Name: a calcium phosphate-induced mouse abdominal aortic aneurysm model
Uploaded: 2022-11-18T13:50:00
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Cette recherche a été financée par la Fondation nationale des sciences naturelles de Chine (NSFC, 81730010, 91839302, 81921001, 31930056 et 91529203) et le National Key R&D Program of China (2019YFA 0801600).

Les études sur les animaux ont été réalisées conformément aux directives du Comité institutionnel de soin et d’utilisation des animaux du Centre des sciences de la santé de l’Université de Pékin et ont été approuvées par le Comité d’éthique biomédicale de l’Université de Pékin (LA2015142). Toutes les souris pour la chirurgie ont été anesthésiées avec de l’isoflurane (1,5%-2%), et l’anesthésie a été soigneusement surveillée pour éviter la douleur ou l’inconfort pour les souris....

<ol>
	<li>Kent, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Abdominal+aortic+aneurysms.">Abdominal aortic aneurysms.</a> The New England Journal of Medicine. 371, 2101-2108 (2014).</li><li>Patelis, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+in+the+research+of+abdominal+aortic+aneurysms+development.">Animal models in the research of abdominal aortic aneurysms development.</a> Physiological Research. 66 (6), 899-915 (2017).</li><li>Gertz, S. D., Kurgan, A., Eisenberg, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aneurysm+of+the+rabbit+common+carotid+artery+induced+by+periarterial+application+of+calcium-chloride+in+vivo.">Aneurysm of the rabbit common carotid artery induced by periarterial application of calcium-chloride in vivo.</a> Journal of Clinical Investigation. 81 (3), 649-656 (1988).</li><li>Yamanouchi, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accelerated+aneurysmal+dilation+associated+with+apoptosis+and+inflammation+in+a+newly+developed+calcium+phosphate+rodent+abdominal+aortic+aneurysm+model.">Accelerated aneurysmal dilation associated with apoptosis and inflammation in a newly developed calcium phosphate rodent abdominal aortic aneurysm model.</a> Journal of Vascular Surgery. 56 (2), 455-461 (2012).</li><li>Wang, Y. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+apolipoprotein+E,+age+and+aortic+site+on+calcium+phosphate+induced+abdominal+aortic+aneurysm+in+mice.">Influence of apolipoprotein E, age and aortic site on calcium phosphate induced abdominal aortic aneurysm in mice.</a> Atherosclerosis. 235 (1), 204-212 (2014).</li><li>Zhao, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unspliced+xbp1+confers+VSMC+homeostasis+and+prevents+aortic+aneurysm+formation+via+foxo4+interaction.">Unspliced xbp1 confers VSMC homeostasis and prevents aortic aneurysm formation via foxo4 interaction.</a> Circulation Research. 121 (12), 1331-1345 (2017).</li><li>Jia, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+macrophage+TFEB-14-3-3+epsilon+interface+by+naringenin+inhibits+abdominal+aortic+aneurysm.">Targeting macrophage TFEB-14-3-3 epsilon interface by naringenin inhibits abdominal aortic aneurysm.</a> Cell Discovery. 8 (1), 21 (2022).</li><li>Gage, G. J., Kipke, D. R., Shain, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole+animal+perfusion+fixation+for+rodents.">Whole animal perfusion fixation for rodents.</a> Journal of Visualized Experiments. (65), e3564 (2012).</li><li>Yu, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CYLD+deubiquitinates+nicotinamide+adenine+dinucleotide+phosphate+oxidase+4+contributing+to+adventitial+remodeling.">CYLD deubiquitinates nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidase 4 contributing to adventitial remodeling.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 37 (8), 1698-1709 (2017).</li><li>Altobelli, E., Rapacchietta, L., Profeta, V. F., Fagnano, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Risk+factors+for+abdominal+aortic+aneurysm+in+population-based+studies:+A+systematic+review+and+meta-analysis.">Risk factors for abdominal aortic aneurysm in population-based studies: A systematic review and meta-analysis.</a> International Journal of Environmental Research and Public Health. 15 (12), 2805 (2018).</li><li>Theivacumar, N. S., Stephenson, M. A., Mistry, H., Valenti, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diabetes+mellitus+and+aortic+aneurysm+rupture:+A+favorable+association.">Diabetes mellitus and aortic aneurysm rupture: A favorable association.</a> Vascular and Endovascular Surgery. 48 (1), 45-50 (2014).</li><li>Tanaka, T., Takei, Y., Yamanouchi, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyperglycemia+suppresses+calcium+phosphate-induced+aneurysm+formation+through+inhibition+of+macrophage+activation.">Hyperglycemia suppresses calcium phosphate-induced aneurysm formation through inhibition of macrophage activation.</a> Journal of the American Heart Association. 5 (3), 003062 (2016).</li><li>Lu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subcutaneous+angiotensin+II+infusion+using+osmotic+pumps+induces+aortic+aneurysms+in+mice.">Subcutaneous angiotensin II infusion using osmotic pumps induces aortic aneurysms in mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (103), e53191 (2015).</li><li>Urry, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutral+sites+for+calcium+ion+binding+to+elastin+and+collagen:+A+charge+neutralization+theory+for+calcification+and+its+relationship+to+atherosclerosis.">Neutral sites for calcium ion binding to elastin and collagen: A charge neutralization theory for calcification and its relationship to atherosclerosis.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 68 (4), 810-814 (1971).</li><li>Li, Z. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Runx2+(runt-related+transcription+factor+2)-mediated+microcalcification+is+a+novel+pathological+characteristic+and+potential+mediator+of+abdominal+aortic+aneurysm.">Runx2 (runt-related transcription factor 2)-mediated microcalcification is a novel pathological characteristic and potential mediator of abdominal aortic aneurysm.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 40 (5), 1352-1369 (2020).</li><li>Kelly, M. J., Igari, K., Yamanouchi, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osteoclast-like+cells+in+aneurysmal+disease+exhibit+an+enhanced+proteolytic+phenotype.">Osteoclast-like cells in aneurysmal disease exhibit an enhanced proteolytic phenotype.</a> International Journal of Molecular Sciences. 20 (19), 4689 (2019).</li></ol>

L’application périaortique de CaPO4 est une approche robuste pour induire l’AAA chez la souris. Plusieurs études ont utilisé le modèle CaPO4 et ont systématiquement rapporté qu’il s’agit d’une méthode rapide et reproductible pour étudier l’AAA chez la souris 7,9. Ce modèle est considéré comme récapitulant une partie des caractéristiques de l’anévrisme de l’aorte humaine et fournissant des informations mécaniste...

Un anévrisme de l’aorte abdominale (AAA) est une maladie cardiovasculaire mortelle caractérisée par une dilatation permanente de l’aorte abdominale, avec des taux de mortalité élevés une fois la rupture survenue. L’AAA est associé au vieillissement, au tabagisme, au sexe masculin, à l’hypertension et à l’hyperlipidémie1. Il a été démontré que plusieurs processus pathologiques contribuent à la formation d’AAA, notamment la protéolyse des fibres de la matrice extracellulaire, l’infiltration des cellules immunitaires et la perte des cellules musculaires lisses vasculaires. Actuellement, les mécanismes pathologiques de l’AAA restent insaisissables et il n’existe aucun médicament éprouvé pour le traitement de l’AAA1. La recherche sur l’AAA humain est limitée en raison de l’existence de peu d’échantillons aortiques humains; ainsi, plusieurs modèles AAA animaux induits par des modifications chimiques ont été établis et largement adoptés, y compris la perfusion sous-cutanée d’angiotensine II (AngII), l’incubation périvasculaire ou intraluminale d’élastase et l’application périvasculaire de phosphatede calcium 2. Un modèle murin couramment utilisé est l’application de phosphate de calcium (CaPO4) à l’adventice de l’aorte abdominale infrarénale, ce qui est rentable et ne nécessite pas de modification génétique.
L’application périaortique directe de CaCl2 sur l’artère carotide de lapins pour induire un changement anévrysmal a été initialement rapportée par Gertz et al.3 et a ensuite été appliquée aux aortes abdominales de souris. Le modèle a été développé par Yamanouchi et al. pour accélérer la dilatation aortique en utilisant des cristaux CaPO 4 chez la souris4. L’infiltration de CaPO4 dans les aortes de souris récapitule de nombreuses caractéristiques pathologiques observées chez les AAA humains, notamment l’infiltration profonde des macrophages, la dégradation de la matrice extracellulaire et le dépôt de calcium. Les facteurs de risque de l’AAA humain, tels que l’hyperlipidémie, augmentent également l’AAA induit par CaPO4 chez la souris5. Contrairement à l’AAA induit par la perfusion AngII chez les souris ApoE-/- ou LDLR-/-, l’AAA induit par CaPO 4 se produit dans la région aortique infrarénale, qui imite l’AAA humain. Actuellement, cette méthode a été largement appliquée pour évaluer la sensibilité au développement de l’AAA chez les souris génétiquement modifiées et évaluer les effets anti-AAA des médicaments 6,7.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td>MECKLIN</td>
			<td>C805225</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Biomed</td>
			<td>SH5001-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>HARVEYBIO</td>
			<td>MB5051</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small animal ventilator</td>
			<td>RWD</td>
			<td>H1550501-012</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a calcium phosphate-induced mouse abdominal aortic aneurysm model

Un anévrisme de l’aorte abdominale (AAA) est une maladie cardiovasculaire potentiellement mortelle qui survient dans le monde entier et se caractérise par une dilatation irréversible de l’aorte abdominale. Actuellement, plusieurs modèles murins AAA induits chimiquement sont utilisés, chacun simulant un aspect différent de la pathogenèse de l’AAA. Le modèle AAA induit par le phosphate de calcium est un modèle rapide et rentable par rapport aux modèles AAA induits par l’angiotensine II et l’élastase. L’application de cristaux de CaPO4 à l’aorte de la souris entraîne une dégradation des fibres élastiques, une perte de cellules musculaires lisses, une inflammation et un dépôt de calcium associé à la dilatation aortique. Cet article présente un protocole standard pour le modèle AAA induit par CaPO4. Le protocole comprend la préparation du matériel, l’application chirurgicale du CaPO4 à l’adventice de l’aorte abdominale infrarénale, la récolte des aortes pour visualiser les anévrismes de l’aorte et les analyses histologiques chez la souris.

14 jours après l’application de CaPO4, les souris mâles C57BL/6J ont été euthanasiées et leurs aortes ont été récoltées et nettoyées. La morphologie des aortes a été imagée pour visualiser la formation d’AAA. Comme le montre la figure 1A-B, l’application de CaPO4 a entraîné une dilatation de l’aorte abdominale infrarénale. Histologiquement, CaPO4 a entraîné une dégradation spectaculaire des fibres ?...

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A Calcium Phosphate-Induced Mouse Abdominal Aortic Aneurysm Model

Ce protocole décrit un modèle murin d’anévrisme de l’aorte abdominale induit par le phosphate de calcium (AAA) pour étudier les caractéristiques pathologiques et les mécanismes moléculaires des AAA.

Modèle d’anévrisme de l’aorte abdominale de souris induit par le phosphate de calcium

An abdominal aortic aneurysm (AAA) is a life-threatening cardiovascular disease that occurs worldwide and is characterized by irreversible dilation of the ...

Ce protocole décrit le modèle murin d’anévrisme de l’aorte abdominale triple A induit par le phosphate de calcium pour étudier les caractéristiques pathologiques des mécanismes moléculaires de l’anévrisme de l’aorte abdominale. Le modèle d’anévrisme de l’aorte abdominale induit par le phosphate de calcium est un modèle rapide et rentable par rapport au tube d’angiotensine et aux modèles d’anévrisme de l’aorte abdominale induite par l’élastase. La démonstration de la procédure sera Zeyu Cai, post-médecin ici, un membre de notre laboratoire.Pour commencer, coupez des bandes de 0,3 centimètre de large de gants en caoutchouc sans poudre et de gaze. Ensuite, achetez des souris C57BL6J Mayo âgées de huit à dix semaines et hébergez les animaux dans un environnement climatisé avec un cycle d’obscurité légère de 12 heures et un accès gratuit à la nourriture et à l’eau. Ensuite, autoclavez la gaze, les cotons-tiges, les ciseaux et les forceps avant la chirurgie, et obtenez de la bétadine, de l’éthanol à 70% et un lavage antiseptique des mains.Rasez les poils abdominaux de la souris anesthésiée à l’aide d’une tondeuse électrique ou d’une crème dépilatoire. Ensuite, écouvillonnez et essuyez la zone rasée avec de la bétadine, suivie de 70% d’éthanol plusieurs fois dans un mouvement circulaire. Ensuite, faites une incision d’environ 1,5 centimètre au bas de l’abdomen le long de la ligne médiane de l’abdomen à l’aide de ciseaux.À l’aide d’un coton-tige stérile humidifié avec une solution saline normale, retirez délicatement l’intestin jusqu’à ce que l’aorte infrarénale soit visible. Ensuite, disséquez le tissu conjonctif et la graisse de l’aorte infrarénale sur une section d’environ 0,5 centimètre tout en évitant toute déchirure dans les petits vaisseaux du côté dorsal. Ensuite, emballez un morceau de la bande de gants en caoutchouc imbibée de solution saline sous l’aorte abdominale et la veine principale abdominale tout en essuyant l’excès de liquide à l’aide d’un coton-tige.Ensuite, emballez un morceau de gaze imbibé de chlorure de calcium 0,5 molaire sur l’adventice du système vasculaire abdominal infrarénal pendant 10 minutes. Retirez la gaze et emballez un autre morceau de gaze imbibé de solution de PBS pendant cinq minutes pour générer des cristaux d’orthophosphate de calcium en C2 dans l’adventice de l’aorte. Ensuite, retirez délicatement la bande de gants en caoutchouc et la gaze.Après avoir réinitialisé le tractus intestinal de la souris, suturez l’incision abdominale et la peau avec une suture cinq zéro. Ensuite, placez la souris sur un coussin chauffant jusqu’à ce qu’elle reprenne conscience. Hébergez la souris pendant encore 14 jours et surveillez-la de près après la chirurgie et observez-la au moins tous les jours par la suite.Après 14 jours de chirurgie, ouvrez les cavités thoracique et abdominale de la souris euthanasiée ventralement et ouvrez l’oreillette droite. Analysez les souris avec un tampon PBS à travers le ventricule gauche du cœur pour éliminer le sang dans l’aorte, puis perfuse avec 4% de paraformaldéhyde comme décrit dans le manuscrit. Retirez soigneusement le tissu adventice et la graisse au microscope.Ensuite, récoltez l’aorte et placez-la dans un tube contenant cinq millilitres de paraformaldéhyde à 4% pendant 48 heures. Ensuite, épinglez l’aorte sur une plaque de cire noire avec des aiguilles d’insectes et procédez à l’acquisition d’images aortiques. Après 14 jours d’application d’orthophosphate de calcium, la morphologie des aortes a été imagée pour visualiser la formation d’anévrisme de l’aorte abdominale.Il a été observé que l’orthophosphate de calcium entraînait une dilatation de l’aorte abdominale infrarénale et entraînait une dégradation spectaculaire des fibres élastiques, comme l’illustrent les cassures de l’élastine. Utiliser un coton-tige stérile humidifié avec une solution saline normale pour enlever l’intestin jusqu’à ce que l’aorte infrarénale soit visible, puis extraire le tissu conjonctif et la graisse de l’aorte infrarénale. Dans l’ensemble, le modèle d’anévrisme de l’aorte abdominale induit par le phosphorate de calcium est une approche rapide et rentable pour explorer les mécanismes moléculaires et les stratégies thérapeutiques de l’anévrisme de l’aorte abdominale et pourrait être appliqué en parallèle avec les autres modèles pour imiter pleinement les caractéristiques de l’anévrisme de l’aorte abdominale humaine.

Research

JoVE Journal

Biology

Creation of Murine Experimental Abdominal Aortic Aneurysms with Elastase 

Création d&#39;expérimental murin anévrismes aortiques abdominaux avec l&#39;élastase

Transient intraluminal infusion of porcine pancreatic elastase into the infrarenal segment of the abdominal aorta is the most widely used animal model of ...

Recherche

Biologie

Aortic Ring Assay

Assay anneau aortique

Angiogenesis, the sprouting of blood vessels from preexisting vasculature is associated with both natural and pathological processes. Various angiogenesis ...

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

L&#39;imagerie in vivo et des traitements thérapeutiques dans un modèle de souris orthotopique de cancer des ovaires

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models.  This paper describes the development of an orthotopic mouse model ...

Isolation and Primary Culture of Mouse Aortic Endothelial Cells

L&#39;isolement et la culture primaire de cellules endothéliales aortiques de souris

The vascular endothelium is essential to normal vascular homeostasis. Its dysfunction participates in various cardiovascular disorders. The mouse is an ...

Trans-inner Cell Mass Injection of Embryonic Stem Cells Leads to Higher Chimerism Rates

TRANS-intérieur cellulaire massive Injection de cellules souches embryonnaires conduit à des taux plus élevés de chimérisme

In an effort to increase efficiency in the creation of genetically modified mice via ES Cell methodologies, we present an adaptation to the current ...

A Mouse Model of Intestinal Partial Obstruction

Un modèle de souris d’une Obstruction intestinale partielle

Intestinal obstructions, that impede or block peristaltic movement, can be caused by abdominal adhesions and most gastrointestinal (GI) diseases including ...

Simultaneous Measurements of Intracellular Calcium and Membrane Potential in Freshly Isolated and Intact Mouse Cerebral Endothelium

Mesure simultanée de Calcium intracellulaire et le potentiel de Membrane dans l’endothélium cérébral de souris fraîchement isolées et intacte

Cerebral arteries and their respective microcirculation deliver oxygen and nutrients to the brain via blood flow regulation. Endothelial cells line the ...

Imaging Calcium Dynamics in Subpopulations of Mouse Pancreatic Islet Cells

Imagerie de la dynamique du calcium dans les sous-populations de cellules d'islet pancréatique de souris

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Mass Spectrometry Analysis to Identify Ubiquitylation of EYFP-tagged CENP-A (EYFP-CENP-A)

Mass Spectrometry Analysis to Identify Ubiquitylation of EYFP-tagged CENP-A EYFP-CENP-A

Analyse de spectrométrie de masse pour identifier l’ubiquité de cenp-A marqué par EYFP (EYFP-CENP-A)

Studying the structure and the dynamics of kinetochores and centromeres is important in understanding chromosomal instability (CIN) and cancer ...

A Mouse Model of Lumbar Spine Instability

Un modèle de souris de l’instabilité lombaire de colonne vertébrale

Intervertebral disc degeneration (IDD) is a common pathological change leading to low back pain. Appropriate animal models are desired for understanding ...