Name: phospholipid mediator induced transformation in three-dimensional cultures
Uploaded: 2022-07-27T14:20:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Phospholipid Mediator Induced Transformation in Three-Dimensional Cultures at JoVE.com

Ringraziamo l'IISER Pune Microscopy Facility per l'accesso alle attrezzature e alle infrastrutture e il supporto per gli esperimenti. Questo studio è stato sostenuto da una sovvenzione del Dipartimento di Biotecnologia (DBT), Govt. of India (BT / PR8699 / MED / 30/1018 / 2013), Science and Engineering Research Board (SERB), Govt. of India (EMR / 2016 / 001974) e in parte da IISER, finanziamento Pune Core. A. K. è stato finanziato dalla borsa di studio CSIR-SRF, L.A. è stato finanziato dalla borsa di studio DST-INSPIRE, V.C. è stato finanziato da DBT (BT / PR8699 / MED / 30/1018/2013).

1. Semina di celle MCF10A in lrECM
<ol><li>Mantenere le cellule MCF10A (cellule epiteliali mammarie aderenti) nel mezzo di crescita. Passare le celle ogni 4 giorni. NOTA: Composizione del terreno di crescita: DMEM ad alto contenuto di glucosio senza piruvato di sodio contenente siero di cavallo (5%), insulina (10 μg/mL), idrocortisone (0,5 μg/ml), fattore di crescita epidermico, EGF (20 ng/ml), tossina del colera (100 ng/mL) e penicillina-streptomicina (100 unità/ml) (vedere Tabella dei m...

I modelli basati su linee cellulari consolidate sono ampiamente utilizzati per studiare il processo di cancerogenesi. Le colture monostrato di cellule continuano a fornire informazioni sulle varie vie di segnalazione molecolare che mediano i cambiamenti caratteristici nelle cellule tumorali32. Studi sul ruolo di oncogeni ben noti come Ras, Myc e p53 mutati sono stati riportati per la prima volta utilizzando colture monostrato come sistema modello33,34,35,36<sup c...

Una miriade di modelli sono disponibili per studiare la progressione del cancro, ognuno dei quali è unico e rappresenta un sottotipo di questa complessa malattia. Ogni modello fornisce informazioni uniche e preziose sulla biologia del cancro e ha migliorato i mezzi per imitare la condizione reale della malattia. Le linee cellulari consolidate cresciute come monostrato hanno fornito preziose informazioni sui processi vitali in vitro, come proliferazione, invasività, migrazione e apoptosi1. Sebbene la coltura cellulare bidimensionale (2D) sia stata lo strumento tradizionale per studiare la risposta delle cellule di mammifero a diverse perturbazioni ambientali, l'estrapolazione di questi risultati per prevedere le risposte a livello tissutale non sembra sufficientemente convincente. La principale limitazione delle colture 2D è che il microambiente creato differisce in gran parte da quello del tessuto mammario stesso2. La coltura 2D manca dell'interazione delle cellule con la matrice extracellulare, che è vitale per la crescita di qualsiasi tessuto. Inoltre, le forze di trazione sperimentate dalla cellula in colture monostrato ostacolano la polarità di queste cellule, alterando così la segnalazione e il comportamento cellulare 3,4,5. I sistemi di coltura tridimensionali (3D) hanno aperto una nuova strada nel campo della ricerca sul cancro con la loro capacità di imitare le condizioni in vivo in vitro. Molti segnali microambientali cruciali che vengono persi nella coltura cellulare 2D potrebbero essere ristabiliti utilizzando colture 3D di matrice extracellulare ricca di laminina (lrECM)6.
Diversi studi hanno identificato l'importanza del microambiente tumorale nella carcinogenesi 7,8. I fattori associati all'infiammazione sono una parte importante del microambiente. Il fattore attivante piastrinico (PAF) è un mediatore fosfolipidico secreto da varie cellule immunitarie che media le risposte immunitarie multiple 9,10. Alti livelli di PAF sono secreti da diverse linee cellulari di cancro al seno e sono associati a una maggiore proliferazione11. Studi del nostro laboratorio hanno dimostrato che la presenza prolungata di PAF nelle colture acinose porta alla trasformazione delle cellule epiteliali mammarie12. PAF attiva il recettore PAF (PAFR), attivando l'asse di segnalazione PI3K/Akt13. PAFR è anche segnalato per essere associato a EMT, invasione e metastasi14.
Il presente protocollo dimostra un sistema modello per studiare la trasformazione indotta da PAF, utilizzando colture 3D di cellule epiteliali mammarie, come è stato precedentemente descritto da Chakravarty et al.12. Le cellule epiteliali mammarie cresciute sulla matrice extracellulare (colture 3D) tendono a formare sferoidi polarizzati arrestati dalla crescita. Questi sono chiamati acini e assomigliano molto agli acini del tessuto mammario, la più piccola unità funzionale della ghiandola mammaria, in vivo15. Questi sferoidi (Figura 1A,B) sono costituiti da un monostrato di cellule epiteliali polarizzate strettamente imballate che circondano un lume cavo e attaccate alla membrana basale (Figura 1C). Questo processo di morfogenesi è stato ben descritto in letteratura16. Quando seminano su lrECM, le cellule subiscono divisione e differenziazione per formare un gruppo di cellule, che poi si polarizzano dal giorno 4 in poi. Al giorno 8, gli acini sono costituiti da un gruppo di cellule polarizzate che sono in contatto diretto con la matrice extracellulare e un gruppo di cellule non polarizzate racchiuse all'interno delle cellule polarizzate esterne, senza contatto con la matrice. Queste cellule non polarizzate sono note per andare incontro ad apoptosi entro il giorno 12 della coltura, formando un lume cavo. Entro il giorno 16, le strutture in arresto della crescita si formano16.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64146/64146fig01.jpg"> Figura 1: Nuclei di cellule in acini colorati con una colorazione nucleare . (A) Costruzione 3D degli acini. (B) Immagine a contrasto di fase di MCF10A acini coltivati su Matrigel per 20 giorni. (C) La sezione più centrale mostra la presenza di un lume cavo. Barra di scala = 20 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64146/64146fig01large.jpg" target="_blank">Fare clic qui per visualizzare una versione ingrandita di questa figura.</a>
A differenza delle colture 2D, le colture di acinosi aiutano a distinguere le cellule normali e trasformate attraverso apparenti cambiamenti morfologici. Le cellule epiteliali mammarie non trasformate formano acini con un lume cavo, imitando i normali acini del seno umano. Questi sferoidi, dopo la trasformazione, mostrano una morfologia perturbata caratterizzata da una grave perdita di polarità (uno dei segni distintivi del cancro), assenza di un lume o rottura del lume cavo (a causa dell'evasione dell'apoptosi) che può essere indotta a causa della deregolazione di vari geni17,18,19,20 . Queste trasformazioni possono essere studiate utilizzando tecniche comunemente usate come l'immunofluorescenza. Pertanto, il modello di coltura cellulare 3D può funzionare come un metodo semplice per studiare il processo di morfogenesi acinogenesi del seno e la carcinogenesi del seno. Stabilire un sistema di coltura 3D per comprendere l'effetto di un mediatore dei fosfolipidi, PAF, aiuterà nello screening preclinico dei farmaci ad alto rendimento.
Questo lavoro ha adattato il protocollo di coltura 3D "on top"16,21 per studiare la trasformazione indotta da PAF 22. I cambiamenti fenotipici indotti dall'esposizione degli acini al mediatore fosfolipidico sono stati studiati utilizzando l'immunofluorescenza. Nello studio sono stati utilizzati vari marcatori di polarità ed epiteliale-transizione mesenchimale (EMT)12,16. La Tabella 1 menziona la loro normale localizzazione e il loro fenotipo atteso dopo la trasformazione.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>Anticorpi</td>
			<td>Marchi</td>
			<td>Localizzazione normale</td>
			<td>Fenotipo trasformato</td>
		</tr><tr><td>α6-integrina</td>
			<td>Basolaterale</td>
			<td>Basali con debole macchia laterale</td>
			<td>Forte macchia laterale / apicale</td>
		</tr><tr><td>β-catenina</td>
			<td>Giunzione cellula-cellula</td>
			<td>Basolaterale</td>
			<td>Localizzazione anomala / nucleare o citoplasmatica</td>
		</tr><tr><td>Vimentino</td>
			<td>Emt</td>
			<td>Presenza assente / debole</td>
			<td>Up-regulation</td>
		</tr></tbody></table>Tabella 1: Marcatori utilizzati nello studio. Diversi marcatori utilizzati con la loro localizzazione in presenza e assenza di trattamento PAF.
Questo metodo può essere utilizzato al meglio per studiare / selezionare farmaci plausibili e geni bersaglio per vari sottotipi di cancro al seno. Ciò può fornire dati di risposta ai farmaci più vicini allo scenario in vivo , contribuendo a uno sviluppo più rapido e affidabile del farmaco. Inoltre, questo sistema può essere utilizzato per studiare la segnalazione molecolare associata alla risposta ai farmaci e alla resistenza ai farmaci.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.05% Trypsin EDTA</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>25300062</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>16% paraformaldehyde</td>
			<td>Alfa Aesar</td>
			<td>AA433689M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti Mouse Alexa Flour 488</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A11029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti Rabbit Alexa Flour 488</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A-11008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A7030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chamber Coverglass</td>
			<td>Nunc</td>
			<td>155409</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cholera Toxin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C8052-1MG</td>
			<td>1 mg/mL in dH2O</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal Microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>Leica SP8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11965126</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>E6758</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EGF</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>E9644-0.2MG</td>
			<td>100 mg/mL in dH2O</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>F(ab&#8217;)2 fragment of antibody raised in goat against mouse antigen</td>
			<td>Jackson Immunoresearch</td>
			<td>115-006-006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GM130 antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab52649</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat Serum</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab7481</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hoechst</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>33258</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Horse Serum</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>16050122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrocortisone</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>H0888</td>
			<td>1 mg/mL in ethanol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Image Processing Software</td>
			<td>ImageJ</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>I1882</td>
			<td>10 mg/mL stock dH2O</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>lrECM (Matrigel)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>356231</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mounting reagent (Slow fade Gold Anti-fade)</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>S36937</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nuclear Stain&#160; (Hoechst)</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>33258</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PAF</td>
			<td>Cayman Chemicals</td>
			<td>91575-58-5</td>
			<td>Methylcarbamyl PAF C-16, procured as a 10 mg/mL in ethanol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>17-602E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Azide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S2002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris Base</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>B9754</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T8787</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween 20</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P9416</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vimentin antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab92547</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#945;6-integrin antibody</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>MAB1378</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

phospholipid mediator induced transformation in three-dimensional cultures

Diversi modelli sono stati sviluppati per studiare il cancro, come modelli di roditori e linee cellulari stabilite. Informazioni preziose sulla carcinogenesi sono state fornite da studi che utilizzano questi modelli. Le linee cellulari hanno fornito una comprensione della deregolazione della segnalazione molecolare associata alla tumorigenesi mammaria, mentre i modelli di roditori sono ampiamente utilizzati per studiare le caratteristiche cellulari e molecolari del cancro al seno in vivo. La creazione di colture 3D di cellule epiteliali e cancerose del seno aiuta a colmare il divario tra modelli in vivo e in vitro imitando le condizioni in vivo in vitro. Questo modello può essere utilizzato per comprendere la deregolazione di eventi di segnalazione molecolare complessi e le caratteristiche cellulari durante la carcinogenesi mammaria. Qui, un sistema di coltura 3D viene modificato per studiare una trasformazione indotta dal mediatore fosfolipidico (Fattore di attivazione piastrinica, PAF). Gli immunomodulatori e altre molecole secrete svolgono un ruolo importante nell'inizio e nella progressione del tumore nel seno. Nel presente studio, le colture acinose 3D di cellule epiteliali mammarie sono esposte a caratteristiche di trasformazione PAF come perdita di polarità e caratteristiche cellulari alterate. Questo sistema di coltura 3D aiuterà a far luce sulle perturbazioni genetiche e / o epigenetiche indotte da varie entità di piccole molecole nel microambiente tumorale. Inoltre, questo sistema fornirà anche una piattaforma per l'identificazione di geni nuovi e noti che potrebbero essere coinvolti nel processo di trasformazione.

Le cellule MCF10A, dopo esposizione al trattamento con PAF, formano strutture acinose con fenotipi molto distinti. L'α6-integrina è risultata essere localizzata in modo errato con una colorazione più apicale. Alcuni acini hanno anche mostrato colorazioni discontinue (Figura 2A). Entrambi questi fenotipi indicano la perdita di polarità basale, come evidenziato dalla letteratura24,25. Rapporti precedenti indicano il ruolo controver...

Watch this Scientific Journal Video about Phospholipid Mediator Induced Transformation in Three-Dimensional Cultures at JoVE.com

Phospholipid Mediator Induced Transformation in Three-Dimensional Cultures

Il presente protocollo descrive la messa a punto di colture 3D "on top " di una linea cellulare epiteliale mammaria non trasformata, MCF10A, che è stata modificata per studiare la trasformazione indotta dal fattore attivante piastrinico (PAF). L'immunofluorescenza è stata utilizzata per valutare la trasformazione ed è discussa in dettaglio.

Trasformazione indotta dal mediatore dei fosfolipidi in colture tridimensionali

Several models have been developed to study cancer, such as rodent models and established cell lines. Valuable insights into carcinogenesis have been ...

Le nostre colture di analisi 3D modificate possono essere utilizzate per studiare il ruolo di vari componenti in un microambiente tumorale, portando all'identificazione di nuovi biomarcatori e bersagli farmacologici. Questo metodo consente di studiare i cambiamenti nel fenotipo cellulare e nella segnalazione molecolare che assomigliano molto al sistema immunitario. Può anche essere modificato per soddisfare i requisiti specifici di uno studio.Questo metodo può aiutare a identificare nuovi biomarcatori che possono aiutare nella diagnosi precoce del cancro al seno. Inoltre, le intuizioni molecolari possono essere utilizzate per identificare nuovi bersagli farmacologici. Questo metodo può essere utilizzato per studiare sia la tumorigenesi che la morfogenesi dopo la perturbazione del gene o dei geni che possono fornire informazioni sul ruolo svolto dal gene o dai geni.Per iniziare, tripsinizzare le cellule aspirando il mezzo e lavando con 2 millilitri di PBS. Aggiungere 900 microlitri di tripsina-EDTA allo 0,05% e incubare a 37 gradi Celsius per circa 15 minuti o fino a quando le cellule sono completamente tripsinzzate. Preparare un letto di lrECM in otto pozzetti di un vetrino di copertura camerato rivestendo ciascun pozzetto con 60 microlitri di lrECM.Posizionarlo in un incubatore ad anidride carbonica a 37 gradi Celsius per un massimo di 15 minuti. Per preparare la sospensione cellulare, aggiungere 5 millilitri di mezzo di risospensione per estinguere l'attività della tripsina e ruotare le cellule a 112 volte g per 10 minuti a 25 gradi Celsius. Aspirare il mezzo esaurito e risospendere le cellule in 2 millilitri di mezzo di analisi.Mescolare bene la sospensione per garantire la formazione di una sospensione a cella singola. Contare le cellule usando un emocitometro e calcolare il volume di sospensione cellulare necessaria per seminare 6.000 cellule in ciascun pozzetto. In base al numero di pozzetti richiesti, diluire la sospensione cellulare nel mezzo di sovrapposizione.Aggiungere 400 microlitri della sospensione cellulare diluita ai letti lrECM preparati, assicurandosi attentamente di non disturbare il letto lrECM. Incubare a 37 gradi Celsius in un incubatore umidificato al 5% di anidride carbonica. Dopo 3 ore, aggiungere 200 nanomoli di PAF a ciascun pozzetto.Aggiungere la stessa concentrazione di PAF durante ogni cambio di terreno e reintegrare le cellule con terreno fresco ogni 4 giorni. Dopo 20 giorni di coltivazione, pipettare accuratamente il terreno da ciascun pozzetto e lavare i pozzetti con 400 microlitri di PBS preriscaldato. Fissare le strutture acinose aggiungendo 400 microlitri di paraformaldeide al 4% appena preparata e incubando per 20 minuti a temperatura ambiente.Risciacquare i pozzetti una volta con PBS ghiacciato e permeabilizzare con PBS contenente 0,5% Triton X-100 per 10 minuti a 4 gradi Celsius. Dopo 10 minuti, pipettare accuratamente la soluzione di Triton X-100 e risciacquare con 400 microlitri di glicina PBS appena preparata. Aggiungere 400 microlitri della soluzione bloccante primaria contenente il 10% di siero di capra in tampone di immunofluorescenza e incubare a temperatura ambiente per 60 minuti.Rimuovere la soluzione bloccante primaria, aggiungere 200 microlitri di anticorpo bloccante secondario al 2% preparato nella soluzione bloccante primaria e lasciarlo a temperatura ambiente per 45-60 minuti. Preparare l'anticorpo primario in una soluzione di anticorpi bloccanti secondari al 2% in una diluizione 1:100. Rimuovere la soluzione di blocco secondaria, aggiungere l'anticorpo appena preparato e incubare durante la notte a 4 gradi Celsius.Pipettare accuratamente la soluzione anticorpale primaria e lavarla tre volte con 400 microlitri di tampone immunofluorescenza. Quindi, preparare una diluizione 1:200 dell'anticorpo secondario coniugato con fluoroforo nella soluzione bloccante primaria e incubare i vetrini nella soluzione anticorpale secondaria per 40-60 minuti a temperatura ambiente. Risciacquare i vetrini con 400 microlitri di tampone immunofluorescenza per 20 minuti, seguiti da due lavaggi con PBS per 10 minuti ciascuno.Contro-colorare i nuclei con PBS contenente 0,5 nanogrammi per millilitro di macchia nucleare per 5-6 minuti a temperatura ambiente. Lavare i vetrini tre volte con 400 microlitri di PBS per rimuovere la macchia in eccesso. Pipettare accuratamente l'intero PBS e assicurarsi di rimuovere la soluzione residua.Quindi aggiungere una goccia di reagente di montaggio in ciascun pozzetto e lasciarlo riposare a temperatura ambiente durante la notte. Infine, immagina i vetrini con ingrandimento 40x o 63x su un microscopio confocale, prendendo sezioni Z ottiche di dimensioni di 0,6 millimetri. Le immagini rappresentano i nuclei delle cellule in acini colorati con una colorazione nucleare.La costruzione 3D degli acini e l'immagine a contrasto di fase degli acini MCF10A cresciuti su lrECM per 20 giorni sono mostrati qui. La sezione più centrale mostra la presenza di un lume vuoto. PAF interrompe la polarità e induce cambiamenti simili a EMT negli acini mammari MCF10A.Le cellule MCF10A sono state coltivate come 3D su colture top'in lrECM. Le colture sono state trattate con PAF nei giorni 0, 4, 8, 12 e 16. Le colture sono state mantenute per 20 giorni e poi immunocolorate per alfa6-integrina e colorazione nucleare, GM130, un marker per la polarità apicale, e Vimentin, un marcatore EMT.La pila più centrale dei rispettivi acini è stata mostrata qui. I dati rappresentativi sono per 40-50 acini provenienti da tre esperimenti biologicamente indipendenti. Il letto lrECM deve essere realizzato con cura in modo che sia distribuito uniformemente senza bolle d'aria.Inoltre, la sospensione cellulare deve essere miscelata uniformemente e aggiunta lentamente per evitare l'aggregazione. Si possono ottenere proteine e RNA dalle colture 3D che possono quindi essere utilizzate per studiare i diversi percorsi molecolari.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Moving Upwards: A Simple and Flexible In Vitro Three-dimensional Invasion Assay Protocol

Moving Upwards: A Simple and Flexible In Vitro Three-dimensional Invasion Assay Protocol

Lo spostamento verso l'alto: Un semplice e flessibile In Vitro tridimensionale invasione protocollo di analisi

Although 3D invasion assays have been developed, the challenge remains to study cells without affecting the integrity of their microenvironment. ...

Ricerca

Ricerca sul cancro

Generation of High-Throughput Three-Dimensional Tumor Spheroids for Drug Screening

Generazione di sferoidi tumore tridimensionale High-Throughput per lo Screening di stupefacenti

Cancer cells have routinely been cultured in two dimensions (2D) on a plastic surface. This technique, however, lacks the true environment a tumor mass is ...

A Three-dimensional Thymic Culture System to Generate Murine Induced Pluripotent Stem Cell-derived Tumor Antigen-specific Thymic Emigrants

Un sistema di coltura timica tridimensionale per generare emigrati timici derivati da murine

The inheritance of pre-rearranged T cell receptors (TCRs) and their epigenetic rejuvenation make induced pluripotent stem cell (iPSC)-derived T cells a ...

Longitudinal Morphological and Physiological Monitoring of Three-dimensional Tumor Spheroids Using Optical Coherence Tomography

Longitudinale morfologiche e fisiologiche monitoraggio di sferoidi tridimensionale del tumore usando la tomografia a coerenza ottica

Tumor spheroids have been developed as a three-dimensional (3D) cell culture model in cancer research and anti-cancer drug discovery. However, currently, ...

Three-Dimensional Bone Extracellular Matrix Model for Osteosarcoma

Modello di matrice extracellulare tridimensionale dell'osso per Osteosarcoma

Osteosarcoma (OS) is the most common and a highly aggressive primary bone tumor. It is characterized with anatomic and histologic variations along with ...

Fully Human Tumor-based Matrix in Three-dimensional Spheroid Invasion Assay

Matrice a base di tumore umano in un saggio di invasione sferoide tridimensionale

Two-dimensional cell culture-based assays are commonly used in in vitro cancer research. However, they lack several basic elements that form the tumor ...

Evaluating Cell Death Using Cell-Free Supernatant of Probiotics in Three-Dimensional Spheroid Cultures of Colorectal Cancer Cells

Valutazione della morte cellulare utilizzando un surnatante privo di cellule di probiotici in colture sferoidali tridimensionali di cellule tumorali del colon-retto

This manuscript describes a protocol to evaluate cancer cell deaths in three dimensional (3D) spheroids of multicellular types of cancer cells using ...

In Vitro Evaluation of Oncogenic Transformation in Human Mammary Epithelial Cells

Valutazione in vitro della trasformazione oncogenica nelle cellule epiteliali mammarie umane

Tumorigenesis is a multi-step process in which cells acquire capabilities&#160;that allow their growth, survival, and dissemination under hostile ...

A Three-dimensional Model of Spheroids to Study Colon Cancer Stem Cells

Un modello tridimensionale di sferoidi per studiare le cellule staminali del cancro del colon

Colorectal cancers are characterized by heterogeneity and a hierarchical organization comprising a population of cancer stem cells (CSCs) responsible for ...

Three-Dimensional In Vitro Biomimetic Model of Neuroblastoma Using Collagen-Based Scaffolds

Three-Dimensional In Vitro Biomimetic Model of Neuroblastoma Using Collagen-Based Scaffolds

Modello biomimetico tridimensionale in vitro di neuroblastoma utilizzando scaffold a base di collagene

Neuroblastoma is the most common extracranial solid tumor in children, accounting for 15% of overall pediatric cancer deaths. The native tumor tissue is a ...