Name: in ovo and ex ovo methods to study avian inner ear development
Uploaded: 2022-06-16T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In Ovo and Ex Ovo Methods to Study Avian Inner Ear Development at JoVE.com

نحن نعترف بامتنان بالدعم المقدم من NCBS و TIFR و Infosys-TIFR Leading Edge Research Grant و DST-SERB والمعهد الوطني الملكي للصم. نود أن نشكر المنظمة المركزية لتنمية الدواجن ومعهد التدريب ، هيساراغاتا ، بنغالورو. نحن ممتنون لمرافق CIFF و EM ودعم المختبرات في NCBS. نشكر يوشيكو تاكاهاشي وكويتشي كاواكامي على بنيات Tol2-eGFP و T2TP ، وجاي ريتشاردسون على الجسم المضاد HCA و G19 Pcdh15. نحن ممتنون لأعضاء Earlab لدعمهم المستمر وملاحظاتهم القيمة على البروتوكول.

تمت الموافقة على البروتوكولات التي تنطوي على شراء وزراعة واستخدام بيض الدجاج المخصب والأجنة غير المفرغة من قبل لجنة أخلاقيات الحيوان المؤسسية التابعة للمركز الوطني للعلوم البيولوجية ، بنغالورو ، كارناتاكا.
1. في التثقيب الكهربائي للبيض من السلائف السمعية الفرخ</str...

<ol>
	<li>Sai, X., Ladher, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+steps+in+inner+ear+development:+induction+and+morphogenesis+of+the+otic+placode.">Early steps in inner ear development: induction and morphogenesis of the otic placode.</a> Frontiers in Pharmacology. 6, 19 (2015).</li><li>Groves, A. K., Fekete, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Shaping+sound+in+space:+the+regulation+of+inner+ear+patterning.">Shaping sound in space: the regulation of inner ear patterning.</a> Development. 139 (2), 245-257 (2012).</li><li>Driver, E. C., Kelley, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+the+cochlea.">Development of the cochlea.</a> Development. 147 (12), (2020).</li><li>Richardson, G. P., Petit, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hair-bundle+links:+genetics+as+the+gateway+to+function.">Hair-bundle links: genetics as the gateway to function.</a> Cold Spring Harbor Perspectives in Medicine. 9 (12), 033142 (2019).</li><li>Tilney, L. G., Cotanche, D. A., Tilney, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Actin+filaments,+stereocilia+and+hair+cells+of+the+bird+cochlea.+VI.+How+the+number+and+arrangement+of+stereocilia+are+determined.">Actin filaments, stereocilia and hair cells of the bird cochlea. VI. How the number and arrangement of stereocilia are determined.</a> Development. 116 (1), 213-226 (1992).</li><li>Jones, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ciliary+proteins+link+basal+body+polarization+to+planar+cell+polarity+regulation.">Ciliary proteins link basal body polarization to planar cell polarity regulation.</a> Nature Genetics. 40 (1), 69-77 (2008).</li><li>Sipe, C. W., Lu, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kif3a+regulates+planar+polarization+of+auditory+hair+cells+through+both+ciliary+and+non-ciliary+mechanisms.">Kif3a regulates planar polarization of auditory hair cells through both ciliary and non-ciliary mechanisms.</a> Development. 138 (16), 3441-3449 (2011).</li><li>May-Simera, H. L., Kelley, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cilia,+Wnt+signaling,+and+the+cytoskeleton.">Cilia, Wnt signaling, and the cytoskeleton.</a> Cilia. 1 (1), 1 (2012).</li><li>Ebrahim, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stereocilia-staircase+spacing+is+influenced+by+myosin+III+motors+and+their+cargos+espin-1+and+espin-like.">Stereocilia-staircase spacing is influenced by myosin III motors and their cargos espin-1 and espin-like.</a> Nature Communications. 7, 10833 (2016).</li><li>Corwin, J. T., Cotanche, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regeneration+of+sensory+hair+cells+after+acoustic+trauma.">Regeneration of sensory hair cells after acoustic trauma.</a> Science. 240 (4860), 1772-1774 (1988).</li><li>Collado, M. S., Burns, J. C., Hu, Z., Corwin, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+advances+in+hair+cell+regeneration+research.">Recent advances in hair cell regeneration research.</a> Current Opinion in Otolaryngology &amp; Head and Neck Surgery. 16 (5), 465-471 (2008).</li><li>Edge, A. S., Chen, Z. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hair+cell+regeneration.">Hair cell regeneration.</a> Current Opinion in Neurobiology. 18 (4), 377-382 (2008).</li><li>Atkinson, P. J., Huarcaya Najarro, E., Sayyid, Z. N., Cheng, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensory+hair+cell+development+and+regeneration:+similarities+and+differences.">Sensory hair cell development and regeneration: similarities and differences.</a> Development. 142 (9), 1561-1571 (2015).</li><li>Brignull, H. R., Raible, D. W., Stone, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Feathers+and+fins:+non-mammalian+models+for+hair+cell+regeneration.">Feathers and fins: non-mammalian models for hair cell regeneration.</a> Brain Research. 1277, 12-23 (2009).</li><li>Rubel, E. W., Furrer, S. A., Stone, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+brief+history+of+hair+cell+regeneration+research+and+speculations+on+the+future.">A brief history of hair cell regeneration research and speculations on the future.</a> Hearing Research. 297, 42-51 (2013).</li><li>Stone, J. S., Cotanche, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hair+cell+regeneration+in+the+avian+auditory+epithelium.">Hair cell regeneration in the avian auditory epithelium.</a> The International Journal of Developmental Biology. 51 (6-7), 633-647 (2007).</li><li>Roberson, D. W., Alosi, J. A., Cotanche, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+transdifferentiation+gives+rise+to+the+earliest+new+hair+cells+in+regenerating+avian+auditory+epithelium.">Direct transdifferentiation gives rise to the earliest new hair cells in regenerating avian auditory epithelium.</a> Journal of Neuroscience Research. 78 (4), 461-471 (2004).</li><li>Fritzsch, B., Beisel, K. W., Pauley, S., Soukup, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+evolution+of+the+vertebrate+mechanosensory+cell+and+ear.">Molecular evolution of the vertebrate mechanosensory cell and ear.</a> The International Journal of Developmental Biology. 51 (6-7), 663-678 (2007).</li><li>Tilney, L. G., DeRosier, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Actin+filaments,+stereocilia,+and+hair+cells+of+the+bird+cochlea.+IV.+How+the+actin+filaments+become+organized+in+developing+stereocilia+and+in+the+cuticular+plate.">Actin filaments, stereocilia, and hair cells of the bird cochlea. IV. How the actin filaments become organized in developing stereocilia and in the cuticular plate.</a> Developmental Biology. 116 (1), 119-129 (1986).</li><li>Oesterle, E. C., Tsue, T. T., Reh, T. A., Rubel, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hair-cell+regeneration+in+organ+cultures+of+the+postnatal+chicken+inner+ear.">Hair-cell regeneration in organ cultures of the postnatal chicken inner ear.</a> Hearing Research. 70 (1), 85-108 (1993).</li><li>Honda, A., Freeman, S. D., Sai, X., Ladher, R. K., O'Neill, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+placode+to+labyrinth:+culture+of+the+chicken+inner+ear.">From placode to labyrinth: culture of the chicken inner ear.</a> Methods. 66 (3), 447-453 (2014).</li><li>Matsunaga, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Initiation+of+supporting+cell+activation+for+hair+cell+regeneration+in+the+avian+auditory+epithelium:+an+explant+culture+model.">Initiation of supporting cell activation for hair cell regeneration in the avian auditory epithelium: an explant culture model.</a> Frontiers in Cellular Neuroscience. 14, 583994 (2020).</li><li>Concordet, J. P., Haeussler, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CRISPOR:+intuitive+guide+selection+for+CRISPR/Cas9+genome+editing+experiments+and+screens.">CRISPOR: intuitive guide selection for CRISPR/Cas9 genome editing experiments and screens.</a> Nucleic Acids Research. 46, 242-245 (2018).</li><li>Gandhi, S., Piacentino, M. L., Vieceli, F. M., Bronner, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+CRISPR/Cas9+genome+editing+for+loss-of-function+in+the+early+chick+embryo.">Optimization of CRISPR/Cas9 genome editing for loss-of-function in the early chick embryo.</a> Developmental Biology. 432 (1), 86-97 (2017).</li><li>Green, M. R., Sambrook, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cloning+and+transformation+with+plasmid+vectors.">Cloning and transformation with plasmid vectors.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2021 (11), (2021).</li><li>Sato, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stable+integration+and+conditional+expression+of+electroporated+transgenes+in+chicken+embryos.">Stable integration and conditional expression of electroporated transgenes in chicken embryos.</a> Developmental Biology. 305 (2), 616-624 (2007).</li><li>Takahashi, Y., Watanabe, T., Nakagawa, S., Kawakami, K., Sato, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transposon-mediated+stable+integration+and+tetracycline-inducible+expression+of+electroporated+transgenes+in+chicken+embryos.">Transposon-mediated stable integration and tetracycline-inducible expression of electroporated transgenes in chicken embryos.</a> Methods in Cell Biology. 87, 271-280 (2008).</li><li>Mashal, R. D., Koontz, J., Sklar, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+mutations+by+cleavage+of+DNA+heteroduplexes+with+bacteriophage+resolvases.">Detection of mutations by cleavage of DNA heteroduplexes with bacteriophage resolvases.</a> Nature Genetics. 9 (2), 177-183 (1995).</li><li>Ogier, J. M., Burt, R. A., Drury, H. R., Lim, R., Nayagam, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organotypic+culture+of+neonatal+murine+inner+ear+explants.">Organotypic culture of neonatal murine inner ear explants.</a> Frontiers in Cellular Neuroscience. 13, 170 (2019).</li><li>Davies, S., Forge, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+the+mammalian+organ+of+Corti+for+scanning+electron+microscopy.">Preparation of the mammalian organ of Corti for scanning electron microscopy.</a> Journal of Microscopy. 147, 89-101 (1987).</li><li>Parker, A., Chessum, L., Mburu, P., Sanderson, J., Bowl, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Light+and+electron+microscopy+methods+for+examination+of+cochlear+morphology+in+mouse+models+of+deafness.">Light and electron microscopy methods for examination of cochlear morphology in mouse models of deafness.</a> Current Protocols in Mouse Biology. 6 (3), 272-306 (2016).</li><li>Bermingham, N. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Math1:+an+essential+gene+for+the+generation+of+inner+ear+hair+cells.">Math1: an essential gene for the generation of inner ear hair cells.</a> Science. 284 (5421), 1837-1841 (1999).</li><li>Goodyear, R. J., Forge, A., Legan, P. K., Richardson, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Asymmetric+distribution+of+cadherin+23+and+protocadherin+15+in+the+kinocilial+links+of+avian+sensory+hair+cells.">Asymmetric distribution of cadherin 23 and protocadherin 15 in the kinocilial links of avian sensory hair cells.</a> The Journal of Comparative Neurology. 518 (21), 4288-4297 (2010).</li><li>Bartolami, S., Goodyear, R., Richardson, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Appearance+and+distribution+of+the+275+kD+hair-cell+antigen+during+development+of+the+avian+inner+ear.">Appearance and distribution of the 275 kD hair-cell antigen during development of the avian inner ear.</a> The Journal of Comparative Neurology. 314 (4), 777-788 (1991).</li><li>Funahashi, J., Nakamura, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroporation+in+avian+embryos.">Electroporation in avian embryos.</a> Methods in Molecular Biology. 461, 377-382 (2008).</li><li>Nakamura, H., Funahashi, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroporation:+past,+present+and+future.">Electroporation: past, present and future.</a> Development, Growth &amp; Differentiation. 55 (1), 15-19 (2013).</li><li>Olaya-Sanchez, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fgf3+and+Fgf16+expression+patterns+define+spatial+and+temporal+domains+in+the+developing+chick+inner+ear.">Fgf3 and Fgf16 expression patterns define spatial and temporal domains in the developing chick inner ear.</a> Brain Structure &amp; Function. 222 (1), 131-149 (2017).</li><li>Jones, J. M., Warchol, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+the+Gata3+transcription+factor+in+the+acoustic+ganglion+of+the+developing+avian+inner+ear.">Expression of the Gata3 transcription factor in the acoustic ganglion of the developing avian inner ear.</a> The Journal of Comparative Neurology. 516 (6), 507-518 (2009).</li><li>Serralbo, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenesis+and+web+resources+in+quail.">Transgenesis and web resources in quail.</a> Elife. 9, 56312 (2020).</li></ol>

الفرخ هو إضافة فعالة من حيث التكلفة ومريحة للكائنات النموذجية التي قد يستخدمها المختبر للبحث في الأذن الداخلية. تستخدم الطرق الموضحة هنا بشكل روتيني في مختبرنا وتكمل الأبحاث الجارية في الأذن الداخلية للثدييات. في التثقيب الكهربائي للبيض يستخدم لإدخال التلاعب الجيني في جينوم الفرخ. ...

الأذن الداخلية لجميع الفقاريات مشتقة من ظهارة بسيطة تعرف باسم placode 1,2. سيؤدي ذلك إلى ظهور جميع العناصر الهيكلية وأنواع الخلايا اللازمة لتحويل المعلومات الحسية الميكانيكية المرتبطة بإدراك السمع والتوازن. خلايا الشعر (HCs) ، المستشعر المهدبي للأذن الداخلية ، محاطة بخلايا داعمة (SCs). تنقل HCs المعلومات إلى الدماغ الخلفي السمعي من خلال الخلايا العصبية للعصب القحفي الثامن. يتم إنشاؤها أيضا من placode3 الأذنية. يتم تحقيق النقل الأولي للصوت على السطح القمي ل HC السمعي ، من خلال حزمة شعر حساسة ميكانيكيا4. يتم التوسط في ذلك من خلال نتوءات معدلة قائمة على الأكتين تسمى stereocilia، والتي يتم ترتيبها في نمط درجمتدرج 5. بالإضافة إلى ذلك ، ينظم الكيليوم الأولي المعدل ، المسمى kinocilium ، تكوين حزمة الشعر وهو مجاور لأطول صف من الأهداب المجسمة6،7،8. تعد بنية الأهداب الفراغية أمرا بالغ الأهمية لهذا الدور في تحويل المحفزات الميكانيكية المشتقة من الطاقة الصوتية إلى إشارات عصبية كهربائية9. يمكن أن يؤدي تلف HC السمعي من خلال الشيخوخة أو العدوى أو صدمة الأذن الصوتية أو الصدمة السامة للأذن إلى فقدان السمع الجزئي أو الكامل الذي لا رجعة فيه في الثدييات10.
تم اقتراح علاجات الاستبدال الخلوي التي قد تصلح مثل هذا الضرر11,12. كان نهج هذا البحث هو فهم التطور الطبيعي لخلية شعر الثدييات والسؤال عما إذا كان يمكن إعادة بدء برامج التطوير في الخلايا الشبيهة بالسلف التي قد تكون موجودة داخل الأذن الداخلية13. كان النهج الثاني هو النظر خارج الثدييات ، إلى الفقاريات غير الثديية التي يحدث فيها تجديد قوي لخلايا الشعر السمعية ، مثل الطيور14,15. في الطيور ، يحدث تجديد خلايا الشعر في الغالب من خلال إزالة تمايز الخلية الداعمة إلى حالة تشبه السلف ، يليها الانقسام الانقسامي غير المتماثل لتوليد خلية شعرية وخلية داعمة16. بالإضافة إلى ذلك ، لوحظ أيضا التمايز المباشر للخلية الداعمة لتوليد خلية شعرية17.
في حين أن آليات التطور السمعي للطيور تظهر أوجه تشابه كبيرة مع تلك الخاصة بالثدييات ، إلا أن هناك اختلافات18. يظهر تمايز HC و SC في الفرخ BP من اليوم الجنيني (E) 7 ، ويصبح أكثر وضوحا بمرور الوقت. بواسطة E12 ، يمكن تصور الحليمة القاعدية ذات النمط الجيد والاستقطاب الجيد (BP) ، وبواسطة E17 يمكن رؤية خلايا الشعر المتطورةجيدا 19. توفر هذه النقاط الزمنية نوافذ على آليات التمايز والزخرفة والقطبية ، بالإضافة إلى نضوج خلايا الشعر. من المهم فهم ما إذا كانت هذه الآليات محفوظة أو متباينة ، لأنها توفر نظرة ثاقبة للتماثل العميق لأصول خلايا الشعر الحسية الميكانيكية.
هنا ، نعرض مجموعة من التقنيات التي يتم إجراؤها في المراحل الجنينية المبكرة والمتأخرة لدراسة العمليات الخلوية مثل الانتشار ، وتحديد مصير ، والتمايز ، والأنماط ، والصيانة طوال تطور عضو الأذن الداخلية. هذا يكمل البروتوكولات الأخرى لفهم تطور الأذن الداخلية في زراعة النباتات20،21،22. نناقش أولا إدخال الحمض النووي أو الحمض النووي الريبي الخارجي في سلائف BP داخل كيس الأذن E3.5 باستخدام التثقيب الكهربائي للبيض. على الرغم من أن التلاعب الجيني يمكن أن يوفر رؤى قيمة ، إلا أن الأنماط الظاهرية المتولدة على هذا النحو يمكن أن تكون متعددة الاتجاهات وبالتالي مربكة. هذا صحيح بشكل خاص أثناء تطور الأذن الداخلية في وقت لاحق ، حيث تلعب العمليات الأساسية مثل إعادة تشكيل الهيكل الخلوي أدوارا متعددة في انقسام الخلايا ، وتشكل الأنسجة ، والتخصص الخلوي. نقدم بروتوكولات للتثبيط الدوائي في النباتات المستزرعة ، والتي توفر مزايا في التحكم في الجرعة وتوقيت العلاج ومدته ، مما يوفر معالجة زمانية مكانية دقيقة لآليات النمو.
يمكن استخدام طرق زراعة الأعضاء المختلفة اعتمادا على مدة علاج المثبطات الصغيرة. نوضح هنا طريقتين لزراعة الأعضاء تسمح بإلقاء نظرة ثاقبة على التشكل الظهاري والتخصص الخلوي. طريقة لثقافة 3D باستخدام الكولاجين كمصفوفة لثقافة قناة القوقعة تمكن من زراعة قوية والتصور الحي ل BP النامية. لفهم تكوين الأهداب المجسمة ، نقدم طريقة زراعة الغشاء بحيث يتم استزراع الأنسجة الظهارية على مصفوفة صلبة تمكن نتوءات الأكتين من النمو بحرية. تسمح كلتا الطريقتين بالمعالجة النهائية مثل تصوير الخلايا الحية ، والكيمياء المناعية ، والمسح المجهري الإلكتروني (SEM) ، وتسجيل الخلايا ، وما إلى ذلك. توفر هذه التقنيات خارطة طريق للاستخدام الفعال للفرخ كنظام نموذجي لفهم ومعالجة تطور ونضج وتجديد ظهارة الطيور السمعية.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 488 Phalloidin</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A12379</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 647 Phalloidin</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A22287</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alt-R S.p. HiFi Cas9 Nuclease V3</td>
			<td>Integrated DNA Technologies</td>
			<td>1081061</td>
			<td>High fidelity Cas9 protein</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-GFP antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab290</td>
			<td>Rabbit polyclonal to GFP</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A9647</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium Chloride Dihydrate</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>Q12135</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagen I, rat tail</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A1048301</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Critical Point Dryer Leica EM CPD300</td>
			<td>Leica</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CUY-21 Electroporator</td>
			<td>Nepagene</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D8418</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DM5000B Widefield Microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM, high glucose, GlutaMAX Supplement, pyruvate</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>10569010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #5 Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11251-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #55 Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11255-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fast Green FCF</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F7252</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluoroshield</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F6182</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FLUOVIEW 3000 Laser Scanning Microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutaraldehyde (25 %)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>340855</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-Mouse IgG Secondary Antibody, Alexa Fluor 488</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A-11001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-Mouse IgG Secondary Antibody, Alexa Fluor 594</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A-11032</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-Rabbit IgG Secondary Antibody, Alexa Fluor 488</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A-11008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat Serum Sterile filtered</td>
			<td>HiMedia</td>
			<td>RM10701</td>
			<td>Heat inactivated</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hanks&#39; Balanced Salt Solution (HBSS)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>14025092</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LSM980 Airyscan Microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Millicell Cell Culture Insert, 30 mm, hydrophilic PTFE, 0.4 &#181;m</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>PICM03050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MVX10 Stereo Microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MYO7A antibody</td>
			<td>DSHB</td>
			<td>138-1</td>
			<td>Mouse monoclonal to Unconventional myosin-VIIa</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MZ16 Dissecting microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-2 Supplement (100X)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>17502048</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Noyes Scissors, 14cm (5.5&#39;&#39;)</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>501237</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Osmium tetroxide (4%)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>75632</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>158127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PC-10 Puller</td>
			<td>Narishige</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pcU6_1sgRNA</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>92395</td>
			<td>Mini vector with modified chicken U6 promoter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin G sodium salt</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P3032</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffered Saline (PBS)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>10010023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ProLong Gold Antifade Mountant</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>P36934</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SMZ1500 Dissecting microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Cacodylate Buffer, 0.2M</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>11652</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride</td>
			<td>HiMedia</td>
			<td>GRM853</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sputtre Coater K550X</td>
			<td>Emitech</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Standard Glass Capillaries 3 in, OD 1.0 mm, No Filament</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>1B100-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>84097</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>The MERLIN Compact VP</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thiocarbohydrazide</td>
			<td>Alfa Aesar</td>
			<td>L01205</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TWEEN 20</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P1379</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in ovo and ex ovo methods to study avian inner ear development

تدرك الأذن الداخلية الصوت وتحافظ على التوازن باستخدام القوقعة والدهليز. يقوم بذلك باستخدام نوع خلية حسية ميكانيكية مخصصة تعرف باسم خلية الشعر. أدت الأبحاث الأساسية في الأذن الداخلية إلى فهم عميق لكيفية عمل خلايا الشعر ، وكيف يمكن أن يؤدي عدم التنظيم إلى فقدان السمع والدوار. بالنسبة لهذا البحث ، كان الماوس هو النظام النموذجي البارز. ومع ذلك ، فقدت الفئران ، مثل جميع الثدييات ، القدرة على استبدال خلايا الشعر. وبالتالي ، عند محاولة فهم العلاجات الخلوية لاستعادة وظيفة الأذن الداخلية ، يمكن أن توفر الدراسات التكميلية في أنواع الفقاريات الأخرى مزيدا من الأفكار. الظهارة السمعية للطيور ، الحليمة القاعدية (BP) ، هي ورقة من الظهارة تتكون من خلايا شعرية حسية ميكانيكية (HCs) مقحمة بخلايا داعمة (SCs). على الرغم من اختلاف البنية التشريحية للحليمة القاعدية وقوقعة الثدييات ، إلا أن الآليات الجزيئية لتطور الأذن الداخلية والسمع متشابهة. هذا يجعل الحليمة القاعدية نظاما مفيدا ليس فقط للدراسات المقارنة ولكن أيضا لفهم التجديد. هنا ، نصف تقنيات التشريح والتلاعب للأذن الداخلية للدجاج. تظهر هذه التقنية طرق تثبيط الجزيئات الجينية والصغيرة ، والتي توفر أداة قوية لدراسة الآليات الجزيئية لتطور الأذن الداخلية. في هذه الورقة ، نناقش في تقنيات التثقيب الكهربائي للبيض لاضطراب الحليمة القاعدية وراثيا باستخدام حذف CRIPSR-Cas9 ، يليه تشريح الحليمة القاعدية. نوضح أيضا ثقافة أعضاء BP والاستخدام الأمثل لمصفوفات الثقافة ، لمراقبة تطور الظهارة وخلايا الشعر.

في إعداد التثقيب الكهربائي ، يمكن أن يلعب تحديد موضع القطب دورا في مجال النقل. يتم وضع القطب الموجب تحت صفار البيض ، والسالب فوق الجنين (الشكل 1 أ). ينتج عن هذا تعبير GFP أعلى في جزء كبير من الأذن الداخلية وكلا الجهازين الدهليزيين (الشكل 1B) ، والحليمة القاعدية ا?...

Watch this Scientific Journal Video about In Ovo and Ex Ovo Methods to Study Avian Inner Ear Development at JoVE.com

In Ovo and Ex Ovo Methods to Study Avian Inner Ear Development

الفرخ هو كائن نموذجي فعال من حيث التكلفة ويمكن الوصول إليه ومتاح على نطاق واسع لمجموعة متنوعة من الدراسات. هنا ، يتم تفصيل سلسلة من البروتوكولات لفهم الآليات الجزيئية الكامنة وراء تطور الأذن الداخلية للطيور وتجديدها.

في طرق Ovo و Ex Ovo لدراسة تطور الأذن الداخلية للطيور

The inner ear perceives sound and maintains balance using the cochlea and vestibule. It does this by using a dedicated mechanosensory cell type known as ...

يمكن أن يتسبب العمر والعدوى والأدوية السامة للأذن في تنكس خلايا الشعر في الأذن الداخلية ، مما يؤدي فينا إلى فقدان السمع. في الفقاريات غير الثديية ، مثل الفرخ ، يمكن تجديد خلايا الشعر. تستفيد التقنيات الموضحة هنا من فعالية التكلفة للعمل على أجنة الفرخ ، وسهولة الحصول على الأجنة ، والتطور الجيد لنباتات الأنسجة.يمكن أن يوفر فهم نمو شعر الأذن الداخلية للطيور وتجديده رؤى مهمة حول فقدان السمع والعلاجات المحتملة ، ويمكن أن تكون زراعة النباتات مهمة لتقييم التأثيرات السامة للأذن للأدوية المختلفة. قبل البدء في التجربة ، قم بشراء البيض الطازج ، ونظفه بنسبة 70٪ من الإيثانول لمنع التلوث. احتضان البيض لمدة 3.5 إلى 4 أيام ، عند 37 إلى 38 درجة مئوية مع رطوبة 45٪.بعد الحضانة ، أعد وضع الجنين في أعلى صفار البيض ، عن طريق وضع بيضة على جانبه لمدة خمس دقائق. بعد ذلك ، استخدم ملقط لعمل ثقب صغير في الجزء العلوي ونهاية حادة للبيضة لتمرير إبرة قياس 21. باستخدام حقنة سعة خمسة ملليلتر وإبرة قياس 21 ، قم بإزالة ملليلتر من الألبومين من ثقب في الطرف الحاد للبيضة.قم بتغطية الفتحة في النهاية الحادة باستخدام شريط شفاف. لجعل نافذة البيض تلصق الشريط الشفاف على الجزء العلوي من قشرة البيضة. امسك الإبر من الحقن المجهري من الشعيرات الدموية الزجاجية القياسية باستخدام مجتذب ماصة عمودي.بعد السحب ، قم بقطع الطرف الشعري باستخدام ملقط دقيق للحصول على قطر طرف يبلغ حوالي 50 ميكرومتر بنهاية مدببة. بالنسبة لتجربة خروج المغلوب الجيني ، امزج التركيبات الثلاثة ، وهي البلازميد الإرشادي ، pcU6.1sgRNA ، T2KeGFP ، T2TP بنسبة واحد إلى واحد إلى واحد مع ميكروجرام واحد من بروتين SP Cas9 ، 30٪ سكروز ، و 0.1٪ صبغة خضراء سريعة ، وحجم نهائي يبلغ 10 ميكرولتر. أثناء البلازميدات المتعددة ، تأكد من أن التركيز النهائي للحمض النووي لا يقل عن أربعة ميكروجرامات لكل ميكرولتر.مع مساعدة من مقص springbow قطع مفتوحة حول نافذة طولها سنتيمترين وعرضها 1.5 سم ، وفضح الجنين. ثم استخدم الملقط لفتح الأغشية المشيمية التي تغطي الجنين ، مما يسمح بالوصول إلى الجنين. حقن حوالي 200 نانولتر من مزيج محلول الحمض النووي لملء الحويصلة الأذنية.لتحديد دليل كفاءة الحمض النووي الريبي إجراء فحص نوكلياز T7. أضف 0.719٪ قطرات ملحية إلى الجنين لخفض المقاومة الكهربائية ، ومنع ارتفاع درجة الحرارة. بعد ذلك ، ضع القطب الموجب من خلال الفتحة المصنوعة في الجانب الحاد من البيضة ، وقم بمناورة القطب بحيث يكون تحت صفار البيض.ضع القطب السالب فوق كيس الأذن المملوء. لنقل البلازميد إلى الحويصلة الأذنية باستخدام التثقيب الكهربائي ، استخدم مولد نبضة مربعة ، وقم بتطبيق خمس نبضات من 25 فولت لمدة 100 مللي ثانية لكل منها ، بفارق 50 مللي ثانية. تحديد الظروف تجريبيا على أساس إعداد التثقيب الكهربائي الفردي.بعد التثقيب الكهربائي ، رطب الجنين بإضافة بضع قطرات من 0.719٪ محلول ملحي. أعد ختم البيضة بشريط شفاف ، والعودة إلى الحاضنة المرطبة عند 37 إلى 38 درجة مئوية لمزيد من الحضانة. تطهير الطاولة الجراحية ، ومرحلة المجهر ، والمنطقة المحيطة بها باستخدام 70٪ من الإيثانول والحرارة ، أو الكحول تعقيم معدات التشريح الدقيقة ، بما في ذلك مقص قوس الربيع الحد الأدنى ، ومكشطة دقيقة ، وزوجين من الملقط الناعم.قم بإعداد ألواح التشريح بما في ذلك طبق بتري زجاجي بقاعدة سيليكون سوداء ، وطبق بتري بلاستيكي 90 ملم ، وطبق بتري 60 ملم. حافظ على محلول الملح المتوازن من PBS أو Hanks المعروف أيضا باسم HBSS جاهزا للتشريح. اكسر البيضة برفق في طبق بتري 90 ملم.ثم حدد الأذن الخارجية للفرخ ، وانقل الرأس إلى طبق بتري 60 ملم مملوء بالجليد البارد PBS. بعد ذلك ، قم بتوجيه الجنين بحيث يكون الجزء العلوي من المنقار مواجها للداخل ، وأمسك المنقار باستخدام أحد الملقط رقم خمسة. استخرج العينين باستخدام ملقط الرقم خمسة الثاني.ثم ، من المنبر إلى الذيلي ، قطع على طول الجمجمة على طول خط الوسط ، واستخراج الدماغ. أضف المزيد من PBS البارد ، أو HBSS ، وحدد موقع اثنين من otoliths من lagena كهياكل لامعة في نهاية قناة القوقعة ، وعلى مقربة من خط الوسط. لعزل أذنين داخليتين ، اقطع بين اللاجينات ، وأعلى وأسفل المنطقة.ثم تحت الإضاءة المائلة تصور الخطوط العريضة للأذن الداخلية ، وإزالة الأنسجة الدخيلة والدهليز. انقل القوقعة المعزولة إلى صفيحة قاعدة سيليكون سوداء مع PBS بارد مثلج. انزع كبسولة القوقعة الغضروفية باستخدام ملقط رقم خمسة للحصول على قناة القوقعة.ثم حدد موقع الطبقة المتموجة أو tegmentum من القناة القوقعية ، وقم بإزالتها باستخدام عدد 55 ملقط لكشف الحليمة القاعدية أو BP. بعد ذلك ، قم بإزالة الغشاء التكتوري لفضح خلايا الشعر والخلايا الداعمة باستخدام عدد 55 ملقط. بالنسبة للاستزراع الغشائي للحليمة القاعدية ، خذ صفيحة زراعة الأنسجة المكونة من ستة آبار ، وقم بترتيب إدراج غشاء زراعة واحد لكل بئر. ارسم بعض الوسائط في ماصة سعة 200 ميكرولتر ، ثم قم بشفط نبات الحليمة القاعدية المشريح باستخدام مخزن مؤقت X HBSS.انقل النبات إلى غشاء ، وقم بتوجيهه بحيث تواجه الحليمة القاعدية لأعلى ، ويكون الشعر والخلايا الداعمة مرئية من الأعلى. بمجرد وضع explant ، قم بشفط المخزن المؤقت HBSS ببطء من سطح غشاء الثقافة. في هذه العملية ، سوف يعلق النبات على غشاء الثقافة.املأ بئر صفيحة الآبار الستة بإضافة 1.2 ملليلتر من وسط النسر المعدل من دولبيكو ، أو وسائط الاستزراع DMEM ، بين إدخال الغشاء وجدار البئر. لتحضير مزرعة الكولاجين في قناة القوقعة ، أضف ثلاث قطرات من خليط الكولاجين الطازج في كل بئر من صفيحة أربعة آبار ، وانقل قناة القوقعة تشريح إلى كل قطرة كولاجين. احتضان الطبق لمدة 10 دقائق عند 37 درجة مئوية ، و 5٪ ثاني أكسيد الكربون لعلاج مصفوفة الكولاجين.للحصول على معالجة جزيء صغير للمزارع ، استبدل وسائط الاستزراع ب 700 ميكرولتر من الوسائط المكملة بالمغير الدوائي ، مثل البنسلين ، واحتضان الألواح كما هو موضح من قبل. استبدال 50٪ من وسائل الإعلام الثقافية كل يوم. بعد وقت الحضانة المناسب ، قم بإزالة وسائط الاستزراع ، واستخدم النباتات الخارجية لفحوصات المصب.في إعداد التثقيب الكهربائي ، أدى وضع القطب الكهربائي الصحيح إلى تعبير GFP أعلى في الأذن الداخلية في كلا الجهازين الدهليزيين ، والحليمة القاعدية السمعية التي تؤكد النقل. كريسبر كاس 9 بوساطة الضربة القاضية الجين Atoh1 في الأذن الداخلية ، مما أدى إلى فقدان خلايا الشعر. خروج جين Atoh1 عن طريق التثقيب الكهربائي للبيض متبوعا بالحضانة حتى أظهر E10 انخفاضا في نمو خلايا الشعر مقارنة بالتحكم في البلازميد الفارغ.على الرغم من أن التثقيب الكهربائي عبارة عن فسيفساء ، إلا أن الخلايا الضابطة بالكهرباء كانت قادرة على تكوين خلايا شعرية. في عينات Atoh1 gRNA الكهربائية ، لم تظهر الخلايا الإيجابية لبروتين الفلورسنت الأخضر أبدا علامات تطور خلايا الشعر. قدمت ثقافة الجهاز من الحليمة القاعدية في مصفوفة 3D ، مثل الكولاجين والبقع مع الأجسام المضادة ضد مستضد خلايا الشعر الحفاظ على ممتازة من مورفولوجيا الأنسجة لمدة تصل إلى خمسة أيام.تم الحفاظ على تنظيم خلايا الشعر والخلايا الداعمة في ظروف المزرعة هذه. يمكن الحفاظ على مزارع الأعضاء على الغشاء لمدة تصل إلى خمسة أيام مع الحفاظ على سلامة حزمة الشعر. يمكن ملاحظة ذلك في الصورة التمثيلية من خلال توطين بروتين رابط الطرف ، protocadherin 15.للتحقيق في تطور حزمة الشعر ، يمكن أن يوفر التصوير عالي الدقة ، مثل الفحص المجهري فائق الدقة أو المجهر الإلكتروني الماسح مزيدا من المعلومات. يجب الحفاظ على الظروف المعقمة طوال العملية. أثناء التفريغ الكهربائي ، تأكد من أن الأجنة لا تجف.عند معايرة مثبطات الدوائية ، يمكن للمرء تقليل التركيز للتغلب على أي فتك. يمكن أخذ كل من الأجنة والنباتات الخارجية لإجراء تجارب التصوير. إما عن طريق إجراء المجهر بالفيديو في الوقت الفعلي ، أو المجهر الإلكتروني البؤري للضوء الثابت ، كما هو موضح في البروتوكول.نظرا لسهولة وإمكانية استخدام نباتات الأذن الداخلية للكتكوت ، يمكننا استخدام وسيط من خلال فحص الدليل لتحديد جزيئات جديدة ضرورية لتجديد خلايا الشعر.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

In Ovo and Ex Ovo Methods to Study Avian Inner Ear Development

Efficient Gene Transfer in Chick Retinas for Primary Cell Culture Studies: An Ex-ovo Electroporation Approach

Efficient Gene Transfer in Chick Retinas for Primary Cell Culture Studies: An Ex-ovo Electroporation Approach

كفاءة نقل الجينات في شبكية العين الفرخ عن الخلية الأولية دراسات الثقافة: ل<em&gt; السابقين البيضة</em&gt; Electroporation للمنهج

The cone photoreceptor-enriched cultures derived from embryonic chick retinas have become an indispensable tool for researchers around the world studying ...

Optimized Ex-ovo Culturing of Chick Embryos to Advanced Stages of Development

Optimized Ex-ovo Culturing of Chick Embryos to Advanced Stages of Development

الأمثل<em&gt; السابقين البيضة</em&gt; التثقيف من الفرخ الأجنة إلى مراحل متقدمة من التطوير

Research in anatomy, embryology, and developmental biology has largely relied on the use of model organisms. In order to study development in live embryos ...

Gene Transfer into the Chicken Auditory Organ by In Ovo Micro-electroporation

Gene Transfer into the Chicken Auditory Organ by In Ovo Micro-electroporation

نقل الجينات إلى داخل الجهاز الدجاج السمعية التي كتبها<em&gt; في البيضة</em&gt; الصغرى Electroporation لل

Chicken embryos are ideal model systems for studying embryonic development as manipulations of gene function can be conducted with relative ease in ovo. ...

A Novel Ex Ovo Banding Technique to Alter Intracardiac Hemodynamics in an Embryonic Chicken System

A Novel Ex Ovo Banding Technique to Alter Intracardiac Hemodynamics in an Embryonic Chicken System

رواية<em&gt; البيضة السابقين</em&gt; التطويق وتقنيات لتغيير داخل القلب ديناميكا الدم في نظام الجنينية الدجاج

The new model presented here can be used to understand the influence of hemodynamics on specific cardiac developmental processes, at the cellular and ...

A Submerged Filter Paper Sandwich for Long-term Ex Ovo Time-lapse Imaging of Early Chick Embryos

A Submerged Filter Paper Sandwich for Long-term Ex Ovo Time-lapse Imaging of Early Chick Embryos

والمغمورة ساندويتش ورقة مرشح للالمدى الطويل<em&gt; البيضة السابقين</em&gt; الوقت الفاصل بين التصوير من وقت مبكر الفرخ الأجنة

Due to its availability, low cost, flat geometry, and transparency, the ex ovo chick embryo has become a major vertebrate animal model for the study of ...

In Ovo Electroporation in the Chicken Auditory Brainstem

In Ovo Electroporation in the Chicken Auditory Brainstem

في أوفو إليكتروبوراتيون في الدماغ الدماغ السمعي

Electroporation is a method that introduces genes of interest into biologically relevant organisms like the chicken embryo. It is long established that ...

Methods for the Study of Regeneration in Stentor

Methods for the Study of Regeneration in Stentor

أساليب لدراسة التجديد في ستنتور

Cells need to be able to regenerate their parts to recover from external perturbations. The unicellular ciliate Stentor coeruleus is an excellent model ...

Whole-Mount In Situ Hybridization in Zebrafish Embryos and Tube Formation Assay in iPSC-ECs to Study the Role of Endoglin in Vascular Development

التهجين الكامل في الموقع في أجنة حمار وحشي وأنبوب تشكيل اساي في iPSC-ECs لدراسة دور Endoglin في التنمية الوعائية

Vascular development is determined by the sequential expression of specific genes, which can be studied by performing in situ hybridization assays in ...

Creating Avian Forebrain Chimeras to Assess Facial Development

إنشاء كيميرا الدماغ الأمامي للطيور لتقييم نمو الوجه

The avian embryo has been used as a model system for more than a century and has led to fundamental understanding of vertebrate development. One of the ...

In Ovo Feeding of Commercial Broiler Eggs: An Accurate and Reproducible Method to Affect Muscle Development and Growth

In Ovo Feeding of Commercial Broiler Eggs: An Accurate and Reproducible Method to Affect Muscle Development and Growth

في أوفو تغذية بيض اللاحم التجاري: طريقة دقيقة وقابلة للتكرار للتأثير على نمو العضلات ونموها

Within the past three decades, red meat and poultry scientists focused on developing strategies and technologies to manipulate muscle development during ...