Name: organotypic cultures of adult human cortex as an ex vivo model for human stem cell transplantation and validation
Uploaded: 2022-12-09T13:20:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Organotypic Cultures of Adult Human Cortex as an Ex vivo Model for Human Stem Cell Transplantation and Validation at JoVE.com

Эта работа поддерживается грантами Шведского исследовательского совета, Шведского фонда мозга, Шведского фонда борьбы с инсультом, Региона Сконе, Фонда Торстена и Эльзы Сегерфальк и Инициативы правительства Швеции по стратегическим исследованиям (StemTherapy).

Этот протокол соответствует руководящим принципам, утвержденным Региональным этическим комитетом, Лунд, Швеция (номер этического разрешения 2021-07006-01). Здоровая ткань неокортекса была получена от пациентов, перенесших плановую операцию по поводу височной эпилепсии. Информированное со?...

<ol>
	<li>Kuriakose, D., Xiao, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathophysiology+and+treatment+of+stroke:+Present+status+and+future+perspectives.">Pathophysiology and treatment of stroke: Present status and future perspectives.</a> International Journal of Molecular Sciences. 21 (20), 7609 (2020).</li><li>Armstrong, M. J., Okun, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnosis+and+treatment+of+Parkinson+disease:+A+review.">Diagnosis and treatment of Parkinson disease: A review.</a> The Journal of the American Medical Association. 323 (6), 548-560 (2020).</li><li>Lindvall, O., Kokaia, Z., Martinez-Derrano, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cell+therapy+for+human+neurodegenerative+disorders-How+to+make+it+work.">Stem cell therapy for human neurodegenerative disorders-How to make it work.</a> Nature Medicine. 10, 42-50 (2004).</li><li>Reubinoff, B. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+progenitors+from+human+embryonic+stem+cells.">Neural progenitors from human embryonic stem cells.</a> Nature Biotechnology. 19 (12), 1134-1140 (2001).</li><li>Chandrasekaran, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+2D+and+3D+neural+induction+methods+for+the+generation+of+neural+progenitor+cells+from+human+induced+pluripotent+stem+cells.">Comparison of 2D and 3D neural induction methods for the generation of neural progenitor cells from human induced pluripotent stem cells.</a> Stem Cell Research. 25, 139-151 (2017).</li><li>Tornero, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+inputs+from+stroke-injured+brain+to+grafted+human+stem+cell-derived+neurons+activated+by+sensory+stimuli.">Synaptic inputs from stroke-injured brain to grafted human stem cell-derived neurons activated by sensory stimuli.</a> Brain. 140 (3), 692-706 (2017).</li><li>Palma-Tortosa, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activity+in+grafted+human+iPS+cell-derived+cortical+neurons+integrated+in+stroke-injured+rat+brain+regulates+motor+behavior.">Activity in grafted human iPS cell-derived cortical neurons integrated in stroke-injured rat brain regulates motor behavior.</a> Proceedings of the National Academy of Sciencesof the United States of America. 117 (16), 9094-9100 (2020).</li><li>Robinson, N. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+current+state+of+animal+models+in+research:+A+review.">The current state of animal models in research: A review.</a> International Journal of Surgery. 72, 9-13 (2019).</li><li>Akhtar, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+flaws+and+human+harms+of+animal+experimentation.">The flaws and human harms of animal experimentation.</a> Cambridge Quarterly Healthcare Ethics. 24 (4), 407-419 (2015).</li><li>Gonzalez-Ramos, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+stem+cell-derived+GABAergic+neurons+functionally+integrate+into+human+neuronal+networks.">Human stem cell-derived GABAergic neurons functionally integrate into human neuronal networks.</a> Scientific Reports. 11, 22050 (2021).</li><li>Noraberg, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organotypic+hippocampal+slice+cultures+for+studies+of+brain+damage,+neuroprotection+and+neurorepair.">Organotypic hippocampal slice cultures for studies of brain damage, neuroprotection and neurorepair.</a> Current Drug Targets. CNS &amp; Neurological Disorders. 4 (4), 435-452 (2005).</li><li>Delavaran, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proximity+of+brain+infarcts+to+regions+of+endogenous+neurogenesis+and+involvement+of+striatum+in+ischaemic+stroke.">Proximity of brain infarcts to regions of endogenous neurogenesis and involvement of striatum in ischaemic stroke.</a> European Journal of Neurology. 20 (3), 473-479 (2013).</li><li>Sabuncu, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+dynamics+of+cortical+and+hippocampal+atrophy+in+Alzheimer+disease.">The dynamics of cortical and hippocampal atrophy in Alzheimer disease.</a> Archives of Neurology. 68 (8), 1040-1048 (2011).</li><li>Eugene, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+organotypic+brain+slice+preparation+from+adult+patients+with+temporal+lobe+epilepsy.">An organotypic brain slice preparation from adult patients with temporal lobe epilepsy.</a> The Journal of Neuroscience Methods. 235, 234-244 (2014).</li><li>Mendes, N. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Free-floating+adult+human+brain-derived+slice+cultures+as+a+model+to+study+the+neuronal+impact+of+Alzheimer's+disease-associated+A&#946;+oligomers.">Free-floating adult human brain-derived slice cultures as a model to study the neuronal impact of Alzheimer's disease-associated A&#946; oligomers.</a> The Journal of Neuroscience Methods. 307, 203-209 (2018).</li><li>Kalmbach, B. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Signature+morpho-electric,+transcriptomic,+and+dendritic+properties+of+human+layer+5+neocortical+pyramidal+neurons.">Signature morpho-electric, transcriptomic, and dendritic properties of human layer 5 neocortical pyramidal neurons.</a> Neuron. 109 (18), 2914-2927 (2021).</li><li>Barth, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microglial+inclusions+and+neurofilament+light+chain+release+follow+neuronal+alpha-synuclein+lesions+in+long-term+brain+slice+cultures.">Microglial inclusions and neurofilament light chain release follow neuronal alpha-synuclein lesions in long-term brain slice cultures.</a> Molecular Neurodegeneration. 16 (1), 54 (2021).</li><li>Almeida, G. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+infection+by+oropouche+virus+in+adult+human+brain+slices+induces+an+inflammatory+and+toxic+response.">Neural infection by oropouche virus in adult human brain slices induces an inflammatory and toxic response.</a> Frontiers in Neuroscience. 15, 674576 (2021).</li><li>Schwarz, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+cerebrospinal+fluid+promotes+long-term+neuronal+viability+and+network+function+in+human+neocortical+organotypic+brain+slice+cultures.">Human cerebrospinal fluid promotes long-term neuronal viability and network function in human neocortical organotypic brain slice cultures.</a> Scientific Reports. 7, 12249 (2017).</li><li>Miskinyte, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+conversion+of+human+fibroblasts+to+functional+excitatory+cortical+neurons+integrating+into+human+neural+networks.">Direct conversion of human fibroblasts to functional excitatory cortical neurons integrating into human neural networks.</a> Stem Cell Research &amp; Therapy. 8 (1), 207 (2017).</li><li>Gronning Hansen, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Grafted+human+pluripotent+stem+cell-derived+cortical+neurons+integrate+into+adult+human+cortical+neural+circuitry.">Grafted human pluripotent stem cell-derived cortical neurons integrate into adult human cortical neural circuitry.</a> Stem Cells Translational Medicine. 9 (11), 1365-1377 (2020).</li><li>Falk, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Capture+of+neuroepithelial-like+stem+cells+from+pluripotent+stem+cells+provides+a+versatile+system+for+in+vitro+production+of+human+neurons.">Capture of neuroepithelial-like stem cells from pluripotent stem cells provides a versatile system for in vitro production of human neurons.</a> PLoS One. 7 (1), 29597 (2012).</li><li>Avaliani, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optogenetics+reveal+delayed+afferent+synaptogenesis+on+grafted+human-induced+pluripotent+stem+cell-derived+neural+progenitors.">Optogenetics reveal delayed afferent synaptogenesis on grafted human-induced pluripotent stem cell-derived neural progenitors.</a> Stem Cells. 32 (12), 3088-3098 (2014).</li><li>Engel, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Practice+parameter:+temporal+lobe+and+localized+neocortical+resections+for+epilepsy.">Practice parameter: temporal lobe and localized neocortical resections for epilepsy.</a> Epilepsia. 44 (6), 741-751 (2003).</li><li>Qi, X. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+brain+slice+culture:+A+useful+tool+to+study+brain+disorders+and+potential+therapeutic+compounds.">Human brain slice culture: A useful tool to study brain disorders and potential therapeutic compounds.</a> Neuroscience Bulletin. 35 (2), 244-252 (2019).</li><li>Verwer, R. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Injury+response+of+resected+human+brain+tissue+in+vitro.">Injury response of resected human brain tissue in vitro.</a> Brain Pathology. 25 (4), 454-468 (2015).</li><li>Verwer, R. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altered+loyalties+of+neuronal+markers+in+cultured+slices+of+resected+human+brain+tissue.">Altered loyalties of neuronal markers in cultured slices of resected human brain tissue.</a> Brain Pathology. 26 (4), 523-532 (2016).</li><li>Xu, L., Wang, J., Ding, Y., Wang, L., Zhu, Y. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+knowledge+of+microglia+in+traumatic+spinal+cord+injury.">Current knowledge of microglia in traumatic spinal cord injury.</a> Frontiers in Neurology. 12, 796704 (2021).</li><li>Jones, R. S., da Silva, A. B., Whittaker, R. G., Woodhall, G. L., Cunningham, M. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+brain+slices+for+epilepsy+research:+Pitfalls,+solutions+and+future+challenges.">Human brain slices for epilepsy research: Pitfalls, solutions and future challenges.</a> Journal of Neuroscience Methods. 260, 221-232 (2016).</li><li>Schwarz, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+adult+human+brain+slice+cultures+as+a+model+system+to+study+human+CNS+circuitry+and+disease.">Long-term adult human brain slice cultures as a model system to study human CNS circuitry and disease.</a> Elife. 8, 48417 (2019).</li><li>Lancaster, M. A., Knoblich, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organogenesis+in+a+dish:+Modeling+development+and+disease+using+organoid+technologies.">Organogenesis in a dish: Modeling development and disease using organoid technologies.</a> Science. 345 (6194), 1247125 (2014).</li><li>Wang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organoid+technology+for+brain+and+therapeutics+research.">Organoid technology for brain and therapeutics research.</a> CNS Neuroscience &amp; Therapeutics. 23 (10), 771-778 (2017).</li><li>Wang, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+neurological+diseases+with+human+brain+organoids.">Modeling neurological diseases with human brain organoids.</a> Frontiers in Synaptic Neuroscience. 10, 15 (2018).</li><li>Palma-Tortosa, S., Coll-San Martin, B., Kokaia, Z., Tornero, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+replacement+in+stem+cell+therapy+for+stroke:+Filling+the+gap.">Neuronal replacement in stem cell therapy for stroke: Filling the gap.</a> Frontiers in Cell and Developmental Biology. 9, 662636 (2021).</li></ol>

Получение срезов hACtx достаточно высокого качества является наиболее важным шагом в этом протоколе. Кортикальная ткань получают у пациентов с эпилепсией, перенесших резекционную операцию24. Качество резецированной ткани, а также время экспозиции ткани между резе?...

Нейродегенеративные расстройства, такие как болезнь Паркинсона, болезнь Альцгеймера или ишемический инсульт, представляют собой группу заболеваний, которые имеют общую черту нарушения работы нейронов или смерти. Они неоднородны с точки зрения пораженной области мозга и популяции нейронов. К сожалению, методы лечения этих заболеваний скудны или имеют ограниченную эффективность из-за отсутствия животных моделей, имитирующих то, что происходит в человеческом мозге 1,2. Терапия стволовыми клетками является одной из наиболее перспективных стратегий регенерации мозга3. Генерация нейронных предшественников из стволовых клеток из разных источников получила значительное развитие в последние годы 4,5. Недавние публикации показали, что индуцированные плюрипотентные стволовые (iPS) клетки человека, полученные из долгосрочных самообновляющихся нейроэпителиоподобных стволовых клеток (lt-NES), следуя протоколу корковой дифференцировки и после внутрикортикальной трансплантации в модели крысы с ишемическим инсультом, поражающим соматосенсорную кору, генерируют зрелые корковые нейроны. Кроме того, нейроны, полученные из трансплантата, получили афферентные и эфферентные синаптические связи от нейронов-хозяев, демонстрируя их интеграцию в нейронную сеть крысы 6,7. Аксоны, полученные из трансплантата, были миелинизированы и обнаружены в различных областях мозга крысы, включая периинфарктную область, мозолистое тело и контралатеральную соматосенсорную кору. Самое главное, что трансплантация iPS-клеток обратила вспять двигательный дефицит у животных, перенесших инсульт7.
Даже если животные модели помогают изучать выживаемость трансплантата, интеграцию нейронов и влияние трансплантированных клеток на двигательные и когнитивные функции, информация о взаимодействии между клетками человека (трансплантат-хозяин) в этой системе отсутствует 8,9. По этой причине здесь описан комбинированный метод длительного органотипического культивирования мозга человека с трансплантацией ex vivo нейронных предшественников, полученных из iPS-клеток человека. Органотипические культуры человеческого мозга, полученные в результате нейрохирургических резекций, являются физиологически значимыми 3D-моделями мозга, которые позволяют исследователям улучшить свое понимание схем центральной нервной системы человека и наиболее точного способа тестирования лечения заболеваний головного мозга человека. Однако в этом контексте было проведено недостаточно исследований, и в большинстве случаев использовались органотипические культуры мозга гиппокампа человека10,11. Кора головного мозга поражена несколькими нейродегенеративными расстройствами, такими как ишемический инсульт12 или болезнь Альцгеймера13, поэтому важно иметь 3D-систему коры головного мозга человека, которая позволяет нам расширять наши знания, а также тестировать и проверять различные терапевтические стратегии. В нескольких исследованиях, проведенных за последние несколько лет, использовались культуры из корковой ткани взрослого человека (hACtx) для моделирования заболеваний головного мозга человека 14,15,16,17,18,19; Тем не менее, ограниченная информация доступна в контексте терапии стволовыми клетками. Два исследования уже продемонстрировали осуществимость описанной здесь системы. В 2018 году было показано, что эмбриональные стволовые клетки человека, запрограммированные различными факторами транскрипции и трансплантированные в ткань hACtx, дают начало зрелым корковым нейронам, которые могут интегрироваться в корковые сети взрослого человека20. В 2020 году трансплантация клеток lt-NES в органотипическую систему человека выявила их способность дифференцироваться в зрелые слоеспецифические корковые нейроны с электрофизиологическими свойствами функциональных нейронов. Привитые нейроны установили как афферентные, так и эфферентные синаптические контакты с корковыми нейронами человека в срезах мозга взрослого человека, что подтверждается ретроградным моносинаптическим отслеживанием вируса бешенства, записями заклепов целых клеток и иммуноэлектронной микроскопией21.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Tissue Cutting and electrophysiology</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adenosine 5&#39;-triphosphate magnesium salt</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A9187</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bath temperature controller&#160;</td>
			<td>Luigs &#38; Neumann</td>
			<td>TC0511354</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium Chloride dihydrate</td>
			<td>Merck</td>
			<td>102382</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbogen gas</td>
			<td>Air Liquide</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cooler</td>
			<td>Julaba FL 300</td>
			<td>9661012.03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-(+)Glucose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G7021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Double Patch-Clamp amplifier</td>
			<td>HEKA electronic</td>
			<td>EPC10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Guanosine 5&#39;-Triphosphate disodium salt</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>371701</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>AppliChem</td>
			<td>A1069</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium Chloride hexahydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M2670</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium Sulfate heptahydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>230391</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Patchmaster</td>
			<td>HEKA electronic</td>
			<td>Patchmaster 2x91</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette Puller</td>
			<td>Sutter</td>
			<td>P-2000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic Petri dish</td>
			<td>Any suitable</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium chloride</td>
			<td>Merck</td>
			<td>104936</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium D-gluconate</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>B25135</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rubber teat + glass pipette</td>
			<td>Any suitable</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Bicarbonate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S5761</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S7653</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium dihydrogen phosphate monohydrate</td>
			<td>Merck</td>
			<td>106346</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S7903</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue adhesive: Acryl super glue</td>
			<td>Loctite</td>
			<td>2062278</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Upright microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>BX51WI&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vibratome&#160;</td>
			<td>Leica</td>
			<td>VT1200 S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RINSING SOLUTION</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-(+)Glucose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G7021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS (without Ca, Mg, or PhenolRed)</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>14175095</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>AppliChem</td>
			<td>A1069</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin (10,000 U/mL)</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>15-140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MANTAINANCE AND CULTURE OF HUMAN NEOCORTICAL TISSUE</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-well plate</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>140675</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alvetex scaffold 6 well insert</td>
			<td>Reinnervate Ltd</td>
			<td>AVP004-96</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27 Supplement (50x)</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>17504001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BrainPhys without Phenol Red</td>
			<td>StemCell technologies</td>
			<td>#05791</td>
			<td>Referenced as neuronal medium in the text</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter units 250 mL or 500 mL</td>
			<td>Corning Sigma</td>
			<td>CLS431096/97</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td>Any suitable</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gentamicin (50 mg/mL)</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>15750037</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutamax Supplement (100x)</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>35050061</td>
			<td>Referenced as L-glutamine in the text</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rubber teat + Glass pipette</td>
			<td>Any suitable</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GENERATION OF lt-NES cells</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-Mercaptoethanol 50 mM</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>31350010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Animal Free Recombinant EGF</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>AF-100-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27 Suplemment (50x)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>17504001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>bFGF</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>AF-100-18B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Albumin Fraction V (7.5% solution)</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>15260037</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cyclopamine, V. calcifornicum</td>
			<td>Calbiochem</td>
			<td># 239803</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D (+) Glucose solution (45%)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G8769</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D2438-10mL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM/F12</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>11320074</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Phosphate Buffer Saline (DPBS)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>14190-144</td>
			<td>Without calcium and magnesium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminin Mouse Protein, Natural</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>23017015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEM Non-essential aminoacids solutions (100x)</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>11140050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-2 Supplement (100 x)</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>17502001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poly-L-Ornithine</td>
			<td>Merk</td>
			<td>P3655</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Human BMP-4 Protein</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>314-BP-010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Human Wnt-3a Protein</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>5036-WN</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Pyruvate (100 mM)</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>11360070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soybean Trypsin Inhibitor, powder</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>17075029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile deionized water</td>
			<td>MilliQ</td>
			<td></td>
			<td>MilliQ filter system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin EDTA (0.25%)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T4049-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EQUIPMENT FOR CELL CULTURE&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adjustable volume pipettes 10, 100, 200, 1000 &#181;L</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Basement membrane matrix ESC-qualified (Matrigel)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>CLS354277-1EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Hettich Centrifugen</td>
			<td>Rotina 420R</td>
			<td>5% CO2, 37 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator</td>
			<td>ThermoForma Steri-Cult CO2</td>
			<td>HEPA Class100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stem cell cutting tool 0.190-0.210 mm</td>
			<td>Vitrolife</td>
			<td>14601</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile tubes</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Disposable Glass Pasteur Pipettes 150 mm</td>
			<td>VWR</td>
			<td>612-1701</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile pipette tips 0.1-1000 &#160;&#181;L</td>
			<td>Biotix VWR</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Serological Pipettes 5, 10, 25, 50 mL</td>
			<td>Costar</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T25 flasks Nunc</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>156367</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IMMUNOHISTOCHEMISTRY</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>488-conjugated AffinityPure Donkey anti-mouse IgG</td>
			<td>Jackson ImmunoReserach</td>
			<td>715-545-151</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>488-conjugated AffinityPure Donkey anti-rabbit IgG</td>
			<td>Jackson ImmunoReserach</td>
			<td>711-545-152</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>488-conjugated AffinityPure Donkey anti-chicken IgG</td>
			<td>Jackson ImmunoReserach</td>
			<td>703-545-155</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa fluor 647-conjugated Streptavidin</td>
			<td>Jackson ImmunoReserach</td>
			<td>016-600-084</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin</td>
			<td>Jackson ImmunoReserach</td>
			<td>001-000-162</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chicken anti-GFP</td>
			<td>Merk Millipore</td>
			<td>AB16901</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chicken anti-MAP2&#160;</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab5392</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cy3-conjugated AffinityPure Donkey anti-chicken IgG</td>
			<td>Jackson ImmunoReserach</td>
			<td>703-165-155</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cy3-conjugated AffinityPure Donkey anti-goat IgG</td>
			<td>Jackson ImmunoReserach</td>
			<td>705-165-147</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cy3-conjugated AffinityPure Donkey anti-mouse IgG</td>
			<td>Jackson ImmunoReserach</td>
			<td>715-165-151</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Diazabicyclooctane (DABCO)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D27802</td>
			<td>Mounting media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-AIF1 (C-terminal)&#160;</td>
			<td>Biorad</td>
			<td>AHP2024</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hoechst 33342</td>
			<td>Molecular Probes</td>
			<td></td>
			<td>Nuclear staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse anti-MBP&#160;</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>808402</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse anti-SC123&#160;</td>
			<td>Stem Cells Inc</td>
			<td>AB-123-U-050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal Donkey Serum</td>
			<td>Merk Millipore</td>
			<td>S30-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paint brush</td>
			<td>Any suitable</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde (PFA)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>150127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Phospate Buffer Saline, KPBS (1x)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;&#160;&#160;&#160; Distilled water</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;&#160;&#160;&#160; Potassium dihydrogen Phospate (KH2PO4)</td>
			<td>Merk Millipore</td>
			<td>104873</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;&#160;&#160;&#160; Potassium phospate dibasic (K2HPO4)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P3786</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;&#160;&#160;&#160; Sodium chloride (NaCl)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S3014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-NeuN&#160;</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab104225</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-Olig2&#160;</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab109186</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-TMEM119&#160;</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab185333</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium azide</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S2002-5G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium citrate</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; Distilled water</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; Tri-Sodium Citrate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S1804-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; Tween-20</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P1379</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>327371000&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EQUIPMENT FOR IMMUNOHISTOCHEMISTRY</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>LSM 780</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope Slides 76 mm x 26 mm</td>
			<td>VWR</td>
			<td>630-1985</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope Coverslips 24 mm x 60 mm</td>
			<td>Marienfeld</td>
			<td>107242</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope Software</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>ZEN Black edition</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rubber teat + Glass pipette</td>
			<td>Any suitable</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

organotypic cultures of adult human cortex as an ex vivo model for human stem cell transplantation and validation

Нейродегенеративные расстройства распространены и неоднородны с точки зрения их симптомов и клеточного воздействия, что затрудняет их изучение из-за отсутствия надлежащих моделей животных, которые полностью имитируют заболевания человека, и плохой доступности посмертной ткани мозга человека. Культура нервной ткани взрослого человека дает возможность изучать различные аспекты неврологических расстройств. Молекулярные, клеточные и биохимические механизмы могут быть легко рассмотрены в этой системе, а также тестирование и проверка лекарств или различных методов лечения, таких как клеточная терапия. Этот метод сочетает в себе долгосрочные органотипические культуры коры головного мозга взрослого человека, полученные от пациентов с эпилепсией, перенесших резективную операцию, и интракортикальную трансплантацию ex vivo индуцированных плюрипотентных предшественников коры, полученных из стволовых клеток. Этот метод позволит изучать выживаемость клеток, дифференцировку нейронов, формирование синаптических входов и выходов, а также электрофизиологические свойства клеток человеческого происхождения после трансплантации в интактную корковую ткань взрослого человека. Этот подход является важным шагом перед разработкой 3D-платформы моделирования заболеваний человека, которая приблизит фундаментальные исследования к клиническому переводу терапии на основе стволовых клеток для пациентов с различными неврологическими расстройствами и позволит разработать новые инструменты для реконструкции поврежденных нейронных цепей.

В соответствии с описанным протоколом ткань hACtx у пациента с височной эпилепсией была собрана и обработана, как описано выше. Несколько срезов фиксировали через 24 ч в культуре для изучения начальной точки ткани хозяина. Анализ различных популяций нервных клеток, таких как нейроны (эксп?...

Watch this Scientific Journal Video about Organotypic Cultures of Adult Human Cortex as an Ex vivo Model for Human Stem Cell Transplantation and Validation at JoVE.com

Organotypic Cultures of Adult Human Cortex as an Ex vivo Model for Human Stem Cell Transplantation and Validation

В этом протоколе описываются долгосрочные органотипические культуры коры головного мозга взрослого человека в сочетании с интракортикальной трансплантацией ex vivo индуцированных плюрипотентных предшественников коры, полученных из стволовых клеток, которые представляют собой новую методологию для дальнейшего тестирования терапии нейродегенеративных заболеваний человека на основе стволовых клеток.

Органотипические культуры коры головного мозга взрослого человека как модель ex vivo для трансплантации и валидации стволовых клеток человека

Neurodegenerative disorders are common and heterogeneous in terms of their symptoms and cellular affectation, making their study complicated due to the ...

Органотипические культуры взрослой коры головного мозга человека до сих пор являются единственной системой для тестирования терапии стволовыми клетками поврежденной коры, которая позволяет изучать взаимодействие между трансплантированными клетками человека и клетками-хозяевами. Терапия, протестированная на животных моделях, обычно терпит неудачу при переводе в клинические условия из-за различий между клетками грызунов и человека. Здесь мы можем изучать трансплантированные клетки, выживание, дифференцировку и функциональность в условиях от человека к человеку.Эта методология поможет нам понять, как работает нейронная схема в человеческом мозге, а также будет стимулировать перевод этих знаний в клинические условия для улучшения функционального восстановления после повреждения головного мозга. Продемонстрируют процедуру Ракель Мартинес-Куриэль, аспирантка, и Костанца Аретио-Медина, студентка магистратуры, обе из моей лаборатории. Для начала поместите вкладыши культуры в шестилуночную пластину с помощью щипцов в лаборатории клеточных культур под вентилируемым колпаком.Добавьте пять миллилитров кортикальной среды взрослого человека на дно вкладыша до тех пор, пока он не соприкоснется с мембраной. Избегайте образования пузырьков и добавьте два миллилитра среды поверх вкладыша. Перед тем, как перенести кусочки ткани во вкладыши, уравновесьте их в инкубаторе при температуре 37 градусов Цельсия и 5% углекислого газа в течение не менее двух часов.Соберите ткань пациента в операционной в емкость с замороженным, пузырчатым и измельченным режущим раствором. Немедленно перенесите закрытый контейнер на льду в зону резки лаборатории. Осмотрите ткань и, учитывая ориентацию кортикального слоя, найдите лучшую поверхность, чтобы приклеить ее к стадии резки вибратомы.При необходимости разрежьте неровную поверхность скальпелем, чтобы поместить ткань на сцену для оптимальной ориентации среза. Затем приклейте ткань к сцене тканевым клеем. Поместите его в камеру для нарезки и сразу же залейте холодным пузырчатым режущим раствором.Продолжайте барботирование в течение всей процедуры резки. Теперь нарежьте корональные или сагиттальные срезы в зависимости от ориентации ткани к лезвию, как описано в рукописи. Поместите срезы в камеру сбора с пузырящимся режущим раствором комнатной температуры.После того, как вся ткань будет разрезана, переложите срезы в стерильную чашку Петри с раствором для полоскания при комнатной температуре, чтобы удалить излишки сахарозы со срезов и транспортировать их в лабораторию клеточных культур. Затем поместите кусочки ткани по отдельности поверх влажных и погруженных в воду вставок. Через 24 часа смените среду, чтобы удалить оставшуюся сахарозу или другие остаточные вещества из процедуры резки.Через две недели используйте кортикальную среду взрослого человека без гентамицина. Извлеките носитель из колбы для клеточной культуры. На седьмой день дифференцировки отделяют кортикально праймированные клетки GFP-lt-NES, добавляя 500 микролитров трипсина, и инкубируют в течение 5-10 минут при комнатной температуре.Затем добавьте равный объем ингибитора трипсина, а затем пять миллилитров среды DDM. Ресуспендируйте клетки, осторожно перенесите клеточную суспензию в 15-миллилитровую пробирку и центрифугу в течение пяти минут при 300 г. Тем временем перенесите пластину, содержащую человеческую ткань, из инкубатора в капюшон и удалите два миллилитра среды из верхней части вкладыша. В конце центрифугирования удалите надосадочную жидкость, ресуспендируйте клетки в холодной, чистой матрице базальной мембраны и перенесите пенсию в меньшую пробирку.Соберите клеточную суспензию в холодный стеклянный капилляр, соединенный с резиновой соской для всасывания. Вводите клеточную суспензию в виде крошечных капель, нанося удары по полусухому срезу ткани в различных местах. Дайте гелю застыть при температуре 37 градусов Цельсия в течение 30 минут.Затем перенесите пластину из инкубатора обратно в капюшон и осторожно добавьте два миллилитра взрослой корковой среды человека в верхнюю часть вкладыша, чтобы полностью погрузить ткань. Острая корковая ткань взрослого человека показала наличие нейронов, олигодендроцитов и астроцитов, демонстрирующих оптимальную сохранность ткани. Ткань показала экспрессию нейрональных маркеров NeuN и Map2 после двух недель культивирования клеток.Запись всего клеточного пластыря показала, что нейроны имеют устойчивый мембранный потенциал покоя и сопротивление мембранного входа, сравнимые с нейронами от острых препаратов. Клетки были немного менее активны, чем в свежей ткани, хотя большинство клеток были способны запускать, по крайней мере, один, если не несколько потенциалов действия. Острая корковая ткань показала экспрессию маркеров микроглии Iba1 и Tmem119.После двух недель в культуре микроглия стала менее разветвленной и приобрела более активированную морфологию, чем в острой ткани. Через четыре недели после трансплантации ex vivo у трансплантированных клеток GFP-lt-NES наблюдались расширенные нейриты с обширными и сложными арборисациями по всей органотипической культуре. В плохо сохранившейся ткани практически не сохранилось ни одной привитой клетки.Обломки и неспецифическая маркировка антител на мертвых клетках широко наблюдались по всему срезу человека. В случае успешной трансплантации клетки становились функционально активными, а зрелые нейроны проявляли повторяющиеся и часто спонтанные потенциалы действия. Быстрый внутренний натрий, медленные наружу калиевые токи и определенный уровень синаптической активности указывают на функциональную интеграцию трансплантата с тканью хозяина через четыре недели после трансплантации.Чем быстрее обрабатывается человеческая ткань после того, как она выходит из операционной, тем выше жизнеспособность системы и успех экспериментальной процедуры.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Organotypic Cultures of Adult Human Cortex as an Ex vivo Model for Human Stem Cell Transplantation and Validation

Lentivirus-mediated Genetic Manipulation and Visualization of Olfactory Sensory Neurons in vivo

Lentivirus-mediated Genetic Manipulation and Visualization of Olfactory Sensory Neurons in vivo

Лентивирус-опосредованной генетических манипуляций и визуализация Обонятельные сенсорные нейроны В естественных условиях</em

Development of a precise olfactory circuit relies on accurate projection of olfactory sensory neuron (OSN) axons to their synaptic 
targets in the ...

Methods for Study of Neuronal Morphogenesis: Ex vivo RNAi Electroporation in Embryonic Murine Cerebral Cortex

Methods for Study of Neuronal Morphogenesis: Ex vivo RNAi Electroporation in Embryonic Murine Cerebral Cortex

Методы изучения морфогенеза нейронов:<em&gt; Ex естественных условиях</em&gt; RNAi Электропорация в эмбриональной коры головного мозга мышей

The cerebral cortex directs higher cognitive functions. This six layered structure is generated in an inside-first, outside-last manner, in which the ...

Ex vivo Culturing of Whole, Developing Drosophila Brains

Ex vivo Culturing of Whole, Developing Drosophila Brains

Экс естественных Культивирование полного Разработка Drosophila Brains

We describe a method for ex vivo culturing of whole Drosophila brains. This can be used as a counterpoint to chronic genetic manipulations for ...

Ex vivo Live Imaging of Single Cell Divisions in Mouse Neuroepithelium

Ex vivo Live Imaging of Single Cell Divisions in Mouse Neuroepithelium

Экс естественных Живая съемка Одноместный клеточных делений в мышь нейроэпителия

We developed a system that integrates live imaging of fluorescent markers and culturing slices of embryonic mouse neuroepithelium. We took advantage of ...

Mouse Hindbrain Ex Vivo Culture to Study Facial Branchiomotor Neuron Migration

Mouse Hindbrain Ex Vivo Culture to Study Facial Branchiomotor Neuron Migration

Мышь Hindbrain<em&gt; Экс Vivo</em&gt; Культура учиться на лице миграции Branchiomotor Neuron

Embryonic neurons are born in the ventricular zone of the brain, but subsequently migrate to new destinations to reach appropriate targets. Deciphering ...

Feeder-free Derivation of Neural Crest Progenitor Cells from Human Pluripotent Stem Cells

Ф-бесплатно Вывод нервного гребня клеток-предшественников из человеческих плюрипотентных стволовых клеток

Human pluripotent stem cells (hPSCs) have great potential for studying human embryonic development, for modeling human diseases in the dish and as a ...

Organotypic Slice Cultures to Study Oligodendrocyte Dynamics and Myelination

Органотипической срез культуры для изучения олигодендроцит Динамика и миелинизации

NG2 expressing cells (polydendrocytes, oligodendrocyte precursor cells) are the fourth major glial cell population in the central nervous system. During ...

Development of a Refined Protocol for Trans-scleral Subretinal Transplantation of Human Retinal Pigment Epithelial Cells into Rat Eyes

Разработка изысканный протокола для транс склеры субретинальное трансплантации эпителиальных клеток человека пигмента сетчатки глаза крыс

Degenerative retinal diseases such as age-related macular degeneration (AMD) are the leading cause of irreversible vision loss worldwide. AMD is ...

Organotypic Hippocampal Slice Cultures As a Model to Study Neuroprotection and Invasiveness of Tumor Cells

Organotypic гиппокампа ломтик культур как модель для изучения нейропротекции и инвазии опухолевых клеток

In organotypic hippocampal slice cultures (OHSC), the morphological and functional characteristics of both neurons and glial cells are well preserved. ...

Modelling Zika Virus Infection of the Developing Human Brain In Vitro Using Stem Cell Derived Cerebral Organoids

Modelling Zika Virus Infection of the Developing Human Brain In Vitro Using Stem Cell Derived Cerebral Organoids

Моделирования Зика вирус развивающегося мозга человека в пробирке с помощью стволовых клеток получены мозгового Organoids

The recent emergence of Zika virus (ZIKV) in susceptible populations has led to an abrupt increase in microcephaly and other neurodevelopmental conditions ...