Name: modeling brain metastasis by internal carotid artery injection of cancer cells
Uploaded: 2022-08-02T15:00:00
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Esta pesquisa foi financiada pelo Conselho Nacional Australiano de Saúde e Pesquisa Médica (NHMRC), número de concessão APP1162560. O ML foi financiado por uma bolsa de pesquisa de pós-graduação da UQ. Gostaríamos de agradecer a todos que ajudaram com a criação de animais e imagens in vivo dos animais. Agradecemos ao Royal Brisbane and Women's Hospital por doar alíquotas de zircônio para este estudo.

Todos os estudos foram conduzidos dentro das diretrizes do Comitê de Ética Animal da Universidade de Queensland (UQCCR/186/19) e do Código Australiano para o Cuidado e Uso de Animais para Fins Científicos.
1. Preparação de células cancerosas para injeção
NOTA: Neste estudo, a linhagem celular de câncer de mama humano, BT-474 (BT474), foi usada. O BT474 foi cultivado em meio de crescimento completo composto por meio RPMI 1640 suplementado com...

A metástase cerebral é um processo complexo de células cancerosas que se espalham de seu local primário para o cérebro. Diferentes modelos animais estão disponíveis que espelham certos estágios desse processo de várias etapas e há considerações fisiológicas e práticas para o desenho de estudos pré-clínicos de metástases41,42. A maioria dos estudos publicados que investigam o uso da nanomedicina para o tratamento de metástases cerebrais utilizou ...

A metástase cerebral é uma neoplasia maligna prevalente associada a um prognóstico muito ruim 1,2. O padrão de atendimento para pacientes com metástases cerebrais é multimodal, consistindo em neurocirurgia, radioterapia de todo o cérebro e/ou radiocirurgia estereotáxica, dependendo do estado geral de saúde dos pacientes, da carga de doença extracraniana e do número e localização de tumores no cérebro 3,4. Pacientes com até três lesões intracranianas são elegíveis para ressecção cirúrgica ou radiocirurgia estereotáxica, enquanto a radioterapia de todo o cérebro é recomendada para pacientes com lesões múltiplas para evitar o risco de infecção e edema relacionados à cirurgia5. No entanto, a radioterapia de todo o cérebro pode infligir danos às estruturas cerebrais radiossensíveis, contribuindo para a má qualidade de vida6.
A terapia sistêmica é uma alternativa não invasiva e uma abordagem lógica para o tratamento de pacientes com lesões múltiplas7. No entanto, é menos considerado devido à noção de longa data de que as terapias sistêmicas têm baixa eficácia, pois a entrega passiva de drogas citotóxicas através da corrente sanguínea não pode atingir níveis terapêuticos no cérebro sem o risco de toxicidade insegura8. Esse paradigma está começando a mudar com a terapia sistêmica recentemente aprovada pela Food and Drug Administration (FDA) dos EUA (tucatinibe com trastuzumabe e capecitabina, indicada para metástase cerebral metastática com câncer de mama HER2+)9,10,11,12 e a atualização nas diretrizes de tratamento para incluir a consideração de opções de terapia sistêmica para pacientes com metástase cerebral 13,14.
Nesse contexto, os desenvolvimentos no campo da terapia molecular direcionada, imunoterapia e sistemas alternativos de liberação de medicamentos, como um portador de nanofármacos direcionado, podem potencialmente superar os desafios do tratamento de metástases cerebrais15,16,17,18. Além disso, abordagens químicas e mecânicas para melhorar a administração de fármacos via permeabilização da barreira crânio-tumoral também estão sendo investigadas19,20. Para estudar e otimizar tais abordagens para serem adequadas ao propósito, é crucial usar modelos pré-clínicos que não apenas espelhem a complexa fisiologia da metástase cerebral, mas também permitam a análise objetiva da resposta intracraniana a medicamentos.
Em termos gerais, as abordagens atuais para modelar metástases cerebrais in vivo envolvem injeção intracardíaca (ventrículo esquerdo), intravenosa (geralmente veia da cauda), intracraniana ou intracarótida (artéria carótida comum) de células cancerígenas em camundongos 21,22,23,24,25,26,27 . Além das estratégias de enxerto tumoral, modelos de camundongos geneticamente modificados em que a formação de tumores é desencadeada pela remoção de genes supressores de tumor ou ativação de oncogenes são úteis para a modelagem tumoral. No entanto, apenas alguns modelos de camundongos geneticamente modificados são relatados para produzir tumores secundários e ainda menos que produzem de forma confiável metástases cerebrais28,29,30.
Métodos de enxerto como injeção intracardíaca (ventrículo esquerdo) e intravenosa (geralmente veia da cauda) imitam a disseminação sistêmica do câncer. Esses modelos normalmente produzem lesões em múltiplos órgãos (por exemplo, cérebro, pulmões, fígado, rins, baço), dependendo do leito capilar que retém a maioria das células tumorais durante sua "primeira passagem" circulatória31. No entanto, taxas inconsistentes de enxerto cerebral exigirão mais animais para atingir o tamanho da amostra para o poder estatístico desejado. O número de células tumorais que eventualmente se estabelecem no cérebro através desses métodos de injeção intracardíaca e intravenosa é variável. Assim, a carga tumoral de metástase cerebral pode variar entre os animais e a diferença na progressão pode tornar a padronização da linha do tempo experimental e a interpretação dos resultados um desafio. A carga tumoral extracraniana pode levar à mortalidade por metástases não cerebrais, tornando esses modelos inadequados para avaliar a eficácia intracraniana. Linhagens celulares cérebro-trópicas têm sido estabelecidas usando processos de seleção clonal artificial para reduzir o estabelecimento extracraniano, mas as taxas de tomada têm sido inconsistentes, e o processo de seleção clonal pode reduzir a heterogeneidade normalmente encontrada em tumores humanos32.
Métodos de enxerto específicos do cérebro, como a injeção intracraniana e intracarótida, permitem uma modelagem de metástases cerebrais mais consistente e eficiente. No método intracraniano33, as células cancerosas são tipicamente injetadas no córtex cerebral frontal, o que gera crescimento tumoral rápido e reprodutível com baixo envolvimento sistêmico. Embora o procedimento seja bem tolerado com baixa mortalidade33, as ressalvas são de que é uma abordagem relativamente grosseira que introduz rapidamente um bolo (localizado) de células no cérebro e não modela a patogênese precoce da metástase cerebral. A agulha danifica a vasculatura do tecido cerebral, o que causa inflamação localizada 5,34. Por experiência, há uma tendência de células tumorais injetadas para refluxo durante a remoção da agulha, levando ao envolvimento leptomeníngeo. Alternativamente, o método intracarotídeo entrega células na artéria carótida comum com microvasculatura cerebral como o primeiro leito capilar a ser encontrado, modelando a sobrevivência na circulação, extravasamento e colonização24. Concordando com outros25, nossa experiência com esse método constatou que ele pode resultar em tumores faciais devido à entrega não intencional de células cancerígenas através da artéria carótida externa para leitos capilares nesses tecidos (dados não publicados). É possível prevenir tumores faciais ligando primeiro a artéria carótida externa antes da injeção da artéria carótida comum (Figura 1). No resto do artigo, este método é referido como a "injeção interna da artéria carótida". A partir da experiência, o método de injeção da artéria carótida interna gera consistentemente metástases cerebrais com muito poucos eventos sistêmicos e tem sido bem-sucedido na geração de modelos de metástases cerebrais de diferentes cânceres primários (por exemplo, melanoma, mama e câncer de pulmão) (Figura 1). As desvantagens são que é tecnicamente desafiador, demorado, invasivo e requer otimização cuidadosa do número de células e um cronograma de monitoramento. Em resumo, os métodos de injeção intracraniana e interna da artéria carótida produzem modelos de camundongos adequados para avaliar o impacto terapêutico no benefício de sobrevida relacionado ao tumor cerebral.
Este protocolo descreve o método de injeção da artéria carótida interna para produzir um modelo de metástase cerebral em camundongo com quase nenhum envolvimento sistêmico e, portanto, adequado para avaliação pré-clínica da distribuição de medicamentos e eficácia da terapêutica experimental.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64216/64216fig01.jpg"> Figura 1: Representação esquemática do protocolo de injeção da artéria carótida interna para metástase cerebral. A injeção interna da artéria carótida com ligadura externa da artéria carótida pode produzir de forma confiável um modelo de metástase cerebral de vários cânceres primários. Neste protocolo, três ligaduras são colocadas na artéria carótida (anotadas como L1-L3 na figura). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64216/64216fig01large.jpg" target="_blank">Por favor, clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>100&#181;m cell strainer</td>
			<td>Corning</td>
			<td>CLS431752</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30G Microlance needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>23748</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>31G Ultra-Fine II insulin syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>326103</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Angled forceps</td>
			<td>Proscitech</td>
			<td>T67A-SS</td>
			<td>Fine pointed, angled without serrations, 18mm tip, length 128 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Animal heat mat</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibiotic and antimycotic</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>15240062</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autoclave bags</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BT-474 (HTB-20) breast cancer cell line</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>HTB-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine (TEMGESIC)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Countess cell counter</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>C10227</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Diet-76A</td>
			<td>ClearH2O</td>
			<td>72-07-5022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissection microscope</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ear puncher</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electric clippers</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine angled forceps</td>
			<td>Proscitech</td>
			<td>DEF11063-07</td>
			<td>Angled 45&#176;, Tip smooth, Tip width: 0.4 mm, Tip dimension: 0.4 x 0.3 mm, length 9cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine tubing for cannula, Tubing OD (in) 1/32, Tubing ID (in) 1/100in</td>
			<td>Cole Parmer</td>
			<td>EW-06419-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Foetal bovine serum</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>26140079</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hank&#39;s Balanced Salt Solution without calcium and magnesium</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>14170120</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrogel</td>
			<td>ClearH2O</td>
			<td>70-01-5022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kimwipes Low lint disposable wipers</td>
			<td>Kimberly Clark- Kimwipes</td>
			<td>Z188964</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mashed mouse chow</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Meloxicam (METACAM)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nose cone</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Fashioned out of a microfuge tube</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PAA ocular lubricant (Carbomer 2mg/g)</td>
			<td>&#160;Bausch and lomb</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Povidone-iodine solution</td>
			<td>Betadine</td>
			<td>2505692</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PPE (glove, mask, gown, hairnet)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Retractors</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td>SURGI-5001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI 1640 Media</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>11875093</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silk suture 13mm 5-0, P3, 45cm</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>JJ-640G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile normal saline</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>TM4469</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sticky tape</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical board</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>A chopping board wrapped with autoclavable bag.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical scissors</td>
			<td>Proscitech</td>
			<td>T104</td>
			<td>Tip Dimensions (LxD): 38x7mm, Length 115mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture forcep/ Curved Brophy forceps</td>
			<td>Proscitech</td>
			<td>T113C</td>
			<td>Curved, Rounded narrow 2 mm tip, with serrations, length 165 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture needle holder (Olsen Hegar needle holder)</td>
			<td>Proscitech</td>
			<td>TC1322-180</td>
			<td>length 190 mm, ratchet clamp</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe driver with foot pedal/ UMP3 Ultra micro pump</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>UMP3-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T75 tissue culture flask</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>156499</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thread</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trigene II surface disinfectant</td>
			<td>Ceva</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan Blue and Cell Counting Chamber Slides</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>C10228</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TrypLE Express dissociating medium</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>12605010</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

modeling brain metastasis by internal carotid artery injection of cancer cells

A metástase cerebral é uma causa de morbidade e mortalidade graves em pacientes com câncer. Aspectos críticos de doenças metastáticas, como o complexo microambiente neural e a interação de células estromais, não podem ser inteiramente replicados com ensaios in vitro ; assim, os modelos animais são fundamentais para investigar e compreender os efeitos da intervenção terapêutica. No entanto, a maioria dos métodos de xenoenxertia de tumores cerebrais não produz metástases cerebrais consistentemente em termos de período de tempo e carga tumoral. Modelos de metástases cerebrais gerados pela injeção intracardíaca de células cancerígenas podem resultar em carga tumoral extracraniana não intencional e levar à morbidade e mortalidade metastática não cerebral. Embora a injeção intracraniana de células cancerígenas possa limitar a formação de tumores extracranianos, ela tem várias ressalvas, como as células injetadas frequentemente formam uma massa tumoral singular no local da injeção, alto envolvimento leptomeníngeo e danos à vasculatura cerebral durante a penetração da agulha. Este protocolo descreve um modelo de rato de metástase cerebral gerada pela injeção da artéria carótida interna. Este método produz tumores intracranianos de forma consistente sem o envolvimento de outros órgãos, possibilitando a avaliação de agentes terapêuticos para metástases cerebrais.

Comparando a injeção da artéria carótida comum com ou sem ligadura externa da artéria carótida Quando as células cancerosas foram injetadas através da artéria carótida comum sem primeiro ligar a artéria carótida externa24, tumores faciais foram encontrados em 77,8% dos camundongos enxertados (n = 7/9 animais). Um exemplo de tumor facial é ilustrado na Figura Suplementar 3. O método descrito neste protocolo previne metástases fac...

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Modeling Brain Metastasis by Internal Carotid Artery Injection of Cancer Cells

A metástase cerebral é uma causa de morbidade e mortalidade graves em pacientes com câncer. A maioria dos modelos de camundongos com metástases cerebrais é complicada por metástases sistêmicas que confundem a análise da mortalidade e os resultados da intervenção terapêutica. Apresenta-se aqui um protocolo para injeção carotídea interna de células cancerígenas que produz tumores intracranianos consistentes com tumores sistêmicos mínimos.

Modelagem de Metástases Cerebrais por Injeção de Células Cancerígenas na Artéria Carótida Interna

Brain metastasis is a cause of severe morbidity and mortality in cancer patients. Critical aspects of metastatic diseases, such as the complex neural ...

Então, por que esse protocolo é significativo? Bem, as metástases cerebrais são muito difíceis de tratar e este protocolo produz um modelo de rato clinicamente relevante com tumores extracranianos mínimos. Esta técnica permite a análise objetiva da distribuição e resposta de medicamentos de tumores intracranianos.A principal vantagem desta técnica é que o modelo é altamente reprodutível e as metástases cerebrais se desenvolvem em um tempo relativamente curto após a injeção. A progressão da doença é semelhante entre os animais, tornando mais fácil para os pesquisadores padronizarem os experimentos, os cronogramas de tratamento e os desfechos. Meu conselho para iniciantes é praticar o uso da pinça e seringa enquanto olha através do microscópio de dissecção, familiarizando-se com os marcos anatômicos ao redor do pescoço e praticando o protocolo na presença de um veterinário.Comece por semear as células cancerosas BT-474 a uma densidade de semeadura de duas vezes 10 para as seis células em um frasco T-75 usando 10 mililitros de meios de crescimento completos e cultura até que as células atinjam uma confluência de 70 a 80% antes da injeção. No dia da injeção, descarte o meio de crescimento e lave a monocamada celular com PBS duas vezes e adicione cinco mililitros de reagente de dissociação de cultura celular pré-aquecido. Incubar a 37 graus Celsius por cinco minutos ou até que as células tenham se desprendido.Após cinco minutos, retire o balão da incubadora e bata-o suavemente para ajudar no descolamento celular. Adicione cinco mililitros de meio de crescimento completo contendo 10% de FBS para extinguir a atividade do reagente de dissociação. Ressuspeite suavemente as células da solução pipetando para reduzir os aglomerados celulares.Transfira a suspensão da célula para um tubo de 50 mililitros e centrifugar a 180 G por três minutos à temperatura ambiente. Decantar o sobrenadante e ressuspender o pellet celular em 10 mililitros de HBSSS sem cálcio e magnésio para minimizar a aglomeração celular. Centrifugar a suspensão celular a 180 G durante três minutos à temperatura ambiente Decantar o sobrenadante para remover o soro residual ou o reagente de dissociação e ressuspender o pellet celular em três mililitros de HBSS.Coloque um filtro celular de 100 micrômetros em um tubo cônico fresco de 50 mililitros e passe a suspensão celular para remover os aglomerados celulares. Calcular o número de células viáveis utilizando azul de tripano e diluir a suspensão celular com HBSS para uma concentração celular de 2,5 vezes 10 para as seis células por mililitro. Mantenha o tubo horizontal no gelo e agite suavemente o tubo periodicamente para minimizar a aglomeração.A suspensão celular pode ser armazenada no gelo por um período máximo de seis horas. Rato de punção auricular para identificação e use cortadores elétricos para raspar a pele da região do pescoço. Limpe o excesso de cabelo da pele exposta usando fita adesiva.Aplique lubrificante ocular nos olhos para evitar a secagem. Prenda o mouse suavemente prendendo os dentes incisivos superiores usando fio preso à placa cirúrgica, seguido de prender as patas dianteira e traseira. Este passo estende o corpo e mantém o pescoço reto durante o procedimento.Para a preparação pré-operatória da pele, limpe o pescoço com um antisséptico tópico, como iodopovidona para reduzir a carga da microflora da pele e remover os pelos soltos. Limpe do centro da pele, trabalhando para fora para evitar a recontaminação do local da incisão. Repita o processo usando etanol a 70% e realize três rodadas alternadas de iodo e etanol para desinfecção.Verifique se há reflexo através do teste de pinça para garantir a morte da anestesia antes de continuar o procedimento. Coloque uma cortina cirúrgica estéril sobre o animal. Sob o microscópio de dissecção, faça uma incisão vertical de 15 milímetros ao longo da linha média na região do pescoço do rato usando uma tesoura, começando de cinco milímetros abaixo da mandíbula até a entrada torácica.Usando dois pares de pinça angulada, parta a pele e as glândulas salivares subjacentes e aplique afastadores para manter a traqueia exposta. Usando dois pares de pinça de ângulo fino, disseque sem rodeios o músculo e o tecido adiposo adjacente à traqueia para expor a bainha da carótida direita. A bainha carotídea é a camada fibrosa que cobre a artéria carótida comum, veia e nervo vago, e esse feixe pode ser visualizado pela artéria carótida comum vermelha brilhante.Limpe um segmento da artéria carótida comum caudal para a bifurcação carotídea da fáscia circundante e separe-o do nervo vago e das veias. Isole e limpe a bifurcação carotídea dos nervos e fáscia circundantes. Posicione pinças finas sob a artéria carótida externa e passe uma sutura de seda 5-0 sob a artéria.Amarre e aperte a sutura e corte o excesso de linha. Posicione pinças finas sob a artéria carótida comum e passe uma sutura de seda 5-0 sob a artéria. Amarre um nó e aperte a sutura numa posição proximal ao local de injeção proposto.Corte o excesso de sutura, deixando cerca de 10 milímetros da linha. Corte e umedeça uma tira de limpadores descartáveis de fiapos baixos cerca de 10 por 5 milímetros. Dobre a tira e coloque-a sob a artéria carótida no local proposto para a injeção.Isto irá apoiar o vaso durante a injeção. Na artéria carótida comum rostral ao local de injeção proposto, coloque uma terceira ligadura com um nó solto. Isto é apertado somente após a injeção.Agite suavemente a suspensão celular e desenhe 200 microlitros de suspensão celular em uma seringa de insulina com uma agulha de calibre 31. Carregue a seringa no controlador da seringa ligado a um pedal de pé ativador. Fixe uma cânula fina com uma agulha de calibre 31 à seringa e prima a linha.Verifique se a artéria carótida está bem posicionada e pressurizada. Usando duas pinças de ângulo fino, uma tensionando suavemente na extremidade da primeira ligadura e a outra segurando a agulha de calibre 31, insira lentamente a agulha com o bisel no lúmen do vaso sanguíneo, tomando cuidado para não perfurá-la. Injete lentamente 100 microlitros de suspensão celular preparados anteriormente na artéria carótida comum a 10 microlitros por segundo.Isso entregará 2,5 vezes 10 para as quintas células no vaso sanguíneo. A injeção bem-sucedida pode ser visualizada através da limpeza do sangue do vaso sanguíneo carotídeo. Levante e aperte suavemente a ligadura solta imediatamente após retirar a agulha para evitar o refluxo e o sangramento.Apare o excesso de suturas e remova o pedaço de limpadores descartáveis umedecidos de fiapos baixos. Usando uma pipeta P-200, lave a cavidade cirúrgica duas vezes com 150 a 200 microlitros de água estéril ou solução salina. Depois de verificar se há sangramentos, reposicione os tecidos moles, as glândulas salivares e a pele sobre a artéria carótida e a traqueia.Feche a camada de pele da incisão usando um suporte de agulha de sutura, pinça e uma sutura de monofilamento 6-0 absorvível ou não absorvível em um padrão contínuo. Injete 50 microgramas por quilograma de buprenorfina e um miligrama por quilograma de meloxicam através de injeção subcutânea como alívio da dor pós-cirúrgica. Mova o animal para uma gaiola quente e limpa para se recuperar da anestesia.A lectina foi injetada na artéria carótida comum dos camundongos com ou sem ligadura externa da artéria carótida. Uma redução na lectina foi observada nos tecidos da bochecha quando a artéria carótida externa foi ligada. Os resultados mostraram que a ligadura não afetou a entrega do cérebro.A progressão do tumor foi monitorada usando a linhagem celular de câncer de mama amplificada por HER2 e expressadora de luciferase. O modelo de metástase cerebral BT474 mostrou um aumento nos sinais bioluminescentes a partir da quinta semana pós-injeção interna de carótida e cresceu progressivamente a partir daí. Das semanas cinco a oito, a intensidade heterogênea do sinal indicou tumor intracraniano com perfusão complexa de líquidos.A concentração de gadolínio dentro da região do tumor aumentou à medida que vazava da circulação sanguínea para o tecido tumoral. O acúmulo de nanomedicina e metástases cerebrais foi confirmado nos camundongos BT-474 por níveis mais altos de nanomedicina detectados na região do tumor em comparação com as regiões cerebrais não envolvidas. À medida que o modelo de metástase cerebral BT-474 progredia, os animais começaram a perder até 20% do peso corporal, tornando o tempo médio de sobrevivência nove semanas após a injeção.Os resultados histológicos mostraram que os tumores estavam localizados unilateralmente, coincidindo com o local da injeção carotídea, onde os tumores apareciam principalmente como massas sólidas e solitárias. Bolsões de espaços vazios foram frequentemente observados e consistiram de células necróticas, enquanto excrescências menores também estavam presentes em alguns animais. A coisa mais importante a lembrar ao tentar o protocolo é preparar e posicionar a artéria carótida corretamente antes de inserir a agulha e, em seguida, aplicar a tensão adequada durante a inserção da agulha.Este modelo é útil para pesquisadores que exploram a entrega de drogas ao cérebro e a eficácia da nova terapêutica para o tratamento de metástases cerebrais.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Intra-iliac Artery Injection for Efficient and Selective Modeling of Microscopic Bone Metastasis

Injeção Artéria Intra-ilíaca para eficiente e seletiva Modelagem de microscópico metástase óssea

Intra-iliac artery (IIA) injection is an efficient approach to introduce metastatic lesions of various cancer cells in animals. Compared to the widely ...

Pesquisa do câncer

A Portal Vein Injection Model to Study Liver Metastasis of Breast Cancer

Um modelo de injeção da veia porta para o Estudo do Fígado metástase do câncer de mama

Breast cancer is the leading cause of cancer-related mortality in women worldwide. Liver metastasis is involved in upwards of 30% of cases with breast ...

Intracarotid Cancer Cell Injection to Produce Mouse Models of Brain Metastasis

Intracarotídeo injeção de células de cancer para produzir mouse modelos de metástases cerebrais

Metastasis, the spread and growth of malignant cells at secondary sites within a patient&#39;s body, accounts for &#62; 90% of cancer-related mortality. ...

Modeling Breast Cancer via an Intraductal Injection of Cre-expressing Adenovirus into the Mouse Mammary Gland

Modelagem de câncer de mama através de uma injeção intraductal de CRE-expressando Adenovirus na glândula mamária do mouse

Breast cancer is a heterogeneous disease, possibly due to complex interactions between different cells of origins and oncogenic events. Mouse models are ...

Micromanipulation of Circulating Tumor Cells for Downstream Molecular Analysis and Metastatic Potential Assessment

Micromanipulação de células tumorais circulantes para análise molecular a jusante e avaliação do potencial metastático

Blood-borne metastasis accounts for&#160;most cancer-related deaths and involves circulating tumor cells (CTCs) that are successful in establishing new ...

Pathological Analysis of Lung Metastasis Following Lateral Tail-Vein Injection of Tumor Cells

Análise patológica da metástase pulmonar após injeção lateral de cauda-veia de células tumorais

Metastasis, the primary cause of morbidity and mortality for most cancer patients, can be challenging to model preclinically in mice. Few spontaneous ...

Modeling Brain Metastases Through Intracranial Injection and Magnetic Resonance Imaging

Modelando metástases cerebrais através de injeção intracraniana e ressonância magnética

Metastatic spread of cancer is an unfortunate consequence of disease progression, aggressive cancer subtypes, and/or late diagnosis. Brain metastases are ...

Modeling Primary Bone Tumors and Bone Metastasis with Solid Tumor Graft Implantation into Bone

Modelagem de Tumores Ósseos Primários e Metástases Ósseas com Implante de Enxerto Sólido de Tumor em Osso

Primary bone tumors or bone metastasis from solid tumors result in painful osteolytic, osteoblastic, or mixed osteolytic/osteoblastic lesions. These ...

Modeling Brain Metastasis Via Tail-Vein Injection of Inflammatory Breast Cancer Cells

Modelando Metástase Cerebral Via Injeção Venosa Caudal de Células Inflamatórias de Câncer de Mama

Metastatic spread to the brain is a common and devastating manifestation of many types of cancer. In the United States alone, about 200,000 patients are ...

Portal Vein Injection of Colorectal Cancer Organoids to Study the Liver Metastasis Stroma

Portal Injeção de Veia de Organoides de Câncer Colorretal para Estudar o Estroma metástase hepática

Hepatic metastasis of colorectal cancer (CRC) is a leading cause of cancer-related death. Cancer-associated fibroblasts (CAFs), a major component of the ...