Name: separation of immune cell subpopulations in peripheral blood samples from children with infectious mononucleosis
Uploaded: 2022-09-07T13:00:00
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この研究は、中国国家自然科学財団(82002130)、北京自然科学財団(7222059)、およびCAMS医学イノベーション基金(2019-I2M-5-026)の支援を受けました。

血液サンプルは、IM(n = 3)、健康なEBVキャリア(n = 3)、およびEBVに感染していない小児(n = 3)の患者から得られた。首都医科大学の北京小児病院からボランティアを募集し、すべての研究が倫理的に承認されました。倫理的承認は、首都医科大学北京小児病院の倫理委員会によって取得されました(承認番号:[2021]-E-056-Y)。この研究では残りのサンプルのみを臨床試験に使用したため、患者のインフ...

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	<li>Kwok, H., Chiang, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+conventional+to+next+generation+sequencing+of+Epstein-Barr+virus+genomes.">From conventional to next generation sequencing of Epstein-Barr virus genomes.</a> Viruses. 8 (3), 60 (2016).</li><li>Bu, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunization+with+components+of+the+viral+fusion+apparatus+elicits+antibodies+that+neutralize+Epstein-Barr+virus+in+B+cells+and+epithelial+cells.">Immunization with components of the viral fusion apparatus elicits antibodies that neutralize Epstein-Barr virus in B cells and epithelial cells.</a> Immunity. 50 (5), 1305-1316 (2019).</li><li>Balfour, H. 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S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+nature+and+clinical+significance+of+atypical+mononuclear+cells+in+infectious+mononucleosis+caused+by+the+Epstein-Barr+virus+in+children.">The nature and clinical significance of atypical mononuclear cells in infectious mononucleosis caused by the Epstein-Barr virus in children.</a> Journal of Infectious Diseases. 223 (10), 1699-1706 (2021).</li><li>Al Tabaa, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=B-cell+polyclonal+activation+and+Epstein-Barr+viral+abortive+lytic+cycle+are+two+key+features+in+acute+infectious+mononucleosis.">B-cell polyclonal activation and Epstein-Barr viral abortive lytic cycle are two key features in acute infectious mononucleosis.</a> Journal of Clinical Virology. 52 (1), 33-37 (2011).</li><li>M, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Natural+Killer+cell+transcriptome+during+primary+EBV+infection+and+EBV+associated+Hodgkin+Lymphoma+in+children-A+preliminary+observation.">Natural Killer cell transcriptome during primary EBV infection and EBV associated Hodgkin Lymphoma in children-A preliminary observation.</a> Immunobiology. 225 (3), 151907 (2020).</li><li>Greenough, T. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+gene+expression+signature+that+correlates+with+CD8++T+cell+expansion+in+acute+EBV+infection.">A gene expression signature that correlates with CD8+ T cell expansion in acute EBV infection.</a> Journal of Immunology. 195 (9), 4185-4197 (2015).</li><li>Xia, Y., Gao, Y., Wang, B., Zhang, H., Zhang, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimizing+the+method+of+cell+separation+from+bile+of+patients+with+cholangiocarcinoma+for+flow+cytometry.">Optimizing the method of cell separation from bile of patients with cholangiocarcinoma for flow cytometry.</a> Gastroenterology Research and Practice. , 5436961 (2019).</li><li>Maecker, H. T., Trotter, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+cytometry+controls,+instrument+setup,+and+the+determination+of+positivity.">Flow cytometry controls, instrument setup, and the determination of positivity.</a> Cytometry Part A. 69 (9), 1037-1042 (2006).</li><li>Byford, E., Carr, M., Pinon, L., Ahearne, M. J., Wagner, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+CD4++T-cells+and+analysis+of+circulating+T-follicular+helper+(cTfh)+cell+subsets+from+peripheral+blood+using+6-color+flow+cytometry.">Isolation of CD4+ T-cells and analysis of circulating T-follicular helper (cTfh) cell subsets from peripheral blood using 6-color flow cytometry.</a> Journal of Visualized Experiments. 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P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emergence+of+CD4++and+CD8++polyfunctional+T+cell+responses+against+immunodominant+lytic+and+latent+EBV+antigens+in+children+with+primary+EBV+infection.">Emergence of CD4+ and CD8+ polyfunctional T cell responses against immunodominant lytic and latent EBV antigens in children with primary EBV infection.</a> Frontiers In Microbiology. 9, 416 (2018).</li><li>Choi, I. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Signaling+by+the+Epstein-Barr+virus+LMP1+protein+induces+potent+cytotoxic+CD4(+)+and+CD8(+)+T+cell+responses.">Signaling by the Epstein-Barr virus LMP1 protein induces potent cytotoxic CD4(+) and CD8(+) T cell responses.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 115 (4), 686-695 (2018).</li></ol>

このプロトコルは、末梢血免疫細胞亜集団を分類する効率的な方法を表しています。この研究では、IM患者、健康なEBVキャリア、およびEBVに感染していない子供からの静脈血サンプルが研究目的として選択されました。IMの患者の末梢血を使用したこの作業は、主にマルチカラーフローサイトメトリーによるさまざまな細胞サブセットの比率の分析と決定に焦点を当てています。トランスクリ...

ヒトヘルペスウイルス4型としても知られるγヘルペスウイルスであるエプスタインバーウイルス(EBV)は、ヒト集団に遍在しており、成人人口の90%以上で生涯にわたる潜伏感染を確立しています1。ほとんどのEBV一次感染は小児期および青年期に発生し、一部の患者は感染性単核球症(IM)2を呈し、血液中のCD8+ T細胞による活性化免疫応答や中咽頭3におけるEBV感染B細胞の一時的な増殖などの特徴的な免疫病理を示します。IMの経過は2〜6週間続く可能性があり、患者の大多数はよく回復します4。しかし、一部の個人は、慢性活動性EBV感染症(CAEBV)5に分類される、高い罹患率および死亡率を伴う持続性または再発性のIM様症状を発症します。さらに、EBVは重要な発癌性ウイルスであり、鼻咽頭癌、バーキットリンパ腫、ホジキンリンパ腫(HL)、T/NK細胞リンパ腫などの類上皮性およびリンパ系悪性腫瘍を含むさまざまな悪性腫瘍と密接に関連しています6。EBVは50年以上にわたって研究されてきましたが、その病因やリンパ球の増殖を誘導するメカニズムは完全には解明されていません。
いくつかの研究は、トランスクリプトームシーケンシングによるEBV感染の免疫病理学の分子シグネチャを調査しています。Zhong et al.は、IMまたはCAEBVの中国の子供の末梢血単核細胞(PBMC)の全トランスクリプトームプロファイリングを分析し、CD8+ T細胞の増殖が主にIMグループ7で見られ、CD8+ T細胞がIMで主要な役割を果たしている可能性があることを発見しました。同様に、別の研究では、EBVの再活性化と他の薬剤の両方によって引き起こされるIMの患者よりも、原発性EBV感染によって引き起こされたIM患者では、EBV特異的細胞傷害性T細胞およびCD19+ B細胞の割合が低く、CD8 + T細胞の割合が高いことがわかりました8。B細胞は、EBV受容体がその表面に提示されるため、最初にIMに関与します。Al Tabaaらは、IM9の間にB細胞が多クローン的に活性化され、形質芽細胞(CD19+、CD27+およびCD20−、およびCD138−細胞)および形質細胞(CD19+、CD27+およびCD20−、ならびにCD138+)に分化することを発見した。さらに、Zhongらは、単球マーカーCD14およびCD64がCAEBVでアップレギュレーションされていることを発見し、単球が抗体依存性細胞傷害(ADCC)および活動亢進食作用を介してCAEBVの細胞性免疫応答に重要な役割を果たす可能性があることを示唆しています7。Alkaらは、IMまたはHLの4人の患者からのMACSソーティングCD56dim CD16+ NK細胞のトランスクリプトームを特徴付け、IMおよびHLの両方のNK細胞が自然免疫およびケモカインシグナル伝達遺伝子を下方制御し、NK細胞の低応答性の原因となる可能性があることを発見しました10。さらに、Greenoughらは、IMを有する個体の10個のPBMCからの選別されたCD8+ T細胞の遺伝子発現を分析した。彼らは、IM中のCD8+ T細胞の大部分がウイルス特異的であり、活性化され、分裂し、エフェクター活性を発揮するようにプライミングされていることを報告しました11。T細胞を介したEBV特異的応答とNK細胞を介した非特異的応答の両方が、一次EBV感染中に重要な役割を果たします。しかし、これらの研究は、免疫細胞の多様な混合物またはリンパ球の特定の亜集団のみのトランスクリプトーム結果を調査しただけであり、同じ疾患状態のIMを有する小児における異なる免疫細胞亜集団の分子特性および機能の包括的な比較には十分ではない。
この論文では、免疫磁気ビーズと蛍光活性化セルソーティング(FACS)を組み合わせて、PBMC(単球、CD4+ T細胞、CD8+ T細胞、B細胞、およびNK細胞)の定義された免疫細胞亜集団を分離および分析する方法について説明します。この方法を使用すると、磁気および蛍光標識された細胞を磁気分離器およびFACSを使用して精製するか、フローサイトメトリーによって分析することができます。RNAは、トランスクリプトームシーケンシングのために精製細胞から抽出することができる。この方法により、IM患者の同じ疾患状態における異なる免疫細胞の特性評価と遺伝子発現が可能になり、EBV感染の免疫病理学の理解が広がります。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>APC anti-human CD16</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>302012</td>
			<td>Fluorescent antibody&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APC anti-human CD56 (NCAM)</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>362504</td>
			<td>Fluorescent antibody&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APC/Cyanine7 anti-human CD4</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>344616</td>
			<td>Fluorescent antibody&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automated cell counter</td>
			<td>BIO RAD</td>
			<td>TC20</td>
			<td>Cell count</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD FACSAria fluorescence-activated&#160;flow&#160;cell&#160;sorter-cytometer (BD FACSAria II)</td>
			<td>Becton, Dickinson and Company</td>
			<td>644832</td>
			<td>Cell sort</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD14 MicroBeads, human</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-050-201</td>
			<td>microbeads</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell ctng slides</td>
			<td>BIO RAD</td>
			<td>1450016</td>
			<td>Cell count</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge tubes</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>35209715</td>
			<td>15 mL centrifuge tube</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA (&#8805;99%, BioPremium)</td>
			<td>Beyotime</td>
			<td>ST1303</td>
			<td>EDTA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylene diamine tetra acetic acid (EDTA) anticoagulant tubes</td>
			<td>Becton, Dickinson and Company</td>
			<td>&#160;367862&#160;</td>
			<td>EDTA anticoagulant tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FITC anti-human CD19</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>302206</td>
			<td>Fluorescent antibody&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gibco Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>16000-044</td>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;High-speed&#160;centrifuge</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>&#160;3K15</td>
			<td>Cell centrifugation for 15 mL centrifuge tube</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;High-speed&#160;centrifuge</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>5424R</td>
			<td>Cell centrifugation for 1.5 mL Eppendorf (EP) tube</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human lymphocyte separation medium</td>
			<td>Dakewe</td>
			<td>DKW-KLSH-0100</td>
			<td>Ficoll-Paque</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LS&#160;Separation&#160;columns</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-042-401</td>
			<td>Separation&#160;columns</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microcentrifuge tubes</td>
			<td>Axygen</td>
			<td>MCT-150-C</td>
			<td>1.5 mL microcentrifuge tube</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MidiMACS Separator</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-042-302</td>
			<td>Magnetic bead separator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE anti-human CD8</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>344706</td>
			<td>Fluorescent antibody&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PerCP/Cyanine5.5 anti-human CD3</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>344808</td>
			<td>Fluorescent antibody&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffered Saline (PBS)</td>
			<td>BI</td>
			<td>02-024-1ACS</td>
			<td>PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polystyrene round bottom tubes</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352235</td>
			<td>5 mL tube for FACS flow cytometer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TRIzol reagent</td>
			<td>Ambion</td>
			<td>15596024</td>
			<td>Lyse cells for RNA extraction</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan Blue Staining Cell Viability Assay Kit</td>
			<td>Beyotime</td>
			<td>C0011</td>
			<td>Trypan Blue Staining</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

separation of immune cell subpopulations in peripheral blood samples from children with infectious mononucleosis

感染性単核球症(IM)は、主に原発性エプスタインバーウイルス(EBV)感染に関連する急性症候群です。主な臨床症状には、不規則な発熱、リンパ節腫脹、および末梢血中のリンパ球の有意な増加が含まれます。IMの発症メカニズムはまだ不明です。それに対する効果的な治療法はなく、主に対症療法が利用可能です。EBV免疫生物学の主な疑問は、感染した個人のごく一部だけが重篤な臨床症状を示し、EBV関連の悪性腫瘍を発症することさえあるのに対し、ほとんどの個人はウイルスで一生無症候性である理由です。
B細胞は、EBV受容体がその表面に提示されるため、最初にIMに関与します。ナチュラルキラー(NK)細胞は、EBV感染細胞を殺すために重要な細胞傷害性の自然リンパ球です。CD4+ T細胞の割合は減少しますが、CD8+ T細胞の割合は急性EBV感染時に劇的に拡大し、CD8+ T細胞の持続性はIMの生涯にわたる制御にとって重要です。これらの免疫細胞はIMにおいて重要な役割を果たしており、その機能は個別に同定する必要があります。この目的のために、単球は、CD14マイクロビーズ、カラム、および磁気分離器を使用して、IM個体の末梢血単核球(PBMC)から最初に分離される。
残りのPBMCをペリジニン-クロロフィルタンパク質(PerCP)/シアニン5.5抗CD3、アロフィコシアニン(APC)/シアニン7抗CD4、フィコエリスリン(PE)抗CD8、フルオレセインイソチオシアネート(FITC)抗CD19、APC抗CD56、およびAPC抗CD16抗体で染色し、フローサイトメーターを使用してCD4+ T細胞、CD8+ T細胞、B細胞、およびNK細胞を選別します。さらに、5つの亜集団のトランスクリプトームシーケンシングを実施し、IMにおけるそれらの機能と病原性メカニズムを調査しました。

ゲーティング戦略の参照 4つのリンパ球亜集団を分類するために使用されるゲーティング戦略を図1に示します。簡単に説明すると、リンパ球は、顆粒度(SSC-A)対サイズ(FSC-A)を示すドットプロット上で選択(P1)されます。次に、サイズ(FSC-A)対前方散乱(FSC-H)を示すドットプロット上で単一セルが選択され(P2)、ダブレットセルは除外されます。CD3+ T細胞...

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Separation of Immune Cell Subpopulations in Peripheral Blood Samples from Children with Infectious Mononucleosis

免疫磁気ビーズと蛍光活性化細胞ソーティングを組み合わせて、末梢血単核球(単球、CD4+ T細胞、CD8+ T細胞、B細胞、およびナチュラルキラー細胞)の定義された免疫細胞サブポピュレーションを分離および分析する方法について説明します。この方法を使用すると、磁気および蛍光標識された細胞を精製および分析できます。

感染性単核球症の小児からの末梢血サンプル中の免疫細胞亜集団の分離

Infectious mononucleosis (IM) is an acute syndrome mostly associated with primary Epstein&#8211;Barr virus (EBV) infection. The main clinical symptoms ...

この方法により、IM患者の同じ疾患状態にある異なる免疫細胞の特性評価が可能になり、EBV感染のメカニズムの理解が広がります。手順を実演するのは、私たちの研究室の医師であるリンリン・チャンです。まず、1.5ミリリットルのマイクロ遠心チューブで事前に分離したPBMCを取り、室温で300 Gで10分間回転させます。上清を捨て、調製した80マイクロリットルのバッファーで細胞を再懸濁します。次に、20マイクロリットルのCD14マイクロビーズを細胞懸濁液に加え、ピペッティングによりよく混合し、氷上でチューブを15分間インキュベートする。次に、1ミリリットルのバッファーを使用してPBMCを洗浄し、室温で10分間300 Gで遠心分離します。上清全体を廃棄し、500マイクロリットルのバッファーで細胞を再懸濁します。磁気分離の場合は、磁気ビーズセパレーターの上にカラムを置き、3ミリリットルのバッファーでカラムを洗浄してプライミングします。次に、細胞懸濁液をカラムに加えます。それを通過させ、ラベルのない細胞を15ミリリットルの遠沈管に集めます。3ミリリットルのバッファーでカラムを3回洗浄し、15ミリリットルの遠沈管に廃液全体を回収します。次に、カラムを新しい15ミリリットルの遠沈管に入れ、5ミリリットルのバッファーをカラムに追加します。プランジャーをカラムにしっかりと押し込み、磁気標識されたセルをチューブに洗い流します。磁気標識した細胞を300 Gで5分間遠心分離します。上清を除去した後、細胞を500マイクロリットルのPBSに再懸濁し、その後のトランスクリプトームシーケンシングのために細胞懸濁液を1.5ミリリットルのマイクロ遠心チューブに移します。回収した非標識細胞を300Gで5分間遠心分離してペレット化し、1.5ミリリットルの微小遠心チューブに100マイクロリットルのPBSで細胞を再懸濁します。次に、2マイクロリットルの各標識抗体を細胞懸濁液に加え、光から保護された氷上で30分間インキュベートします。次に、1.5ミリリットルの微小遠心チューブに100マイクロリットルのPBMC細胞懸濁液を分注し、陰性対照サンプルをCD3、CD4、CD8、およびCD19、単一染色サンプル、CD56、またはCD16染色サンプルとセットした。次に、対応する蛍光標識抗体を2マイクロリットルずつ各チューブに加え、光から保護された氷上で30分間インキュベートします。インキュベーション後、前述のようにすべての細胞をPBSで洗浄し、500マイクロリットルのPBSに再懸濁します。セル選別システムを開き、電源オンプログラムを実行します。次に、85マイクロメートルのノズルを取り付け、仕分けストリームを開きます。ソート電圧を4, 500ボルト、周波数を47に設定します。ブレークオフウィンドウでギャップを8に設定し、スイートスポット自動ソートモードをオンにして、液滴振幅値を自動的に決定します。最後に、サイドストリームウィンドウで液滴遅延を30.31に調整します。前方散布図と側方散布図を使用して、ポリゴンゲートP1を描画し、無傷のリンパ球集団を特定します。次に、前方散乱領域対高さドットプロットを使用して、ポリゴンゲートP2を描画して単一セルを特定し、ダブレットを除外します。次に、CPCY 5.5エリアドットプロットあたりのCD 19FITCエリア対CD3を使用して、長方形のゲートP3を描画して、CD3陽性T細胞、およびCD19陽性Bセルを選択します。次に、CD4APCCY7領域対CD8PE領域ドットプロットを用いて、矩形ゲートを描画し、CD4、およびCD8陽性T細胞を選択する。最後に、側方散乱領域対CD56またはCD16APC領域ドットプロットを使用して、矩形ゲートを描画して、CD56またはCD16陽性ナチュラルキラー細胞を選択する。ネガティブコントロールチューブの場合は、取得ダッシュボードでロードをクリックし、ソフトウェアでサイトメーター設定を選択します。インスペクターウィンドウで、パラメータタブをクリックし、前方散乱、側方散乱、およびさまざまな蛍光色素の電圧を調整します。単一の染色チューブをサイトメーターにロードした後、取得ダッシュボードのロードをクリックし、補正タブをクリックして、テキストで説明されているように補正を調整します。細胞懸濁液を穏やかにボルテックスしてから、チューブをサイトメーターにロードします。200マイクロリットルのFBSを4つの収集フローチューブに加え、チューブをボルテックスします。それらをサイトメーター収集チャンバーに入れます。異なるタイプのセルを4つのフローチューブに別々に収集します。分離した細胞を300 Gで5分間スピンダウンし、トランスクリプトームシーケンシングのために200マイクロリットルのRNA単離試薬を細胞パレットに加えます。本研究では、異なるサンプルの末梢血由来の免疫細胞亜集団を、免疫磁気ビーズの技術と蛍光活性化細胞選別の技術を組み合わせることによって効率的に選別した。このプロトコルで重要なのは、細胞ソーティングステップが細胞の生存率を改善するために最適化されていることです。選別された免疫細胞は、健康なエプスタインバーウイルスキャリアおよび非感染サンプルの両方と比較して、感染性単核球症患者におけるCD3、CD8陽性T細胞の割合の増加を示した。対照的に、感染性単核球症の患者では、健康なEBVキャリアおよびEBVに感染していない子供と比較して、CD3、CD4陽性T細胞、およびCD19陽性B細胞の割合の減少が観察されました。さらに、感染性単核球症の患者では、EBVに感染していない子供と比較して、CD 56またはCD 16陽性のナチュラルキラー細胞の割合の減少が観察されました。.細胞の生存率を維持することは、その後の実験に不可欠です。選別プロセス中に細胞を氷上または冷蔵庫に保管することは、細胞の生存率にとって有益です。

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Enumeration of Major Peripheral Blood Leukocyte Populations for Multicenter Clinical Trials Using a Whole Blood Phenotyping Assay

全血の表現型アッセイを用いて多施設臨床試験のための主要な末梢血白血球集団の列挙

Cryopreservation of peripheral blood leukocytes is widely used to preserve cells for immune response evaluations in clinical trials and offers many ...

Isolation of Precursor B-cell Subsets from Umbilical Cord Blood

臍帯血から前駆B細胞サブセットの分離

Umbilical cord blood is highly enriched for hematopoietic progenitor cells at different lineage commitment stages. We have developed a protocol for ...

An In vitro Model to Study Immune Responses of Human Peripheral Blood Mononuclear Cells to Human Respiratory Syncytial Virus Infection

An In vitro Model to Study Immune Responses of Human Peripheral Blood Mononuclear Cells to Human Respiratory Syncytial Virus Infection

Human respiratory syncytial  virus (HRSV) infections present a broad spectrum of disease severity, ranging  from mild infections to life-threatening ...

Detection of Fluorescent Nanoparticle Interactions with Primary Immune Cell Subpopulations by Flow Cytometry

フローサイトメトリーによる一次免疫細胞亜集団との蛍光ナノ粒子の相互作用を検出

Engineered nanoparticles are endowed with very promising properties for therapeutic and diagnostic purposes. This work describes a fast and reliable ...

Rapid Identification of Gram Negative Bacteria from Blood Culture Broth Using MALDI-TOF Mass Spectrometry

MALDI-TOF質量分析法を使用した血液培養ブロスからのグラム陰性菌の迅速な同定

An important role of the clinical microbiology laboratory is to provide rapid identification of bacteria causing bloodstream infection. Traditional ...

Detecting Glycogen in Peripheral Blood Mononuclear Cells with Periodic Acid Schiff Staining

過ヨウ素酸シッフ染色で末梢血単核細胞中のグリコーゲンの検出

Periodic acid Schiff (PAS) staining is an immunohistochemical technique used on muscle biopsies and as a diagnostic tool for blood samples. ...

Generation of Human Alloantigen-specific T Cells from Peripheral Blood

末梢血からのヒトアロ抗原特異的T細胞の生成

The study of human T lymphocyte biology often involves examination of responses to activating ligands. T cells recognize and respond to processed peptide ...

A Semi-automated Approach to Preparing Antibody Cocktails for Immunophenotypic Analysis of Human Peripheral Blood

ヒト末梢血の免疫表現型分析のための抗体のカクテルを準備する半自動のアプローチ

Immunophenotyping of peripheral blood by flow cytometry determines changes in the frequency and activation status of peripheral leukocytes during disease ...

Isolation and Flow Cytometric Analysis of Glioma-infiltrating Peripheral Blood Mononuclear Cells

神経膠腫浸潤末梢血単核細胞の単離およびフローサイトメトリー分析

Our laboratory has recently demonstrated that natural killer (NK) cells are capable of eradicating orthotopically implanted mouse GL26 and rat CNS-1 ...