Name: phospholipid mediator induced transformation in three-dimensional cultures
Uploaded: 2022-07-27T14:20:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Phospholipid Mediator Induced Transformation in Three-Dimensional Cultures at JoVE.com

אנו מודים למתקן המיקרוסקופיה IISER פונה על הגישה לציוד ותשתיות ותמיכה בניסויים. מחקר זה נתמך על ידי מענק מהמחלקה לביוטכנולוגיה (DBT), ממשלת הודו (BT/PR8699/MED/30/1018/2013), מועצת המחקר למדע והנדסה (SERB), ממשלת הודו (EMR/2016/001974) ובחלקו על ידי IISER, מימון Pune Core. א. ק. מומן על ידי מלגת CSIR-SRF, לוס אנג'לס מומנה באמצעות מלגת DST-INSPIRE, V.C מומנה על ידי DBT (BT/PR8699/MED/30/1018/2013).

1. זריעת תאי MCF10A ב-lrECM
<ol><li>לשמור על תאי MCF10A (תאי אפיתל שד דבק) במדיום הצמיחה. מעבירים את התאים כל 4 ימים. הערה: הרכב הצמיחה בינוני: DMEM גבוה ללא נתרן פירובט המכיל סרום סוסים (5%), אינסולין (10 מיקרוגרם למ"ל), הידרוקורטיזון (0.5 מיקרוגרם/מ"ל), גורם גדילה אפידרמלי, EGF (20 ננוגרם/מ"ל), רעלן כולרה (100...

מודלים מבוססים המבוססים על קווי תאים נמצאים בשימוש נרחב כדי לחקור את תהליך הסרטן. תרביות חד-שכבתיות של תאים ממשיכות לספק תובנות על מסלולי האיתות המולקולריים השונים המתווכים שינויים אופייניים בתאים סרטניים32. מחקרים על תפקידם של אונקוגנים ידועים כגון Ras, Myc ו-p53 שעברו מוטציה דו?...

מספר עצום של מודלים זמינים כדי לחקור את התקדמות הסרטן, כל אחד מהם להיות ייחודי ומייצג תת סוג של מחלה מורכבת זו. כל מודל מספק תובנות ייחודיות ובעלות ערך על הביולוגיה של הסרטן ושיפר את האמצעים לחקות את מצב המחלה בפועל. קווי תאים מבוססים שגודלו כחד-שכבתיים סיפקו תובנות חשובות על תהליכים חיוניים במבחנה, כגון התפשטות, פולשות, נדידה ואפופטוזיס1. אף על פי שתרבית תאים דו-ממדית (2D) היא הכלי המסורתי לחקור את התגובה של תאי יונקים למספר הפרעות סביבתיות, אקסטרפולציה של ממצאים אלה כדי לחזות תגובות ברמת הרקמה אינה נראית משכנעת מספיק. המגבלה העיקרית של התרביות הדו-ממדיות היא שהמיקרו-סביבה שנוצרת שונה במידה רבה מזו של רקמת השד עצמה2. תרבית דו-ממדית חסרה את האינטראקציה של התאים עם המטריצה החוץ-תאית, החיונית לצמיחה של כל רקמה. כמו כן, כוחות מתיחה שחווה התא בתרביות חד-שכבתיות מעכבים את הקוטביות של תאים אלה, ובכך משנים את האיתות וההתנהגות של התא 3,4,5. מערכות תרבית תלת-ממדיות (תלת-ממדיות) פתחו אפיק חדש בתחום חקר הסרטן עם יכולתן לחקות את תנאי ה-in vivo במבחנה. רמזים מיקרו-סביבתיים חיוניים רבים שאבדו בתרבית תאים דו-ממדית יכולים להתבסס מחדש באמצעות תרביות תלת-ממדיות של מטריצה חוץ-תאית עשירה בלמינין (lrECM)6.
מחקרים שונים זיהו את החשיבות של מיקרו-סביבה של הגידול בסרטן 7,8. גורמים הקשורים לדלקת הם חלק מרכזי מהמיקרו-סביבה. גורם מפעיל טסיות (PAF) הוא מתווך פוספוליפידים המופרש על ידי תאי חיסון שונים המתווך תגובות חיסוניות מרובות 9,10. רמות גבוהות של PAF מופרשות על ידי קווי תאים שונים של סרטן השד וקשורות לשגשוג מוגבר11. מחקרים מהמעבדה שלנו הראו כי נוכחות ממושכת של PAF בתרביות אצנר מובילה לשינוי של תאי אפיתל השד12. PAF מפעיל את קולטן ה-PAF (PAFR), ומפעיל את ציר האיתות PI3K/Akt13. דווח כי PAFR קשור גם ל-EMT, פלישה וגרורות14.
הפרוטוקול הנוכחי מדגים מערכת מודל לחקר טרנספורמציה המושרה על ידי PAF, תוך שימוש בתרביות תלת-ממדיות של תאי אפיתל השד, כפי שתואר בעבר על ידי Chakravarty et al.12. תאי אפיתל השד הגדלים על המטריצה החוץ-תאית (תרביות תלת-ממדיות) נוטים ליצור ספרואידים מקוטבים שנעצרו על-ידי צמיחה. אלה נקראים acini ודומים מאוד acini של רקמת השד, היחידה הפונקציונלית הקטנה ביותר של בלוטת החלב, in vivo15. הספרואידים האלה (איור 1A,B) מורכבים ממונו-שכבה של תאי אפיתל מקוטבים צפופים שמקיפים לומן חלול ומחוברים לקרום המרתף (איור 1C). תהליך זה של מורפוגנזה תואר היטב בספרות16. כאשר הם נזרעים על lrECM, התאים עוברים חלוקה והתמיינות כדי ליצור אשכול תאים, אשר לאחר מכן מקטבים מיום 4 ואילך. עד יום 8, האצ'יני מורכב מקבוצה של תאים מקוטבים הנמצאים במגע ישיר עם המטריצה החוץ-תאית וצביר של תאים לא מקוטבים הסגורים בתוך התאים המקוטבים החיצוניים, ללא מגע עם המטריצה. ידוע כי תאים לא מקוטבים אלה עוברים אפופטוזיס עד יום 12 של התרבית, ויוצרים לומן חלול. עד יום 16, מבנים שנעצרו על ידי צמיחה נוצרים16.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64146/64146fig01.jpg"> איור 1: גרעינים של תאים באצ'יני המוכתמים בכתם גרעיני . (A) בנייה תלת-ממדית של האצ'יני. (B) תמונת ניגודיות פאזה של MCF10A acini שגדלה על Matrigel במשך 20 יום. (C) החלק המרכזי ביותר מראה נוכחות של לומן חלול. סרגל קנה מידה = 20 מיקרומטר. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64146/64146fig01large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של נתון זה.</a>
שלא כמו תרביות דו-ממדיות, תרביות אצ'ינאר מסייעות להבחין בין תאים נורמליים לתאים שעברו טרנספורמציה באמצעות שינויים מורפולוגיים לכאורה. תאי אפיתל שד שאינם מותמרים יוצרים acini עם לומן חלול, המחקה את אציני השד האנושי הרגיל. ספרואידים אלה, עם הטרנספורמציה, מראים מורפולוגיה משובשת המאופיינת באובדן גדול של קוטביות (אחד מסימני ההיכר של סרטן), היעדר לומן, או שיבוש של לומן חלול (עקב התחמקות מאפופטוזיס) שעלול להיגרם עקב הסרת רגולציה של גנים שונים17,18,19,20 . ניתן לחקור טרנספורמציות אלה באמצעות טכניקות נפוצות כגון אימונופלואורסצנציה. לפיכך, מודל תרבית התאים התלת-ממדית יכול לתפקד כשיטה פשוטה לחקור את התהליך של מורפוגנזה של אצנר השד וסרטן השד. הקמת מערכת תרבית תלת-ממדית להבנת ההשפעה של מתווך פוספוליפידים, PAF, תסייע בבדיקת תרופות פרה-קלינית בתפוקה גבוהה.
עבודה זו התאימה את פרוטוקול התרבות התלת-ממדית 'על גבי' 16,21 לחקר טרנספורמציה המושרה על ידי PAF 22. השינויים הפנוטיפיים הנגרמים על ידי חשיפה של האציני למתווך הפוספוליפידים נחקרו באמצעות אימונופלואורסצנציה. במחקר נעשה שימוש בסמני קוטביות ואפיתל שונים למעבר מזנכימלי (EMT). טבלה 1 מזכירה את הלוקליזציה הרגילה שלהם ואת הפנוטיפ הצפוי שלהם בעת הטרנספורמציה.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>נוגדנים</td>
			<td>סימני</td>
			<td>לוקליזציה רגילה</td>
			<td>פנוטיפ מותמר</td>
		</tr><tr><td>α6-אינטגרין</td>
			<td>בזולטרלי</td>
			<td>בזל עם כתם רוחבי חלש</td>
			<td>כתם רוחבי / אפיקלי חזק</td>
		</tr><tr><td>β-קטנין</td>
			<td>צומת תא-תא</td>
			<td>בזולטרלי</td>
			<td>לוקליזציה חריגה / גרעינית או ציטופלסמית</td>
		</tr><tr><td>וימנטין</td>
			<td>EMT</td>
			<td>נוכחות נעדרת / חלשה</td>
			<td>אפ-רגולציה</td>
		</tr></tbody></table>טבלה 1: סמנים ששימשו במחקר. סמנים שונים המשמשים עם לוקליזציה שלהם בנוכחות והיעדר טיפול PAF.
ניתן להשתמש בשיטה זו בצורה הטובה ביותר כדי לחקור/לסנן תרופות סבירות ולמקד גנים עבור תתי-סוגים שונים של סרטן השד. זה יכול לספק נתוני תגובה לתרופות קרוב יותר לתרחיש in vivo , ולסייע בפיתוח תרופות מהיר ואמין יותר. כמו כן, ניתן להשתמש במערכת זו כדי לחקור את האיתות המולקולרי הקשור לתגובה לתרופות ולעמידות לתרופות.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.05% Trypsin EDTA</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>25300062</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>16% paraformaldehyde</td>
			<td>Alfa Aesar</td>
			<td>AA433689M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti Mouse Alexa Flour 488</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A11029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti Rabbit Alexa Flour 488</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A-11008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A7030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chamber Coverglass</td>
			<td>Nunc</td>
			<td>155409</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cholera Toxin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C8052-1MG</td>
			<td>1 mg/mL in dH2O</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal Microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>Leica SP8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11965126</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>E6758</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EGF</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>E9644-0.2MG</td>
			<td>100 mg/mL in dH2O</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>F(ab&#8217;)2 fragment of antibody raised in goat against mouse antigen</td>
			<td>Jackson Immunoresearch</td>
			<td>115-006-006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GM130 antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab52649</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat Serum</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab7481</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hoechst</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>33258</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Horse Serum</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>16050122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrocortisone</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>H0888</td>
			<td>1 mg/mL in ethanol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Image Processing Software</td>
			<td>ImageJ</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>I1882</td>
			<td>10 mg/mL stock dH2O</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>lrECM (Matrigel)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>356231</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mounting reagent (Slow fade Gold Anti-fade)</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>S36937</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nuclear Stain&#160; (Hoechst)</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>33258</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PAF</td>
			<td>Cayman Chemicals</td>
			<td>91575-58-5</td>
			<td>Methylcarbamyl PAF C-16, procured as a 10 mg/mL in ethanol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>17-602E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Azide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S2002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris Base</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>B9754</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T8787</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween 20</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P9416</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vimentin antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab92547</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#945;6-integrin antibody</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>MAB1378</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

phospholipid mediator induced transformation in three-dimensional cultures

מספר מודלים פותחו כדי לחקור סרטן, כגון מודלים של מכרסמים וקווי תאים מבוססים. תובנות חשובות על קרצינוגנזה סופקו על ידי מחקרים המשתמשים במודלים אלה. קווי תאים סיפקו הבנה של דה-רגולציה של איתותים מולקולריים הקשורים לגידולי שד, בעוד שמודלים של מכרסמים נמצאים בשימוש נרחב לחקר מאפיינים תאיים ומולקולריים של סרטן השד in vivo. הקמת תרביות תלת-ממד של אפיתל השד ותאים סרטניים מסייעת לגשר על הפער בין מודלים in vivo ו- in vitro על ידי חיקוי תנאי in vivo במבחנה. ניתן להשתמש במודל זה כדי להבין את הדה-רגולציה של אירועי איתות מולקולריים מורכבים ואת המאפיינים התאיים במהלך סרטן השד. כאן, מערכת תרבית תלת-ממדית משתנה כדי לחקור טרנספורמציה המושרה על-ידי מתווך פוספוליפידים (גורם מפעיל טסיות, PAF). אימונומודולטורים ומולקולות מופרשות אחרות ממלאים תפקיד מרכזי בייזום הגידול ובהתקדמותו בשד. במחקר הנוכחי, תרביות אצינאר תלת-ממדיות של תאי אפיתל בשד נחשפות למאפייני טרנספורמציה של PAF כגון אובדן קוטביות ושינויים בתכונות התאים. מערכת תרבית תלת-ממדית זו תסייע לשפוך אור על הפרעות גנטיות ו/או אפיגנטיות המושרות על-ידי ישויות שונות של מולקולות קטנות במיקרו-סביבה של הגידול. בנוסף, מערכת זו תספק גם פלטפורמה לזיהוי גנים חדשים וידועים שעשויים להיות מעורבים בתהליך הטרנספורמציה.

תאי MCF10A, עם החשיפה לטיפול ב-PAF, יוצרים מבנים אסינאריים עם פנוטיפים מובחנים מאוד. α6-integrin נמצא בטעות עם כתמים אפיקליים יותר. כמה אצ'יני גם הראו כתמים בלתי פוסקים (איור 2A). שני הפנוטיפים הללו מצביעים על אובדן הקוטביות הבסיסית, כפי שמעידה ספרות24,25. ...

Watch this Scientific Journal Video about Phospholipid Mediator Induced Transformation in Three-Dimensional Cultures at JoVE.com

Phospholipid Mediator Induced Transformation in Three-Dimensional Cultures

הפרוטוקול הנוכחי מתאר את הקמתן של תרביות תלת-ממדיות 'על גבי' של קו תאי אפיתל שד ללא טרנספורמציה, MCF10A, ששונה כדי לחקור טרנספורמציה המושרה על-ידי גורם מפעיל טסיות (PAF). אימונו-פלואורסצנציה שימשה להערכת השינוי ונדונה בפירוט.

מתווך פוספוליפידים המושרה טרנספורמציה בתרבויות תלת מימדיות

Several models have been developed to study cancer, such as rodent models and established cell lines. Valuable insights into carcinogenesis have been ...

ניתן להשתמש בתרביות הבדיקה התלת-ממדיות המותאמות שלנו כדי לחקור את תפקידם של רכיבים שונים במיקרו-סביבה של סרטן, מה שמוביל לזיהוי סמנים ביולוגיים חדשים ומטרות של תרופות. שיטה זו מאפשרת לחקור שינויים בפנוטיפ התאי ובאיתות המולקולרי הדומים מאוד למערכת החיסון. ניתן גם לשנות אותו כדי לעמוד בדרישות ספציפיות של מחקר.שיטה זו יכולה לסייע בזיהוי סמנים ביולוגיים חדשים שיכולים לסייע בגילוי מוקדם של סרטן השד. כמו כן, ניתן להשתמש בתובנות מולקולריות לזיהוי מטרות תרופות חדשות. ניתן להשתמש בשיטה זו כדי לחקור הן גידולים והן מורפוגנזה לאחר הפרעה של גנים או גנים שיכולים לספק תובנה לגבי התפקיד שממלאים הגן או הגנים.כדי להתחיל, trypsinize את התאים על ידי שאיפה המדיום לשטוף עם 2 מיליליטר של PBS. יש להוסיף 900 מיקרוליטרים של 0.05% טריפסין-EDTA ולדגור בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך כ-15 דקות או עד שהתאים עוברים טריפסינליזציה מלאה. הכינו מצע של lrECM בשמונה בארות של שקופית זכוכית עם כיסוי קאמרית על ידי ציפוי כל באר ב-60 מיקרוליטרים של lrECM.מניחים אותו באינקובטור פחמן דו חמצני של 37 מעלות צלזיוס למשך 15 דקות לכל היותר. כדי להכין את תרחיף התאים, הוסף 5 מיליליטר של מדיום ההשעיה מחדש כדי להרוות את פעילות הטריפסין ולסובב את התאים ב 112 פעמים g במשך 10 דקות ב 25 מעלות צלזיוס. לשאוף את המדיום בילה להשעות מחדש את התאים ב 2 מיליליטר של מדיום בדיקה.מערבבים היטב את המתלים כדי להבטיח היווצרות של השעיה של תא בודד. לספור את התאים באמצעות hemocytometer ולחשב את נפח ההשעיה התא הדרוש כדי לזרוע 6, 000 תאים בכל באר. על פי מספר הבארות הנדרשות, לדלל את השעיית התא במדיום הכיסוי.הוסף 400 מיקרוליטרים של מתלה התאים המדולל למיטות lrECM המוכנות, תוך הקפדה קפדנית שלא להפריע למיטת lrECM. דגירה ב-37 מעלות צלזיוס בחממה לחה של 5% פחמן דו-חמצני. לאחר 3 שעות, הוסף 200 ננומולים של PAF לכל באר.הוסיפו את אותו ריכוז של PAF במהלך כל שינוי מדיה, ומלאו את התאים במדיום טרי כל 4 ימים. לאחר 20 יום של תרבות, בזהירות pipette החוצה את המדיום מכל באר ולשטוף את הבארות עם 400 microliters של PBS מחומם מראש. תקן את מבני האסינאר על ידי הוספת 400 מיקרוליטרים של 4% פרפורמלדהיד טריים ודגירה במשך 20 דקות בטמפרטורת החדר.שטפו את הבארות פעם אחת עם PBS קר כקרח וחלחלו עם PBS המכיל 0.5% Triton X-100 למשך 10 דקות בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס. לאחר 10 דקות, הוציאו את תמיסת Triton X-100 בזהירות ושטפו עם 400 מיקרוליטר של גליצין PBS טרי. הוסיפו 400 מיקרוליטרים של תמיסת החסימה העיקרית הכוללת סרום 10% עזים במאגר אימונופלואורסצנטי ודגרה בטמפרטורת החדר למשך 60 דקות.הסר את פתרון החסימה הראשי, הוסף 200 מיקרוליטרים של נוגדן חוסם משני 2% שהוכן בתמיסת החסימה הראשונית, והשאר אותו בטמפרטורת החדר למשך 45 עד 60 דקות. הכינו את הנוגדן העיקרי בתמיסת נוגדן חוסם משנית ב-2% בדילול של 1:100. הסר את תמיסת החסימה המשנית, הוסף את הנוגדן המוכן טרי, ודגירה לילה ב 4 מעלות צלזיוס.בזהירות פיפטה תמיסת הנוגדנים העיקרית ולשטוף אותו שלוש פעמים עם 400 microliters של חיץ immunofluorescence. לאחר מכן, הכינו דילול של 1:200 של הנוגדן המשני המצומד לפלואורופור בתמיסת החסימה הראשונית ודגרו את השקופיות בתמיסת הנוגדנים המשנית למשך 40 עד 60 דקות בטמפרטורת החדר. שטפו את השקופיות עם 400 מיקרוליטרים של חיץ אימונופלואורסצנטי במשך 20 דקות, ולאחר מכן שתי שטיפות עם PBS במשך 10 דקות כל אחת.הכתימו את הגרעינים ב-PBS המכיל 0.5 ננוגרם למיליליטר של כתם גרעיני למשך 5 עד 6 דקות בטמפרטורת החדר. שטפו את השקופיות שלוש פעמים עם 400 מיקרוליטר של PBS כדי להסיר את הכתם העודף. בזהירות pipette החוצה את כל PBS ולהבטיח הסרת הפתרון שיורי.לאחר מכן הוסיפו טיפה אחת של מגיב הרכבה לכל באר ואפשרו לה לעמוד בטמפרטורת החדר למשך הלילה. לבסוף, צלם את השקופיות תחת הגדלה של 40x או 63x במיקרוסקופ קונפוקלי, תוך צילום קטעי Z אופטיים בגודל צעד של 0.6 מילימטר. התמונות מייצגות את גרעיני התאים באסיני המוכתמים בכתם גרעיני.הבנייה התלת-ממדית של האצ'יני ותמונת ניגודיות הפאזה של MCF10A acini שגדלה על lrECM במשך 20 יום מוצגות כאן. החלק המרכזי ביותר מראה נוכחות של לומן חלול. PAF משבש את הקוטביות וגורם לשינויים דמויי EMT באציני שד MCF10A.תאי MCF10A גודלו כתלת-ממד בתרביות עליונות ב-lrECM. התרביות טופלו ב-PAF ביום 0, 4, 8, 12 ו-16. התרביות נשמרו במשך 20 יום ולאחר מכן הוכתמו עבור אלפא-אינטגרין וכתם גרעיני, GM130, סמן לקוטביות אפית, ווימנטין, סמן EMT.הערימה המרכזית ביותר של האצ'יני בהתאמה הוצגה כאן. הנתונים המייצגים הם עבור 40-50 acini משלושה ניסויים בלתי תלויים ביולוגית. מיטת lrECM צריכה להיות עשויה בקפידה כך שהיא מפוזרת באופן שווה ללא בועות אוויר.כמו כן, יש לערבב את השעיית התא באופן שווה ולהוסיף אותה באיטיות כדי למנוע גושים. אפשר לקבל חלבון ורנ"א מהתרביות התלת-ממדיות שבהן ניתן להשתמש כדי לחקור את המסלולים המולקולריים השונים.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Moving Upwards: A Simple and Flexible In Vitro Three-dimensional Invasion Assay Protocol

Moving Upwards: A Simple and Flexible In Vitro Three-dimensional Invasion Assay Protocol

נעים כלפי מעלה: פשוט וגמיש במבחנה הפלישה תלת מימדי Assay פרוטוקול

Although 3D invasion assays have been developed, the challenge remains to study cells without affecting the integrity of their microenvironment. ...

Generation of High-Throughput Three-Dimensional Tumor Spheroids for Drug Screening

מהדור בתפוקה גבוהה תלת מימדי הגידול Spheroids להקרנה סמים

Cancer cells have routinely been cultured in two dimensions (2D) on a plastic surface. This technique, however, lacks the true environment a tumor mass is ...

A Three-dimensional Thymic Culture System to Generate Murine Induced Pluripotent Stem Cell-derived Tumor Antigen-specific Thymic Emigrants

תלת מימדי הרתי תרבות מערכת לייצר Murine המושרה תא גזע Pluripotent-הגידול הנגזר אנטיגן-מהגרים ספציפיים הרתי

The inheritance of pre-rearranged T cell receptors (TCRs) and their epigenetic rejuvenation make induced pluripotent stem cell (iPSC)-derived T cells a ...

Longitudinal Morphological and Physiological Monitoring of Three-dimensional Tumor Spheroids Using Optical Coherence Tomography

האורך פיזיולוגיים מורפולוגיים ניטור של Spheroids תלת מימדי הגידול באמצעות טומוגרפיה אופטית קוהרנטית

Tumor spheroids have been developed as a three-dimensional (3D) cell culture model in cancer research and anti-cancer drug discovery. However, currently, ...

Three-Dimensional Bone Extracellular Matrix Model for Osteosarcoma

עצם תלת-ממדי מטריצה חוץ-תאית מודל אוסטאוסרקומה

Osteosarcoma (OS) is the most common and a highly aggressive primary bone tumor. It is characterized with anatomic and histologic variations along with ...

Fully Human Tumor-based Matrix in Three-dimensional Spheroid Invasion Assay

מטריקס מבוסס על גידול אדם במלואו באופן שלוש מימדי הפלישה ספרואיד שיטת

Two-dimensional cell culture-based assays are commonly used in in vitro cancer research. However, they lack several basic elements that form the tumor ...

Evaluating Cell Death Using Cell-Free Supernatant of Probiotics in Three-Dimensional Spheroid Cultures of Colorectal Cancer Cells

הערכת מוות תאים באמצעות Supernatant ללא תאים של פרוביוטיקה בתרביות כדוריות תלת מימדיות של תאים סרטניים המעי הגס

This manuscript describes a protocol to evaluate cancer cell deaths in three dimensional (3D) spheroids of multicellular types of cancer cells using ...

In Vitro Evaluation of Oncogenic Transformation in Human Mammary Epithelial Cells

הערכה במבחנה של טרנספורמציה אונקוגנית בתאי אפיתל ממ"ר אנושיים

Tumorigenesis is a multi-step process in which cells acquire capabilities&#160;that allow their growth, survival, and dissemination under hostile ...

A Three-dimensional Model of Spheroids to Study Colon Cancer Stem Cells

מודל תלת מימדי של ספרואידים לחקר תאי גזע סרטניים המעי הגס

Colorectal cancers are characterized by heterogeneity and a hierarchical organization comprising a population of cancer stem cells (CSCs) responsible for ...

Three-Dimensional In Vitro Biomimetic Model of Neuroblastoma Using Collagen-Based Scaffolds

Three-Dimensional In Vitro Biomimetic Model of Neuroblastoma Using Collagen-Based Scaffolds

מודל ביומימטי תלת מימדי במבחנה של נוירובלסטומה באמצעות פיגומים מבוססי קולגן

Neuroblastoma is the most common extracranial solid tumor in children, accounting for 15% of overall pediatric cancer deaths. The native tumor tissue is a ...