Name: a calcium phosphate-induced mouse abdominal aortic aneurysm model
Uploaded: 2022-11-18T13:50:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Calcium Phosphate-Induced Mouse Abdominal Aortic Aneurysm Model at JoVE.com

Bu araştırma, Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (NSFC, 81730010, 91839302, 81921001, 31930056 ve 91529203) ve Çin Ulusal Anahtar Ar-Ge Programı (2019YFA 0801600) tarafından finanse edilerek desteklenmiştir.

Hayvan çalışmaları, Pekin Üniversitesi Sağlık Bilimleri Merkezi Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi kılavuzlarına uygun olarak gerçekleştirilmiş ve Pekin Üniversitesi Biyomedikal Etik Kurulu (LA2015142) tarafından onaylanmıştır. Ameliyat için tüm fareler izofluran (% 1.5 -% 2) ile uyuşturuldu ve fareler için ağrı veya rahatsızlıktan kaçınmak için anestezi dikkatle izlendi.
1. Hazırlık
<ol><li>0,3 cm genişliğinde pudrasız lastik e...

<ol>
	<li>Kent, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Abdominal+aortic+aneurysms.">Abdominal aortic aneurysms.</a> The New England Journal of Medicine. 371, 2101-2108 (2014).</li><li>Patelis, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+in+the+research+of+abdominal+aortic+aneurysms+development.">Animal models in the research of abdominal aortic aneurysms development.</a> Physiological Research. 66 (6), 899-915 (2017).</li><li>Gertz, S. D., Kurgan, A., Eisenberg, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aneurysm+of+the+rabbit+common+carotid+artery+induced+by+periarterial+application+of+calcium-chloride+in+vivo.">Aneurysm of the rabbit common carotid artery induced by periarterial application of calcium-chloride in vivo.</a> Journal of Clinical Investigation. 81 (3), 649-656 (1988).</li><li>Yamanouchi, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accelerated+aneurysmal+dilation+associated+with+apoptosis+and+inflammation+in+a+newly+developed+calcium+phosphate+rodent+abdominal+aortic+aneurysm+model.">Accelerated aneurysmal dilation associated with apoptosis and inflammation in a newly developed calcium phosphate rodent abdominal aortic aneurysm model.</a> Journal of Vascular Surgery. 56 (2), 455-461 (2012).</li><li>Wang, Y. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+apolipoprotein+E,+age+and+aortic+site+on+calcium+phosphate+induced+abdominal+aortic+aneurysm+in+mice.">Influence of apolipoprotein E, age and aortic site on calcium phosphate induced abdominal aortic aneurysm in mice.</a> Atherosclerosis. 235 (1), 204-212 (2014).</li><li>Zhao, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unspliced+xbp1+confers+VSMC+homeostasis+and+prevents+aortic+aneurysm+formation+via+foxo4+interaction.">Unspliced xbp1 confers VSMC homeostasis and prevents aortic aneurysm formation via foxo4 interaction.</a> Circulation Research. 121 (12), 1331-1345 (2017).</li><li>Jia, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+macrophage+TFEB-14-3-3+epsilon+interface+by+naringenin+inhibits+abdominal+aortic+aneurysm.">Targeting macrophage TFEB-14-3-3 epsilon interface by naringenin inhibits abdominal aortic aneurysm.</a> Cell Discovery. 8 (1), 21 (2022).</li><li>Gage, G. J., Kipke, D. R., Shain, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole+animal+perfusion+fixation+for+rodents.">Whole animal perfusion fixation for rodents.</a> Journal of Visualized Experiments. (65), e3564 (2012).</li><li>Yu, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CYLD+deubiquitinates+nicotinamide+adenine+dinucleotide+phosphate+oxidase+4+contributing+to+adventitial+remodeling.">CYLD deubiquitinates nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidase 4 contributing to adventitial remodeling.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 37 (8), 1698-1709 (2017).</li><li>Altobelli, E., Rapacchietta, L., Profeta, V. F., Fagnano, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Risk+factors+for+abdominal+aortic+aneurysm+in+population-based+studies:+A+systematic+review+and+meta-analysis.">Risk factors for abdominal aortic aneurysm in population-based studies: A systematic review and meta-analysis.</a> International Journal of Environmental Research and Public Health. 15 (12), 2805 (2018).</li><li>Theivacumar, N. S., Stephenson, M. A., Mistry, H., Valenti, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diabetes+mellitus+and+aortic+aneurysm+rupture:+A+favorable+association.">Diabetes mellitus and aortic aneurysm rupture: A favorable association.</a> Vascular and Endovascular Surgery. 48 (1), 45-50 (2014).</li><li>Tanaka, T., Takei, Y., Yamanouchi, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyperglycemia+suppresses+calcium+phosphate-induced+aneurysm+formation+through+inhibition+of+macrophage+activation.">Hyperglycemia suppresses calcium phosphate-induced aneurysm formation through inhibition of macrophage activation.</a> Journal of the American Heart Association. 5 (3), 003062 (2016).</li><li>Lu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subcutaneous+angiotensin+II+infusion+using+osmotic+pumps+induces+aortic+aneurysms+in+mice.">Subcutaneous angiotensin II infusion using osmotic pumps induces aortic aneurysms in mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (103), e53191 (2015).</li><li>Urry, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutral+sites+for+calcium+ion+binding+to+elastin+and+collagen:+A+charge+neutralization+theory+for+calcification+and+its+relationship+to+atherosclerosis.">Neutral sites for calcium ion binding to elastin and collagen: A charge neutralization theory for calcification and its relationship to atherosclerosis.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 68 (4), 810-814 (1971).</li><li>Li, Z. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Runx2+(runt-related+transcription+factor+2)-mediated+microcalcification+is+a+novel+pathological+characteristic+and+potential+mediator+of+abdominal+aortic+aneurysm.">Runx2 (runt-related transcription factor 2)-mediated microcalcification is a novel pathological characteristic and potential mediator of abdominal aortic aneurysm.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 40 (5), 1352-1369 (2020).</li><li>Kelly, M. J., Igari, K., Yamanouchi, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osteoclast-like+cells+in+aneurysmal+disease+exhibit+an+enhanced+proteolytic+phenotype.">Osteoclast-like cells in aneurysmal disease exhibit an enhanced proteolytic phenotype.</a> International Journal of Molecular Sciences. 20 (19), 4689 (2019).</li></ol>

CaPO4'ün periaortik uygulaması, farelerde AAA'yı indüklemek için sağlam bir yaklaşımdır. Birkaç çalışma CaPO4 modelini kullanmış ve sürekli olarak bunun farelerde AAA'yı incelemek için hızlı ve tekrarlanabilir bir yöntem olduğunu bildirmiştir 7,9. Bu modelin insan aort anevrizmasının özelliklerinin bir kısmını özetlediği ve inflamasyon ve hücre dışı matriks yıkımı da dahil olmak üzere AAA patogenezi hak...

Abdominal aort anevrizması (AAA), abdominal aortun kalıcı genişlemesi ile karakterize, rüptür meydana geldiğinde yüksek mortalite oranları olan ölümcül bir kardiyovasküler hastalıktır. AAA yaşlanma, sigara içme, erkek cinsiyet, hipertansiyon ve hiperlipidemi ile ilişkilidir1. Hücre dışı matriks lif proteolizi, immün hücre infiltrasyonu ve vasküler düz kas hücrelerinin kaybı dahil olmak üzere çeşitli patolojik süreçlerin AAA oluşumuna katkıda bulunduğu gösterilmiştir. Şu anda, AAA'nın patolojik mekanizmaları belirsizliğini korumaktadır ve AAA1'in tedavisi için kanıtlanmış bir ilaç yoktur. İnsan AAA'sı üzerine yapılan araştırmalar, az sayıda insan aort örneğinin varlığı nedeniyle sınırlıdır; Bu nedenle, subkutan anjiyotensin II (AngII) infüzyonu, perivasküler veya intraluminal elastaz inkübasyonu ve perivasküler kalsiyum fosfat uygulaması2 dahil olmak üzere çeşitli kimyasal modifikasyona bağlı hayvan AAA modelleri kurulmuş ve yaygın olarak benimsenmiştir. Yaygın olarak kullanılan bir fare modeli, infrarenal abdominal aortun adventitisine kalsiyum fosfatın (CaPO4) uygulanmasıdır, bu da uygun maliyetlidir ve genetik modifikasyon gerektirmez.
Anevrizmal değişikliği indüklemek için tavşanların karotis arterine CaCl2'nin doğrudan periaort uygulaması başlangıçta Gertz ve ark.3 tarafından bildirilmiş ve daha sonra farelerin abdominal aortlarına uygulanmıştır. Model, farelerde CaPO 4 kristalleri kullanılarak aort genişlemesini hızlandırmak için Yamanouchi ve ark.tarafından geliştirilmiştir4. CaPO4'ün farelerin aortlarına infiltrasyonu, derin makrofaj infiltrasyonu, hücre dışı matriks yıkımı ve kalsiyum birikimi dahil olmak üzere insan AAA'larında gözlenen birçok patolojik özelliği özetler. Hiperlipidemi gibi insan AAA'sının risk faktörleri, farelerde CaPO4 kaynaklı AAA'yı da arttırır5. ApoE-/- veya LDLR-/- farelerde AngII perfüzyona bağlı AAA'nın aksine, CaPO4 kaynaklı AAA, insan AAA'sını taklit eden infrarenal aort bölgesinde meydana gelir. Günümüzde bu yöntem, genetiği değiştirilmiş farelerde AAA gelişimine duyarlılığı değerlendirmek ve ilaçların anti-AAA etkilerini değerlendirmek için yaygın olarak uygulanmaktadır 6,7.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td>MECKLIN</td>
			<td>C805225</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Biomed</td>
			<td>SH5001-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>HARVEYBIO</td>
			<td>MB5051</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small animal ventilator</td>
			<td>RWD</td>
			<td>H1550501-012</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a calcium phosphate-induced mouse abdominal aortic aneurysm model

Abdominal aort anevrizması (AAA), tüm dünyada görülen, hayatı tehdit eden ve abdominal aortun geri dönüşümsüz genişlemesi ile karakterize kardiyovasküler bir hastalıktır. Günümüzde, her biri AAA'nın patogenezinin farklı bir yönünü simüle eden çeşitli kimyasal olarak indüklenmiş murin AAA modelleri kullanılmaktadır. Kalsiyum fosfat kaynaklı AAA modeli, anjiyotensin II ve elastaz kaynaklı AAA modellerine kıyasla hızlı ve uygun maliyetli bir modeldir. CaPO4 kristallerinin fare aortuna uygulanması, elastik lif yıkımı, düz kas hücrelerinin kaybı, iltihaplanma ve aort dilatasyonu ile ilişkili kalsiyum birikimi ile sonuçlanır. Bu makalede, CaPO4 kaynaklı AAA modeli için standart bir protokol tanıtılmaktadır. Protokol, materyal hazırlamayı, CaPO4'ün infrarenal abdominal aortun adventitisine cerrahi olarak uygulanmasını, aort anevrizmalarını görselleştirmek için aortların toplanmasını ve farelerde histolojik analizleri içerir.

CaPO4 uygulamasından 14 gün sonra, C57BL / 6J erkek fareleri ötenazi yapıldı ve aortları hasat edildi ve temizlendi. AAA oluşumunu görselleştirmek için aortların morfolojisi görüntülendi. Şekil 1A-B'de gösterildiği gibi, CaPO 4 uygulaması infrarenal abdominal aortun genişlemesine yol açmıştır. Histolojik olarak, CaPO4, elastin kırılmaları ile gösterildiği gibi, elastik liflerin dramatik bir şekil...

Watch this Scientific Journal Video about A Calcium Phosphate-Induced Mouse Abdominal Aortic Aneurysm Model at JoVE.com

A Calcium Phosphate-Induced Mouse Abdominal Aortic Aneurysm Model

Bu protokol, AAA'ların patolojik özelliklerini ve moleküler mekanizmalarını incelemek için kalsiyum fosfata bağlı abdominal aort anevrizması (AAA) fare modelini tanımlamaktadır.

Kalsiyum Fosfat Kaynaklı Fare Abdominal Aort Anevrizması Modeli

An abdominal aortic aneurysm (AAA) is a life-threatening cardiovascular disease that occurs worldwide and is characterized by irreversible dilation of the ...

Bu protokol, abdominal aort anevrizmasının moleküler mekanizmalarındaki patolojik özellikleri incelemek için kalsiyum fosfata bağlı abdominal aort anevrizması üçlü A fare modelini tanımlar. Kalsiyum fosfat kaynaklı abdominal aort anevrizması modeli, anjiyotensin tüpü ve elastaz kaynaklı abdominal aort anevrizması modellerine kıyasla hızlı ve uygun maliyetli bir modeldir. Prosedürü gösteren, burada doktora sonrası doktor, laboratuvarımızdan bir arkadaş olan Zeyu Cai olacak.Başlamak için 0,3 santimetre genişliğinde pudrasız lastik eldiven ve gazlı bez şeritleri kesin. Daha sonra sekiz ila on haftalık C57BL6J Mayo fareleri satın alın ve hayvanları 12 saatlik açık karanlık döngü ve yiyecek ve suya ücretsiz erişim ile klimalı bir ortamda barındırın. Daha sonra, ameliyattan önce gazlı bez, pamuklu çubuklar, makas ve forseps otoklav yapın ve Betadine,% 70 etanol ve antiseptik el yıkama elde edin.Anestezi uygulanan farenin karın kıllarını elektrikli kesme makinesi veya epilasyon kremi kullanarak tıraş edin. Daha sonra tıraş edilen bölgeyi Betadine ile silin ve silin, ardından dairesel bir hareketle birkaç kez% 70 etanol alın. Daha sonra makas kullanarak karnın orta çizgisi boyunca alt karın bölgesinde yaklaşık 1,5 santimetrelik bir kesi yapın.Normal salin ile nemlendirilmiş steril bir pamuklu çubuk kullanarak, infrarenal aort görünene kadar bağırsağı dikkatlice çıkarın. Daha sonra, bağ dokusunu ve yağını infrarenal aorttan yaklaşık 0.5 santimetrelik bir bölüm boyunca diseke ederken, küçük damarlarda dorsal tarafa herhangi bir yırtılmayı önleyin. Ardından, pamuklu çubukla fazla sıvıyı silerken abdominal aort ve abdominal ana damarın altına tuzlu su batırılmış kauçuk eldiven şeridinin bir parçasını paketleyin.Daha sonra, 10 dakika boyunca infrarenal abdominal vaskülatürün adventitisi üzerine 0.5 molar kalsiyum klorür ile ıslatılmış bir parça gazlı bez paketleyin. Gazlı bezi çıkarın ve aortun adventitisinde C2'de kalsiyum ortofosfat kristalleri üretmek için beş dakika boyunca PBS çözeltisi ile ıslatılmış başka bir gazlı bez parçası paketleyin. Ardından lastik eldiven şeridini ve gazlı bezi dikkatlice çıkarın.Farenin bağırsak sistemini sıfırladıktan sonra, karın insizyonunu ve cildi beş sıfır dikişle dikin. Ardından, fare bilincini yeniden kazanana kadar fareyi bir ısıtma yastığına yerleştirin. Fareyi 14 gün daha bekletin ve ameliyattan sonra fareyi yakından izleyin ve daha sonra en az her gün gözlemleyin.Ameliyattan 14 gün sonra, ötenazi fare torasik ve abdominal boşluklarını ventralal olarak kesin ve sağ atriyumu açın. PBS tamponlu fareleri aorttaki kanı çıkarmak için kalbin sol ventrikülünden bolca kullanın ve daha sonra makalede açıklandığı gibi% 4 paraformaldehit ile perfüze edin. Adventitial doku ve yağları stereo mikroskop altında dikkatlice çıkarın.Daha sonra aortu hasat edin ve 48 saat boyunca beş mililitre% 4 paraformaldehit içeren bir tüpe yerleştirin. Daha sonra aortu böcek iğneleriyle siyah bir balmumu plakasına sabitleyin ve aort görüntüleri elde etmeye devam edin. 14 günlük kalsiyum ortofosfat uygulamasından sonra abdominal aort anevrizması oluşumunu görselleştirmek için aortların morfolojisi görüntülendi.Kalsiyum ortofosfatın infrarenal abdominal aortun genişlemesine yol açtığı ve elastin kırılmaları ile gösterildiği gibi elastik liflerin dramatik bir şekilde bozulmasına neden olduğu gözlendi. İnfrarenal aort görünene kadar bağırsağı çıkarmak için normal salin ile nemlendirilmiş steril bir pamuklu çubuk kullanmak ve daha sonra bağ dokusunu ve yağını infrarenal aorttan çıkarmak. Genel olarak, kalsiyum fosforata bağlı fareler abdominal aort anevrizması modeli, abdominal aort anevrizmasının moleküler mekanizmalarını ve terapötik stratejilerini araştırmak için hızlı ve uygun maliyetli bir yaklaşımdır ve insan abdominal aort anevrizmasının özelliklerini tam olarak taklit etmek için diğer modellerle paralel olarak uygulanabilir.

Research

JoVE Journal

Biology

Creation of Murine Experimental Abdominal Aortic Aneurysms with Elastase 

Elastaz ile murin Deneysel Abdominal Aort Anevrizmalarının Yaratılış

Transient intraluminal infusion of porcine pancreatic elastase into the infrarenal segment of the abdominal aorta is the most widely used animal model of ...

Aortic Ring Assay

Aort Halka Testi

Angiogenesis, the sprouting of blood vessels from preexisting vasculature is associated with both natural and pathological processes. Various angiogenesis ...

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

In vivo Görüntüleme ve Yumurtalık Kanseri Ortotopik Fare Modeli Tedavi Tedaviler

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models.  This paper describes the development of an orthotopic mouse model ...

Isolation and Primary Culture of Mouse Aortic Endothelial Cells

İzolasyon ve Fare aort endotel hücreleri İlköğretim Kültür

The vascular endothelium is essential to normal vascular homeostasis. Its dysfunction participates in various cardiovascular disorders. The mouse is an ...

Trans-inner Cell Mass Injection of Embryonic Stem Cells Leads to Higher Chimerism Rates

Trans-iç hücre embriyonik kök hücrelerin kitle enjeksiyon daha yüksek Chimerism oranları için yol açar.

In an effort to increase efficiency in the creation of genetically modified mice via ES Cell methodologies, we present an adaptation to the current ...

A Mouse Model of Intestinal Partial Obstruction

Bağırsak kısmi tıkanıklık bir fare modeli

Intestinal obstructions, that impede or block peristaltic movement, can be caused by abdominal adhesions and most gastrointestinal (GI) diseases including ...

Simultaneous Measurements of Intracellular Calcium and Membrane Potential in Freshly Isolated and Intact Mouse Cerebral Endothelium

Hücre içi kalsiyum ve taze izole ve olduğu gibi fare serebral endotel membran potansiyeli eşzamanlı ölçümler

Cerebral arteries and their respective microcirculation deliver oxygen and nutrients to the brain via blood flow regulation. Endothelial cells line the ...

Imaging Calcium Dynamics in Subpopulations of Mouse Pancreatic Islet Cells

Fare Pankreas Adacık Hücrelerinin Alt Popülasyonlarında Görüntüleme Kalsiyum Dinamiği

Pancreatic islet hormones regulate blood glucose homeostasis. Changes in blood glucose induce oscillations of cytosolic calcium in pancreatic islet cells ...

Mass Spectrometry Analysis to Identify Ubiquitylation of EYFP-tagged CENP-A (EYFP-CENP-A)

Mass Spectrometry Analysis to Identify Ubiquitylation of EYFP-tagged CENP-A EYFP-CENP-A

EYFP etiketli CENP-A (EYFP-CENP-A) Ubiquitylation tanımlamak için Kütle Spektrometresi Analizi

Studying the structure and the dynamics of kinetochores and centromeres is important in understanding chromosomal instability (CIN) and cancer ...

A Mouse Model of Lumbar Spine Instability

Bel Omurgası Kararsızlığının Fare Modeli

Intervertebral disc degeneration (IDD) is a common pathological change leading to low back pain. Appropriate animal models are desired for understanding ...