillende genen 17,18,19,20 . Deze transformaties kunnen worden bestudeerd met behulp van veelgebruikte technieken zoals immunofluorescentie. Het 3D-celkweekmodel kan dus functioneren als een eenvoudige methode om het proces van borstacinaire morfogenese en carcinogenese van de borst te onderzoeken. Het opzetten van een 3D-kweeksysteem om het effect van een fosfolipidemediator, PAF, te begrijpen, zal helpen bij preklinische geneesmiddelenscreening met hoge doorvoer.
Dit werk heeft het 3D 'on top' cultuurprotocol16,21 aangepast voor het bestuderen van transformatie geïnduceerd door PAF22. De fenotypische veranderingen veroorzaakt door blootstelling van de acini aan de fosfolipide mediator werden bestudeerd met behulp van immunofluorescentie. Verschillende polariteit en epitheliale naar mesenchymale overgang (EMT) markers12,16 werden gebruikt in de studie. Tabel 1 vermeldt hun normale lokalisatie en hun verwachte fenotype bij transformatie.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>Antilichamen</td>
			<td>Merken</td>
			<td>Normale lokalisatie</td>
			<td>Getransformeerd fenotype</td>
		</tr><tr><td>α6-Integrin</td>
			<td>Basolateraal</td>
			<td>Basaal met zwakke laterale vlek</td>
			<td>Sterke laterale / apicale vlek</td>
		</tr><tr><td>β-Catenin</td>
			<td>Cel-cel junctie</td>
			<td>Basolateraal</td>
			<td>Abnormale / nucleaire of cytoplasmatische lokalisatie</td>
		</tr><tr><td>Vimentin</td>
			<td>Emt</td>
			<td>Afwezige / zwakke aanwezigheid</td>
			<td>Up-regulering</td>
		</tr></tbody></table>Tabel 1: Markers gebruikt in het onderzoek. Verschillende markers gebruikt met hun lokalisatie in de aan- en afwezigheid van PAF-behandeling.
Deze methode kan het best worden gebruikt om plausibele geneesmiddelen en doelgenen voor verschillende subtypen borstkanker te bestuderen / screenen. Dit kan een geneesmiddelresponsgegevens opleveren die dichter bij het in vivo scenario liggen, wat helpt bij een snellere en betrouwbaardere ontwikkeling van geneesmiddelen. Dit systeem kan ook worden gebruikt om de moleculaire signalering te bestuderen die verband houdt met medicijnrespons en medicijnresistentie.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.05% Trypsin EDTA</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>25300062</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>16% paraformaldehyde</td>
			<td>Alfa Aesar</td>
			<td>AA433689M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti Mouse Alexa Flour 488</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A11029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti Rabbit Alexa Flour 488</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A-11008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A7030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chamber Coverglass</td>
			<td>Nunc</td>
			<td>155409</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cholera Toxin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C8052-1MG</td>
			<td>1 mg/mL in dH2O</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal Microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>Leica SP8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11965126</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>E6758</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EGF</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>E9644-0.2MG</td>
			<td>100 mg/mL in dH2O</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>F(ab&#8217;)2 fragment of antibody raised in goat against mouse antigen</td>
			<td>Jackson Immunoresearch</td>
			<td>115-006-006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GM130 antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab52649</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat Serum</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab7481</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hoechst</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>33258</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Horse Serum</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>16050122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrocortisone</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>H0888</td>
			<td>1 mg/mL in ethanol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Image Processing Software</td>
			<td>ImageJ</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>I1882</td>
			<td>10 mg/mL stock dH2O</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>lrECM (Matrigel)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>356231</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mounting reagent (Slow fade Gold Anti-fade)</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>S36937</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nuclear Stain&#160; (Hoechst)</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>33258</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PAF</td>
			<td>Cayman Chemicals</td>
			<td>91575-58-5</td>
			<td>Methylcarbamyl PAF C-16, procured as a 10 mg/mL in ethanol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>17-602E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Azide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S2002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris Base</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>B9754</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T8787</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween 20</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P9416</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vimentin antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab92547</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#945;6-integrin antibody</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>MAB1378</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

phospholipid mediator induced transformation in three-dimensional cultures

Er zijn verschillende modellen ontwikkeld om kanker te bestuderen, zoals knaagdiermodellen en gevestigde cellijnen. Waardevolle inzichten in carcinogenese zijn verkregen door studies met behulp van deze modellen. Cellijnen hebben inzicht gegeven in de deregulering van moleculaire signalering geassocieerd met borsttumorigenese, terwijl knaagdiermodellen op grote schaal worden gebruikt om cellulaire en moleculaire kenmerken van borstkanker in vivo te bestuderen. De oprichting van 3D-culturen van borstepitheel- en kankercellen helpt bij het overbruggen van de kloof tussen in vivo en in vitro modellen door de in vivo omstandigheden in vitro na te bootsen. Dit model kan worden gebruikt om de deregulering van complexe moleculaire signaleringsgebeurtenissen en de cellulaire kenmerken tijdens de carcinogenese van de borst te begrijpen. Hier wordt een 3D-kweeksysteem aangepast om een door fosfolipide mediator geïnduceerde (Platelet Activating Factor, PAF) transformatie te bestuderen. Immunomodulatoren en andere uitgescheiden moleculen spelen een belangrijke rol bij tumorinitiatie en progressie in de borst. In de huidige studie worden 3D-acinaire culturen van borstepitheelcellen blootgesteld aan PAF vertoonde transformatiekenmerken zoals verlies van polariteit en veranderde cellulaire kenmerken. Dit 3D-kweeksysteem zal helpen bij het werpen van licht op genetische en / of epigenetische verstoringen geïnduceerd door verschillende kleine molecuulentiteiten in de micro-omgeving van de tumor. Bovendien zal dit systeem ook een platform bieden voor de identificatie van zowel nieuwe als bekende genen die betrokken kunnen zijn bij het transformatieproces.

MCF10A-cellen vormen bij blootstelling aan PAF-behandeling acinaire structuren met zeer verschillende fenotypen. α6-integrine bleek verkeerd gelokaliseerd te zijn met meer apicale kleuring. Enkele acini vertoonden ook discontinue kleuring (figuur 2A). Beide fenotypen wijzen op het verlies van basale polariteit, zoals blijkt uit literatuur24,25. Eerdere rapporten wijzen op de controversiële rol van α6-integrine bij kankermetastase....

Watch this Scientific Journal Video about Phospholipid Mediator Induced Transformation in Three-Dimensional Cultures at JoVE.com

Phospholipid Mediator Induced Transformation in Three-Dimensional Cultures

Het huidige protocol beschrijft het opzetten van 3D 'bovenop' culturen van een niet-getransformeerde borstepitheelcellijn, MCF10A, die is aangepast om door Bloedplaatjes Activerende Factor (PAF) geïnduceerde transformatie te bestuderen. Immunofluorescentie is gebruikt om de transformatie te beoordelen en wordt in detail besproken.

Fosfolipide mediator geïnduceerde transformatie in driedimensionale culturen

Several models have been developed to study cancer, such as rodent models and established cell lines. Valuable insights into carcinogenesis have been ...

Onze gemodificeerde 3D-testculturen kunnen worden gebruikt om de rol van verschillende componenten in een micro-omgeving van kanker te onderzoeken, wat leidt tot de identificatie van nieuwe biomarkers en medicijndoelen. Deze methode stelt iemand in staat om veranderingen in het cellulaire fenotype en moleculaire signalering te bestuderen die sterk lijken op het immuunsysteem. Het kan ook worden aangepast om te voldoen aan specifieke vereisten van een studie.Deze methode kan helpen bij het identificeren van nieuwe biomarkers die kunnen helpen bij het vroegtijdig opsporen van borstkanker. Ook kunnen moleculaire inzichten worden gebruikt voor het identificeren van nieuwe medicijndoelen. Deze methode kan worden gebruikt om zowel tumorigenese als morfogenese na verstoring van gen of genen te bestuderen die inzicht kunnen geven in de rol van het gen of de genen.Om te beginnen, trypsinize de cellen door het medium aan te zuigen en te wassen met 2 milliliter PBS. Voeg 900 microliter 0,05% Trypsine-EDTA toe en incubeer bij 37 graden Celsius gedurende ongeveer 15 minuten of totdat de cellen volledig trypsinized zijn. Bereid een bed lrECM voor in acht putten van een glazen schuif met kamer door elke put te coaten met 60 microliter lrECM.Plaats het in een kooldioxide-incubator van 37 graden Celsius gedurende maximaal 15 minuten. Om de celsuspensie voor te bereiden, voegt u 5 milliliter re-suspensiemedium toe om de trypsine-activiteit te doven en de cellen gedurende 10 minuten op 25 graden Celsius op 112 keer g te laten draaien. Aspirateer het gebruikte medium en suspensieer de cellen opnieuw in 2 milliliter assay medium.Meng de suspensie goed om de vorming van een eencellige suspensie te garanderen. Tel de cellen met behulp van een hemocytometer en bereken het volume van de celsuspensie dat nodig is om 6.000 cellen in elke put te zaaien. Afhankelijk van het aantal benodigde putten, verdunt u de celsuspensie in het overlay-medium.Voeg 400 microliter van de verdunde celsuspensie toe aan de voorbereide lrECM-bedden en zorg er zorgvuldig voor dat het lrECM-bed niet wordt verstoord. Incubeer bij 37 graden Celsius in een bevochtigde 5% kooldioxide-incubator. Voeg na 3 uur 200 nanomol PAF toe aan elk putje.Voeg dezelfde concentratie PAF toe tijdens elke mediaverandering en vul de cellen elke 4 dagen aan met vers medium. Na 20 dagen kweken, pipetteer voorzichtig het medium uit elke put en was de putten met 400 microliter voorverwarmde PBS. Fixeer de acinarstructuren door 400 microliter vers bereide 4% paraformaldehyde toe te voegen en gedurende 20 minuten bij kamertemperatuur te broeden.Spoel de putjes eenmaal af met ijskoude PBS en permeabiliseer met PBS met 0,5% Triton X-100 gedurende 10 minuten bij 4 graden Celsius. Pipetteer na 10 minuten de Triton X-100-oplossing zorgvuldig en spoel af met 400 microliter vers bereide PBS-glycine. Voeg 400 microliter van de primaire blokoplossing bestaande uit 10% geitenserum toe aan immunofluorescentiebuffer en incubeer gedurende 60 minuten bij kamertemperatuur.Verwijder de primaire blokkeringsoplossing, voeg 200 microliter 2% secundair blokkerend antilichaam toe dat in de primaire blokkerende oplossing is bereid en laat het 45 tot 60 minuten op kamertemperatuur staan. Bereid het primaire antilichaam in een 1:100 verdunning in een secundair blokkerende antilichaamoplossing met 2%. Verwijder de secundaire blokkeeroplossing, voeg het vers bereide antilichaam toe en incubeer een nacht bij 4 graden Celsius.Pipetteer voorzichtig de primaire antilichaamoplossing en was deze driemaal met 400 microliter immunofluorescentiebuffer. Bereid vervolgens een 1:200 verdunning van het fluorofoor-geconjugeerde secundaire antilichaam in de primaire blokkerende oplossing en incubeer de dia's in de secundaire antilichaamoplossing gedurende 40 tot 60 minuten bij kamertemperatuur. Spoel de dia's gedurende 20 minuten met 400 microliter immunofluorescentiebuffer, gevolgd door twee wasbeurten met PBS gedurende elk 10 minuten.Bevlek de kernen met PBS met 0,5 nanogram per milliliter kernvlek gedurende 5 tot 6 minuten bij kamertemperatuur. Was de dia's driemaal met 400 microliter PBS om de overtollige vlek te verwijderen. Pipetteer voorzichtig de gehele PBS en zorg voor verwijdering van de restoplossing.Voeg vervolgens een druppel montagereagens toe aan elke put en laat het een nacht op kamertemperatuur staan. Ten slotte, beeld de dia's onder 40x of 63x vergroting op een confocale microscoop, waarbij optische Z-secties van 0,6 millimeter stapgrootte worden genomen. De afbeeldingen stellen de kernen van cellen in acini gekleurd met een nucleaire vlek voor.De 3D-constructie van de acini en het fasecontrastbeeld van MCF10A acini gekweekt op lrECM gedurende 20 dagen worden hier getoond. Het middelste gedeelte toont de aanwezigheid van een hol lumen. PAF verstoort de polariteit en induceert EMT-achtige veranderingen in MCF10A borst-acini.MCF10A-cellen werden gekweekt als 3D-on-topculturen in lrECM. De culturen werden behandeld met PAF op dag 0, 4, 8, 12 en 16. De culturen werden gedurende 20 dagen gehandhaafd en vervolgens immunostained voor alfa6-integrine en nucleaire kleuring, GM130, een marker voor apicale polariteit, en Vimentin, een EMT-marker.De middelste stapel van de respectievelijke acini is hier getoond. De representatieve gegevens zijn voor 40-50 acini uit drie biologisch onafhankelijke experimenten. Het lrECM-bed moet zorgvuldig zo worden gemaakt dat het gelijkmatig wordt verdeeld zonder luchtbellen.Ook moet de celsuspensie gelijkmatig worden gemengd en langzaam worden toegevoegd om klonteren te voorkomen. Men kan eiwit en RNA verkrijgen uit de 3D-culturen die vervolgens kunnen worden gebruikt om de verschillende moleculaire routes te onderzoeken.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Moving Upwards: A Simple and Flexible In Vitro Three-dimensional Invasion Assay Protocol

Moving Upwards: A Simple and Flexible In Vitro Three-dimensional Invasion Assay Protocol

Verplaatsen naar boven: Een eenvoudig en flexibel In Vitro driedimensionale invasie Assay Protocol

Although 3D invasion assays have been developed, the challenge remains to study cells without affecting the integrity of their microenvironment. ...

Generation of High-Throughput Three-Dimensional Tumor Spheroids for Drug Screening

Generatie van High-Throughput driedimensionale Tumor spheroïden voor Drug Screening

Cancer cells have routinely been cultured in two dimensions (2D) on a plastic surface. This technique, however, lacks the true environment a tumor mass is ...

A Three-dimensional Thymic Culture System to Generate Murine Induced Pluripotent Stem Cell-derived Tumor Antigen-specific Thymic Emigrants

Een driedimensionaal Thymic cultuur systeem voor het genereren van Murine geïnduceerde pluripotente stamcel afkomstige tumor antigen-specifieke Thymic emigranten

The inheritance of pre-rearranged T cell receptors (TCRs) and their epigenetic rejuvenation make induced pluripotent stem cell (iPSC)-derived T cells a ...

Longitudinal Morphological and Physiological Monitoring of Three-dimensional Tumor Spheroids Using Optical Coherence Tomography

Longitudinale morfologische en fysiologische Monitoring van driedimensionale Tumor spheroïden met behulp van optische coherentie tomografie

Tumor spheroids have been developed as a three-dimensional (3D) cell culture model in cancer research and anti-cancer drug discovery. However, currently, ...

Three-Dimensional Bone Extracellular Matrix Model for Osteosarcoma

Driedimensionale bot extracellulaire Matrix Model voor Osteosarcoom

Osteosarcoma (OS) is the most common and a highly aggressive primary bone tumor. It is characterized with anatomic and histologic variations along with ...

Fully Human Tumor-based Matrix in Three-dimensional Spheroid Invasion Assay

Volledig menselijke tumor-gebaseerde matrijs in driedimensionele sferoïde invasie assay

Two-dimensional cell culture-based assays are commonly used in in vitro cancer research. However, they lack several basic elements that form the tumor ...

Evaluating Cell Death Using Cell-Free Supernatant of Probiotics in Three-Dimensional Spheroid Cultures of Colorectal Cancer Cells

Celdood evalueren met celvrije supernatant van probiotica in driedimensionale sferoïde culturen van colorectale kankercellen

This manuscript describes a protocol to evaluate cancer cell deaths in three dimensional (3D) spheroids of multicellular types of cancer cells using ...

In Vitro Evaluation of Oncogenic Transformation in Human Mammary Epithelial Cells

In Vitro Evaluatie van Oncogene Transformatie in Human Mammary Epithelial Cells

Tumorigenesis is a multi-step process in which cells acquire capabilities&#160;that allow their growth, survival, and dissemination under hostile ...

A Three-dimensional Model of Spheroids to Study Colon Cancer Stem Cells

Een driedimensionaal model van sferoïden om stamcellen van darmkanker te bestuderen

Colorectal cancers are characterized by heterogeneity and a hierarchical organization comprising a population of cancer stem cells (CSCs) responsible for ...

Three-Dimensional In Vitro Biomimetic Model of Neuroblastoma Using Collagen-Based Scaffolds

Three-Dimensional In Vitro Biomimetic Model of Neuroblastoma Using Collagen-Based Scaffolds

Driedimensionaal in vitro biomimetisch model van neuroblastoom met behulp van op collageen gebaseerde steigers

Neuroblastoma is the most common extracranial solid tumor in children, accounting for 15% of overall pediatric cancer deaths. The native tumor tissue is a ...