Name: modeling brain metastasis by internal carotid artery injection of cancer cells
Uploaded: 2022-08-02T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Modeling Brain Metastasis by Internal Carotid Artery Injection of Cancer Cells at JoVE.com

Это исследование финансировалось Австралийским национальным советом по здравоохранению и медицинским исследованиям (NHMRC), номер гранта APP1162560. ML финансировался исследовательской стипендией UQ для аспирантов. Мы хотели бы поблагодарить всех, кто помогал с животноводством и визуализацией животных in vivo . Мы благодарим Королевскую брисбенскую и женскую больницу за пожертвование аликвот циркония для этого исследования.

Все исследования проводились в соответствии с руководящими принципами Комитета по этике животных Университета Квинсленда (UQCCR/186/19) и Австралийским кодексом по уходу за животными и их использованию в научных целях.
1. Подготовка раковых клеток к инъекциям
<p class="...

Метастазирование в мозг представляет собой сложный процесс распространения раковых клеток от их первичного участка к мозгу. Доступны различные модели на животных, которые отражают определенные этапы этого многоступенчатого процесса, и существуют физиологические и практические сооб...

Метастазирование в мозг является распространенным злокачественным новообразованием, связанным с очень плохим прогнозом 1,2. Стандартом лечения пациентов с метастазами в мозг является мультимодальный подход, состоящий из нейрохирургии, лучевой терапии всего мозга и / или стереотаксической радиохирургии в зависимости от общего состояния здоровья пациентов, бремени экстракраниальных заболеваний, а также количества и расположения опухолей в головном мозге 3,4. Пациенты с тремя внутричерепными поражениями имеют право на хирургическую резекцию или стереотаксическую радиохирургию, в то время как лучевая терапия всего мозга рекомендуется для пациентов с множественными поражениями, чтобы избежать риска инфекции, связанной с хирургическим вмешательством, и отека5. Однако лучевая терапия всего мозга может нанести ущерб радиочувствительным структурам мозга, способствуя низкому качеству жизни6.
Системная терапия является неинвазивным альтернативным и логическим подходом к лечению пациентов с множественными поражениями7. Тем не менее, это менее рассматривается из-за давнего представления о том, что системная терапия имеет низкую эффективность, потому что пассивная доставка цитотоксических препаратов через кровоток не может достичь терапевтических уровней в мозге без риска небезопасной токсичности8. Эта парадигма начинает меняться с недавно одобренной Управлением по контролю за продуктами и лекарствами США (FDA) системной терапией (тукатиниб с трастузумабом и капецитабином, показанным для метастатического метастазирования рака молочной железы HER2 + в мозг)9,10,11,12 и обновлением руководящих принципов лечения, чтобы включить рассмотрение вариантов системной терапии для пациентов с метастазами в мозг13,14.
В этом контексте разработки в области молекулярной таргетной терапии, иммунотерапии и альтернативных систем доставки лекарств, таких как целевой нанопрепарат, могут потенциально преодолеть проблемы лечения метастазов в мозг 15,16,17,18. Кроме того, химические и механические подходы к улучшению доставки лекарств путем пермеабилизации барьера опухоли головного мозга также исследуются19,20. Чтобы изучить и оптимизировать такие подходы, чтобы они соответствовали цели, крайне важно использовать доклинические модели, которые не только отражают сложную физиологию метастазирования в мозг, но и позволяют объективно анализировать внутричерепную реакцию на лекарства.
В целом, современные подходы к моделированию метастазирования в мозг in vivo включают внутрисердечную (левый желудочек), внутривенную (обычно хвостовую вену), внутричерепную или внутрикаротидную (общая сонная артерия) инъекцию раковых клеток у мышей 21,22,23,24,25,26,27 . Помимо стратегий приживления опухоли, генетически модифицированные мышиные модели, где образование опухоли запускается удалением генов-супрессоров опухолей или активацией онкогенов, полезны для моделирования опухолей. Тем не менее, только несколько генетически модифицированных моделей мышей, как сообщается, производят вторичные опухоли и еще меньше, которые надежно производят метастазы в мозг 28,29,30.
Методы приживления, такие как внутрисердечная (левый желудочек) и внутривенная (обычно хвостовая вена) инъекции, имитируют системную диссеминацию рака. Эти модели обычно вызывают поражения в нескольких органах (например, мозге, легких, печени, почках, селезенке) в зависимости от капиллярного русла, которое захватывает большинство опухолевых клеток во время их циркуляторного «первого прохода»31. Однако непоследовательные темпы приживления мозга потребуют большего количества животных для достижения размера выборки для желаемой статистической мощности. Количество опухолевых клеток, которые в конечном итоге устанавливаются в мозге с помощью этих внутрисердечных и внутривенных методов инъекций, варьируется. Следовательно, метастазна в мозг опухолевая нагрузка может варьироваться между животными, и разница в прогрессировании может сделать стандартизацию экспериментальной временной шкалы и интерпретацию результатов проблемой. Экстракраниальная опухолевая нагрузка может привести к смертности от метастазов вне мозга, что делает эти модели непригодными для оценки внутричерепной эффективности. Линии клеток мозг-тропики были установлены с использованием искусственных процессов клонального отбора для уменьшения экстракраниального учреждения, но показатели приема были непоследовательными, и процесс клонального отбора может уменьшить гетерогенность, обычно встречающуюся в опухолях человека32.
Специфические для мозга методы приживления, такие как внутричерепная и внутрикаротидная инъекция, позволяют более последовательно и эффективно моделировать метастазы в мозг. В внутричерепном методе33 раковые клетки обычно вводят в лобную кору головного мозга, которая генерирует быстрый и воспроизводимый рост опухоли с низким системным участием. Хотя процедура хорошо переносится с низкой смертностью33, предостережения заключаются в том, что это относительно грубый подход, который быстро вводит (локализованный) болюс клеток в мозг и не моделирует патогенез ранних метастазов в мозг. Игла повреждает сосудистую ткань мозга, что затем вызывает локализованное воспаление 5,34. По опыту, существует тенденция к инъекции опухолевых клеток к рефлюксу во время удаления иглы, что приводит к лептоменингеальному вовлечению. Альтернативно, внутрикаротидный метод доставляет клетки в общую сонную артерию с микроциркуляторным руслом мозга в качестве первого капиллярного русла, с которым можно столкнуться, моделируя выживание в циркуляции, экстравазацию и колонизацию24. В соответствии с другими25, наш опыт работы с этим методом показал, что он может привести к опухолям лица из-за непреднамеренной доставки раковых клеток через наружную сонную артерию в капиллярные ложа в этих тканях (неопубликованные данные). Предотвратить опухоли лица можно, предварительно перевязав наружную сонную артерию перед инъекцией общей сонной артерии (рисунок 1). В остальной части статьи этот метод упоминается как «инъекция внутренней сонной артерии». Исходя из опыта, метод инъекции внутренней сонной артерии последовательно генерирует метастазы в мозг с очень небольшим количеством системных событий и был успешным в создании моделей метастазирования в мозг различных первичных видов рака (например, меланомы, рака молочной железы и легких) (рисунок 1). Недостатки заключаются в том, что это технически сложно, трудоемко, инвазивно и требует тщательной оптимизации количества клеток и графика мониторинга. Таким образом, как внутричерепные, так и внутренние методы инъекций сонной артерии создают мышиные модели, подходящие для оценки терапевтического воздействия на выживаемость, связанную с опухолью головного мозга.
Этот протокол описывает метод инъекции внутренней сонной артерии для получения мышиной модели метастазирования в мозг почти без системного участия и, следовательно, подходит для доклинической оценки распределения лекарств и эффективности экспериментальных терапевтических средств.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64216/64216fig01.jpg"> Рисунок 1: Схематическое изображение протокола инъекции внутренней сонной артерии для метастазирования в мозг. Инъекция внутренней сонной артерии с перевязкой наружной сонной артерии может надежно производить модель метастазирования в мозг от различных первичных видов рака. В этом протоколе три лигатуры помещаются на сонную артерию (на рисунке аннотируется как L1-L3). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64216/64216fig01large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.</a>

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>100&#181;m cell strainer</td>
			<td>Corning</td>
			<td>CLS431752</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30G Microlance needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>23748</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>31G Ultra-Fine II insulin syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>326103</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Angled forceps</td>
			<td>Proscitech</td>
			<td>T67A-SS</td>
			<td>Fine pointed, angled without serrations, 18mm tip, length 128 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Animal heat mat</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibiotic and antimycotic</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>15240062</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autoclave bags</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BT-474 (HTB-20) breast cancer cell line</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>HTB-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine (TEMGESIC)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Countess cell counter</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>C10227</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Diet-76A</td>
			<td>ClearH2O</td>
			<td>72-07-5022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissection microscope</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ear puncher</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electric clippers</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine angled forceps</td>
			<td>Proscitech</td>
			<td>DEF11063-07</td>
			<td>Angled 45&#176;, Tip smooth, Tip width: 0.4 mm, Tip dimension: 0.4 x 0.3 mm, length 9cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine tubing for cannula, Tubing OD (in) 1/32, Tubing ID (in) 1/100in</td>
			<td>Cole Parmer</td>
			<td>EW-06419-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Foetal bovine serum</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>26140079</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hank&#39;s Balanced Salt Solution without calcium and magnesium</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>14170120</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrogel</td>
			<td>ClearH2O</td>
			<td>70-01-5022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kimwipes Low lint disposable wipers</td>
			<td>Kimberly Clark- Kimwipes</td>
			<td>Z188964</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mashed mouse chow</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Meloxicam (METACAM)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nose cone</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Fashioned out of a microfuge tube</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PAA ocular lubricant (Carbomer 2mg/g)</td>
			<td>&#160;Bausch and lomb</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Povidone-iodine solution</td>
			<td>Betadine</td>
			<td>2505692</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PPE (glove, mask, gown, hairnet)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Retractors</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td>SURGI-5001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI 1640 Media</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>11875093</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silk suture 13mm 5-0, P3, 45cm</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>JJ-640G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile normal saline</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>TM4469</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sticky tape</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical board</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>A chopping board wrapped with autoclavable bag.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical scissors</td>
			<td>Proscitech</td>
			<td>T104</td>
			<td>Tip Dimensions (LxD): 38x7mm, Length 115mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture forcep/ Curved Brophy forceps</td>
			<td>Proscitech</td>
			<td>T113C</td>
			<td>Curved, Rounded narrow 2 mm tip, with serrations, length 165 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture needle holder (Olsen Hegar needle holder)</td>
			<td>Proscitech</td>
			<td>TC1322-180</td>
			<td>length 190 mm, ratchet clamp</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe driver with foot pedal/ UMP3 Ultra micro pump</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>UMP3-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T75 tissue culture flask</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>156499</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thread</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trigene II surface disinfectant</td>
			<td>Ceva</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan Blue and Cell Counting Chamber Slides</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>C10228</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TrypLE Express dissociating medium</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>12605010</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

modeling brain metastasis by internal carotid artery injection of cancer cells

Метастазы в мозг являются причиной тяжелой заболеваемости и смертности у онкологических больных. Критические аспекты метастатических заболеваний, такие как сложное нервное микроокружение и взаимодействие стромальных клеток, не могут быть полностью воспроизведены с помощью анализов in vitro ; таким образом, животные модели имеют решающее значение для исследования и понимания эффектов терапевтического вмешательства. Тем не менее, большинство методов ксенотрансплантации опухолей головного мозга не производят метастазы в мозг последовательно с точки зрения временных рамок и опухолевой нагрузки. Модели метастазирования в мозг, генерируемые внутрисердечной инъекцией раковых клеток, могут привести к непреднамеренной экстракраниальной опухолевой нагрузке и привести к метастатической заболеваемости и смертности вне мозга. Хотя внутричерепная инъекция раковых клеток может ограничить образование экстракраниальной опухоли, она имеет несколько предостережений, таких как введенные клетки часто образуют единичную опухолевую массу в месте инъекции, высокое поражение лептоменингеала и повреждение сосудистой системы мозга во время проникновения иглы. Этот протокол описывает мышиную модель метастазирования в мозг, генерируемого инъекцией внутренней сонной артерии. Этот метод последовательно продуцирует внутричерепные опухоли без участия других органов, что позволяет оценить терапевтические агенты для метастазирования в мозг.

Сравнение общей инъекции сонной артерии с перевязкой наружной сонной артерии или без нее Когда раковые клетки вводили через общую сонную артерию без предварительного перевязки наружной сонной артерии24, опухоли лица были обнаружены у 77,8% трансплантированн...

Watch this Scientific Journal Video about Modeling Brain Metastasis by Internal Carotid Artery Injection of Cancer Cells at JoVE.com

Modeling Brain Metastasis by Internal Carotid Artery Injection of Cancer Cells

Метастазы в мозг являются причиной тяжелой заболеваемости и смертности у онкологических больных. Большинство моделей метастазирования в мозг у мышей осложняются системными метастазами, смешивающими анализ смертности и результатов терапевтического вмешательства. Здесь представлен протокол внутренней каротидной инъекции раковых клеток, который продуцирует последовательные внутричерепные опухоли с минимальными системными опухолями.

Моделирование метастазирования в мозг путем инъекции раковых клеток во внутреннюю сонную артерию

Brain metastasis is a cause of severe morbidity and mortality in cancer patients. Critical aspects of metastatic diseases, such as the complex neural ...

Так почему же этот протокол важен? Ну, метастазы в мозг очень сложно лечить, и этот протокол создает клинически значимую модель мыши с минимальными экстракраниальными опухолями. Этот метод позволяет объективно анализировать распределение лекарств и реакцию на внутричерепные опухоли.Основным преимуществом этой методики является то, что модель обладает высокой воспроизводимостью и метастазы в мозг развиваются за относительно короткое время после инъекции. Прогрессирование заболевания аналогично среди животных, что облегчает исследователям стандартизацию экспериментов, сроков лечения и конечных точек. Мой совет для начинающих - практиковать использование щипца и шприца, глядя через рассеченный микроскоп, знакомясь с анатомическими ориентирами вокруг шеи и практикуя протокол в присутствии ветеринара.Начните с посева раковых клеток BT-474 с плотностью посева в два раза от 10 до шести клеток в колбу T-75 с использованием 10 миллилитров полной питательной среды и культуры до тех пор, пока клетки не достигнут слияния от 70 до 80% перед инъекцией. В день инъекции отбросьте питательные среды и дважды промывайте клеточный монослой PBS и добавляйте пять миллилитров предварительно подогретого реагента диссоциации клеточной культуры. Насиживайте при 37 градусах Цельсия в течение пяти минут или до тех пор, пока клетки не отделятся.Через пять минут извлеките колбу из инкубатора и осторожно постучите по ней, чтобы помочь отслоению клеток. Добавьте пять миллилитров полной питательной среды, содержащей 10% FBS, чтобы погасить активность реагента диссоциации. Осторожно повторно суспендируйте клетки в растворе путем пипетирования, чтобы уменьшить клеточные сгустки.Переложите клеточную суспензию в 50-миллилитровую трубку и центрифугу при 180 Г в течение трех минут при комнатной температуре. Декантируйте супернатант и повторно суспендируйте клеточную гранулу в 10 миллилитрах HBSSS без кальция и магния, чтобы свести к минимуму слипание клеток. Центрифугируют клеточную суспензию при 180 Г в течение трех минут при комнатной температуре Декантируют супернатант для удаления остаточной сыворотки или диссоциационного реагента и повторно суспендируют клеточную гранулу в трех миллилитрах HBSS.Поместите 100-микрометровый клеточный сетчатый фильтр на свежую 50-миллилитровую коническую трубку и пропустите клеточную суспензию, чтобы удалить сгустки клеток. Рассчитайте количество жизнеспособных клеток, используя трипан синий и разбавьте клеточную суспензию HBSS до концентрации клеток в 2,5 раза 10 до шести клеток на миллилитр. Держите трубку горизонтально на льду и осторожно периодически раскачивайте трубку, чтобы свести к минимуму слипание.Клеточная суспензия может храниться на льду не более шести часов. Мышь для идентификации и использования электрических кусачек для бритья меха из области шеи. Очистите лишние волосы от открытой кожи с помощью ленты.Нанесите глазную смазку на глаза, чтобы предотвратить пересыхание. Осторожно закрепите мышь, зацепив верхние резцовые зубы с помощью резьбы, приклеенной к хирургической доске, с последующим заклеиванием передних и задних ног. Этот шаг расширяет тело и держит шею прямой во время процедуры.Для предоперационной подготовки кожи протрите шею местным антисептиком, таким как повидон йод, чтобы уменьшить нагрузку на микрофлору кожи и удалить распущенные волосы. Очищайте от центра кожи, действуя наружу, чтобы предотвратить повторное загрязнение места разреза. Повторите процесс с использованием 70% этанола и выполните три чередующихся раунда йода и этанола для дезинфекции.Проверьте рефлекс с помощью теста на защемление, чтобы убедиться в смерти анестезии перед продолжением процедуры. Положите на животное стерильную хирургическую драпировку. Под рассеченным микроскопом сделайте вертикальный 15-миллиметровый разрез вдоль средней линии в области шеи мыши с помощью ножниц, начиная от пяти миллиметров ниже челюсти до грудного входа.Используя две пары угловых щипцов, разделите кожу и подлежащие слюнные железы и нанесите ретракторы, чтобы держать трахею открытой. Используя две пары тонкоугольных щипцов, тупо рассекают мышечную и жировую ткань, прилегающую к трахее, чтобы обнажить правую сонную оболочку. Сонная оболочка представляет собой фиброзный слой, покрывающий общую сонную артерию, вену и блуждающий нерв, и этот пучок можно визуализировать ярко-красной общей сонной артерией.Очистите сегмент общей сонной артерии каудально до каротидной бифуркации окружающей фасции и отделите ее от блуждающего нерва и вен. Изолируют и очищают бифуркацию сонной артерии от окружающих нервов и фасций. Расположите тонкие щипцы под наружной сонной артерией и проведите 5-0 шелковым швом под артерией.Завяжите узел и затяните шов и отрежьте лишнюю линию. Расположите тонкие щипцы под общей сонной артерией и проведите 5-0 шелковым швом под артерией. Завяжите узел и затяните шов в положении, близком к предполагаемому месту инъекции.Отрежьте лишний шов, оставив около 10 миллиметров линии. Вырежьте и смочите полоску низковорсовых одноразовых дворников размером около 10 на 5 миллиметров. Сложите полоску и поместите ее под сонную артерию в предполагаемом месте инъекции.Это будет поддерживать сосуд во время инъекции. На ростральную общую сонную артерию к предполагаемому месту инъекции поместить третью перевязку со рыхлым узлом. Это затягивается только после инъекции.Осторожно перемешайте клеточную суспензию и втяните 200 микролитров клеточной суспензии в инсулиновый шприц с помощью иглы 31-го калибра. Загрузите шприц в драйвер шприца, подключенный к активирующей ножной педали. Прикрепите тонкую канюлю с иглой 31 калибра к шприцу и загрунтуйте линию.Проверьте, хорошо ли расположена сонная артерия и находится под давлением. Используя два тонкоугольных щипца, один из которых мягко натягивается на конец первой лигатуры, а другой удерживает иглу 31-го калибра, медленно вставьте иглу со скосом вверх в просвет кровеносного сосуда, следя за тем, чтобы не проколоть его. Медленно вводят 100 микролитров клеточной суспензии, приготовленной ранее, в общую сонную артерию со скоростью 10 микролитров в секунду.Это доставит 2,5 раза по 10 к пятой клетке в кровеносный сосуд. Успешная инъекция может быть визуализирована путем очистки крови из сонного кровеносного сосуда. Осторожно поднимите и затяните свободную лигатуру сразу после извлечения иглы, чтобы предотвратить обратный поток и кровотечение.Обрежьте лишние швы и извлеките кусок увлажненных низковорсовых одноразовых дворников. Используя пипетку P-200, дважды промойте хирургическую полость 150-200 микролитрами стерильной воды или физиологического раствора. После проверки кровотечений переместите мягкие ткани, слюнные железы и кожу над сонной артерией и трахеей.Закройте кожный слой разреза с помощью шовного иглы-держателя, щипцов и рассасывающегося или нерассасывающегося монофиламентного шва 6-0 в непрерывном режиме. Инъекция 50 микрограмм на килограмм бупренорфина и один миллиграмм на килограмм мелоксикама через подкожную инъекцию в качестве послеоперационного обезболивания. Переместите животное в теплую и чистую клетку, чтобы восстановиться после анестезии.Лектин вводили в общую сонную артерию мышей с перевязкой наружной сонной артерии или без нее. Снижение лектина наблюдалось в тканях щек при перевязке наружной сонной артерии. Результаты показали, что лигирование не повлияло на доставку мозга.Прогрессирование опухоли контролировали с использованием люцифераз-экспрессирующей, HER2-амплифицированной клеточной линии рака молочной железы. Модель метастазирования BT474 в мозг показала увеличение биолюминесцентных сигналов с пятой недели после внутренней инъекции сонной артерии и постепенно росла после этого. С пятой по восемь недель гетерогенная интенсивность сигнала указывала на внутричерепную опухоль со сложной перфузией жидкости.Концентрация гадолиния в области опухоли увеличивалась по мере его утечки из кровообращения в опухолевую ткань. Накопление наномедицины и метастазов в мозг было подтверждено у мышей BT-474 более высокими уровнями наномедицины, обнаруженными в области опухоли по сравнению с невовлеченными областями мозга. По мере прогрессирования модели метастазирования в мозг BT-474 животные начали терять до 20% массы тела, что делало среднее время выживания девять недель после инъекции.Результаты гистологии показали, что опухоли были расположены в одностороннем порядке, что соответствует месту инъекции сонной артерии, где опухоли в основном выглядели как твердые, одиночные массы. Карманы пустых пространств часто наблюдались и состояли из некротических клеток, в то время как более мелкие выросты также присутствовали у некоторых животных. Самое главное, что нужно помнить при попытке протокола, это правильно подготовить и расположить сонную артерию перед введением иглы, а затем применить надлежащее натяжение во время введения иглы.Эта модель полезна для исследователей, изучающих доставку лекарств в мозг и эффективность новых терапевтических средств для лечения метастазов в мозг.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Intra-iliac Artery Injection for Efficient and Selective Modeling of Microscopic Bone Metastasis

Intra-подвздошной артерией Инъекции для эффективного и селективного моделирования Микроскопическое костными метастазами

Intra-iliac artery (IIA) injection is an efficient approach to introduce metastatic lesions of various cancer cells in animals. Compared to the widely ...

A Portal Vein Injection Model to Study Liver Metastasis of Breast Cancer

Воротной вены для инъекций модель для изучения печени метастазирования рака молочной железы

Breast cancer is the leading cause of cancer-related mortality in women worldwide. Liver metastasis is involved in upwards of 30% of cases with breast ...

Intracarotid Cancer Cell Injection to Produce Mouse Models of Brain Metastasis

Intracarotid Cancer Cell Инъекции Произвести мышь Модели метастаз мозга

Metastasis, the spread and growth of malignant cells at secondary sites within a patient&#39;s body, accounts for &#62; 90% of cancer-related mortality. ...

Modeling Breast Cancer via an Intraductal Injection of Cre-expressing Adenovirus into the Mouse Mammary Gland

Моделирование рака молочной железы с помощью интрадуктальной инъекции Cre-выражения аденовируса в мышь mammary Gland

Breast cancer is a heterogeneous disease, possibly due to complex interactions between different cells of origins and oncogenic events. Mouse models are ...

Micromanipulation of Circulating Tumor Cells for Downstream Molecular Analysis and Metastatic Potential Assessment

Микроманипуляции циркулирующей опухолевой клетки для молекулярного анализа вниз по течению и метастатического потенциального оценивания

Blood-borne metastasis accounts for&#160;most cancer-related deaths and involves circulating tumor cells (CTCs) that are successful in establishing new ...

Pathological Analysis of Lung Metastasis Following Lateral Tail-Vein Injection of Tumor Cells

Патологический анализ метастазирования в легкие после инъекции опухолевых клеток в латеральную хвостовую вену

Metastasis, the primary cause of morbidity and mortality for most cancer patients, can be challenging to model preclinically in mice. Few spontaneous ...

Modeling Brain Metastases Through Intracranial Injection and Magnetic Resonance Imaging

Моделирование метастазов мозга через внутричерепную инъекцию и магнитно-резонансную томографию

Metastatic spread of cancer is an unfortunate consequence of disease progression, aggressive cancer subtypes, and/or late diagnosis. Brain metastases are ...

Modeling Primary Bone Tumors and Bone Metastasis with Solid Tumor Graft Implantation into Bone

Моделирование первичных опухолей костей и метастазов в кости с имплантацией солидного опухолевого трансплантата в кость

Primary bone tumors or bone metastasis from solid tumors result in painful osteolytic, osteoblastic, or mixed osteolytic/osteoblastic lesions. These ...

Modeling Brain Metastasis Via Tail-Vein Injection of Inflammatory Breast Cancer Cells

Моделирование метастазирования в головной мозг с помощью инъекции воспалительных клеток рака молочной железы в хвостовую вену

Metastatic spread to the brain is a common and devastating manifestation of many types of cancer. In the United States alone, about 200,000 patients are ...

Portal Vein Injection of Colorectal Cancer Organoids to Study the Liver Metastasis Stroma

Портальная инъекция органоидов колоректального рака для изучения стромы метастазов в печень

Hepatic metastasis of colorectal cancer (CRC) is a leading cause of cancer-related death. Cancer-associated fibroblasts (CAFs), a major component of the ...