Name: separation of immune cell subpopulations in peripheral blood samples from children with infectious mononucleosis
Uploaded: 2022-09-07T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Separation of Immune Cell Subpopulations in Peripheral Blood Samples from Children with Infectious Mononucleosis at JoVE.com

Questo lavoro è stato sostenuto dalla National Natural Science Foundation of China (82002130), dalla Beijing Natural Science Foundation (7222059) e dal CAMS Innovation Fund for Medical Sciences (2019-I2M-5-026).

I campioni di sangue sono stati ottenuti da pazienti con IM (n = 3), portatori sani di EBV (n = 3) e bambini non infetti da EBV (n = 3). I volontari sono stati reclutati dall'ospedale pediatrico di Pechino, dalla Capital Medical University e tutti gli studi sono stati approvati eticamente. L'approvazione etica è stata ottenuta dal Comitato etico dell'ospedale pediatrico di Pechino, Capital Medical University (numero di approvazione: [2021]-E-056-Y). Il consenso informato dei pazienti è stato revocato in quanto lo studi...

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	<li>Kwok, H., Chiang, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+conventional+to+next+generation+sequencing+of+Epstein-Barr+virus+genomes.">From conventional to next generation sequencing of Epstein-Barr virus genomes.</a> Viruses. 8 (3), 60 (2016).</li><li>Bu, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunization+with+components+of+the+viral+fusion+apparatus+elicits+antibodies+that+neutralize+Epstein-Barr+virus+in+B+cells+and+epithelial+cells.">Immunization with components of the viral fusion apparatus elicits antibodies that neutralize Epstein-Barr virus in B cells and epithelial cells.</a> Immunity. 50 (5), 1305-1316 (2019).</li><li>Balfour, H. 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T., Trotter, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+cytometry+controls,+instrument+setup,+and+the+determination+of+positivity.">Flow cytometry controls, instrument setup, and the determination of positivity.</a> Cytometry Part A. 69 (9), 1037-1042 (2006).</li><li>Byford, E., Carr, M., Pinon, L., Ahearne, M. J., Wagner, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+CD4++T-cells+and+analysis+of+circulating+T-follicular+helper+(cTfh)+cell+subsets+from+peripheral+blood+using+6-color+flow+cytometry.">Isolation of CD4+ T-cells and analysis of circulating T-follicular helper (cTfh) cell subsets from peripheral blood using 6-color flow cytometry.</a> Journal of Visualized Experiments. 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B., Zuo, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteome-wide+analysis+of+CD8++T+cell+responses+to+EBV+reveals+differences+between+primary+and+persistent+infection.">Proteome-wide analysis of CD8+ T cell responses to EBV reveals differences between primary and persistent infection.</a> PLoS Pathogens. 14 (9), 1007110 (2018).</li><li>Zamai, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Understanding+the+Synergy+of+NKp46+and+co-activating+signals+in+various+NK+cell+subpopulations:+paving+the+way+for+more+successful+NK-cell-based+immunotherapy.">Understanding the Synergy of NKp46 and co-activating signals in various NK cell subpopulations: paving the way for more successful NK-cell-based immunotherapy.</a> Cells. 9 (3), 753 (2020).</li><li>Lam, J. K. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emergence+of+CD4++and+CD8++polyfunctional+T+cell+responses+against+immunodominant+lytic+and+latent+EBV+antigens+in+children+with+primary+EBV+infection.">Emergence of CD4+ and CD8+ polyfunctional T cell responses against immunodominant lytic and latent EBV antigens in children with primary EBV infection.</a> Frontiers In Microbiology. 9, 416 (2018).</li><li>Choi, I. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Signaling+by+the+Epstein-Barr+virus+LMP1+protein+induces+potent+cytotoxic+CD4(+)+and+CD8(+)+T+cell+responses.">Signaling by the Epstein-Barr virus LMP1 protein induces potent cytotoxic CD4(+) and CD8(+) T cell responses.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 115 (4), 686-695 (2018).</li></ol>

Questo protocollo rappresenta un modo efficace per ordinare le sottopopolazioni di cellule immunitarie del sangue periferico. In questo studio, campioni di sangue venoso di pazienti con IM, portatori sani di EBV e bambini non infetti da EBV sono stati selezionati come obiettivo della ricerca. Questo lavoro che utilizza il sangue periferico di pazienti di IM si concentra principalmente sull'analisi e la determinazione delle proporzioni di diversi sottogruppi cellulari attraverso la citometria a flusso multicolore. Il sequ...

Il virus di Epstein-Barr (EBV), un γ-herpesvirus noto anche come herpes virus umano di tipo 4, è onnipresente nella popolazione umana e stabilisce un'infezione latente permanente in oltre il 90% della popolazione adulta1. La maggior parte dell'infezione primaria da EBV si verifica durante l'infanzia e l'adolescenza, con una frazione di pazienti che manifesta mononucleosi infettiva (IM)2, che mostra immunopatologia caratteristica, tra cui una risposta immunitaria attivata con cellule T CD8+ nel sangue e una proliferazione transitoria di cellule B infette da EBV nell'orofaringe3. Il decorso della IM può durare 2-6 settimane e la maggior parte dei pazienti guarisce ben4. Tuttavia, alcuni individui sviluppano sintomi IM-simili persistenti o ricorrenti con elevata morbilità e mortalità, che è classificata come infezione cronica attiva da EBV (CAEBV)5. Inoltre, l'EBV è un importante virus oncogeno, che è strettamente correlato a una varietà di tumori maligni, tra cui tumori maligni epitelioidi e linfoidi come il carcinoma nasofaringeo, il linfoma di Burkitt, il linfoma di Hodgkin (HL) e il linfoma a cellule T / NK6. Sebbene l'EBV sia stato studiato per oltre 50 anni, la sua patogenesi e il meccanismo con cui induce la proliferazione dei linfociti non sono stati completamente chiariti.
Diversi studi hanno studiato le firme molecolari per l'immunopatologia dell'infezione da EBV mediante sequenziamento del trascrittoma. Zhong et al. hanno analizzato il profilo dell'intero trascrittoma delle cellule mononucleate del sangue periferico (PBMC) di bambini cinesi con IM o CAEBV per scoprire che l'espansione delle cellule T CD8 + è stata trovata prevalentemente nel gruppo IM7, suggerendo che le cellule T CD8 + possono svolgere un ruolo importante nella IM. Allo stesso modo, un altro studio ha rilevato percentuali più basse di cellule T citotossiche e CD19+ B specifiche per EBV e percentuali più elevate di cellule T CD8+ nei pazienti con IM causata da infezione primaria da EBV rispetto ai pazienti con IM causata sia dalla riattivazione dell'EBV che da altri agenti8. Le cellule B sono coinvolte per la prima volta nell'IM perché i recettori EBV sono presentati sulla loro superficie. Al Tabaa et al. hanno scoperto che le cellule B erano attivate policlonalmente e differenziate in plasmablasti (cellule CD19+, CD27+ e CD20− e CD138−) e plasmacellule (CD19+, CD27+ e CD20− e CD138+) durante IM9. Inoltre, Zhong et al. hanno scoperto che i marcatori monocitari CD14 e CD64 erano sovraregolati in CAEBV, suggerendo che i monociti possono svolgere un ruolo importante nella risposta immunitaria cellulare di CAEBV attraverso citotossicità cellulare anticorpo-dipendente (ADCC) e fagocitosi iperattiva7. Alka et al. hanno caratterizzato il trascrittoma delle cellule NK CD56 CD56 CD16+ selezionate da quattro pazienti di IM o HL e hanno scoperto che le cellule NK di IM e HL avevano una sottoregolazione dell'immunità innata e dei geni di segnalazione delle chemochine, che potrebbero essere responsabili dell'iporeattività delle cellule NK10. Inoltre, Greenough et al. hanno analizzato l'espressione genica delle cellule T CD8 + ordinate da 10 PBMC di individui con IM. Hanno riferito che una grande percentuale di cellule T CD8 + in IM erano specifiche del virus, attivate, divise e innescate per esercitare attività effettrici11. Sia le risposte mediate dalle cellule T, specifiche per l'EBV, sia le risposte non specifiche mediate dalle cellule NK svolgono un ruolo essenziale durante l'infezione primaria da EBV. Tuttavia, questi studi hanno studiato solo i risultati del trascrittoma della diversa miscela di cellule immunitarie o solo una certa sottopopolazione di linfociti, il che non è sufficiente per il confronto completo delle caratteristiche molecolari e delle funzioni di diverse sottopopolazioni di cellule immunitarie nei bambini con IM allo stesso stato di malattia.
Questo articolo descrive un metodo che combina sfere immunomagnetiche e selezione cellulare attivata da fluorescenza (FACS) per isolare e analizzare sottopopolazioni definite di cellule immunitarie di PBMC (monociti, cellule T CD4 +, cellule T CD8 +, cellule B e cellule NK). Utilizzando questo metodo, le cellule magnetiche e fluorescenti possono essere purificate utilizzando un separatore magnetico e FACS o analizzate mediante citometria a flusso. L'RNA può essere estratto dalle cellule purificate per il sequenziamento del trascrittoma. Questo metodo consentirà la caratterizzazione e l'espressione genica di diverse cellule immunitarie negli stessi stati di malattia di individui con IM, che amplierà la nostra comprensione dell'immunopatologia dell'infezione da EBV.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>APC anti-human CD16</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>302012</td>
			<td>Fluorescent antibody&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APC anti-human CD56 (NCAM)</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>362504</td>
			<td>Fluorescent antibody&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APC/Cyanine7 anti-human CD4</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>344616</td>
			<td>Fluorescent antibody&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automated cell counter</td>
			<td>BIO RAD</td>
			<td>TC20</td>
			<td>Cell count</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD FACSAria fluorescence-activated&#160;flow&#160;cell&#160;sorter-cytometer (BD FACSAria II)</td>
			<td>Becton, Dickinson and Company</td>
			<td>644832</td>
			<td>Cell sort</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD14 MicroBeads, human</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-050-201</td>
			<td>microbeads</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell ctng slides</td>
			<td>BIO RAD</td>
			<td>1450016</td>
			<td>Cell count</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge tubes</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>35209715</td>
			<td>15 mL centrifuge tube</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA (&#8805;99%, BioPremium)</td>
			<td>Beyotime</td>
			<td>ST1303</td>
			<td>EDTA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylene diamine tetra acetic acid (EDTA) anticoagulant tubes</td>
			<td>Becton, Dickinson and Company</td>
			<td>&#160;367862&#160;</td>
			<td>EDTA anticoagulant tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FITC anti-human CD19</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>302206</td>
			<td>Fluorescent antibody&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gibco Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>16000-044</td>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;High-speed&#160;centrifuge</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>&#160;3K15</td>
			<td>Cell centrifugation for 15 mL centrifuge tube</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;High-speed&#160;centrifuge</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>5424R</td>
			<td>Cell centrifugation for 1.5 mL Eppendorf (EP) tube</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human lymphocyte separation medium</td>
			<td>Dakewe</td>
			<td>DKW-KLSH-0100</td>
			<td>Ficoll-Paque</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LS&#160;Separation&#160;columns</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-042-401</td>
			<td>Separation&#160;columns</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microcentrifuge tubes</td>
			<td>Axygen</td>
			<td>MCT-150-C</td>
			<td>1.5 mL microcentrifuge tube</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MidiMACS Separator</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-042-302</td>
			<td>Magnetic bead separator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE anti-human CD8</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>344706</td>
			<td>Fluorescent antibody&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PerCP/Cyanine5.5 anti-human CD3</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>344808</td>
			<td>Fluorescent antibody&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffered Saline (PBS)</td>
			<td>BI</td>
			<td>02-024-1ACS</td>
			<td>PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polystyrene round bottom tubes</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352235</td>
			<td>5 mL tube for FACS flow cytometer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TRIzol reagent</td>
			<td>Ambion</td>
			<td>15596024</td>
			<td>Lyse cells for RNA extraction</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan Blue Staining Cell Viability Assay Kit</td>
			<td>Beyotime</td>
			<td>C0011</td>
			<td>Trypan Blue Staining</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

separation of immune cell subpopulations in peripheral blood samples from children with infectious mononucleosis

La mononucleosi infettiva (IM) è una sindrome acuta per lo più associata all'infezione primaria da virus di Epstein-Barr (EBV). I principali sintomi clinici includono febbre irregolare, linfoadenopatia e linfociti significativamente aumentati nel sangue periferico. Il meccanismo patogenetico della IM non è ancora chiaro; Non esiste un metodo di trattamento efficace per questo, con terapie principalmente sintomatiche disponibili. La domanda principale nell'immunobiologia dell'EBV è perché solo un piccolo sottogruppo di individui infetti mostra gravi sintomi clinici e sviluppa persino tumori maligni associati a EBV, mentre la maggior parte degli individui è asintomatica per tutta la vita con il virus.
Le cellule B sono coinvolte per la prima volta nell'IM perché i recettori EBV sono presentati sulla loro superficie. Le cellule natural killer (NK) sono linfociti innati citotossici che sono importanti per uccidere le cellule infette da EBV. La proporzione di cellule T CD4+ diminuisce mentre quella delle cellule T CD8+ si espande drammaticamente durante l'infezione acuta da EBV e la persistenza delle cellule T CD8+ è importante per il controllo permanente della IM. Queste cellule immunitarie svolgono un ruolo importante nella IM e le loro funzioni devono essere identificate separatamente. A tale scopo, i monociti vengono separati prima dalle cellule mononucleate del sangue periferico (PBMC) di individui IM utilizzando microsfere CD14, una colonna e un separatore magnetico.
Le restanti PBMC sono colorate con peridinina-clorofilla-proteina (PerCP)/cianina 5.5 anti-CD3, alloficocianina (APC)/cianina 7 anti-CD4, ficoeritrina (PE) anti-CD8, fluoresceina isotiocianato (FITC) anti-CD19, APC anti-CD56 e anticorpi APC anti-CD16 per ordinare le cellule T CD4 +, le cellule T CD8 +, le cellule B e le cellule NK utilizzando un citometro a flusso. Inoltre, è stato eseguito il sequenziamento del trascrittoma di cinque sottopopolazioni per esplorare le loro funzioni e meccanismi patogenetici nella IM.

Riferimento della strategia di gating La strategia di gating utilizzata per ordinare le quattro sottopopolazioni di linfociti è mostrata nella Figura 1. In breve, i linfociti sono selezionati (P1) su un dot plot che mostra la granulosità (SSC-A) rispetto alle dimensioni (FSC-A). Quindi, le singole celle vengono selezionate (P2) su un dot plot che mostra la dimensione (FSC-A) rispetto alla dispersione diretta (FSC-H), mentre le celle doppiette sono escluse. Le cellule T ...

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Separation of Immune Cell Subpopulations in Peripheral Blood Samples from Children with Infectious Mononucleosis

Descriviamo un metodo che combina sfere immunomagnetiche e selezione cellulare attivata dalla fluorescenza per isolare e analizzare sottopopolazioni definite di cellule mononucleate del sangue periferico (monociti, cellule T CD4 +, cellule T CD8 +, cellule B e cellule natural killer). Utilizzando questo metodo, le cellule magnetiche e fluorescenti possono essere purificate e analizzate.

Separazione delle sottopopolazioni di cellule immunitarie nei campioni di sangue periferico da bambini con mononucleosi infettiva

Infectious mononucleosis (IM) is an acute syndrome mostly associated with primary Epstein&#8211;Barr virus (EBV) infection. The main clinical symptoms ...

Questo metodo consentirà la caratterizzazione di diverse cellule immunitarie negli stessi stati di malattia di individui con IM, che amplierà la nostra comprensione del meccanismo dell'infezione da EBV. A dimostrare la procedura sarà Linlin Zhang, un medico del nostro laboratorio. Per iniziare, prendere i PBMC isolati in precedenza in una provetta da microcentrifuga da 1,5 millilitri e ruotarli a 300 G per 10 minuti a temperatura ambiente.Scartare il surnatante e risospendere le cellule con 80 microlitri del tampone preparato. Quindi, aggiungere 20 microlitri di microsfere CD 14 alla sospensione cellulare, mescolata bene mediante pipettaggio, e incubare il tubo per 15 minuti sul ghiaccio. Quindi lavare le PBMC utilizzando un millilitro di tampone e centrifugare a 300 G per 10 minuti a temperatura ambiente.Scartare l'intero surnatante e risospendere le cellule con 500 microlitri di tampone. Per la separazione magnetica, posizionare una colonna sul separatore di sfere magnetiche e innescare la colonna lavandola con tre millilitri di tampone. Quindi, aggiungere la sospensione della cella alla colonna.Lasciarlo passare e raccogliere le cellule non etichettate in una provetta da centrifuga da 15 millilitri. Lavare la colonna tre volte con tre millilitri di tampone e raccogliere l'intero effluente in una provetta da centrifuga da 15 millilitri. Ora, posizionare la colonna in una nuova provetta da centrifuga da 15 millilitri e aggiungere cinque millilitri di tampone alla colonna.Spingere saldamente lo stantuffo nella colonna per lavare le celle marcate magneticamente nel tubo. Centrifugare le celle marcate magneticamente a 300 G per cinque minuti. Dopo aver rimosso il surnatante, risospendere le cellule in 500 microlitri di PBS e trasferire la sospensione cellulare in una provetta da microcentrifuga da 1,5 millilitri per il successivo sequenziamento del trascrittoma.Pellettare le cellule non etichettate raccolte centrifugando a 300 G per cinque minuti e risospendere le cellule in 100 microlitri di PBS in una provetta da microcentrifuga da 1,5 millilitri. Quindi, aggiungere due microlitri di ciascun anticorpo marcato alla sospensione cellulare e incubare sul ghiaccio per 30 minuti, al riparo dalla luce. Successivamente, aliquote 100 microlitri della sospensione della cella PBMC in provette di microcentrifuga da 1,5 millilitri per impostare un campione di controllo negativo CD 3, CD 4, CD 8 e CD 19, campioni di colorazione singoli e un campione di colorazione CD 56 o CD 16.Quindi aggiungere due microlitri del corrispondente anticorpo marcato con fluorescenza a ciascuna provetta e incubare sul ghiaccio per 30 minuti, al riparo dalla luce. Dopo l'incubazione, lavare tutte le cellule con PBS come dimostrato in precedenza e risospendere in 500 microlitri di PBS. Aprire il sistema di ordinamento delle celle ed eseguire il programma di accensione.Quindi, installare l'ugello da 85 micrometri e aprire il flusso di smistamento. Impostare la tensione di ordinamento su 4.500 volt e la frequenza su 47. Imposta lo spazio su 8 nella finestra di interruzione e attiva la modalità di ordinamento automatico del punto debole per determinare automaticamente il valore dell'ampiezza della goccia.Infine, regola il ritardo delle gocce su 30,31 nella finestra del flusso laterale. Utilizzando un dot plot a dispersione in avanti rispetto a un lato, disegnare la porta poligonale P1 per identificare la popolazione di linfociti intatta. Successivamente, utilizzando un'area di dispersione diretta rispetto al grafico a punti di altezza, disegnare il gate poligonale P2 per identificare le singole celle ed escludere doppietti.Quindi, utilizzando un'area FITC CD 19 rispetto a CD 3 per il grafico a punti dell'area CPCY 5.5, disegnare il gate rettangolare P3 per selezionare le celle T positive del CD 3 e le celle B positive del CD 19. Successivamente, utilizzando un'area APCCY 7 CD 4 rispetto al dot plot dell'area PE del CD 8, disegnare un gate rettangolare per selezionare le celle T positive CD 4 e CD 8. Infine, utilizzando un'area di dispersione laterale rispetto al diagramma di punti dell'area APC CD 56 o CD 16, disegnare un cancello rettangolare per selezionare le celle natural killer positive CD 56 o CD 16.Per il tubo di controllo negativo, fare clic su Carica nel dashboard di acquisizione e selezionare le impostazioni del citometro nel software. Nella finestra di impostazioni, fare clic sulla scheda parametri e regolare le tensioni di dispersione diretta, dispersione laterale e coloranti fluorescenti diversi. Dopo aver caricato i singoli tubi colorati nel citometro, fare clic su Carica nel dashboard di acquisizione, quindi fare clic sulla scheda Compensazione per regolare la compensazione, come descritto nel testo.Vortice la sospensione cellulare delicatamente, prima di caricare il tubo nel citometro. Aggiungere 200 microlitri di FBS a quattro tubi di flusso di raccolta e vortice i tubi. Posizionarli nella camera di raccolta del citometro.Raccogliere i diversi tipi di celle separatamente nei quattro tubi di flusso. Ruotare le cellule separate a 300 G per cinque minuti e aggiungere 200 microlitri di reagente di isolamento dell'RNA alla tavolozza cellulare per il sequenziamento del trascrittoma. Nel presente studio, le sottopopolazioni di cellule immunitarie dal sangue periferico di diversi campioni sono state selezionate in modo efficiente combinando le tecniche delle perle immunomagnetiche e della selezione delle cellule attivate dalla fluorescenza.È importante sottolineare che in questo protocollo, la fase di ordinamento delle cellule è stata ottimizzata per migliorare la vitalità cellulare. Le cellule immunitarie selezionate hanno mostrato una maggiore percentuale di cellule T positive CD 3, CD 8 nei pazienti con mononucleosi infettiva rispetto sia ai portatori sani del virus Epstein-Barr che ai campioni non infetti. Al contrario, una diminuzione delle proporzioni di cellule T CD 3, CD 4 positive e cellule B CD 19 positive è stata osservata in pazienti con mononucleosi infettiva rispetto ai portatori sani di EBV e ai bambini non infetti da EBV.Inoltre, sono state osservate percentuali ridotte di cellule natural killer CD 56 o CD 16 positive nei pazienti con mononucleosi infettiva rispetto ai bambini non infetti da EBV. Mantenere la vitalità cellulare è vitale per gli esperimenti successivi. Mantenere le celle sul ghiaccio o in frigorifero durante il processo di selezione è vantaggioso per la vitalità delle cellule.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Enumeration of Major Peripheral Blood Leukocyte Populations for Multicenter Clinical Trials Using a Whole Blood Phenotyping Assay

Enumerazione delle popolazioni dei leucociti del sangue periferico per le principali studi clinici multicentrici utilizzando un intero saggio Fenotipizzazione Sangue

Cryopreservation of peripheral blood leukocytes is widely used to preserve cells for immune response evaluations in clinical trials and offers many ...

Ricerca

Immunologia e infezioni

Isolation of Precursor B-cell Subsets from Umbilical Cord Blood

Isolamento di precursori delle cellule B di sottoinsiemi di sangue del cordone ombelicale

Umbilical cord blood is highly enriched for hematopoietic progenitor cells at different lineage commitment stages. We have developed a protocol for ...

An In vitro Model to Study Immune Responses of Human Peripheral Blood Mononuclear Cells to Human Respiratory Syncytial Virus Infection

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Human respiratory syncytial  virus (HRSV) infections present a broad spectrum of disease severity, ranging  from mild infections to life-threatening ...

Detection of Fluorescent Nanoparticle Interactions with Primary Immune Cell Subpopulations by Flow Cytometry

Rilevamento di nanoparticelle fluorescenti Interazioni con Primaria immunitario sottopopolazioni cellulari mediante citometria di flusso

Engineered nanoparticles are endowed with very promising properties for therapeutic and diagnostic purposes. This work describes a fast and reliable ...

Rapid Identification of Gram Negative Bacteria from Blood Culture Broth Using MALDI-TOF Mass Spectrometry

Rapida identificazione dei batteri Gram-negativi dal sangue brodo di coltura Uso MALDI-TOF

An important role of the clinical microbiology laboratory is to provide rapid identification of bacteria causing bloodstream infection. Traditional ...

Detecting Glycogen in Peripheral Blood Mononuclear Cells with Periodic Acid Schiff Staining

Rilevamento glicogeno in cellule periferiche mononucleate del sangue con Periodic Acid Schiff colorazione

Periodic acid Schiff (PAS) staining is an immunohistochemical technique used on muscle biopsies and as a diagnostic tool for blood samples. ...

Generation of Human Alloantigen-specific T Cells from Peripheral Blood

Generazione di Human alloantigene-specifiche cellule T da sangue periferico

The study of human T lymphocyte biology often involves examination of responses to activating ligands. T cells recognize and respond to processed peptide ...

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Un approccio semi-automatico di preparare anticorpi cocktail per l&#39;analisi immunofenotipica di Human sangue periferico

Immunophenotyping of peripheral blood by flow cytometry determines changes in the frequency and activation status of peripheral leukocytes during disease ...

Isolation and Flow Cytometric Analysis of Glioma-infiltrating Peripheral Blood Mononuclear Cells

Isolamento e analisi citofluorimetrica di-Glioma infiltrazione sangue periferico mononucleari Cellule

Our laboratory has recently demonstrated that natural killer (NK) cells are capable of eradicating orthotopically implanted mouse GL26 and rat CNS-1 ...