Name: zebrafish larvae as a model to evaluate potential radiosensitizers or protectors
Uploaded: 2022-08-25T14:15:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Zebrafish Larvae as a Model to Evaluate Potential Radiosensitizers or Protectors at JoVE.com

एसएस की प्रयोगशाला और आरकेएस की प्रयोगशाला को डीबीटी और एसईआरबी, भारत से अनुदान द्वारा वित्त पोषित किया जाता है। एपीएम भारत सरकार के आईसीएमआर फैलोशिप के प्राप्तकर्ता हैं। डीपी सीएसआईआर फैलोशिप, भारत सरकार के प्राप्तकर्ता हैं। संयुक्त राष्ट्र भारत सरकार के डीएसटी-इंस्पायर फैलोशिप का प्राप्तकर्ता है। चित्रा 2 बायोरेंडर (https://biorender.com) का उपयोग करके उत्पन्न किया गया था।

वर्तमान अध्ययन संस्थागत पशु नैतिक समिति, जीवन विज्ञान संस्थान, भुवनेश्वर के दिशानिर्देशों से पूर्व अनुमोदन और पालन के साथ आयोजित किया गया था। सभी ज़ेबराफ़िश रखरखाव और प्रजनन 28.5 डिग्री सेल्सियस पर एक ?...

ज़ेबराफ़िश का उपयोग कई अध्ययनों में मूल्यवान मॉडल के रूप में किया जाता है, जिसमें कई प्रकार के कैंसर अनुसंधान शामिल हैं। यह मॉडल बड़े पैमाने पर दवा स्क्रीनिंग67,68 के लिए एक उपयोगी मंच प्रदा?...

ज़ेबराफ़िश (डेनियो रेरियो) एक प्रसिद्ध पशु मॉडल है जिसका व्यापक रूप से पिछले 3 दशकों में अनुसंधान में उपयोग किया गया है। यह एक छोटी मीठे पानी की मछली है जिसे प्रयोगशाला की स्थितियों में पालना और प्रजनन करना आसान है। जेब्राफिश का व्यापक रूप से विभिन्न विकासात्मक और विष विज्ञान अध्ययनों के लिए उपयोग किया गया है 1,2,3,4,5,6,7,8। ज़ेबराफ़िश में उच्च प्रजनन क्षमता और छोटी भ्रूण पीढ़ी होती है; भ्रूण विभिन्न विकास चरणों को ट्रैक करने के लिए उपयुक्त हैं, नेत्रहीन पारदर्शी हैं, और आनुवंशिक हेरफेर और उच्च-थ्रूपुट स्क्रीनिंग प्लेटफॉर्म 9,10,11,12,13,14 की किस्मों के लिए उत्तरदायी हैं। इसके अलावा, जेब्राफिश टोटो और लाइव इमेजिंग प्रदान करता है जिसके लिए इसकी विकास प्रक्रिया और विभिन्न विषाक्त पदार्थों या कारकों की उपस्थिति में विभिन्न विकृतियों का स्टीरियो या फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोपी 7,15,16 का उपयोग करके आसानी से अध्ययन किया जा सकता है।
रेडियोथेरेपी कैंसर 17,18,19,20,21,22,23,24 के इलाज में उपयोग किए जाने वाले प्रमुख चिकित्सीय तरीकों में से एक है। हालांकि, कैंसर रेडियोथेरेपी संभावित रेडियोप्रोटेक्टर्स की मांग करती है ताकि घातक कोशिकाओं को मारते समय सामान्य स्वस्थ कोशिकाओं को मरने से बचाया जा सके या उच्च ऊर्जा विकिरण 25,26,27,28,29 से जुड़े चिकित्सा के दौरान मानव स्वास्थ्य की रक्षा की जा सके। इसके विपरीत, घातक कोशिकाओं को मारने के लिए विकिरण की दक्षता बढ़ाने के लिए शक्तिशाली रेडियोसेंसिटाइज़र की भी जांच की जा रही है, विशेष रूप से लक्षित और सटीक उपचार30,31,32,33 में। इसलिए, शक्तिशाली रेडियोप्रोटेक्टर्स और सेंसिटाइज़र को मान्य करने के लिए, अर्ध-उच्च-थ्रूपुट दवा स्क्रीनिंग के लिए उपयुक्त एक मॉडल और विकिरण प्रभावों को प्रदर्शित करने के लिए अत्यधिक मांग की जाती है। विकिरण अध्ययन में कई उपलब्ध मॉडल का उपयोग किया जाता है और दवा स्क्रीनिंग प्रयोगों में शामिल किया जाता है। हालांकि, उच्च कशेरुक और यहां तक कि विवो मॉडल, चूहों में सबसे अधिक उपयोग किए जाने वाले, बड़े पैमाने पर दवा स्क्रीनिंग के लिए अनुपयुक्त हैं क्योंकि इन मॉडलों के साथ इस तरह के स्क्रीनिंग प्रयोगों को डिजाइन करना समय लेने वाला, महंगा और चुनौतीपूर्ण है। इसी तरह, सेल कल्चर मॉडल उच्च-थ्रूपुट दवा स्क्रीनिंग प्रयोगों34,35 की किस्मों के लिए आदर्श हैं। हालांकि, सेल संस्कृति से जुड़े प्रयोग हमेशा व्यावहारिक, अत्यधिक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य या विश्वसनीय नहीं होते हैं क्योंकि संस्कृति में कोशिकाएं विकास की स्थिति और कैनेटीक्स के अनुसार अपने व्यवहार को स्पष्ट रूप से बदल सकती हैं। इसके अलावा, सेल प्रकारों की किस्में अंतर विकिरण संवेदीकरण दिखाती हैं। विशेष रूप से, 2 डी और 3 डी सेल कल्चर सिस्टम पूरे जीव परिदृश्य का प्रतिनिधित्व नहीं करते हैं, और, इस प्रकार, प्राप्त परिणाम रेडियोटॉक्सिसिटी36,37 के वास्तविक स्तर को पुन: उत्पन्न नहीं कर सकते हैं। इस संबंध में, ज़ेबराफ़िश उपन्यास रेडियोसेंसिटाइज़र और रेडियोप्रोटेक्टर्स के लिए स्क्रीनिंग में कई फायदे प्रदान करता है। हैंडलिंग में आसानी, बड़े क्लच आकार, छोटे जीवन काल, तेजी से भ्रूण का विकास, भ्रूण पारदर्शिता और छोटे शरीर का आकार ज़ेबराफ़िश को बड़े पैमाने पर दवा स्क्रीनिंग के लिए एक उपयुक्त मॉडल बनाता है। उपरोक्त लाभों के कारण, प्रयोगों को थोड़े समय में आसानी से दोहराया जा सकता है, और प्रभाव को मल्टी-वेल प्लेटों में विच्छेदन माइक्रोस्कोप के तहत आसानी से देखा जा सकता है। इसलिए, जेब्राफिश विकिरण अध्ययन38,39 से जुड़े दवा स्क्रीनिंग अनुसंधान में लोकप्रियता प्राप्त कर रहा है।
विकिरण संशोधक को स्क्रीन करने के लिए एक बोनाफाइड मॉडल के रूप में जेब्राफिश की क्षमता विभिन्न अध्ययनों 40,41,42,43,44,45 में प्रदर्शित की गई है। संभावित रेडियो संशोधक, जैसे नैनोपार्टिकल डीएफ 1, एमिफोस्टाइन (डब्ल्यूआर -2721), डीएनए मरम्मत प्रोटीन केयू 80 और एटीएम, और प्रत्यारोपित हेमटोपोइएटिक स्टेम कोशिकाओं के रेडियोप्रोटेक्टिव प्रभाव, और जेब्राफिश मॉडल में फ्लेवोपिरिडोल और एजी 1478 जैसे रेडियोसेंसिटाइज़र के प्रभाव 19,41,42,43,44,45,46 बताए गए हैं।. उसी प्रणाली का उपयोग करते हुए, डीएफ -1 (फुलरीन नैनोपार्टिकल) के रेडियोप्रोटेक्टिव प्रभाव का मूल्यांकन प्रणालीगत और अंग-विशिष्ट दोनों स्तरों पर किया गया था, और रेडियोप्रोटेक्टर स्क्रीनिंग के लिए जेब्राफिश भ्रूण के उपयोग का भी पता लगाया गयाथा। हाल ही में, केलुलुट शहद को ज़ेबराफिश भ्रूण में एक रेडियोप्रोटेक्टर के रूप में रिपोर्ट किया गया था और भ्रूण के अस्तित्व को बढ़ाने और अंग-विशिष्ट क्षति, सेलुलर डीएनए क्षति और एपोप्टोसिस48 को रोकने के लिए पाया गया था।
इसी तरह, हंट्ज़श की प्रतिक्रिया के माध्यम से उत्पन्न पॉलिमर के रेडियोप्रोटेक्टिव प्रभावों को एक उच्च-थ्रूपुट स्क्रीनिंग में ज़ेबराफिश भ्रूण पर जांचा गया था, और सुरक्षा मुख्य रूप सेडीएनए क्षति से कोशिकाओं की रक्षा करके प्रदान की गई थी। पिछले अध्ययनों में से एक में, लिपोफिलिक स्टेटिन फ्लुवास्टेटिन को इस दृष्टिकोण50 के साथ ज़ेबराफिश मॉडल का उपयोग करके एक संभावित रेडियोसेंसिटाइज़र के रूप में पाया गया था। इसी तरह, सोने के नैनोकणों को एक आदर्श रेडियोसेंसिटाइज़र माना जाता है और इसका उपयोग कई अध्ययनों में किया गया है।
ज़ेबराफ़िश में भ्रूण के विकास में प्रारंभिक 3 घंटे में दरार शामिल होती है जिसमें एक एकल-कोशिका वाला युग्मनज 2 कोशिकाओं, 4 कोशिकाओं, 8 कोशिकाओं, 16 कोशिकाओं, 32 कोशिकाओं और 64 कोशिकाओं को बनाने के लिए विभाजित होता है जो आसानी से स्टीरियोमाइक्रोस्कोप के साथ पहचाने जाते हैं। फिर, यह 128 कोशिकाओं (2.25 घंटे पोस्ट-फर्टिलाइजेशन, एचपीएफ) के साथ ब्लास्टुला चरण प्राप्त करता है, जहां कोशिकाएं हर 15 मिनट में दोगुनी हो जाती हैं और इन निम्नलिखित चरणों से गुजरती हैं: 256 कोशिकाएं (2.5 एचपीएफ), 512 कोशिकाएं (2.75 एचपीएफ), और केवल 3 घंटे में 1,000+ कोशिकाओं तक पहुंचती हैं (चित्रा 1)। 4 घंटे में, अंडा गोले के चरण को प्राप्त करता है, इसके बाद भ्रूण द्रव्यमान 7,53,54 में गुंबद के आकार का निर्माण होता है। जेब्राफिश में गैस्ट्रुलेशन 5.25 एचपीएफ54 से शुरू होता है, जहां यह ढाल चरण तक पहुंचता है। ढाल स्पष्ट रूप से जर्म रिंग (चित्रा 1) के एक तरफ कोशिकाओं के तेजी से अभिसरण आंदोलन को इंगित करती है और गैस्ट्रुलटिंग भ्रूण का एक प्रमुख और विशिष्ट चरण है जिसे आसानी से53,54 पहचाना जा सकता है। यद्यपि भ्रूण के विकिरण जोखिम को उनके विकास के किसी भी चरण में किया जा सकता है, गैस्ट्रुलेशन के दौरान विकिरण जोखिम में अधिक विशिष्ट रूपात्मक परिवर्तन हो सकते हैं जो विकिरण-प्रेरित विषाक्तता के बेहतर रीडआउट की सुविधा प्रदानकरते हैं। इसी तरह, भ्रूण के लिए दवाओं का प्रशासन 2 एचपीएफ54 के रूप में शुरू किया जा सकता है।

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>6 Well plates</td>
			<td>Corning</td>
			<td>CLS3335</td>
			<td>Polystyrene</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B.O.D Incubator</td>
			<td>Oswald</td>
			<td>JRIC-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium Chloride</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>10101-41-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting Microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>Stemi 2000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>External Tank for the 1.0 L Breeding Tank</td>
			<td>Tecniplast</td>
			<td>ZB10BTE</td>
			<td>Polycarbonate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass petriplates</td>
			<td>Borosil</td>
			<td>3165A75</td>
			<td>Glass</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GraphpadPrism</td>
			<td>GraphPad Software, Inc.</td>
			<td></td>
			<td>Version 5.01</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kline concavity slides</td>
			<td>Himedia</td>
			<td>GW092-1PK</td>
			<td>Glass</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium Chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M8266</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methylene blue hydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>66720-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm</td>
			<td>Tarsons</td>
			<td>380020</td>
			<td>Paraffin film</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pasteur pipettes</td>
			<td>Himedia</td>
			<td>PW1212-1X500NO</td>
			<td>Polyethylene plastic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Perforated Internal Tank for the 1.0 L Breeding Tank</td>
			<td>Tecniplast</td>
			<td>ZB10BTI</td>
			<td>Polycarbonate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polycarbonate Divider for the 1.0 L Breeding Tank</td>
			<td>Tecniplast</td>
			<td>ZB10BTD</td>
			<td>Polycarbonate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polycarbonate Lid for the 1.0 L Breeding Tank</td>
			<td>Tecniplast</td>
			<td>ZB10BTL</td>
			<td>Polycarbonate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P5655</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S7653-5KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium hydroxide pellet</td>
			<td>SRL</td>
			<td>1949181</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereo Microscope Leica M205FA</td>
			<td>Leica</td>
			<td>Model/PN MDG35/10 450 125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-Rad 225 Precision X-Ray</td>
			<td>Precision X-Ray</td>
			<td>X-RAD 225XL</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

zebrafish larvae as a model to evaluate potential radiosensitizers or protectors

ज़ेबराफ़िश का बड़े पैमाने पर कई प्रकार के अनुसंधान में उपयोग किया जाता है क्योंकि वे आसानी से बनाए रखे गए कशेरुक मॉडल में से एक हैं और एक अद्वितीय और सुविधाजनक मॉडल प्रणाली की कई विशेषताओं का प्रदर्शन करते हैं। चूंकि अत्यधिक प्रोलिफेरेटिव कोशिकाएं विकिरण-प्रेरित डीएनए क्षति के लिए अतिसंवेदनशील होती हैं, जेब्राफिश भ्रूण विकिरण अनुसंधान में विवो मॉडल में एक फ्रंट-लाइन हैं। इसके अलावा, यह मॉडल प्रमुख जैविक घटनाओं और संबंधित प्रतिक्रियाओं के साथ-साथ थोड़े समय के भीतर विकिरण और विभिन्न दवाओं के प्रभाव को प्रोजेक्ट करता है। कई कैंसर अध्ययनों ने ज़ेबराफ़िश का उपयोग किया है, और यह प्रोटोकॉल रेडियोथेरेपी और कैंसर के संदर्भ में विकिरण संशोधक के उपयोग पर आधारित है। इस विधि का उपयोग विकिरणित और नियंत्रण (गैर-विकिरणित) भ्रूण पर विभिन्न दवाओं के प्रभावों को मान्य करने के लिए आसानी से किया जा सकता है, इस प्रकार दवाओं को रेडियो संवेदीकरण या सुरक्षात्मक दवाओं के रूप में पहचाना जा सकता है। यद्यपि इस पद्धति का उपयोग अधिकांश दवा स्क्रीनिंग प्रयोगों में किया जाता है, एक्स-रे विकिरण जोखिम की पृष्ठभूमि के साथ प्रयोग और विषाक्तता मूल्यांकन का विवरण सीमित या केवल संक्षेप में संबोधित किया जाता है, जिससे प्रदर्शन करना मुश्किल हो जाता है। यह प्रोटोकॉल इस मुद्दे को संबोधित करता है और एक विस्तृत चित्रण के साथ प्रक्रिया और विषाक्तता मूल्यांकन पर चर्चा करता है। प्रक्रिया बहुत विश्वसनीयता और प्रजनन क्षमता के साथ विकिरण अध्ययन और विकिरण-आधारित दवा स्क्रीनिंग के लिए ज़ेब्राफ़िश भ्रूण का उपयोग करने के लिए एक सरल दृष्टिकोण का वर्णन करती है।

प्रोटोकॉल का समग्र लेआउट चित्रा 2 में दर्शाया गया है। खुराक-निर्भर तरीके से विकिरण और लक्षण वर्णन के प्रभाव का मूल्यांकन निम्नलिखित विश्लेषणों के साथ किया गया था।
एक्स-...

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Zebrafish Larvae as a Model to Evaluate Potential Radiosensitizers or Protectors

जेब्राफिश को हाल ही में संभावित विकिरण संशोधक को मान्य करने के लिए एक मॉडल के रूप में शोषण किया गया है। वर्तमान प्रोटोकॉल विकिरण-आधारित स्क्रीनिंग प्रयोगों के लिए ज़ेबराफ़िश भ्रूण का उपयोग करने के लिए विस्तृत चरणों और विभिन्न उपचारों और विकिरण के प्रभाव का मूल्यांकन करने के लिए कुछ अवलोकन संबंधी दृष्टिकोणों का वर्णन करता है।

संभावित रेडियोसेंसिटाइज़र या रक्षक ों का मूल्यांकन करने के लिए एक मॉडल के रूप में ज़ेबराफिश लार्वा

Zebrafish are extensively used in several kinds of research because they are one of the easily maintained vertebrate models and exhibit several features ...

यह प्रोटोकॉल विकिरण-आधारित स्क्रीनिंग प्रयोगों के लिए ज़ेब्राफ़िश भ्रूण का उपयोग करने के लिए विस्तृत चरणों और विभिन्न दवाओं और विकिरण के उपचार का मूल्यांकन करने के लिए कुछ अवलोकन संबंधी दृष्टिकोणों का वर्णन करता है। यह पाठकों को ज़ेबराफिश भ्रूण का उपयोग करके एक्स-रे एक्सपोजर से जुड़े अर्ध-उच्च थ्रूपुट दवा स्क्रीनिंग को सेट करने में मदद करेगा, जो रेडियोटॉक्सिसिटी के मूल्यांकन और उपयोग की जाने वाली विभिन्न दवाओं की प्रभावशीलता में मार्गदर्शन करेगा। इस प्रक्रिया का उपयोग संभावित रेडियोसेंसिटाइज़र या रक्षक के रूप में विभिन्न दवाओं की स्क्रीनिंग और सत्यापन या मूल्यांकन करने के लिए किया जा सकता है, जिन्हें कैंसर रेडियोथेरेपी या रेडियोबायोलॉजी के क्षेत्र में आगे खोजा या उपयोग किया जा सकता है।शुरू करने के लिए, विच्छेदन माइक्रोस्कोप के तहत बढ़ते भ्रूण की निगरानी करें। उचित चरण की पहचान करें और किसी भी मृत या अस्वास्थ्यकर भ्रूण को हटा दें। सुनिश्चित करें कि पर्याप्त भ्रूण स्टेजिंग विकिरण है और दवा की खुराक एक विशेष गैस्ट्रुलेशन चरण में दी जाएगी।प्रयोग शुरू करने से पहले, पाश्चर पिपेट की मदद से प्रयोगात्मक प्लेटों में स्वस्थ भ्रूण को सावधानीपूर्वक वितरित करें। प्रत्येक प्रयोगात्मक समूह के लिए, 15 से 20 भ्रूण लें। विकिरण प्रयोग स्थापित करते समय, एक नियंत्रण गैर-विकिरणित और एक विकिरण-केवल समूह शामिल करें।भ्रूण को एक अच्छी प्लेट में वितरित करें यदि विकिरण ढाल विकिरण से अतिरिक्त कुओं को कवर और संरक्षित कर सकते हैं जबकि अन्य कुएं एक विशेष विकिरण खुराक के संपर्क में हैं। अन्यथा, प्रति विकिरण खुराक भ्रूण को देखने के लिए व्यक्तिगत प्लेटों या डिस्क का उपयोग करें। एक्स-रे इरेडिएटर मशीन चालू करें और मशीन आरंभ और वार्मअप शुरू करें।प्रयोगात्मक प्लेट को केंद्र में मशीन के अंदर इरेडिएटर के नीचे रखें, यह सुनिश्चित करते हुए कि प्लेट सीधे एक्स-रे स्रोत के नीचे है। और फिर खुराक सेट करें और एक्स-रे शुरू करें। विकिरण के पूरा होने के बाद, प्लेटों को बाहर निकालें, मशीन प्रोग्राम को बंद करें, मशीन को बंद करें, और विकिरण के तुरंत बाद माइक्रोस्कोप के तहत प्लेटों की जांच करें।मृत भ्रूण को हटा दें, और विच्छेदन माइक्रोस्कोप के तहत उनका मूल्यांकन करने के बाद उनकी संख्या रिकॉर्ड करें। प्लेटों को 28.5 डिग्री सेल्सियस पर इनक्यूबेटर में वापस करें। विकिरण दिए जाने के बाद पूर्व निर्धारित समय अंतराल पर डेटा एकत्र करें।सभी संभावित अवलोकनों को रिकॉर्ड करें जैसे कि जीवित रहना, हैचिंग दक्षता, विकास का चरण, दिल की धड़कन की गिनती, शरीर और पूंछ वक्रता, पेरिकार्डियल एडिमा, और जर्दी थैली का विस्तार, माइक्रोसेफली, तैरने की थैली का विकास, सामान्य गतिशीलता या गतिविधि, आदि। छवियों को कैप्चर करने के लिए, एक साफ स्लाइड पर प्रतिनिधि भ्रूण चुनें। माइक्रोस्कोप के तहत भ्रूण की जांच करें, उन्हें एक विशेष दिशा में उन्मुख करें।निषेचन के छह घंटे बाद विकिरणित भ्रूण के लिए उत्तरजीविता वक्र ने दर्शाया कि नियंत्रण समूह और 2 ग्रे और 5 ग्रे के संपर्क में आने वाले भ्रूण में, भ्रूण में कोई महत्वपूर्ण मृत्यु नहीं हुई थी। प्रति मिनट दिल की धड़कन की गिनती ने सुझाव दिया कि एक्स-रे विकिरण की बढ़ी हुई खुराक के साथ हृदय गति में काफी कमी आई है। हर 24 घंटे के अंतराल पर कंट्रोल ग्रुप में हार्ट रेट बढ़ता देखा गया।15 ग्रे और 20 ग्रे विकिरण के संपर्क में आने वाले भ्रूण में गंभीर कार्डियोवैस्कुलर विकृति का संदेह है क्योंकि दिल की धड़कन बहुत कम हो गई है। अलग-अलग समय बिंदुओं पर विकिरण की अलग-अलग खुराक के संपर्क में आने वाले भ्रूण के लिए विभिन्न फेनोटाइपिक और विकासात्मक दोषों को चित्रित और मूल्यांकन किया जाता है। रीढ़ या पूंछ झुकने, सिर की विकृति और माइक्रोसेफली, विकास में दोष, पेरिकार्डियल एडिमा, जर्दी थैली विकृति, तैरने की थैली की विकृति, और आंखों की संरचना में परिवर्तन के लिए रूपात्मक अवलोकन भी किए गए थे, जो प्रोटोकॉल हमने प्रदर्शित किया है, स्वस्थ भ्रूण चुनना, इरेडिएटर में भ्रूण का उचित प्लेसमेंट और क्रॉस-असामान्यताओं का उचित मूल्यांकन इस प्रक्रिया की कुंजी है।

Research

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