Name: in ovo and ex ovo methods to study avian inner ear development
Uploaded: 2022-06-16T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In Ovo and Ex Ovo Methods to Study Avian Inner Ear Development at JoVE.com

NCBS, TIFR, Infosys-TIFR Leading Edge Research Grant, DST-SERB ve Royal National Institute for the Deaf'ın desteğini minnetle kabul ediyoruz. Merkezi Kanatlı Geliştirme Organizasyonu ve Eğitim Enstitüsü, Hesaraghatta, Bengaluru'ya teşekkür ederiz. NCBS'deki CIFF ve EM tesisine ve laboratuvar desteğine minnettarız. Tol2-eGFP ve T2TP yapıları için Yoshiko Takahashi ve Koichi Kawakami'ye, HCA ve G19 Pcdh15 antikoru için Guy Richardson'a teşekkür ederiz. Earlab üyelerine protokol hakkındaki sürekli destekleri ve değerli geri bildirimleri için minnettarız.

Döllenmiş tavuk yumurtası ve yumurtadan çıkmamış embriyoların tedariki, kültürü ve kullanımını içeren protokoller, Bengaluru, Karnataka Ulusal Biyolojik Bilimler Merkezi Kurumsal Hayvan Etik Komitesi tarafından onaylanmıştır.
1. Civciv işitsel öncüllerinin ovo elektroporasyonunda
<ol><li>CRISPR/Cas9 gen nakavtı için sgRNA tasarımı ve klonlama<ol><li>Gen nakavtları oluşturmak için, DNA'ları genin ekzon bölgelerini, tercihen kodlama böl...

<ol>
	<li>Sai, X., Ladher, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+steps+in+inner+ear+development:+induction+and+morphogenesis+of+the+otic+placode.">Early steps in inner ear development: induction and morphogenesis of the otic placode.</a> Frontiers in Pharmacology. 6, 19 (2015).</li><li>Groves, A. K., Fekete, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Shaping+sound+in+space:+the+regulation+of+inner+ear+patterning.">Shaping sound in space: the regulation of inner ear patterning.</a> Development. 139 (2), 245-257 (2012).</li><li>Driver, E. C., Kelley, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+the+cochlea.">Development of the cochlea.</a> Development. 147 (12), (2020).</li><li>Richardson, G. P., Petit, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hair-bundle+links:+genetics+as+the+gateway+to+function.">Hair-bundle links: genetics as the gateway to function.</a> Cold Spring Harbor Perspectives in Medicine. 9 (12), 033142 (2019).</li><li>Tilney, L. G., Cotanche, D. A., Tilney, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Actin+filaments,+stereocilia+and+hair+cells+of+the+bird+cochlea.+VI.+How+the+number+and+arrangement+of+stereocilia+are+determined.">Actin filaments, stereocilia and hair cells of the bird cochlea. VI. How the number and arrangement of stereocilia are determined.</a> Development. 116 (1), 213-226 (1992).</li><li>Jones, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ciliary+proteins+link+basal+body+polarization+to+planar+cell+polarity+regulation.">Ciliary proteins link basal body polarization to planar cell polarity regulation.</a> Nature Genetics. 40 (1), 69-77 (2008).</li><li>Sipe, C. W., Lu, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kif3a+regulates+planar+polarization+of+auditory+hair+cells+through+both+ciliary+and+non-ciliary+mechanisms.">Kif3a regulates planar polarization of auditory hair cells through both ciliary and non-ciliary mechanisms.</a> Development. 138 (16), 3441-3449 (2011).</li><li>May-Simera, H. L., Kelley, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cilia,+Wnt+signaling,+and+the+cytoskeleton.">Cilia, Wnt signaling, and the cytoskeleton.</a> Cilia. 1 (1), 1 (2012).</li><li>Ebrahim, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stereocilia-staircase+spacing+is+influenced+by+myosin+III+motors+and+their+cargos+espin-1+and+espin-like.">Stereocilia-staircase spacing is influenced by myosin III motors and their cargos espin-1 and espin-like.</a> Nature Communications. 7, 10833 (2016).</li><li>Corwin, J. T., Cotanche, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regeneration+of+sensory+hair+cells+after+acoustic+trauma.">Regeneration of sensory hair cells after acoustic trauma.</a> Science. 240 (4860), 1772-1774 (1988).</li><li>Collado, M. S., Burns, J. C., Hu, Z., Corwin, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+advances+in+hair+cell+regeneration+research.">Recent advances in hair cell regeneration research.</a> Current Opinion in Otolaryngology &amp; Head and Neck Surgery. 16 (5), 465-471 (2008).</li><li>Edge, A. S., Chen, Z. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hair+cell+regeneration.">Hair cell regeneration.</a> Current Opinion in Neurobiology. 18 (4), 377-382 (2008).</li><li>Atkinson, P. J., Huarcaya Najarro, E., Sayyid, Z. N., Cheng, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensory+hair+cell+development+and+regeneration:+similarities+and+differences.">Sensory hair cell development and regeneration: similarities and differences.</a> Development. 142 (9), 1561-1571 (2015).</li><li>Brignull, H. R., Raible, D. W., Stone, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Feathers+and+fins:+non-mammalian+models+for+hair+cell+regeneration.">Feathers and fins: non-mammalian models for hair cell regeneration.</a> Brain Research. 1277, 12-23 (2009).</li><li>Rubel, E. W., Furrer, S. A., Stone, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+brief+history+of+hair+cell+regeneration+research+and+speculations+on+the+future.">A brief history of hair cell regeneration research and speculations on the future.</a> Hearing Research. 297, 42-51 (2013).</li><li>Stone, J. S., Cotanche, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hair+cell+regeneration+in+the+avian+auditory+epithelium.">Hair cell regeneration in the avian auditory epithelium.</a> The International Journal of Developmental Biology. 51 (6-7), 633-647 (2007).</li><li>Roberson, D. W., Alosi, J. A., Cotanche, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+transdifferentiation+gives+rise+to+the+earliest+new+hair+cells+in+regenerating+avian+auditory+epithelium.">Direct transdifferentiation gives rise to the earliest new hair cells in regenerating avian auditory epithelium.</a> Journal of Neuroscience Research. 78 (4), 461-471 (2004).</li><li>Fritzsch, B., Beisel, K. W., Pauley, S., Soukup, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+evolution+of+the+vertebrate+mechanosensory+cell+and+ear.">Molecular evolution of the vertebrate mechanosensory cell and ear.</a> The International Journal of Developmental Biology. 51 (6-7), 663-678 (2007).</li><li>Tilney, L. G., DeRosier, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Actin+filaments,+stereocilia,+and+hair+cells+of+the+bird+cochlea.+IV.+How+the+actin+filaments+become+organized+in+developing+stereocilia+and+in+the+cuticular+plate.">Actin filaments, stereocilia, and hair cells of the bird cochlea. IV. How the actin filaments become organized in developing stereocilia and in the cuticular plate.</a> Developmental Biology. 116 (1), 119-129 (1986).</li><li>Oesterle, E. C., Tsue, T. T., Reh, T. A., Rubel, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hair-cell+regeneration+in+organ+cultures+of+the+postnatal+chicken+inner+ear.">Hair-cell regeneration in organ cultures of the postnatal chicken inner ear.</a> Hearing Research. 70 (1), 85-108 (1993).</li><li>Honda, A., Freeman, S. D., Sai, X., Ladher, R. K., O'Neill, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+placode+to+labyrinth:+culture+of+the+chicken+inner+ear.">From placode to labyrinth: culture of the chicken inner ear.</a> Methods. 66 (3), 447-453 (2014).</li><li>Matsunaga, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Initiation+of+supporting+cell+activation+for+hair+cell+regeneration+in+the+avian+auditory+epithelium:+an+explant+culture+model.">Initiation of supporting cell activation for hair cell regeneration in the avian auditory epithelium: an explant culture model.</a> Frontiers in Cellular Neuroscience. 14, 583994 (2020).</li><li>Concordet, J. P., Haeussler, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CRISPOR:+intuitive+guide+selection+for+CRISPR/Cas9+genome+editing+experiments+and+screens.">CRISPOR: intuitive guide selection for CRISPR/Cas9 genome editing experiments and screens.</a> Nucleic Acids Research. 46, 242-245 (2018).</li><li>Gandhi, S., Piacentino, M. L., Vieceli, F. M., Bronner, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+CRISPR/Cas9+genome+editing+for+loss-of-function+in+the+early+chick+embryo.">Optimization of CRISPR/Cas9 genome editing for loss-of-function in the early chick embryo.</a> Developmental Biology. 432 (1), 86-97 (2017).</li><li>Green, M. R., Sambrook, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cloning+and+transformation+with+plasmid+vectors.">Cloning and transformation with plasmid vectors.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2021 (11), (2021).</li><li>Sato, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stable+integration+and+conditional+expression+of+electroporated+transgenes+in+chicken+embryos.">Stable integration and conditional expression of electroporated transgenes in chicken embryos.</a> Developmental Biology. 305 (2), 616-624 (2007).</li><li>Takahashi, Y., Watanabe, T., Nakagawa, S., Kawakami, K., Sato, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transposon-mediated+stable+integration+and+tetracycline-inducible+expression+of+electroporated+transgenes+in+chicken+embryos.">Transposon-mediated stable integration and tetracycline-inducible expression of electroporated transgenes in chicken embryos.</a> Methods in Cell Biology. 87, 271-280 (2008).</li><li>Mashal, R. D., Koontz, J., Sklar, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+mutations+by+cleavage+of+DNA+heteroduplexes+with+bacteriophage+resolvases.">Detection of mutations by cleavage of DNA heteroduplexes with bacteriophage resolvases.</a> Nature Genetics. 9 (2), 177-183 (1995).</li><li>Ogier, J. M., Burt, R. A., Drury, H. R., Lim, R., Nayagam, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organotypic+culture+of+neonatal+murine+inner+ear+explants.">Organotypic culture of neonatal murine inner ear explants.</a> Frontiers in Cellular Neuroscience. 13, 170 (2019).</li><li>Davies, S., Forge, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+the+mammalian+organ+of+Corti+for+scanning+electron+microscopy.">Preparation of the mammalian organ of Corti for scanning electron microscopy.</a> Journal of Microscopy. 147, 89-101 (1987).</li><li>Parker, A., Chessum, L., Mburu, P., Sanderson, J., Bowl, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Light+and+electron+microscopy+methods+for+examination+of+cochlear+morphology+in+mouse+models+of+deafness.">Light and electron microscopy methods for examination of cochlear morphology in mouse models of deafness.</a> Current Protocols in Mouse Biology. 6 (3), 272-306 (2016).</li><li>Bermingham, N. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Math1:+an+essential+gene+for+the+generation+of+inner+ear+hair+cells.">Math1: an essential gene for the generation of inner ear hair cells.</a> Science. 284 (5421), 1837-1841 (1999).</li><li>Goodyear, R. J., Forge, A., Legan, P. K., Richardson, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Asymmetric+distribution+of+cadherin+23+and+protocadherin+15+in+the+kinocilial+links+of+avian+sensory+hair+cells.">Asymmetric distribution of cadherin 23 and protocadherin 15 in the kinocilial links of avian sensory hair cells.</a> The Journal of Comparative Neurology. 518 (21), 4288-4297 (2010).</li><li>Bartolami, S., Goodyear, R., Richardson, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Appearance+and+distribution+of+the+275+kD+hair-cell+antigen+during+development+of+the+avian+inner+ear.">Appearance and distribution of the 275 kD hair-cell antigen during development of the avian inner ear.</a> The Journal of Comparative Neurology. 314 (4), 777-788 (1991).</li><li>Funahashi, J., Nakamura, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroporation+in+avian+embryos.">Electroporation in avian embryos.</a> Methods in Molecular Biology. 461, 377-382 (2008).</li><li>Nakamura, H., Funahashi, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroporation:+past,+present+and+future.">Electroporation: past, present and future.</a> Development, Growth &amp; Differentiation. 55 (1), 15-19 (2013).</li><li>Olaya-Sanchez, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fgf3+and+Fgf16+expression+patterns+define+spatial+and+temporal+domains+in+the+developing+chick+inner+ear.">Fgf3 and Fgf16 expression patterns define spatial and temporal domains in the developing chick inner ear.</a> Brain Structure &amp; Function. 222 (1), 131-149 (2017).</li><li>Jones, J. M., Warchol, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+the+Gata3+transcription+factor+in+the+acoustic+ganglion+of+the+developing+avian+inner+ear.">Expression of the Gata3 transcription factor in the acoustic ganglion of the developing avian inner ear.</a> The Journal of Comparative Neurology. 516 (6), 507-518 (2009).</li><li>Serralbo, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenesis+and+web+resources+in+quail.">Transgenesis and web resources in quail.</a> Elife. 9, 56312 (2020).</li></ol>

Civciv, bir laboratuvarın iç kulağı araştırmak için kullanabileceği model organizmalara uygun maliyetli ve kullanışlı bir ektir. Burada açıklanan yöntemler laboratuvarımızda rutin olarak kullanılmaktadır ve memeli iç kulağında devam eden araştırmaları tamamlamaktadır. Ovo'da elektroporasyon, civciv genomuna genetik manipülasyonlar sokmak için kullanılır. Elektroporasyon, belirli organellere veya hücre altı yapılara hedeflenen floresan proteinleri kodlayan yapıları tanıtmak içi...

Tüm omurgalıların iç kulağı, otik plakod 1,2 olarak bilinen basit bir epitelden türetilmiştir. Bu, işitme ve denge algısı ile ilişkili mekanosensoriyel bilgiyi dönüştürmek için gerekli tüm yapısal elemanlara ve hücre tiplerine yol açacaktır. İç kulağın siliyer sensörü olan saç hücreleri (HC'ler), destekleyici hücrelerle (SC'ler) çevrilidir. HC'ler, sekizinci kranial sinirin nöronları aracılığıyla işitsel arka beyne bilgi iletir. Bunlar ayrıca otik placode3'ten de üretilir. Sesin birincil iletimi, işitsel HC'nin apikal yüzeyinde, mekanik olarak hassas bir saç demeti4 aracılığıyla elde edilir. Buna, stereocilia adı verilen modifiye aktin bazlı çıkıntılar aracılık eder ve bunlar derecelendirilmiş, merdiven deseni5'te düzenlenir. Ek olarak, kinocilium adı verilen modifiye edilmiş bir birincil siliyum, saç demeti oluşumunu düzenler ve en uzun stereosilia 6,7,8 sırasına bitişiktir. Stereosilia mimarisi, akustik enerjiden türetilen mekanik uyaranların elektriksel nöral sinyallere dönüştürülmesindeki bu rol için kritik öneme sahiptir9. Yaşlanma, enfeksiyon, otoakustik travma veya ototoksik şok yoluyla işitsel HC'nin hasar görmesi, memelilerde geri dönüşü olmayan kısmi veya tam işitme kaybına neden olabilir10.
Bu tür hasarları onarabilecek hücresel replasman tedavileri önerilmiştir11,12. Bu araştırmanın yaklaşımı, memeli kıl hücresinin normal gelişimini anlamak ve iç kulakta bulunabilecek progenitör benzeri hücrelerde gelişim programlarının yeniden başlatılıp başlatılamayacağını sormak olmuştur13. İkinci bir yaklaşım, memelilerin dışına, kuşlar gibi işitsel saç hücrelerinin sağlam bir şekilde yenilenmesinin gerçekleştiği memeli olmayan omurgalılara bakmak olmuştur14,15. Kuşlarda, saç hücresi rejenerasyonu ağırlıklı olarak destekleyici bir hücrenin progenitör benzeri bir duruma farklılaşması yoluyla gerçekleşir, bunu bir saç hücresi ve destekleyici hücre16 oluşturmak için asimetrik mitotik bölünme izler. Ek olarak, bir saç hücresi oluşturmak için bir destekleyici hücrenin doğrudan farklılaşması da gözlenmiştir17.
Kuş işitsel gelişim mekanizmaları memelilerinkiyle önemli benzerlikler gösterirken, farklılıklar vardır18. Civciv BP'deki HC ve SC farklılaşması, embriyonik gün (E) 7'den belirgindir ve zamanla daha belirgin hale gelir. E12 ile iyi desenli ve iyi polarize olmuş bir baziler papilla (BP) görselleştirilebilir ve E17 ile iyi gelişmiş saç hücreleri görülebilir19. Bu zaman noktaları, saç hücresi olgunlaşmasının yanı sıra farklılaşma, modelleme ve polarite mekanizmalarına pencereler sağlar. Bu tür mekanizmaların korunmuş mu yoksa farklı mı olduğunu anlamak, mekanosensoriyel saç hücrelerinin kökenlerinin derin homolojisine dair içgörüler sağladıkları için önemlidir.
Burada, iç kulak organının gelişimi boyunca proliferasyon, kader spesifikasyonu, farklılaşma, modelleme ve bakım gibi hücresel süreçleri incelemek için erken ve geç embriyonik aşamalarda gerçekleştirilen bir dizi tekniği gösteriyoruz. Bu, eksplant kültüründe iç kulak gelişimini anlamaya yönelik diğer protokolleri tamamlar20,21,22. İlk olarak, ovo elektroporasyonunda kullanılan E3.5 otokist içindeki BP öncüllerine eksojen DNA veya RNA'nın sokulması tartışılmıştır. Genetik manipülasyonlar değerli bilgiler sağlayabilse de, bu şekilde üretilen fenotipler pleiotropik ve sonuç olarak kafa karıştırıcı olabilir. Bu, özellikle hücre iskeleti yeniden şekillenmesi gibi temel süreçlerin hücre bölünmesi, doku morfogenezi ve hücresel uzmanlaşmada çoklu rol oynadığı daha sonraki iç kulak gelişimi sırasında geçerlidir. Kültürlü eksplantlarda farmakolojik inhibisyon için protokoller sunuyoruz, bu da dozaj ve tedavi zamanlamasını ve süresini kontrol etmede avantajlar sunuyor ve gelişimsel mekanizmaların hassas mekansal zamansal manipülasyonunu sunuyor.
Küçük inhibitörlerin tedavi süresine bağlı olarak farklı organ kültürü yöntemleri kullanılabilir. Burada, epitelyal morfogenez ve hücresel uzmanlaşma hakkında fikir sahibi olmayı sağlayan iki organ kültürü yöntemi gösterilmektedir. Koklear kanalı kültürlemek için bir matris olarak kollajen kullanan 3D kültür için bir yöntem, gelişmekte olan BP'nin sağlam kültürlenmesini ve canlı görselleştirilmesini sağlar. Stereosilia oluşumunu anlamak için, epitel dokusunun aktin çıkıntılarının serbestçe büyümesini sağlayan sert bir matris üzerinde kültürlendiği bir membran kültürü yöntemi sunuyoruz. Her iki yöntem de canlı hücre görüntüleme, immünohistokimya, taramalı elektron mikroskobu (SEM), hücre kaydı vb. gibi aşağı akış işlemlerine izin verir. Bu teknikler, kuş işitsel epitelinin gelişimini, olgunlaşmasını ve yenilenmesini anlamak ve manipüle etmek için civcivin model bir sistem olarak etkili kullanımı için bir yol haritası sağlar.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 488 Phalloidin</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A12379</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 647 Phalloidin</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A22287</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alt-R S.p. HiFi Cas9 Nuclease V3</td>
			<td>Integrated DNA Technologies</td>
			<td>1081061</td>
			<td>High fidelity Cas9 protein</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-GFP antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab290</td>
			<td>Rabbit polyclonal to GFP</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A9647</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium Chloride Dihydrate</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>Q12135</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagen I, rat tail</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A1048301</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Critical Point Dryer Leica EM CPD300</td>
			<td>Leica</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CUY-21 Electroporator</td>
			<td>Nepagene</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D8418</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DM5000B Widefield Microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM, high glucose, GlutaMAX Supplement, pyruvate</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>10569010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #5 Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11251-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #55 Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11255-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fast Green FCF</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F7252</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluoroshield</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F6182</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FLUOVIEW 3000 Laser Scanning Microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutaraldehyde (25 %)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>340855</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-Mouse IgG Secondary Antibody, Alexa Fluor 488</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A-11001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-Mouse IgG Secondary Antibody, Alexa Fluor 594</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A-11032</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-Rabbit IgG Secondary Antibody, Alexa Fluor 488</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A-11008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat Serum Sterile filtered</td>
			<td>HiMedia</td>
			<td>RM10701</td>
			<td>Heat inactivated</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hanks&#39; Balanced Salt Solution (HBSS)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>14025092</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LSM980 Airyscan Microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Millicell Cell Culture Insert, 30 mm, hydrophilic PTFE, 0.4 &#181;m</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>PICM03050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MVX10 Stereo Microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MYO7A antibody</td>
			<td>DSHB</td>
			<td>138-1</td>
			<td>Mouse monoclonal to Unconventional myosin-VIIa</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MZ16 Dissecting microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-2 Supplement (100X)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>17502048</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Noyes Scissors, 14cm (5.5&#39;&#39;)</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>501237</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Osmium tetroxide (4%)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>75632</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>158127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PC-10 Puller</td>
			<td>Narishige</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pcU6_1sgRNA</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>92395</td>
			<td>Mini vector with modified chicken U6 promoter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin G sodium salt</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P3032</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffered Saline (PBS)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>10010023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ProLong Gold Antifade Mountant</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>P36934</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SMZ1500 Dissecting microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Cacodylate Buffer, 0.2M</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>11652</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride</td>
			<td>HiMedia</td>
			<td>GRM853</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sputtre Coater K550X</td>
			<td>Emitech</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Standard Glass Capillaries 3 in, OD 1.0 mm, No Filament</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>1B100-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>84097</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>The MERLIN Compact VP</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thiocarbohydrazide</td>
			<td>Alfa Aesar</td>
			<td>L01205</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TWEEN 20</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P1379</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in ovo and ex ovo methods to study avian inner ear development

İç kulak sesi algılar ve koklea ve antreyi kullanarak dengeyi korur. Bunu, saç hücresi olarak bilinen özel bir mekanosensoriyel hücre tipi kullanarak yapar. İç kulaktaki temel araştırmalar, saç hücresinin nasıl çalıştığının ve düzensizliğin işitme kaybına ve vertigoya nasıl yol açabileceğinin derinlemesine anlaşılmasını sağlamıştır. Bu araştırma için, fare önde gelen model sistemi olmuştur. Bununla birlikte, fareler, tüm memeliler gibi, saç hücrelerini değiştirme yeteneğini kaybetmişlerdir. Bu nedenle, iç kulak fonksiyonunu geri kazanmak için hücresel tedavileri anlamaya çalışırken, diğer omurgalı türlerinde tamamlayıcı çalışmalar daha fazla bilgi sağlayabilir. Kuşların işitsel epiteli olan baziler papilla (BP), destekleyici hücreler (SC'ler) tarafından interkalize edilmiş mekanosensoriyel saç hücrelerinden (HC'ler) oluşan bir epitel tabakasıdır. Baziller papilla ve memeli kokleanın anatomik mimarisi farklı olsa da, iç kulak gelişimi ve işitmenin moleküler mekanizmaları benzerdir. Bu, baziler papillayı sadece karşılaştırmalı çalışmalar için değil, aynı zamanda rejenerasyonu anlamak için de yararlı bir sistem haline getirir. Burada, tavuk iç kulağı için diseksiyon ve manipülasyon tekniklerini açıklıyoruz. Teknik, iç kulak gelişiminin moleküler mekanizmalarını incelemek için güçlü bir araç sunan genetik ve küçük molekül inhibisyon yöntemlerini gösterir. Bu yazıda, CRIPSR-Cas9 delesyonları kullanılarak baziler papillayı genetik olarak bozmak için ovo elektroporasyon tekniklerini, ardından baziler papillanın diseksiyonunu tartıştık. Ayrıca epitel ve saç hücrelerinin gelişimini gözlemlemek için BP organ kültürünü ve kültür matrislerinin optimal kullanımını da gösteriyoruz.

Elektroporasyon kurulumunda, elektrot konumlandırma transfeksiyon alanında rol oynayabilir. Pozitif elektrot yumurta sarısının altına, negatif ise embriyonun üstüne yerleştirilir (Şekil 1A). Bu, iç kulağın çoğunda ve hem vestibüler organlarda (Şekil 1B) hem de işitsel baziler papillada (Şekil 1C, D) daha yüksek GFP ekspresyonuna neden olur ve transfeksiyonu doğrular.
...

Watch this Scientific Journal Video about In Ovo and Ex Ovo Methods to Study Avian Inner Ear Development at JoVE.com

In Ovo and Ex Ovo Methods to Study Avian Inner Ear Development

Civciv, çeşitli çalışmalar için uygun maliyetli, erişilebilir ve yaygın olarak bulunan bir model organizmadır. Burada, kuş iç kulağı gelişimi ve yenilenmesinin altında yatan moleküler mekanizmaları anlamak için bir dizi protokol detaylandırılmıştır.

Ovo ve Ex Ovo'da Kuş İç Kulak Gelişimini İnceleme Yöntemleri

The inner ear perceives sound and maintains balance using the cochlea and vestibule. It does this by using a dedicated mechanosensory cell type known as ...

Yaş, enfeksiyon ve ototoksik ilaçlar, iç kulağın saç hücrelerinin dejenerasyonuna neden olabilir ve bu da içimizde işitme kaybına neden olur. Civciv gibi memeli olmayan omurgalılarda, saç hücreleri rejenere edilebilir. Burada açıklanan teknikler, civciv embriyoları üzerinde çalışmanın maliyet etkinliğinden, embriyo elde etme kolaylığından ve doku eksplantlarının iyi bir exo gelişiminden yararlanmaktadır.Kuş iç kulak kıllarının gelişimini ve yenilenmesini anlamak, işitme kaybı ve potansiyel tedaviler hakkında önemli bilgiler sağlayabilir ve eksplant kültürü, çeşitli ilaçların ototoksik etkilerini değerlendirmek için önemli olabilir. Deneye başlamadan önce, taze yumurtlanmış yumurtaları tedarik edin ve kontaminasyonu önlemek için% 70 etanol ile temizleyin. Yumurtaları 3,5 ila 4 gün boyunca,% 45 nem oranıyla 37 ila 38 santigrat derecede inkübe edin.Kuluçkadan sonra, embriyoyu beş dakika boyunca yan tarafına bir yumurta yerleştirerek yumurta sarısının tepesine yeniden yerleştirin. Ardından, 21 gauge iğnenin geçmesi için yumurtanın üstünde ve kör ucunda küçük bir delik açmak için forseps kullanın. Beş mililitrelik bir şırınga ve 21 gauge iğne kullanarak, albüminin iki mililitresini yumurtanın kör ucundaki bir delikten çıkarın.Şeffaf bant kullanarak künt uçtaki deliği örtün. Yumurta penceresini yapmak için şeffaf bandı yumurta kabuğunun üstüne yapıştırın. İğneleri dikey pipet çektirme makinesi kullanarak standart cam kılcal damarlardan mikroenjeksiyondan tutun.Çektikten sonra, konik bir uçla yaklaşık 50 mikrometrelik bir uç çapı elde etmek için ince forseps kullanarak kılcal ucu kırın. Gen nakavt deneyi için, kılavuz plazmid, pcU6.1sgRNA, T2KeGFP, T2TP olmak üzere üç yapıyı, bir mikrogram SP Cas9 proteini,% 30 sakkaroz ve% 0.1 hızlı yeşil boya ve 10 mikrolitrelik bir son hacim ile bire bir oranında karıştırın. Birden fazla plazmidi elektroporize ederken, DNA'nın nihai konsantrasyonunun mikrolitre başına en az dört mikrogram olduğundan emin olun.Yay yayı yardımıyla makas iki santimetre uzunluğunda ve 1,5 santimetre genişliğinde bir pencereyi keser ve embriyoyu açığa çıkarır. Daha sonra embriyonun üzerindeki koryonik zarları açmak için forseps kullanın ve embriyoya erişime izin verin. Otik vezikülü doldurmak için yaklaşık 200 nanolitre hacimli DNA çözeltisi karışımı enjekte edin.Kılavuz RNA verimliliğini belirlemek için bir T7 endonükleaz testi yapın. Elektrik direncini düşürmek ve aşırı ısınmayı önlemek için embriyoya% 0.719 salin damlası ekleyin. Daha sonra, pozitif elektrodu yumurtanın künt tarafında yapılan delikten yerleştirin ve elektrodu yumurta sarısının altında olacak şekilde manevra yapın.Negatif elektrodu doldurulmuş otokistin üzerine yerleştirin. Plazmidi elektroporasyon ile otik veziküle aktarmak için, bir kare darbe jeneratörü kullanın ve her biri 50 milisaniye arayla 100 milisaniye boyunca 25 voltluk beş darbe uygulayın. Bireysel bir elektroporasyon kurulumuna dayanarak koşulları ampirik olarak belirleyin.Elektroporasyondan sonra, birkaç damla% 0.719 salin ekleyerek embriyoyu nemlendirin. Yumurtayı şeffaf bantla tekrar kapatın ve daha fazla inkübasyon için nemlendirilmiş inkübatöre 37 ila 38 santigrat derecede geri dönün. Cerrahi masayı, mikroskop aşamasını ve çevresini% 70 etanol ve ısı kullanarak dezenfekte edin veya alkol, minimal yaylı makas, mikro kürek ve iki çift ince forseps dahil olmak üzere mikro diseksiyon ekipmanını sterilize edin.Siyah silikon tabanlı bir cam Petri kabı, 90 milimetre plastik Petri kabı ve 60 milimetre Petri kabı içeren diseksiyon plakalarını hazırlayın. HBSS olarak da bilinen soğutulmuş PBS veya Hanks'in dengeli tuz çözeltisini diseksiyonlara hazır tutun. Yumurtayı yavaşça 90 milimetrelik Petri kabına kırın.Ardından civcivin dış kulağını tanımlayın ve kafayı buz gibi soğuk PBS ile doldurulmuş 60 milimetrelik bir Petri kabına aktarın. Daha sonra, embriyoyu gaganın üst kısmı içeriye bakacak şekilde yönlendirin ve beş numaralı forsepslerden birini kullanarak gagayı tutun. İkinci beş numaralı forseps kullanarak gözleri kepçeyle çıkarın.Daha sonra, rostralden kaudal'a, kafatasını orta çizgisi boyunca kesin ve beyni çıkarın. Daha fazla buz gibi PBS veya HBSS ekleyin ve lagenanın iki otolitini koklear kanalın sonunda ve orta çizgiye yakın parlak yapılar olarak bulun. İki iç kulağı izole etmek için, iki lagena arasında ve bölgenin çok üstünde ve altında kesin.Daha sonra eğik aydınlatma altında iç kulağın ana hatlarını görselleştirin ve yabancı dokuyu ve girişi çıkarın. İzole kokleanı buz gibi soğuk PBS'li siyah silikon taban plakasına aktarın. Koklear kanalı elde etmek için beş numaralı forseps kullanarak kıkırdaklı koklear kapsülü soyun.Daha sonra koklear kanalın dalgalı tabakasını veya tegmentumunu bulun ve baziler papillayı veya BP'yi açığa çıkarmak için 55 numaralı forseps kullanarak çıkarın. Daha sonra, 55 numaralı forseps kullanarak saç hücrelerini ve destekleyici hücreleri ortaya çıkarmak için tektoryal zarı çıkarın. Baziller papillanın membran kültürü için, altı kuyucuklu bir doku kültürü plakası alın ve kuyucuk başına bir kültür membran eki yerleştirin. 200 mikrolitrelik bir pipet içinde bir miktar ortam hazırlayın ve ardından disseke edilmiş baziler papilla eksplantını bir X HBSS tamponu ile aspire edin.Eksplantı bir zar üzerine aktarın ve baziler papilla yukarı bakacak ve saç ve destek hücreleri üstten görülebilecek şekilde yönlendirin. Eksplant yerleştirildikten sonra, HBSS tamponunu kültür membranı yüzeyinden yavaşça aspire edin. Bu işlemde eksplant kültür membranına bağlanacaktır.Membran eki ile kuyu duvarı arasına 1,2 mililitre dulbecco'nun modifiye kartal ortamı veya DMEM kültür ortamı ekleyerek altı kuyu plakasının kuyusunu doldurun. Koklear kanalın kollajen kültürünü hazırlamak için, dört kuyucuklu bir plakanın her bir oluğuna üç damla taze hazırlanmış kolajen karışımı ekleyin ve disseke koklear kanalı her bir kollajen damlasına aktarın. Kollajen matrisini iyileştirmek için plakayı 37 santigrat derecede 10 dakika ve % 5 karbondioksit ile inkübe edin.Kültürlerin küçük moleküllü bir tedavisi için, kültür ortamını penisilin gibi farmakolojik modülatör ile desteklenmiş 700 mikrolitre ortam ile değiştirin ve plakaları daha önce gösterildiği gibi inkübe edin. Kültür medyasının %50'sini her gün değiştirin. Uygun inkübasyon süresinden sonra, kültür ortamını çıkarın ve eksplantları aşağı akış analizleri için kullanın.Elektroporasyon kurulumunda doğru elektrot konumlandırması, her iki vestibüler organda iç kulakta daha yüksek GFP ekspresyonu ve transfeksiyonu doğrulayan işitsel baziler papilla ile sonuçlandı. CRISPR Cas9, iç kulakta Atoh1 gen nakavtına aracılık ederek saç hücrelerinin kaybına neden oldu. Bir ovo-elektroporasyon yoluyla Atoh1 gen nakavtının ardından E10'a kadar inkübasyon, boş plazmid kontrolüne kıyasla saç hücresi gelişiminin azaldığını gösterdi.Elektroporasyon mozaik olmasına rağmen, kontrol elektroporat hücreleri saç hücrelerini oluşturabilmiştir. Atoh1 gRNA elektroporatörlü örneklerde, yeşil floresan protein pozitif hücreler hiçbir zaman saç hücresi gelişiminin belirteçlerini göstermedi. Baziller papillanın 3D matriksteki organ kültürü, örneğin saç hücresi antijenine karşı antikorlarla kollajen ve leke, doku morfolojisinin beş güne kadar mükemmel bir şekilde korunmasını sağlamıştır.Saç hücrelerinin ve destekleyici hücrelerin organizasyonu bu kültür koşullarında korunmuştur. Bir zar üzerindeki organ kültürleri, saç demeti bütünlüğünü korurken beş güne kadar korunabilir. Bu, temsili görüntüde, uç bağlantı proteini protocadherin 15'in lokalizasyonu ile görülebilir.Saç demetinin gelişimini araştırmak için, süper çözünürlüklü mikroskopi veya taramalı elektron mikroskobu gibi daha yüksek çözünürlüklü görüntüleme daha fazla bilgi sağlayabilir. İşlem boyunca steril koşullar korunmalıdır. Elektropozlama yaparken, embriyoların kurumadığından emin olun.Farmakolojik inhibitörleri titre ederken, herhangi bir öldürücülüğün üstesinden gelmek için konsantrasyonu azaltabilir. Görüntüleme deneyleri için hem embriyolar hem de eksplantlar alınabilir. Protokolde gösterildiği gibi gerçek zamanlı video mikroskobu veya statik ışık konfokal elektron mikroskobu gerçekleştirerek.Civciv iç kulak eksplantlarını kullanmanın kolaylığı ve erişilebilirliği göz önüne alındığında, saç hücresi yenilenmesi için gerekli olan yeni molekülleri tanımlamak için kanıt taraması yoluyla ortamı kullanabiliriz.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

In Ovo and Ex Ovo Methods to Study Avian Inner Ear Development

Efficient Gene Transfer in Chick Retinas for Primary Cell Culture Studies: An Ex-ovo Electroporation Approach

Efficient Gene Transfer in Chick Retinas for Primary Cell Culture Studies: An Ex-ovo Electroporation Approach

Primer Hücre Kültürü Araştırmaları Chick retina Verimli Gen Transferi: Bir<em&gt; Eski-ovo</em&gt; Elektroporasyon Yaklaşımı

The cone photoreceptor-enriched cultures derived from embryonic chick retinas have become an indispensable tool for researchers around the world studying ...

Optimized Ex-ovo Culturing of Chick Embryos to Advanced Stages of Development

Optimized Ex-ovo Culturing of Chick Embryos to Advanced Stages of Development

Optimize<em&gt; Ex-ovo</em&gt; Kalkınma Gelişmiş Aşamaları Chick Embriyolar ekimi

Research in anatomy, embryology, and developmental biology has largely relied on the use of model organisms. In order to study development in live embryos ...

Gene Transfer into the Chicken Auditory Organ by In Ovo Micro-electroporation

Gene Transfer into the Chicken Auditory Organ by In Ovo Micro-electroporation

Tavuk İşitsel Organ gen Transferi tarafından<em&gt; Ovo olarak</em&gt; Mikro-elektroporasyon

Chicken embryos are ideal model systems for studying embryonic development as manipulations of gene function can be conducted with relative ease in ovo. ...

A Novel Ex Ovo Banding Technique to Alter Intracardiac Hemodynamics in an Embryonic Chicken System

A Novel Ex Ovo Banding Technique to Alter Intracardiac Hemodynamics in an Embryonic Chicken System

Bir roman<em&gt; Ex Ovo</em&gt; Yapıştırma Tekniği bir Embriyonik tavuk Sistemde İntrakardiyak hemodinamiği Alter

The new model presented here can be used to understand the influence of hemodynamics on specific cardiac developmental processes, at the cellular and ...

A Submerged Filter Paper Sandwich for Long-term Ex Ovo Time-lapse Imaging of Early Chick Embryos

A Submerged Filter Paper Sandwich for Long-term Ex Ovo Time-lapse Imaging of Early Chick Embryos

Uzun vadede bir Batık Filtre Kağıdı Sandviç<em&gt; Ex Ovo</emErken Civciv Embriyolar&gt; Time-lapse Görüntüleme

Due to its availability, low cost, flat geometry, and transparency, the ex ovo chick embryo has become a major vertebrate animal model for the study of ...

In Ovo Electroporation in the Chicken Auditory Brainstem

In Ovo Electroporation in the Chicken Auditory Brainstem

Tavuk İşitsel Beyinsapındaki Ovo Elektroporasyonunda

Electroporation is a method that introduces genes of interest into biologically relevant organisms like the chicken embryo. It is long established that ...

Methods for the Study of Regeneration in Stentor

Methods for the Study of Regeneration in Stentor

Rejenerasyon Stentor içinde çalışma yöntemleri

Cells need to be able to regenerate their parts to recover from external perturbations. The unicellular ciliate Stentor coeruleus is an excellent model ...

Whole-Mount In Situ Hybridization in Zebrafish Embryos and Tube Formation Assay in iPSC-ECs to Study the Role of Endoglin in Vascular Development

Zebrabalığı Embriyolarında Situ Hibridizasyon ve IPSC-EC'lerde Tüp Oluşumu Nda Endoglin'in Vasküler Gelişimdeki Rolünü İncelemek İçin Tam Montaj

Vascular development is determined by the sequential expression of specific genes, which can be studied by performing in situ hybridization assays in ...

Creating Avian Forebrain Chimeras to Assess Facial Development

Yüz Gelişimini Değerlendirmek için Kuş Ön Beyin Kimeraları Oluşturmak

The avian embryo has been used as a model system for more than a century and has led to fundamental understanding of vertebrate development. One of the ...

In Ovo Feeding of Commercial Broiler Eggs: An Accurate and Reproducible Method to Affect Muscle Development and Growth

In Ovo Feeding of Commercial Broiler Eggs: An Accurate and Reproducible Method to Affect Muscle Development and Growth

Burada: Ovo Ticari Broiler Yumurtalarının Beslenmesi: Kas Gelişimini ve Büyümesini Etkilemek İçin Doğru ve Tekrarlanabilir Bir Yöntem

Within the past three decades, red meat and poultry scientists focused on developing strategies and technologies to manipulate muscle development during ...