Name: organotypic cultures of adult human cortex as an ex vivo model for human stem cell transplantation and validation
Uploaded: 2022-12-09T13:20:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Organotypic Cultures of Adult Human Cortex as an Ex vivo Model for Human Stem Cell Transplantation and Validation at JoVE.com

Dette arbeidet støttes av tilskudd fra Vetenskapsrådet, den svenske hjernefonden, den svenske Stroke Foundation, Region Skåne, Thorsten og Elsa Segerfalk Foundation, og den svenske regjeringens initiativ for strategiske forskningsområder (StemTherapy).

Denne protokollen følger retningslinjene godkjent av regional etisk komité, Lund, Sverige (etisk tillatelsesnummer 2021-07006-01). Friskt neokortikalt vev ble innhentet fra pasienter som gjennomgikk elektiv kirurgi for temporallappsepilepsi. Informert samtykke ble innhentet fra alle pasientene.
MERK: Alle oppnådde vev ble behandlet uavhengig av størrelsen. Imidlertid vil vev mindre enn 1-1,5 mm3 i størrelse være teknisk utfordrende å håndtere og seksjonere med en vibratom.</...

<ol>
	<li>Kuriakose, D., Xiao, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathophysiology+and+treatment+of+stroke:+Present+status+and+future+perspectives.">Pathophysiology and treatment of stroke: Present status and future perspectives.</a> International Journal of Molecular Sciences. 21 (20), 7609 (2020).</li><li>Armstrong, M. J., Okun, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnosis+and+treatment+of+Parkinson+disease:+A+review.">Diagnosis and treatment of Parkinson disease: A review.</a> The Journal of the American Medical Association. 323 (6), 548-560 (2020).</li><li>Lindvall, O., Kokaia, Z., Martinez-Derrano, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cell+therapy+for+human+neurodegenerative+disorders-How+to+make+it+work.">Stem cell therapy for human neurodegenerative disorders-How to make it work.</a> Nature Medicine. 10, 42-50 (2004).</li><li>Reubinoff, B. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+progenitors+from+human+embryonic+stem+cells.">Neural progenitors from human embryonic stem cells.</a> Nature Biotechnology. 19 (12), 1134-1140 (2001).</li><li>Chandrasekaran, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+2D+and+3D+neural+induction+methods+for+the+generation+of+neural+progenitor+cells+from+human+induced+pluripotent+stem+cells.">Comparison of 2D and 3D neural induction methods for the generation of neural progenitor cells from human induced pluripotent stem cells.</a> Stem Cell Research. 25, 139-151 (2017).</li><li>Tornero, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+inputs+from+stroke-injured+brain+to+grafted+human+stem+cell-derived+neurons+activated+by+sensory+stimuli.">Synaptic inputs from stroke-injured brain to grafted human stem cell-derived neurons activated by sensory stimuli.</a> Brain. 140 (3), 692-706 (2017).</li><li>Palma-Tortosa, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activity+in+grafted+human+iPS+cell-derived+cortical+neurons+integrated+in+stroke-injured+rat+brain+regulates+motor+behavior.">Activity in grafted human iPS cell-derived cortical neurons integrated in stroke-injured rat brain regulates motor behavior.</a> Proceedings of the National Academy of Sciencesof the United States of America. 117 (16), 9094-9100 (2020).</li><li>Robinson, N. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+current+state+of+animal+models+in+research:+A+review.">The current state of animal models in research: A review.</a> International Journal of Surgery. 72, 9-13 (2019).</li><li>Akhtar, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+flaws+and+human+harms+of+animal+experimentation.">The flaws and human harms of animal experimentation.</a> Cambridge Quarterly Healthcare Ethics. 24 (4), 407-419 (2015).</li><li>Gonzalez-Ramos, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+stem+cell-derived+GABAergic+neurons+functionally+integrate+into+human+neuronal+networks.">Human stem cell-derived GABAergic neurons functionally integrate into human neuronal networks.</a> Scientific Reports. 11, 22050 (2021).</li><li>Noraberg, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organotypic+hippocampal+slice+cultures+for+studies+of+brain+damage,+neuroprotection+and+neurorepair.">Organotypic hippocampal slice cultures for studies of brain damage, neuroprotection and neurorepair.</a> Current Drug Targets. CNS &amp; Neurological Disorders. 4 (4), 435-452 (2005).</li><li>Delavaran, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proximity+of+brain+infarcts+to+regions+of+endogenous+neurogenesis+and+involvement+of+striatum+in+ischaemic+stroke.">Proximity of brain infarcts to regions of endogenous neurogenesis and involvement of striatum in ischaemic stroke.</a> European Journal of Neurology. 20 (3), 473-479 (2013).</li><li>Sabuncu, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+dynamics+of+cortical+and+hippocampal+atrophy+in+Alzheimer+disease.">The dynamics of cortical and hippocampal atrophy in Alzheimer disease.</a> Archives of Neurology. 68 (8), 1040-1048 (2011).</li><li>Eugene, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+organotypic+brain+slice+preparation+from+adult+patients+with+temporal+lobe+epilepsy.">An organotypic brain slice preparation from adult patients with temporal lobe epilepsy.</a> The Journal of Neuroscience Methods. 235, 234-244 (2014).</li><li>Mendes, N. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Free-floating+adult+human+brain-derived+slice+cultures+as+a+model+to+study+the+neuronal+impact+of+Alzheimer's+disease-associated+A&#946;+oligomers.">Free-floating adult human brain-derived slice cultures as a model to study the neuronal impact of Alzheimer's disease-associated A&#946; oligomers.</a> The Journal of Neuroscience Methods. 307, 203-209 (2018).</li><li>Kalmbach, B. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Signature+morpho-electric,+transcriptomic,+and+dendritic+properties+of+human+layer+5+neocortical+pyramidal+neurons.">Signature morpho-electric, transcriptomic, and dendritic properties of human layer 5 neocortical pyramidal neurons.</a> Neuron. 109 (18), 2914-2927 (2021).</li><li>Barth, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microglial+inclusions+and+neurofilament+light+chain+release+follow+neuronal+alpha-synuclein+lesions+in+long-term+brain+slice+cultures.">Microglial inclusions and neurofilament light chain release follow neuronal alpha-synuclein lesions in long-term brain slice cultures.</a> Molecular Neurodegeneration. 16 (1), 54 (2021).</li><li>Almeida, G. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+infection+by+oropouche+virus+in+adult+human+brain+slices+induces+an+inflammatory+and+toxic+response.">Neural infection by oropouche virus in adult human brain slices induces an inflammatory and toxic response.</a> Frontiers in Neuroscience. 15, 674576 (2021).</li><li>Schwarz, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+cerebrospinal+fluid+promotes+long-term+neuronal+viability+and+network+function+in+human+neocortical+organotypic+brain+slice+cultures.">Human cerebrospinal fluid promotes long-term neuronal viability and network function in human neocortical organotypic brain slice cultures.</a> Scientific Reports. 7, 12249 (2017).</li><li>Miskinyte, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+conversion+of+human+fibroblasts+to+functional+excitatory+cortical+neurons+integrating+into+human+neural+networks.">Direct conversion of human fibroblasts to functional excitatory cortical neurons integrating into human neural networks.</a> Stem Cell Research &amp; Therapy. 8 (1), 207 (2017).</li><li>Gronning Hansen, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Grafted+human+pluripotent+stem+cell-derived+cortical+neurons+integrate+into+adult+human+cortical+neural+circuitry.">Grafted human pluripotent stem cell-derived cortical neurons integrate into adult human cortical neural circuitry.</a> Stem Cells Translational Medicine. 9 (11), 1365-1377 (2020).</li><li>Falk, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Capture+of+neuroepithelial-like+stem+cells+from+pluripotent+stem+cells+provides+a+versatile+system+for+in+vitro+production+of+human+neurons.">Capture of neuroepithelial-like stem cells from pluripotent stem cells provides a versatile system for in vitro production of human neurons.</a> PLoS One. 7 (1), 29597 (2012).</li><li>Avaliani, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optogenetics+reveal+delayed+afferent+synaptogenesis+on+grafted+human-induced+pluripotent+stem+cell-derived+neural+progenitors.">Optogenetics reveal delayed afferent synaptogenesis on grafted human-induced pluripotent stem cell-derived neural progenitors.</a> Stem Cells. 32 (12), 3088-3098 (2014).</li><li>Engel, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Practice+parameter:+temporal+lobe+and+localized+neocortical+resections+for+epilepsy.">Practice parameter: temporal lobe and localized neocortical resections for epilepsy.</a> Epilepsia. 44 (6), 741-751 (2003).</li><li>Qi, X. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+brain+slice+culture:+A+useful+tool+to+study+brain+disorders+and+potential+therapeutic+compounds.">Human brain slice culture: A useful tool to study brain disorders and potential therapeutic compounds.</a> Neuroscience Bulletin. 35 (2), 244-252 (2019).</li><li>Verwer, R. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Injury+response+of+resected+human+brain+tissue+in+vitro.">Injury response of resected human brain tissue in vitro.</a> Brain Pathology. 25 (4), 454-468 (2015).</li><li>Verwer, R. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altered+loyalties+of+neuronal+markers+in+cultured+slices+of+resected+human+brain+tissue.">Altered loyalties of neuronal markers in cultured slices of resected human brain tissue.</a> Brain Pathology. 26 (4), 523-532 (2016).</li><li>Xu, L., Wang, J., Ding, Y., Wang, L., Zhu, Y. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+knowledge+of+microglia+in+traumatic+spinal+cord+injury.">Current knowledge of microglia in traumatic spinal cord injury.</a> Frontiers in Neurology. 12, 796704 (2021).</li><li>Jones, R. S., da Silva, A. B., Whittaker, R. G., Woodhall, G. L., Cunningham, M. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+brain+slices+for+epilepsy+research:+Pitfalls,+solutions+and+future+challenges.">Human brain slices for epilepsy research: Pitfalls, solutions and future challenges.</a> Journal of Neuroscience Methods. 260, 221-232 (2016).</li><li>Schwarz, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+adult+human+brain+slice+cultures+as+a+model+system+to+study+human+CNS+circuitry+and+disease.">Long-term adult human brain slice cultures as a model system to study human CNS circuitry and disease.</a> Elife. 8, 48417 (2019).</li><li>Lancaster, M. A., Knoblich, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organogenesis+in+a+dish:+Modeling+development+and+disease+using+organoid+technologies.">Organogenesis in a dish: Modeling development and disease using organoid technologies.</a> Science. 345 (6194), 1247125 (2014).</li><li>Wang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organoid+technology+for+brain+and+therapeutics+research.">Organoid technology for brain and therapeutics research.</a> CNS Neuroscience &amp; Therapeutics. 23 (10), 771-778 (2017).</li><li>Wang, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+neurological+diseases+with+human+brain+organoids.">Modeling neurological diseases with human brain organoids.</a> Frontiers in Synaptic Neuroscience. 10, 15 (2018).</li><li>Palma-Tortosa, S., Coll-San Martin, B., Kokaia, Z., Tornero, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+replacement+in+stem+cell+therapy+for+stroke:+Filling+the+gap.">Neuronal replacement in stem cell therapy for stroke: Filling the gap.</a> Frontiers in Cell and Developmental Biology. 9, 662636 (2021).</li></ol>

Å skaffe hACtx-skiver av høy nok kvalitet er det mest kritiske trinnet i denne protokollen. Kortikalt vev er hentet fra epileptiske pasienter som gjennomgår resektiv kirurgi24. Kvaliteten på resektert vev, samt eksponeringstiden for vevet mellom reseksjon og kultur, er kritisk; Jo raskere vevet overføres fra operasjonsrommet til laboratoriet og kuttes, desto mer optimal blir den organotypiske kulturen. Ideelt sett bør vevet kuttes og overføres til cellekulturlaboratoriet i...

Neurodegenerative lidelser, som Parkinsons sykdom, Alzheimers sykdom eller iskemisk slag, er en gruppe sykdommer som deler fellestrekk ved nevronfeil eller død. De er heterogene når det gjelder hjerneområdet og nevronpopulasjonen som er berørt. Dessverre er behandlinger for disse sykdommene knappe eller av begrenset effekt på grunn av mangel på dyremodeller som etterligner det som skjer i den menneskelige hjerne 1,2. Stamcelleterapi er en av de mest lovende strategiene for hjernens regenerering3. Genereringen av nevronale forfedre fra stamceller fra forskjellige kilder har blitt sterkt utviklet de siste årene 4,5. Nylige publikasjoner har vist at humane induserte pluripotente stamme (iPS) celleavledede langsiktige selvfornyende neuroepithelial-lignende stammeceller (lt-NES), etter en kortikal differensieringsprotokoll og etter intrakortikal transplantasjon i en rottemodell med iskemisk hjerneslag som påvirker den somatosensoriske cortex, genererer modne kortikale nevroner. I tillegg mottok de transplantatavledede nevronene afferente og efferente synaptiske forbindelser fra vertsnevronene, som viser deres integrasjon i rotteneuronnettverket 6,7. De transplantatavledede aksonene ble myeliniserte og funnet i forskjellige områder av rottehjernen, inkludert peri-infarktområdet, corpus callosum og kontralateral somatosensorisk cortex. Viktigst av alt, iPS-celleavledet transplantasjon reverserte motoriske underskudd hos slagdyr7.
Selv om dyremodeller bidrar til å studere transplantasjonsoverlevelse, nevronintegrasjon og effekten av de transplanterte cellene på motoriske og kognitive funksjoner, mangler informasjon om interaksjon mellom humane celler (graft-host) i dette systemet 8,9. Av denne grunn er en kombinert metode for langsiktig human hjerneorganotypisk kultur med ex vivo-transplantasjon av humane iPS-celleavledede nevronale progenitorer beskrevet her. Menneskelige hjerneorganotypiske kulturer hentet fra nevrokirurgiske reseksjoner er fysiologisk relevante 3D-modeller av hjernen som tillater forskere å øke forståelsen av menneskets sentralnervesystemkretsløp og den mest nøyaktige måten å teste behandlinger for humane hjernesykdommer. Imidlertid har det ikke blitt gjort nok forskning i denne sammenhengen, og i de fleste tilfeller har menneskelige hippocampus-hjerneorganotypiske kulturer blitt brukt10,11. Hjernebarken påvirkes av flere neurodegenerative lidelser, som iskemisk slag12 eller Alzheimers sykdom13, så det er viktig å ha et humant kortikal 3D-system som gjør at vi kan utvide vår kunnskap og teste og validere ulike terapeutiske strategier. Flere studier de siste årene har brukt kulturer fra voksent humant kortikalt (hACtx) vev for å modellere menneskelige hjernesykdommer 14,15,16,17,18,19; Imidlertid er begrenset informasjon tilgjengelig i sammenheng med stamcellebehandling. To studier har allerede vist gjennomførbarheten av systemet beskrevet her. I 2018 ble humane embryonale stamceller programmert med forskjellige transkripsjonsfaktorer og transplantert i hACtx-vev vist å gi opphav til modne kortikale nevroner som kunne integreres i voksne humane kortikale nettverk20. I 2020 avslørte transplantasjonen av lt-NES-celler i det humane organotypiske systemet deres evne til å differensiere til modne, lagspesifikke kortikale nevroner med de elektrofysiologiske egenskapene til funksjonelle nevroner. De podede nevronene etablerte både afferente og efferente synaptiske kontakter med de humane kortikale nevronene i de voksne hjerneskivene, som bekreftet av rabiesvirus retrograd monosynaptisk sporing, helcellelapp-klemmeopptak og immunelektronmikroskopi21.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Tissue Cutting and electrophysiology</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adenosine 5&#39;-triphosphate magnesium salt</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A9187</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bath temperature controller&#160;</td>
			<td>Luigs &#38; Neumann</td>
			<td>TC0511354</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium Chloride dihydrate</td>
			<td>Merck</td>
			<td>102382</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbogen gas</td>
			<td>Air Liquide</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cooler</td>
			<td>Julaba FL 300</td>
			<td>9661012.03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-(+)Glucose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G7021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Double Patch-Clamp amplifier</td>
			<td>HEKA electronic</td>
			<td>EPC10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Guanosine 5&#39;-Triphosphate disodium salt</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>371701</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>AppliChem</td>
			<td>A1069</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium Chloride hexahydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M2670</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium Sulfate heptahydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>230391</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Patchmaster</td>
			<td>HEKA electronic</td>
			<td>Patchmaster 2x91</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette Puller</td>
			<td>Sutter</td>
			<td>P-2000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic Petri dish</td>
			<td>Any suitable</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium chloride</td>
			<td>Merck</td>
			<td>104936</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium D-gluconate</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>B25135</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rubber teat + glass pipette</td>
			<td>Any suitable</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Bicarbonate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S5761</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S7653</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium dihydrogen phosphate monohydrate</td>
			<td>Merck</td>
			<td>106346</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S7903</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue adhesive: Acryl super glue</td>
			<td>Loctite</td>
			<td>2062278</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Upright microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>BX51WI&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vibratome&#160;</td>
			<td>Leica</td>
			<td>VT1200 S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RINSING SOLUTION</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-(+)Glucose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G7021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS (without Ca, Mg, or PhenolRed)</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>14175095</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>AppliChem</td>
			<td>A1069</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin (10,000 U/mL)</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>15-140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MANTAINANCE AND CULTURE OF HUMAN NEOCORTICAL TISSUE</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-well plate</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>140675</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alvetex scaffold 6 well insert</td>
			<td>Reinnervate Ltd</td>
			<td>AVP004-96</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27 Supplement (50x)</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>17504001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BrainPhys without Phenol Red</td>
			<td>StemCell technologies</td>
			<td>#05791</td>
			<td>Referenced as neuronal medium in the text</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter units 250 mL or 500 mL</td>
			<td>Corning Sigma</td>
			<td>CLS431096/97</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td>Any suitable</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gentamicin (50 mg/mL)</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>15750037</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutamax Supplement (100x)</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>35050061</td>
			<td>Referenced as L-glutamine in the text</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rubber teat + Glass pipette</td>
			<td>Any suitable</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GENERATION OF lt-NES cells</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-Mercaptoethanol 50 mM</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>31350010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Animal Free Recombinant EGF</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>AF-100-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27 Suplemment (50x)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>17504001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>bFGF</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>AF-100-18B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Albumin Fraction V (7.5% solution)</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>15260037</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cyclopamine, V. calcifornicum</td>
			<td>Calbiochem</td>
			<td># 239803</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D (+) Glucose solution (45%)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G8769</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D2438-10mL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM/F12</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>11320074</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Phosphate Buffer Saline (DPBS)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>14190-144</td>
			<td>Without calcium and magnesium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminin Mouse Protein, Natural</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>23017015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEM Non-essential aminoacids solutions (100x)</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>11140050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-2 Supplement (100 x)</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>17502001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poly-L-Ornithine</td>
			<td>Merk</td>
			<td>P3655</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Human BMP-4 Protein</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>314-BP-010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Human Wnt-3a Protein</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>5036-WN</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Pyruvate (100 mM)</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>11360070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soybean Trypsin Inhibitor, powder</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>17075029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile deionized water</td>
			<td>MilliQ</td>
			<td></td>
			<td>MilliQ filter system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin EDTA (0.25%)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T4049-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EQUIPMENT FOR CELL CULTURE&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adjustable volume pipettes 10, 100, 200, 1000 &#181;L</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Basement membrane matrix ESC-qualified (Matrigel)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>CLS354277-1EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Hettich Centrifugen</td>
			<td>Rotina 420R</td>
			<td>5% CO2, 37 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator</td>
			<td>ThermoForma Steri-Cult CO2</td>
			<td>HEPA Class100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stem cell cutting tool 0.190-0.210 mm</td>
			<td>Vitrolife</td>
			<td>14601</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile tubes</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Disposable Glass Pasteur Pipettes 150 mm</td>
			<td>VWR</td>
			<td>612-1701</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile pipette tips 0.1-1000 &#160;&#181;L</td>
			<td>Biotix VWR</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Serological Pipettes 5, 10, 25, 50 mL</td>
			<td>Costar</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T25 flasks Nunc</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>156367</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IMMUNOHISTOCHEMISTRY</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>488-conjugated AffinityPure Donkey anti-mouse IgG</td>
			<td>Jackson ImmunoReserach</td>
			<td>715-545-151</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>488-conjugated AffinityPure Donkey anti-rabbit IgG</td>
			<td>Jackson ImmunoReserach</td>
			<td>711-545-152</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>488-conjugated AffinityPure Donkey anti-chicken IgG</td>
			<td>Jackson ImmunoReserach</td>
			<td>703-545-155</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa fluor 647-conjugated Streptavidin</td>
			<td>Jackson ImmunoReserach</td>
			<td>016-600-084</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin</td>
			<td>Jackson ImmunoReserach</td>
			<td>001-000-162</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chicken anti-GFP</td>
			<td>Merk Millipore</td>
			<td>AB16901</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chicken anti-MAP2&#160;</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab5392</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cy3-conjugated AffinityPure Donkey anti-chicken IgG</td>
			<td>Jackson ImmunoReserach</td>
			<td>703-165-155</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cy3-conjugated AffinityPure Donkey anti-goat IgG</td>
			<td>Jackson ImmunoReserach</td>
			<td>705-165-147</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cy3-conjugated AffinityPure Donkey anti-mouse IgG</td>
			<td>Jackson ImmunoReserach</td>
			<td>715-165-151</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Diazabicyclooctane (DABCO)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D27802</td>
			<td>Mounting media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-AIF1 (C-terminal)&#160;</td>
			<td>Biorad</td>
			<td>AHP2024</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hoechst 33342</td>
			<td>Molecular Probes</td>
			<td></td>
			<td>Nuclear staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse anti-MBP&#160;</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>808402</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse anti-SC123&#160;</td>
			<td>Stem Cells Inc</td>
			<td>AB-123-U-050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal Donkey Serum</td>
			<td>Merk Millipore</td>
			<td>S30-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paint brush</td>
			<td>Any suitable</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde (PFA)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>150127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Phospate Buffer Saline, KPBS (1x)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;&#160;&#160;&#160; Distilled water</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;&#160;&#160;&#160; Potassium dihydrogen Phospate (KH2PO4)</td>
			<td>Merk Millipore</td>
			<td>104873</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;&#160;&#160;&#160; Potassium phospate dibasic (K2HPO4)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P3786</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;&#160;&#160;&#160; Sodium chloride (NaCl)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S3014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-NeuN&#160;</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab104225</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-Olig2&#160;</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab109186</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-TMEM119&#160;</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab185333</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium azide</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S2002-5G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium citrate</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; Distilled water</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; Tri-Sodium Citrate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S1804-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; Tween-20</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P1379</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>327371000&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EQUIPMENT FOR IMMUNOHISTOCHEMISTRY</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>LSM 780</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope Slides 76 mm x 26 mm</td>
			<td>VWR</td>
			<td>630-1985</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope Coverslips 24 mm x 60 mm</td>
			<td>Marienfeld</td>
			<td>107242</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope Software</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>ZEN Black edition</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rubber teat + Glass pipette</td>
			<td>Any suitable</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

organotypic cultures of adult human cortex as an ex vivo model for human stem cell transplantation and validation

Neurodegenerative lidelser er vanlige og heterogene når det gjelder symptomer og cellulær påvirkning, noe som gjør studien komplisert på grunn av mangel på riktige dyremodeller som fullt ut etterligner menneskelige sykdommer og den dårlige tilgjengeligheten av menneskelig hjernevev etter døden. Voksen human nervevevskultur gir mulighet til å studere ulike aspekter av nevrologiske lidelser. Molekylære, cellulære og biokjemiske mekanismer kan lett adresseres i dette systemet, samt testing og validering av medisiner eller forskjellige behandlinger, for eksempel cellebaserte terapier. Denne metoden kombinerer langsiktige organotypiske kulturer av den voksne humane cortex, oppnådd fra epileptiske pasienter som gjennomgår resektiv kirurgi, og ex vivo intrakortikal transplantasjon av induserte pluripotente stamcelleavledede kortikale progenitorer. Denne metoden vil tillate studier av celleoverlevelse, nevrondifferensiering, dannelse av synaptiske innganger og utganger, og de elektrofysiologiske egenskapene til humanavledede celler etter transplantasjon i intakt voksent humant kortikalt vev. Denne tilnærmingen er et viktig skritt før utviklingen av en 3D-modelleringsplattform for menneskelig sykdom som vil bringe grunnforskning nærmere den kliniske oversettelsen av stamcellebaserte terapier for pasienter med forskjellige nevrologiske lidelser og tillate utvikling av nye verktøy for å rekonstruere skadede nevrale kretser.

Etter den beskrevne protokollen ble hACtx-vev fra en pasient med temporallappsepilepsi samlet og behandlet, som forklart ovenfor. Noen få skiver ble fikset etter 24 timer i kultur for å studere utgangspunktet for vertsvevet. Analysen av ulike nevrale cellepopulasjoner som nevroner (som uttrykker NeuN og Map2, figur 1A), oligodendrocytter (Olig2 og MBP, figur 1B) og astrocytter (humanspesifikk GFAP, også kalt STEM123, figur 1C) viste optimal bevaring av vevet....

Watch this Scientific Journal Video about Organotypic Cultures of Adult Human Cortex as an Ex vivo Model for Human Stem Cell Transplantation and Validation at JoVE.com

Organotypic Cultures of Adult Human Cortex as an Ex vivo Model for Human Stem Cell Transplantation and Validation

Denne protokollen beskriver langsiktige organotypiske kulturer av voksen human cortex kombinert med ex vivo intrakortikal transplantasjon av induserte pluripotente stamcelleavledede kortikale progenitorer, som presenterer en ny metodikk for ytterligere å teste stamcellebaserte terapier for humane nevrodegenerative lidelser.

Organotypiske kulturer av voksen human cortex som en ex vivo-modell for human stamcelletransplantasjon og validering

Neurodegenerative disorders are common and heterogeneous in terms of their symptoms and cellular affectation, making their study complicated due to the ...

Organotypiske kulturer av menneskelig voksen cortex er så langt det eneste systemet for testing av stamcelleterapier for skadet cortex som gjør det mulig å studere samspillet mellom humane podede og humane vertsceller. En terapi testet i dyremodeller mislykkes vanligvis når den oversettes til kliniske innstillinger på grunn av forskjellene mellom gnagere og humane celler. Her kan vi studere podede celler, overlevelse, differensiering og funksjonalitet i en menneske-til-menneske-setting.Denne metoden vil hjelpe oss å forstå hvordan nevrale kretsløp opererer i den menneskelige hjerne, og det vil også stimulere oversettelsen av denne kunnskapen til de kliniske innstillingene for å forbedre funksjonell gjenoppretting etter hjerneskade. Demonstrere prosedyren vil være Raquel Martinez-Curiel, en doktorgradsstudent, og Costanza Aretio-Medina, en masterstudent, begge fra laboratoriet mitt. For å begynne, plasser kulturinnsatsene i en seks-brønnplate ved hjelp av tang i cellekulturlaboratoriet under en ventilert hette.Tilsett fem milliliter av det menneskelige voksne kortikale mediet på bunnen av innsatsen til det kommer i kontakt med membranen. Unngå bobledannelse og tilsett to milliliter av mediet på toppen av innsatsen. Før du overfører vevskivene til innsatsene, må du balansere dem i inkubatoren ved 37 grader Celsius og 5% karbondioksid i minst to timer.Samle vevet fra pasienten i operasjonen i en beholder med frossen, boblet og knust skjæreløsning. Overfør den lukkede beholderen på is umiddelbart til skjæreområdet på laboratoriet. Inspiser vevet, og vurder det kortikale lagets orientering, finn den beste overflaten for å lime den til vibratomets skjæretrinn.Hvis nødvendig, kutt den ujevne overflaten med skalpellen for å plassere vevet på scenen for optimal skiveorientering. Lim deretter vevet til scenen med vevlim. Plasser den i skivekammeret og fyll den umiddelbart med kald, boblet skjæreløsning.Fortsett boblen under hele skjæreprosessen. Klipp nå koronale eller sagittale skiver avhengig av vev-til-blad-orienteringen som beskrevet i manuskriptet. Legg skivene i oppsamlingskammeret med boblende skjæreløsning ved romtemperatur.Når alt vevet er kuttet, overfør skivene til en steril petriskål med skylleløsning ved romtemperatur for å fjerne overflødig sukrose fra skivene og transportere dem til cellekulturlaboratoriet. Deretter plasserer du vevskivene individuelt på toppen av de våte og nedsenkede innsatsene. Etter 24 timer, bytt medium for å fjerne gjenværende sukrose eller andre gjenværende stoffer fra skjæreprosedyren.Etter to uker, bruk humant voksent kortikalt medium uten gentamycin. Fjern mediet fra cellekulturkolben. På dag syv av differensiering, løsne kortikalt primede GFP-lt-NES-celler ved å tilsette 500 mikroliter trypsin og inkubere i 5 til 10 minutter ved romtemperatur.Deretter legger du til et likt volum av trypsinhemmeren etterfulgt av fem milliliter DDM-medium. Resuspender cellene, overfør forsiktig cellesuspensjonen til et 15 milliliter rør og sentrifuge i fem minutter ved 300 G.I mellomtiden overfører platen som inneholder det menneskelige vevet fra inkubatoren til hetten, og fjern to milliliter media fra toppen av innsatsen. På slutten av sentrifugeringen, fjern supernatanten, resuspender cellene i en kald, ren, kjellermembranmatrise og overfør pensjonen til et mindre rør.Samle cellesuspensjonen i en kald glasskapillær koblet til en gummismokk for suging. Injiser cellesuspensjonen som små dråper ved å stikke den halvtørre vevsskiven på forskjellige steder. La gelen stivne ved 37 grader Celsius i 30 minutter.Overfør deretter platen fra inkubatoren tilbake til hetten og tilsett forsiktig to milliliter humant voksent kortikalt medium til toppen av innsatsen for å senke vevet helt. Det akutte humane voksne kortikale vevet viste tilstedeværelse av nevroner, oligodendrocytter og astrocytter som viste optimal bevaring av vevet. Vevet viste uttrykk av nevronmarkørene NeuN og Map2 etter to ukers cellekultur.Registreringen av hele cellelappeklemmen viste at nevroner hadde opprettholdt hvilemembranpotensial og membraninngangsmotstand, sammenlignbart med nevroner fra akutte preparater. Cellene var litt mindre aktive enn i ferskt vev, selv om de fleste cellene var i stand til å skyte minst en om ikke flere aksjonspotensialer. Det akutte kortikale vevet viste uttrykk for mikrogliamarkørene Iba1 og Tmem119.Etter to uker i dyrkning ble mikroglia mindre ramifisert og fikk en mer aktivert morfologi enn i akutt vev. Fire uker etter ex vivo-transplantasjonen viste de podede GFP-lt-NES-cellene utvidede nevritter med omfattende og komplekse arboriseringer gjennom hele den organotypiske kulturen. Knapt noen podede celler overlevde i dårlig bevart vev.Rusk og uspesifikk merking av antistoffer på døde celler ble bredt observert gjennom hele det menneskelige stykket. Ved vellykket transplantasjon ble cellene funksjonelt aktive og modne nevroner viste repeterende og ofte spontane aksjonspotensialer. Rask innadgående natrium, langsomme utadgående kaliumstrømmer og et visst nivå av synaptisk aktivitet indikerer funksjonell integrasjon av transplantatet med vertsvevet fire uker etter poding.Jo raskere det menneskelige vevet behandles når det er ute av operasjonsrommet, desto høyere er systemets levedyktighet og suksessen til den eksperimentelle prosedyren.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Organotypic Cultures of Adult Human Cortex as an Ex vivo Model for Human Stem Cell Transplantation and Validation

Lentivirus-mediated Genetic Manipulation and Visualization of Olfactory Sensory Neurons in vivo

Lentivirus-mediated Genetic Manipulation and Visualization of Olfactory Sensory Neurons in vivo

Development of a precise olfactory circuit relies on accurate projection of olfactory sensory neuron (OSN) axons to their synaptic 
targets in the ...

Methods for Study of Neuronal Morphogenesis: Ex vivo RNAi Electroporation in Embryonic Murine Cerebral Cortex

Methods for Study of Neuronal Morphogenesis: Ex vivo RNAi Electroporation in Embryonic Murine Cerebral Cortex

Metoder for å studere nevrale morphogenesis:<em&gt; Ex vivo</em&gt; RNAi electroporation i Embryonic murin Cerebral Cortex

The cerebral cortex directs higher cognitive functions. This six layered structure is generated in an inside-first, outside-last manner, in which the ...

Ex vivo Culturing of Whole, Developing Drosophila Brains

Ex vivo Culturing of Whole, Developing Drosophila Brains

Ex vivo dyrking av Whole, Utviklingsland Drosophila Brains

We describe a method for ex vivo culturing of whole Drosophila brains. This can be used as a counterpoint to chronic genetic manipulations for ...

Ex vivo Live Imaging of Single Cell Divisions in Mouse Neuroepithelium

Ex vivo Live Imaging of Single Cell Divisions in Mouse Neuroepithelium

Ex vivo Levende Imaging av single celledelinger i mus neuroepithelium

We developed a system that integrates live imaging of fluorescent markers and culturing slices of embryonic mouse neuroepithelium. We took advantage of ...

Mouse Hindbrain Ex Vivo Culture to Study Facial Branchiomotor Neuron Migration

Mouse Hindbrain Ex Vivo Culture to Study Facial Branchiomotor Neuron Migration

Mus hindbrain<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Kultur å studere Facial Branchiomotor Neuron Migration

Embryonic neurons are born in the ventricular zone of the brain, but subsequently migrate to new destinations to reach appropriate targets. Deciphering ...

Feeder-free Derivation of Neural Crest Progenitor Cells from Human Pluripotent Stem Cells

Feeder-free Utledning av Neural Crest stamceller fra menneskelige pluripotent stamceller

Human pluripotent stem cells (hPSCs) have great potential for studying human embryonic development, for modeling human diseases in the dish and as a ...

Organotypic Slice Cultures to Study Oligodendrocyte Dynamics and Myelination

Organotypic skive kulturer til å studere oligodendrocyte Dynamics og myelinisering

NG2 expressing cells (polydendrocytes, oligodendrocyte precursor cells) are the fourth major glial cell population in the central nervous system. During ...

Development of a Refined Protocol for Trans-scleral Subretinal Transplantation of Human Retinal Pigment Epithelial Cells into Rat Eyes

Utvikling av en raffinert protokoll for Trans-Innbukking Subretinal transplantasjon av menneskelig netthinnens Pigment epitelceller i rotte øyne

Degenerative retinal diseases such as age-related macular degeneration (AMD) are the leading cause of irreversible vision loss worldwide. AMD is ...

Organotypic Hippocampal Slice Cultures As a Model to Study Neuroprotection and Invasiveness of Tumor Cells

Organotypic hippocampus skive kulturer som en modell å studere Neuroprotection og Invasiveness av kreftceller

In organotypic hippocampal slice cultures (OHSC), the morphological and functional characteristics of both neurons and glial cells are well preserved. ...

Modelling Zika Virus Infection of the Developing Human Brain In Vitro Using Stem Cell Derived Cerebral Organoids

Modelling Zika Virus Infection of the Developing Human Brain In Vitro Using Stem Cell Derived Cerebral Organoids

Modellering Zika virusinfeksjon på utvikle menneskelige hjerne In Vitro bruke stilk cellen avledet Cerebral Organoids

The recent emergence of Zika virus (ZIKV) in susceptible populations has led to an abrupt increase in microcephaly and other neurodevelopmental conditions ...