Name: establishment of a simple and effective rat model for intraoperative parathyroid gland imaging
Uploaded: 2022-08-17T14:05:00
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Cette étude a été soutenue par la Fondation nationale des sciences naturelles de Chine (NSFC) (82172598), la Fondation des sciences naturelles de la province du Zhejiang, Chine (LZ22H310001), le 551 Health Talent Training Project de la Commission de la santé de la province du Zhejiang, en Chine, et le Medical and Health Science and Technology Project de la province du Zhejiang, Chine (2021KY110).

Toutes les études sur les animaux ont été approuvées par le Comité institutionnel de soin et d’utilisation des animaux (IACUC) de l’Institut de médecine fondamentale et de cancérologie de l’Académie chinoise des sciences. Il s’agit d’une chirurgie de non-survie.
1. Animal
<ol><li>Utilisez un rat SD femelle âgé de 6 à 8 semaines, pesant 250 g, pour l’imagerie PG peropératoire.</li>
</ol>2. Anesthésie</str...

<ol>
	<li>Cope, O., Donaldson, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relation+of+thyroid+and+parathyroid+glands+to+calcium+and+phosphorus+metabolism.+Study+of+a+case+with+coexistent+hypoparathyroidism+and+hyperthyroidism.">Relation of thyroid and parathyroid glands to calcium and phosphorus metabolism. Study of a case with coexistent hypoparathyroidism and hyperthyroidism.</a> The Journal of Clinical Investigation. 16 (3), 329-341 (1937).</li><li>Mansberger, A. R., Wei, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgical+embryology+and+anatomy+of+the+thyroid+and+parathyroid+glands.">Surgical embryology and anatomy of the thyroid and parathyroid glands.</a> Surgical Clinics of North America. 73 (4), 727-746 (1993).</li><li>Koch, A., Hofbeck, M., Dorr, H. G., Singer, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypocalcemia-induced+heart+failure+as+the+initial+symptom+of+hypoparathyroidism.">Hypocalcemia-induced heart failure as the initial symptom of hypoparathyroidism.</a> Zeitschrift f&#252;r Kardiologie. 88 (1), 10-13 (1999).</li><li>Shoback, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Presentation+of+hypoparathyroidism:+etiologies+and+clinical+features.">Presentation of hypoparathyroidism: etiologies and clinical features.</a> The Journal of Clinical Endocrinology &amp; Metabolism. 101 (6), 2300-2312 (2016).</li><li>Arneiro, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Self-report+of+psychological+symptoms+in+hypoparathyroidism+patients+on+conventional+therapy.">Self-report of psychological symptoms in hypoparathyroidism patients on conventional therapy.</a> Archives of Endocrinology Metabolism. 62 (3), 319-324 (2018).</li><li>Olson, E., Wintheiser, G., Wolfe, K. M., Droessler, J., Silberstein, P. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+of+thyroid+cancer:+a+review+of+the+national+cancer+database,+2000-2013.">Epidemiology of thyroid cancer: a review of the national cancer database, 2000-2013.</a> Cureus. 11 (2), 4127 (2019).</li><li>Du, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+of+thyroid+cancer:+incidence+and+mortality+in+China,+2015.">Epidemiology of thyroid cancer: incidence and mortality in China, 2015.</a> Frontiers in Oncology. 10, 1702 (2020).</li><li>Barrios, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incidental+parathyroidectomy+in+thyroidectomy+and+central+neck+dissection.">Incidental parathyroidectomy in thyroidectomy and central neck dissection.</a> Surgery. 169 (5), 1145-1151 (2021).</li><li>Sitges-Serra, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inadvertent+parathyroidectomy+during+total+thyroidectomy+and+central+neck+dissection+for+papillary+thyroid+carcinoma.">Inadvertent parathyroidectomy during total thyroidectomy and central neck dissection for papillary thyroid carcinoma.</a> Surgery. 161 (3), 712-719 (2017).</li><li>Sakorafas, G. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incidental+parathyroidectomy+during+thyroid+surgery:+an+underappreciated+complication+of+thyroidectomy.">Incidental parathyroidectomy during thyroid surgery: an underappreciated complication of thyroidectomy.</a> World Journal of Surgery. 29 (12), 1539-1543 (2005).</li><li>Sahyouni, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rate+of+incidental+parathyroidectomy+in+a+pediatric+population.">Rate of incidental parathyroidectomy in a pediatric population.</a> OTO Open. 5 (4), (2021).</li><li>Erickson, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incidence,+survival+time,+and+surgical+treatment+of+parathyroid+carcinomas+in+dogs:+100+cases+(2010-2019).">Incidence, survival time, and surgical treatment of parathyroid carcinomas in dogs: 100 cases (2010-2019).</a> Journal of the American Veterinary Medical Association. 259 (11), 1309-1317 (2021).</li><li>Bi, R., Fan, Y., Luo, E., Yuan, Q., Mannstadt, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two+techniques+to+create+hypoparathyroid+mice:+parathyroidectomy+using+GFP+glands+and+diphtheria-toxin-mediated+parathyroid+ablation.">Two techniques to create hypoparathyroid mice: parathyroidectomy using GFP glands and diphtheria-toxin-mediated parathyroid ablation.</a> Journal of Visualized Experiments. (121), e55010 (2017).</li><li>Soulsby, S. N., Holland, M., Hudson, J. A., Behrend, E. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasonographic+evaluation+of+adrenal+gland+size+compared+to+body+weight+in+normal+dogs.">Ultrasonographic evaluation of adrenal gland size compared to body weight in normal dogs.</a> Veterinary Radiology &amp; Ultrasound. 56 (3), 317-326 (2015).</li><li>Zheng, W. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biodegradable+iron+oxide+nanoparticles+for+intraoperative+parathyroid+gland+imaging+in+thyroidectomy.">Biodegradable iron oxide nanoparticles for intraoperative parathyroid gland imaging in thyroidectomy.</a> PNAS Nexus. 1 (3), 087 (2022).</li></ol>

Nous démontrons une technique d’imagerie négative guidée par les IONPs du rat en utilisant des IONP noirs, qui ont été injectés localement au centre de la glande thyroïde et diffusés dans la glande thyroïde mais pas dans le PG. Il permet une identification claire du PG à l’œil nu sans l’aide d’aucun microscope. Bien que des souris transgéniques avec une protéine fluorescente verte exprimée sélectivement dans le PG aient été signalées13, le modèle décrit dans cet article...

La glande parathyroïde (PG) est de petites glandes endocrines de forme ovale situées dans le cou des humains et d’autres vertébrés, qui produisent et sécrètent des hormones parathyroïdiennes pour réguler et équilibrer les niveaux de calcium et de phosphore dans le sang et dans les os1. Les humains ont généralement deux paires de PG situées derrière les lobes de la glande thyroïde à des endroits variables; la taille du PG humain mesure généralement 6 mm x 4 mm x 2 mm, avec un poids d’environ 35-40 mg2. L’ablation ou l’endommagement du PG provoque une hypoparathyroïdie (HP), un trouble endocrinien caractérisé par une hypocalcémie et des taux faibles ou indétectables d’hormones parathyroïdiennes, qui provoquent un large éventail de symptômes allant des spasmes ressemblant à des crampes aux dents malformées en passant par les maladies rénales chroniques. Certaines de ces complications sont fatales (p. ex. insuffisance cardiaque et convulsions)3,4,5; ainsi, PG est essentiel dans la régulation du métabolisme du corps et le maintien de la vie.
La HP est l’une des complications les plus courantes après une chirurgie antérieure du cou, en particulier dans la thyroïdectomie, un traitement curatif bien établi du cancer de la thyroïde, qui est le cancer endocrinien le plus répandu dans le monde 6,7. La HP post-thyroïdectomie est principalement causée par un traumatisme direct, une ischémie ou l’ablation du PG en chirurgie en raison d’un manque grave de capacité à discriminer de manière fiable le PG des lobes de la glande thyroïde et d’autres tissus environnants (par exemple, les ganglions lymphatiques et les particules de graisse périphériques) en temps réel dans la salle d’opération. En 2021, Barrios et coll. ont signalé un taux moyen de fausses sections PG de 22,4 % dans 1 114 cas de thyroïdectomie, et même des chirurgiens expérimentés qui avaient un taux d’erreur minimum de 7,7 %8. Ces taux élevés de mauvais sections PG concordent avec d’autres rapports similaires 9,10,11. Ainsi, une parathyroïdectomie incorrecte est un facteur de risque indépendant de HPs postopératoires transitoires et permanentes.
La mise au point de méthodes peropératoires efficaces d’identification des PG est essentielle pour répondre à ce besoin médical critique non satisfait; Cependant, il a été sévèrement limité par le manque de modèles animaux dans la recherche préclinique. À ce jour, la plupart des examens peropératoires d’identification des PG ont été effectués sur des patients humains et de gros animaux (p. ex. chiens)12, qui sont coûteux et difficiles à obtenir une approbation éthique, à augmenter le nombre de sujets et à répéter les tests. Pendant ce temps, la souris, le modèle vertébré le plus couramment utilisé dans la recherche biologique, a un PG extrêmement petit, avec une taille inférieure à 1 mm13. En raison de cette limitation, les modèles PG murins ont rarement été utilisés dans la recherche peropératoire sur l’identification des PG.
Cet article fait état de l’établissement d’un modèle simple, direct et efficace chez le rat pour les études peropératoires d’identification des PG. Nous avons étudié l’utilisation de rats Sprague-Dawley (SD) indigènes sans aucune modification chirurgicale ou génie génétique comme modèle animal fiable pour tester un agent de contraste d’imagerie PG, les IONPs, dans une chirurgie de thyroïdectomie. Ce modèle de rat démontre une structure physiologique très similaire de PG et du microenvironnement environnant à celle des humains, et la taille du PG de rat est suffisamment grande pour être détectée visuellement par rapport à celles des souris. La plupart des rats ont un PG de chaque côté de la glande thyroïde. La simplicité et l’efficacité de ce modèle de rat ont été démontrées en effectuant une imagerie PG peropératoire améliorée par IONP dans la chirurgie de thyroïdectomie.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>alcohol</td>
			<td>Li feng</td>
			<td>9400820067</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anesthesia machine</td>
			<td>RWD Company</td>
			<td>R520IE</td>
			<td>Machine number</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>blade</td>
			<td>Daopian</td>
			<td>TB-JZ-10#</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cylindrical pillow</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>made by ourselves</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>depilatory cream</td>
			<td>Nair</td>
			<td>TMG-001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>electronic scale</td>
			<td>Hong xingda</td>
			<td>CN-HXD2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>eosin</td>
			<td>Thermo Fisher (Waltham, USA).</td>
			<td>C0105S-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>erythromycin</td>
			<td>Shuang ji (Beijing, China)</td>
			<td>200409</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>gauze</td>
			<td>Fulanns</td>
			<td>YY0331-2006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>heating pad</td>
			<td>Johon (ShenZhen,China)</td>
			<td>JH-36-2006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hematoxylin</td>
			<td>Thermo Fisher (Waltham, USA).</td>
			<td>C0105S-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>insulin injection needle</td>
			<td>Jiangyin NanquanMacromolecule</td>
			<td>20170702</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>iodophor cotton ball</td>
			<td>HOYON</td>
			<td>19-6007</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>iron oxide nanoparticle solution</td>
			<td>Zhongke Leiming Technology (Beijing, China)</td>
			<td>Mag9110-05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>isoflurane</td>
			<td>Sigma Aldrich (St Louis USA).</td>
			<td>21112801</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>needle holder</td>
			<td>Meijun</td>
			<td>MH0587</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>operation table</td>
			<td>BioJane</td>
			<td>BJ-P-M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>paraformaldehyde solution</td>
			<td>Biosharp</td>
			<td>21269333</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rubber</td>
			<td>G-CLONE</td>
			<td> 
			XT41050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>scanning machine</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>Slideview VS200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>surgical forceps</td>
			<td>Suping</td>
			<td>SPHC-0676</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>surgical knife handle</td>
			<td>Aladdin</td>
			<td>S3052-06-1EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>surgical retractor</td>
			<td>TOCYTO</td>
			<td>18-4010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>surgical scissors</td>
			<td>Suping</td>
			<td>SPHC-0795</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>surgical towel</td>
			<td>Along technology</td>
			<td>YCKJ-RJ-036205</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>suture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>SA84G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>suture with needle</td>
			<td>Jinhuan (Shanghai,China)</td>
			<td>F301</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>vascular forceps</td>
			<td>Along technology</td>
			<td>YCKJ-RJ-016218</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water Bath-Slide Drier</td>
			<td>Hua su (Jinhua, China)</td>
			<td>HS-1145</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

establishment of a simple and effective rat model for intraoperative parathyroid gland imaging

L’identification de la glande parathyroïde (PG) est un besoin critique non satisfait dans la thyroïdectomie. L’identification du PG est difficile en chirurgie de la thyroïde car il est de couleur similaire à celle de la glande thyroïde. Le manque de modèles animaux efficaces dans la recherche préclinique est une limite sévère pour le développement des techniques d’identification PG. Ce protocole permet d’établir un modèle de rat simple et efficace pour l’identification des PG. Dans ce modèle, les nanoparticules d’oxyde de fer noir (IONP) sont injectées localement dans la glande thyroïde et diffusent rapidement dans la glande thyroïde, mais pas dans le PG. Un PG coloré négativement et une glande thyroïde colorée positivement peuvent être facilement identifiés à l’œil nu sans nécessiter de microscopes externes. La position du PG peut être identifiée en augmentant le contraste de couleur entre la glande thyroïde et le PG, en fonction de la couleur des IONP noirs. Ce modèle de rat est peu coûteux et pratique pour l’identification des PG, et les IONP sont un nouvel agent de contraste PG.

Dans ce modèle animal, nous avons incisé chirurgicalement le cou d’un rat SD pour exposer la trachée, le larynx et les tissus environnants. Ensuite, la glande thyroïde était visuellement située des deux côtés de la trachée; Il est en forme de papillon et mesure environ 3 mm x 5 mm. Une paire de PG est généralement située dans la partie supérieure de la glande thyroïde, et leur couleur est très similaire à celle des lobes de la glande thyroïde, ce qui rend extrêmement difficile de les distinguer à l?...

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Establishment of a Simple and Effective Rat Model for Intraoperative Parathyroid Gland Imaging

À ce jour, le développement de méthodes d’identification de la glande parathyroïde (PG) est limité par le manque de modèles animaux dans la recherche préclinique. Ici, nous établissons un modèle de rat simple et efficace pour l’imagerie PG peropératoire et évaluons son efficacité en utilisant des nanoparticules d’oxyde de fer comme nouvel agent de contraste PG.

Mise en place d’un modèle simple et efficace chez le rat pour l’imagerie peropératoire des glandes parathyroïdes

Parathyroid gland (PG) identification is a critical unmet need in thyroidectomy. The identification of the PG is challenging in thyroid surgery as it is ...

La glande parathyroïde est un petit organe avec des fonctions très importantes. Notre protocole peut être utilisé pour développer de nouvelles technologies d’identification PG qui peuvent aider les chirurgiens à le protéger pendant la thyroïdectomie pour le cancer de la thyroïde. Le principal avantage de ce modèle est qu’il peut observer une nette différence entre la thyroïde et les PG grâce à l’imagerie négative de l’IONP.De plus, le coût et la difficulté opérationnelle sont considérablement inférieurs pour ce modèle de rat que pour les modèles de grands animaux. Pour commencer, placez un coussin chauffant préchauffé sur la table d’opération afin de maintenir la température corporelle de l’animal pendant la chirurgie, puis transférez le rat anesthésié vers un champ chirurgical placé sur la table d’opération. À l’aide d’élastiques, fixez les membres du rat à la table d’opération et placez un oreiller cylindrique en drapé sous l’épaule du rat pour pencher sa tête en arrière, exposant complètement la région du cou, puis appliquez une crème dépilatoire sur la région du cou, jusqu’à l’espace sous-maxillaire, jusqu’au processus xiphoïde et des deux côtés à l’extérieur du muscle sternocléidomastoïdien.Après trois minutes, essuyez délicatement les cheveux et la crème dépilatoire avec un mouchoir. Ensuite, à l’aide d’une boule de coton iodophore, stérilisez le milieu du cou et la zone environnante. dont les poils sont enlevés.Couvrez l’animal avec un champ chirurgical, en gardant le trou aligné avec la zone désinfectée. À l’aide du scalpel, faites une incision longitudinale d’environ cinq centimètres dans la ligne médiane antérieure du cou du rat. Soulevez la peau le long des deux côtés de l’incision et, à l’aide de ciseaux, coupez longitudinalement le long de la linea alba cervicalis.Utilisez une pince pour séparer le muscle sternohyoïdien et le muscle sternothyroïdien. Serrez les muscles séparés devant le cou à l’aide d’une pince vasculaire et tirez le tissu serré à l’extérieur. À l’aide de l’aiguille, passez la suture à travers le tissu serré.Faites un nœud et fixez la suture au champ chirurgical de la table d’opération. Localisez le cartilage thyroïdien en fonction de sa forme de bouclier et le cartilage cricoïde en fonction de sa forme d’anneau comme limite supérieure dans la zone d’opération, puis localisez la trachée en fonction de sa forme d’anneau cartilagineux tubulaire à l’avant et au milieu du cou comme limite inférieure dans la zone d’opération. Localisez la glande thyroïde, une glande rouge en forme de papillon située de l’autre côté de la trachée entre les limites supérieure et inférieure.Ensuite, localisez deux glandes parathyroïdes de forme fusiforme qui sont rougeâtres, mais plus légères que la glande thyroïde environnante avec une certaine limite sur les côtés supérieur et externe de la glande thyroïde. Prenez une photo frontale des glandes parathyroïdes avec la trachée, la thyroïde et le larynx. Disséquez l’arrière de l’œsophage et, à l’aide d’un rétracteur, exposez le côté droit des glandes parathyroïdes.Prenez une photo de droite des glandes parathyroïdes avec la glande thyroïde et la trachée, et exposez et capturez de la même manière le côté gauche des glandes. Utilisez une seringue à insuline pour injecter localement 10 microlitres de suspension de nanoparticules d’oxyde de fer noir au centre de la glande thyroïde et appuyez doucement sur le site d’injection avec de la gaze pendant cinq secondes, puis observez la diffusion rapide des nanoparticules d’oxyde de fer noir dans les glandes thyroïdes, mais pas dans les glandes parathyroïdes, car cela colore négativement les glandes parathyroïdes et les différencie de la thyroïde environnante. Prenez les photos avant, gauche et droite des glandes parathyroïdes colorées négativement ainsi que de la trachée, de la glande thyroïde et du larynx.Après injection, l’agent de contraste, les nanoparticules d’oxyde de fer noir, diffuse facilement dans la glande thyroïde et la colore en noir, mais ne peut pas infiltrer la glande parathyroïde en raison de leur densité tissulaire élevée. L’analyse histologique de nanoparticules d’oxyde de fer noir injectées dans la glande thyroïde a révélé que les glandes parathyroïdes sont enrichies de cellules principales étroitement alignées, tandis que la glande thyroïde présente de nombreuses lumières lâches indiquant une densité tissulaire beaucoup plus faible. Deux choses importantes doivent être rappelées dans cette procédure.Tout d’abord, la posture du rat. Nous avons recommandé de pencher les oreilles et la tête en arrière, exposant complètement la région du cou. Deuxièmement, lorsque nous injectons les IONPs, nous devrions utiliser une aiguille fine car la surface thyroïdienne est pleine de vaisseaux sanguins.Cette procédure peut également être réalisée par imagerie par autofluorescence du PG, qui est non invasive, fournit des informations en temps réel et n’utilise pas de colorant comme agent de contraste, mais le signal d’autofluorescence est faible et l’efficacité de l’imagerie est également faible. D’autres chercheurs peuvent utiliser ce modèle de rat simple et efficace pour développer et évaluer de nouvelles technologies et produits d’identification PG au lieu d’utiliser de grands animaux plus compliqués et coûteux tels que les chiens et les porcs.

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