Name: organotypic cultures of adult human cortex as an ex vivo model for human stem cell transplantation and validation
Uploaded: 2022-12-09T13:20:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Organotypic Cultures of Adult Human Cortex as an Ex vivo Model for Human Stem Cell Transplantation and Validation at JoVE.com

Bu çalışma, İsveç Araştırma Konseyi, İsveç Beyin Vakfı, İsveç İnme Vakfı, Bölge Skåne, Thorsten ve Elsa Segerfalk Vakfı ve İsveç Hükümeti Stratejik Araştırma Alanları Girişimi (StemTherapy) tarafından desteklenmektedir.

Bu protokol, Lund, İsveç Bölgesel Etik Komitesi tarafından onaylanan yönergeleri izler (etik izin numarası 2021-07006-01). Temporal lob epilepsisi nedeniyle elektif cerrahi uygulanan hastalardan sağlıklı neokortikal doku elde edildi. Tüm hastalardan bilgilendirilmiş onam alındı.
NOT: Elde edilen tüm dokular boyutlarına bakılmaksızın işlenmiştir. Bununla birlikte, 1-1.5mm3'ten daha küçük dokuların bir vibratomla işlenmesi ve kesilmesi teknik olarak zor olacak...

<ol>
	<li>Kuriakose, D., Xiao, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathophysiology+and+treatment+of+stroke:+Present+status+and+future+perspectives.">Pathophysiology and treatment of stroke: Present status and future perspectives.</a> International Journal of Molecular Sciences. 21 (20), 7609 (2020).</li><li>Armstrong, M. J., Okun, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnosis+and+treatment+of+Parkinson+disease:+A+review.">Diagnosis and treatment of Parkinson disease: A review.</a> The Journal of the American Medical Association. 323 (6), 548-560 (2020).</li><li>Lindvall, O., Kokaia, Z., Martinez-Derrano, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cell+therapy+for+human+neurodegenerative+disorders-How+to+make+it+work.">Stem cell therapy for human neurodegenerative disorders-How to make it work.</a> Nature Medicine. 10, 42-50 (2004).</li><li>Reubinoff, B. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+progenitors+from+human+embryonic+stem+cells.">Neural progenitors from human embryonic stem cells.</a> Nature Biotechnology. 19 (12), 1134-1140 (2001).</li><li>Chandrasekaran, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+2D+and+3D+neural+induction+methods+for+the+generation+of+neural+progenitor+cells+from+human+induced+pluripotent+stem+cells.">Comparison of 2D and 3D neural induction methods for the generation of neural progenitor cells from human induced pluripotent stem cells.</a> Stem Cell Research. 25, 139-151 (2017).</li><li>Tornero, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+inputs+from+stroke-injured+brain+to+grafted+human+stem+cell-derived+neurons+activated+by+sensory+stimuli.">Synaptic inputs from stroke-injured brain to grafted human stem cell-derived neurons activated by sensory stimuli.</a> Brain. 140 (3), 692-706 (2017).</li><li>Palma-Tortosa, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activity+in+grafted+human+iPS+cell-derived+cortical+neurons+integrated+in+stroke-injured+rat+brain+regulates+motor+behavior.">Activity in grafted human iPS cell-derived cortical neurons integrated in stroke-injured rat brain regulates motor behavior.</a> Proceedings of the National Academy of Sciencesof the United States of America. 117 (16), 9094-9100 (2020).</li><li>Robinson, N. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+current+state+of+animal+models+in+research:+A+review.">The current state of animal models in research: A review.</a> International Journal of Surgery. 72, 9-13 (2019).</li><li>Akhtar, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+flaws+and+human+harms+of+animal+experimentation.">The flaws and human harms of animal experimentation.</a> Cambridge Quarterly Healthcare Ethics. 24 (4), 407-419 (2015).</li><li>Gonzalez-Ramos, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+stem+cell-derived+GABAergic+neurons+functionally+integrate+into+human+neuronal+networks.">Human stem cell-derived GABAergic neurons functionally integrate into human neuronal networks.</a> Scientific Reports. 11, 22050 (2021).</li><li>Noraberg, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organotypic+hippocampal+slice+cultures+for+studies+of+brain+damage,+neuroprotection+and+neurorepair.">Organotypic hippocampal slice cultures for studies of brain damage, neuroprotection and neurorepair.</a> Current Drug Targets. CNS &amp; Neurological Disorders. 4 (4), 435-452 (2005).</li><li>Delavaran, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proximity+of+brain+infarcts+to+regions+of+endogenous+neurogenesis+and+involvement+of+striatum+in+ischaemic+stroke.">Proximity of brain infarcts to regions of endogenous neurogenesis and involvement of striatum in ischaemic stroke.</a> European Journal of Neurology. 20 (3), 473-479 (2013).</li><li>Sabuncu, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+dynamics+of+cortical+and+hippocampal+atrophy+in+Alzheimer+disease.">The dynamics of cortical and hippocampal atrophy in Alzheimer disease.</a> Archives of Neurology. 68 (8), 1040-1048 (2011).</li><li>Eugene, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+organotypic+brain+slice+preparation+from+adult+patients+with+temporal+lobe+epilepsy.">An organotypic brain slice preparation from adult patients with temporal lobe epilepsy.</a> The Journal of Neuroscience Methods. 235, 234-244 (2014).</li><li>Mendes, N. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Free-floating+adult+human+brain-derived+slice+cultures+as+a+model+to+study+the+neuronal+impact+of+Alzheimer's+disease-associated+A&#946;+oligomers.">Free-floating adult human brain-derived slice cultures as a model to study the neuronal impact of Alzheimer's disease-associated A&#946; oligomers.</a> The Journal of Neuroscience Methods. 307, 203-209 (2018).</li><li>Kalmbach, B. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Signature+morpho-electric,+transcriptomic,+and+dendritic+properties+of+human+layer+5+neocortical+pyramidal+neurons.">Signature morpho-electric, transcriptomic, and dendritic properties of human layer 5 neocortical pyramidal neurons.</a> Neuron. 109 (18), 2914-2927 (2021).</li><li>Barth, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microglial+inclusions+and+neurofilament+light+chain+release+follow+neuronal+alpha-synuclein+lesions+in+long-term+brain+slice+cultures.">Microglial inclusions and neurofilament light chain release follow neuronal alpha-synuclein lesions in long-term brain slice cultures.</a> Molecular Neurodegeneration. 16 (1), 54 (2021).</li><li>Almeida, G. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+infection+by+oropouche+virus+in+adult+human+brain+slices+induces+an+inflammatory+and+toxic+response.">Neural infection by oropouche virus in adult human brain slices induces an inflammatory and toxic response.</a> Frontiers in Neuroscience. 15, 674576 (2021).</li><li>Schwarz, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+cerebrospinal+fluid+promotes+long-term+neuronal+viability+and+network+function+in+human+neocortical+organotypic+brain+slice+cultures.">Human cerebrospinal fluid promotes long-term neuronal viability and network function in human neocortical organotypic brain slice cultures.</a> Scientific Reports. 7, 12249 (2017).</li><li>Miskinyte, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+conversion+of+human+fibroblasts+to+functional+excitatory+cortical+neurons+integrating+into+human+neural+networks.">Direct conversion of human fibroblasts to functional excitatory cortical neurons integrating into human neural networks.</a> Stem Cell Research &amp; Therapy. 8 (1), 207 (2017).</li><li>Gronning Hansen, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Grafted+human+pluripotent+stem+cell-derived+cortical+neurons+integrate+into+adult+human+cortical+neural+circuitry.">Grafted human pluripotent stem cell-derived cortical neurons integrate into adult human cortical neural circuitry.</a> Stem Cells Translational Medicine. 9 (11), 1365-1377 (2020).</li><li>Falk, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Capture+of+neuroepithelial-like+stem+cells+from+pluripotent+stem+cells+provides+a+versatile+system+for+in+vitro+production+of+human+neurons.">Capture of neuroepithelial-like stem cells from pluripotent stem cells provides a versatile system for in vitro production of human neurons.</a> PLoS One. 7 (1), 29597 (2012).</li><li>Avaliani, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optogenetics+reveal+delayed+afferent+synaptogenesis+on+grafted+human-induced+pluripotent+stem+cell-derived+neural+progenitors.">Optogenetics reveal delayed afferent synaptogenesis on grafted human-induced pluripotent stem cell-derived neural progenitors.</a> Stem Cells. 32 (12), 3088-3098 (2014).</li><li>Engel, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Practice+parameter:+temporal+lobe+and+localized+neocortical+resections+for+epilepsy.">Practice parameter: temporal lobe and localized neocortical resections for epilepsy.</a> Epilepsia. 44 (6), 741-751 (2003).</li><li>Qi, X. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+brain+slice+culture:+A+useful+tool+to+study+brain+disorders+and+potential+therapeutic+compounds.">Human brain slice culture: A useful tool to study brain disorders and potential therapeutic compounds.</a> Neuroscience Bulletin. 35 (2), 244-252 (2019).</li><li>Verwer, R. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Injury+response+of+resected+human+brain+tissue+in+vitro.">Injury response of resected human brain tissue in vitro.</a> Brain Pathology. 25 (4), 454-468 (2015).</li><li>Verwer, R. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altered+loyalties+of+neuronal+markers+in+cultured+slices+of+resected+human+brain+tissue.">Altered loyalties of neuronal markers in cultured slices of resected human brain tissue.</a> Brain Pathology. 26 (4), 523-532 (2016).</li><li>Xu, L., Wang, J., Ding, Y., Wang, L., Zhu, Y. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+knowledge+of+microglia+in+traumatic+spinal+cord+injury.">Current knowledge of microglia in traumatic spinal cord injury.</a> Frontiers in Neurology. 12, 796704 (2021).</li><li>Jones, R. S., da Silva, A. B., Whittaker, R. G., Woodhall, G. L., Cunningham, M. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+brain+slices+for+epilepsy+research:+Pitfalls,+solutions+and+future+challenges.">Human brain slices for epilepsy research: Pitfalls, solutions and future challenges.</a> Journal of Neuroscience Methods. 260, 221-232 (2016).</li><li>Schwarz, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+adult+human+brain+slice+cultures+as+a+model+system+to+study+human+CNS+circuitry+and+disease.">Long-term adult human brain slice cultures as a model system to study human CNS circuitry and disease.</a> Elife. 8, 48417 (2019).</li><li>Lancaster, M. A., Knoblich, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organogenesis+in+a+dish:+Modeling+development+and+disease+using+organoid+technologies.">Organogenesis in a dish: Modeling development and disease using organoid technologies.</a> Science. 345 (6194), 1247125 (2014).</li><li>Wang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organoid+technology+for+brain+and+therapeutics+research.">Organoid technology for brain and therapeutics research.</a> CNS Neuroscience &amp; Therapeutics. 23 (10), 771-778 (2017).</li><li>Wang, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+neurological+diseases+with+human+brain+organoids.">Modeling neurological diseases with human brain organoids.</a> Frontiers in Synaptic Neuroscience. 10, 15 (2018).</li><li>Palma-Tortosa, S., Coll-San Martin, B., Kokaia, Z., Tornero, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+replacement+in+stem+cell+therapy+for+stroke:+Filling+the+gap.">Neuronal replacement in stem cell therapy for stroke: Filling the gap.</a> Frontiers in Cell and Developmental Biology. 9, 662636 (2021).</li></ol>

Yeterince yüksek kalitede hACtx dilimleri elde etmek, bu protokoldeki en kritik adımdır. Rezeksiyon cerrahisi uygulanan epileptik hastalardan kortikal doku elde edilir24. Rezeke edilen dokunun kalitesi ve rezeksiyon ile kültür arasındaki dokunun maruz kalma süresi kritiktir; doku ameliyathaneden laboratuvara ne kadar hızlı aktarılır ve kesilirse, organotipik kültür o kadar optimal olur. İdeal olarak, doku kesilmeli ve toplandıktan sonraki ilk birkaç saat içinde h...

Parkinson hastalığı, Alzheimer hastalığı veya iskemik inme gibi nörodejeneratif bozukluklar, nöronal fonksiyon bozukluğu veya ölümün ortak özelliğini paylaşan bir grup hastalıktır. Etkilenen beyin bölgesi ve nöronal popülasyon açısından heterojendirler. Ne yazık ki, bu hastalıkların tedavileri, insan beyninde meydana gelenleri taklit eden hayvan modellerinin eksikliği nedeniyle kıttır veya sınırlı etkinliğe sahiptir 1,2. Kök hücre tedavisi, beyin yenilenmesi için en umut verici stratejilerden biridir3. Farklı kaynaklardan gelen kök hücrelerden nöronal progenitörlerin üretimi son yıllarda büyük ölçüde gelişmiştir 4,5. Son yayınlar, insan kaynaklı pluripotent kök (iPS) hücre kaynaklı uzun süreli kendini yenileyen nöroepitel benzeri kök (lt-NES) hücrelerinin, kortikal bir farklılaşma protokolünü takiben ve somatosensoriyel korteksi etkileyen iskemik inme ile bir sıçan modelinde intrakortikal transplantasyondan sonra, olgun kortikal nöronlar ürettiğini göstermiştir. Ek olarak, greft kaynaklı nöronlar, konakçı nöronlardan afferent ve efferent sinaptik bağlantılar aldı ve sıçan nöronal ağına entegrasyonlarını gösterdi 6,7. Greft kaynaklı aksonlar miyelinize edildi ve peri-enfarkt alanı, korpus kallozum ve kontralateral somatosensoriyel korteks dahil olmak üzere sıçan beyninin farklı bölgelerinde bulundu. En önemlisi, iPS hücre kaynaklı transplantasyon, inme hayvanlarında motor açıklarını tersine çevirdi7.
Hayvan modelleri, nakil sağkalımını, nöronal entegrasyonu ve aşılanmış hücrelerin motor ve bilişsel işlevler üzerindeki etkisini incelemeye yardımcı olsa bile, insan hücreleri (greft-konakçı) arasındaki etkileşim hakkında bilgi bu sistemde eksiktir 8,9. Bu nedenle, uzun süreli insan beyni organotipik kültürünün, insan iPS hücresi kaynaklı nöronal progenitörlerin ex vivo transplantasyonu ile kombine bir yöntemi burada tanımlanmıştır. Nöroşirürji rezeksiyonlarından elde edilen insan beyni organotipik kültürleri, araştırmacıların insan merkezi sinir sistemi devresi ve insan beyin bozuklukları için tedavileri test etmenin en doğru yolu hakkındaki anlayışlarını arttırmalarını sağlayan fizyolojik olarak ilgili 3D beyin modelleridir. Bununla birlikte, bu bağlamda yeterli araştırma yapılmamıştır ve çoğu durumda, insan hipokampal beyin organotipik kültürleri kullanılmıştır10,11. Serebral korteks, iskemik inme12 veya Alzheimer hastalığı13 gibi çeşitli nörodejeneratif bozukluklardan etkilenir, bu nedenle bilgimizi genişletmemize ve farklı terapötik stratejileri test etmemize ve doğrulamamıza izin veren bir insan kortikal 3D sistemine sahip olmak önemlidir. Son birkaç yılda yapılan birçok çalışma, insan beyin hastalıklarını modellemek için yetişkin insan kortikal (hACtx) dokusundan kültürleri kullanmıştır 14,15,16,17,18,19; ancak kök hücre tedavisi bağlamında sınırlı bilgi mevcuttur. İki çalışma, burada açıklanan sistemin fizibilitesini zaten göstermiştir. 2018 yılında, farklı transkripsiyon faktörleriyle programlanan ve hACtx dokusuna nakledilen insan embriyonik kök hücrelerinin, yetişkin insan kortikal ağlarına entegre olabilen olgun kortikal nöronlara yol açtığı gösterilmiştir20. 2020 yılında, lt-NES hücrelerinin insan organotipik sistemine transplantasyonu, fonksiyonel nöronların elektrofizyolojik özellikleri ile olgun, tabakaya özgü kortikal nöronlara farklılaşma kapasitelerini ortaya koydu. Aşılanmış nöronlar, kuduz virüsü retrograd monosinaptik izleme, tüm hücre yama-kelepçe kayıtları ve immüno-elektron mikroskobu21 ile doğrulandığı gibi, yetişkin beyin dilimlerindeki insan kortikal nöronları ile hem afferent hem de efferent sinaptik temaslar kurdu.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Tissue Cutting and electrophysiology</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adenosine 5&#39;-triphosphate magnesium salt</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A9187</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bath temperature controller&#160;</td>
			<td>Luigs &#38; Neumann</td>
			<td>TC0511354</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium Chloride dihydrate</td>
			<td>Merck</td>
			<td>102382</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbogen gas</td>
			<td>Air Liquide</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cooler</td>
			<td>Julaba FL 300</td>
			<td>9661012.03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-(+)Glucose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G7021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Double Patch-Clamp amplifier</td>
			<td>HEKA electronic</td>
			<td>EPC10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Guanosine 5&#39;-Triphosphate disodium salt</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>371701</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>AppliChem</td>
			<td>A1069</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium Chloride hexahydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M2670</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium Sulfate heptahydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>230391</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Patchmaster</td>
			<td>HEKA electronic</td>
			<td>Patchmaster 2x91</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette Puller</td>
			<td>Sutter</td>
			<td>P-2000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic Petri dish</td>
			<td>Any suitable</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium chloride</td>
			<td>Merck</td>
			<td>104936</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium D-gluconate</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>B25135</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rubber teat + glass pipette</td>
			<td>Any suitable</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Bicarbonate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S5761</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S7653</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium dihydrogen phosphate monohydrate</td>
			<td>Merck</td>
			<td>106346</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S7903</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue adhesive: Acryl super glue</td>
			<td>Loctite</td>
			<td>2062278</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Upright microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>BX51WI&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vibratome&#160;</td>
			<td>Leica</td>
			<td>VT1200 S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RINSING SOLUTION</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-(+)Glucose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G7021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS (without Ca, Mg, or PhenolRed)</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>14175095</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>AppliChem</td>
			<td>A1069</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin (10,000 U/mL)</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>15-140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MANTAINANCE AND CULTURE OF HUMAN NEOCORTICAL TISSUE</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-well plate</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>140675</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alvetex scaffold 6 well insert</td>
			<td>Reinnervate Ltd</td>
			<td>AVP004-96</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27 Supplement (50x)</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>17504001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BrainPhys without Phenol Red</td>
			<td>StemCell technologies</td>
			<td>#05791</td>
			<td>Referenced as neuronal medium in the text</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter units 250 mL or 500 mL</td>
			<td>Corning Sigma</td>
			<td>CLS431096/97</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td>Any suitable</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gentamicin (50 mg/mL)</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>15750037</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutamax Supplement (100x)</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>35050061</td>
			<td>Referenced as L-glutamine in the text</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rubber teat + Glass pipette</td>
			<td>Any suitable</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GENERATION OF lt-NES cells</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-Mercaptoethanol 50 mM</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>31350010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Animal Free Recombinant EGF</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>AF-100-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27 Suplemment (50x)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>17504001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>bFGF</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>AF-100-18B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Albumin Fraction V (7.5% solution)</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>15260037</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cyclopamine, V. calcifornicum</td>
			<td>Calbiochem</td>
			<td># 239803</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D (+) Glucose solution (45%)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G8769</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D2438-10mL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM/F12</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>11320074</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Phosphate Buffer Saline (DPBS)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>14190-144</td>
			<td>Without calcium and magnesium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminin Mouse Protein, Natural</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>23017015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEM Non-essential aminoacids solutions (100x)</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>11140050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-2 Supplement (100 x)</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>17502001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poly-L-Ornithine</td>
			<td>Merk</td>
			<td>P3655</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Human BMP-4 Protein</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>314-BP-010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Human Wnt-3a Protein</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>5036-WN</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Pyruvate (100 mM)</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>11360070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soybean Trypsin Inhibitor, powder</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>17075029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile deionized water</td>
			<td>MilliQ</td>
			<td></td>
			<td>MilliQ filter system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin EDTA (0.25%)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T4049-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EQUIPMENT FOR CELL CULTURE&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adjustable volume pipettes 10, 100, 200, 1000 &#181;L</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Basement membrane matrix ESC-qualified (Matrigel)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>CLS354277-1EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Hettich Centrifugen</td>
			<td>Rotina 420R</td>
			<td>5% CO2, 37 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator</td>
			<td>ThermoForma Steri-Cult CO2</td>
			<td>HEPA Class100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stem cell cutting tool 0.190-0.210 mm</td>
			<td>Vitrolife</td>
			<td>14601</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile tubes</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Disposable Glass Pasteur Pipettes 150 mm</td>
			<td>VWR</td>
			<td>612-1701</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile pipette tips 0.1-1000 &#160;&#181;L</td>
			<td>Biotix VWR</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Serological Pipettes 5, 10, 25, 50 mL</td>
			<td>Costar</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T25 flasks Nunc</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>156367</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IMMUNOHISTOCHEMISTRY</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>488-conjugated AffinityPure Donkey anti-mouse IgG</td>
			<td>Jackson ImmunoReserach</td>
			<td>715-545-151</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>488-conjugated AffinityPure Donkey anti-rabbit IgG</td>
			<td>Jackson ImmunoReserach</td>
			<td>711-545-152</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>488-conjugated AffinityPure Donkey anti-chicken IgG</td>
			<td>Jackson ImmunoReserach</td>
			<td>703-545-155</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa fluor 647-conjugated Streptavidin</td>
			<td>Jackson ImmunoReserach</td>
			<td>016-600-084</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin</td>
			<td>Jackson ImmunoReserach</td>
			<td>001-000-162</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chicken anti-GFP</td>
			<td>Merk Millipore</td>
			<td>AB16901</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chicken anti-MAP2&#160;</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab5392</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cy3-conjugated AffinityPure Donkey anti-chicken IgG</td>
			<td>Jackson ImmunoReserach</td>
			<td>703-165-155</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cy3-conjugated AffinityPure Donkey anti-goat IgG</td>
			<td>Jackson ImmunoReserach</td>
			<td>705-165-147</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cy3-conjugated AffinityPure Donkey anti-mouse IgG</td>
			<td>Jackson ImmunoReserach</td>
			<td>715-165-151</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Diazabicyclooctane (DABCO)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D27802</td>
			<td>Mounting media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-AIF1 (C-terminal)&#160;</td>
			<td>Biorad</td>
			<td>AHP2024</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hoechst 33342</td>
			<td>Molecular Probes</td>
			<td></td>
			<td>Nuclear staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse anti-MBP&#160;</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>808402</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse anti-SC123&#160;</td>
			<td>Stem Cells Inc</td>
			<td>AB-123-U-050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal Donkey Serum</td>
			<td>Merk Millipore</td>
			<td>S30-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paint brush</td>
			<td>Any suitable</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde (PFA)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>150127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Phospate Buffer Saline, KPBS (1x)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;&#160;&#160;&#160; Distilled water</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;&#160;&#160;&#160; Potassium dihydrogen Phospate (KH2PO4)</td>
			<td>Merk Millipore</td>
			<td>104873</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;&#160;&#160;&#160; Potassium phospate dibasic (K2HPO4)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P3786</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;&#160;&#160;&#160; Sodium chloride (NaCl)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S3014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-NeuN&#160;</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab104225</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-Olig2&#160;</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab109186</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-TMEM119&#160;</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab185333</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium azide</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S2002-5G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium citrate</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; Distilled water</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; Tri-Sodium Citrate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S1804-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; Tween-20</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P1379</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>327371000&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EQUIPMENT FOR IMMUNOHISTOCHEMISTRY</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>LSM 780</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope Slides 76 mm x 26 mm</td>
			<td>VWR</td>
			<td>630-1985</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope Coverslips 24 mm x 60 mm</td>
			<td>Marienfeld</td>
			<td>107242</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope Software</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>ZEN Black edition</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rubber teat + Glass pipette</td>
			<td>Any suitable</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

organotypic cultures of adult human cortex as an ex vivo model for human stem cell transplantation and validation

Nörodejeneratif bozukluklar, semptomları ve hücresel etkileri açısından yaygın ve heterojendir, bu da insan hastalıklarını tamamen taklit eden uygun hayvan modellerinin bulunmaması ve ölüm sonrası insan beyin dokusunun zayıf mevcudiyeti nedeniyle çalışmalarını karmaşık hale getirmektedir. Yetişkin insan sinir dokusu kültürü, nörolojik bozuklukların farklı yönlerini inceleme imkanı sunar. Moleküler, hücresel ve biyokimyasal mekanizmalar bu sistemde kolayca ele alınabilir, ayrıca ilaçları veya hücre bazlı tedaviler gibi farklı tedavileri test edebilir ve doğrulayabilir. Bu yöntem, rezeksiyonel cerrahi geçiren epileptik hastalardan elde edilen yetişkin insan korteksinin uzun süreli organotipik kültürlerini ve indüklenmiş pluripotent kök hücre kaynaklı kortikal progenitörlerin ex vivo intrakortikal transplantasyonunu birleştirir. Bu yöntem, hücre sağkalımı, nöronal farklılaşma, sinaptik girdi ve çıkışların oluşumu ve bozulmamış yetişkin insan kortikal dokusuna transplantasyondan sonra insan kaynaklı hücrelerin elektrofizyolojik özelliklerinin incelenmesine izin verecektir. Bu yaklaşım, temel araştırmayı farklı nörolojik bozuklukları olan hastalar için kök hücre tabanlı tedavilerin klinik çevirisine yaklaştıracak ve hasarlı sinir devrelerini yeniden yapılandırmak için yeni araçların geliştirilmesine izin verecek bir 3D insan hastalığı modelleme platformunun geliştirilmesinden önce önemli bir adımdır.

Tarif edilen protokolü takiben, temporal lob epilepsisi olan bir hastadan hACtx dokusu yukarıda açıklandığı gibi toplandı ve işlendi. Konakçı dokunun başlangıç noktasını incelemek için kültürde 24 saat sonra birkaç dilim sabitlendi. Nöronlar (NeuN ve Map2, Şekil 1A'yı ifade eden), oligodendrositler (Olig2 ve MBP, Şekil 1B) ve astrositler (insana özgü GFAP, ayrıca STEM123, Şekil 1C olarak da adlandırılı...

Watch this Scientific Journal Video about Organotypic Cultures of Adult Human Cortex as an Ex vivo Model for Human Stem Cell Transplantation and Validation at JoVE.com

Organotypic Cultures of Adult Human Cortex as an Ex vivo Model for Human Stem Cell Transplantation and Validation

Bu protokol, yetişkin insan korteksinin uzun süreli organotipik kültürlerini, indüklenmiş pluripotent kök hücre kaynaklı kortikal progenitörlerin ex vivo intrakortikal transplantasyonu ile birlikte tanımlamakta ve insan nörodejeneratif bozuklukları için kök hücre bazlı tedavileri daha fazla test etmek için yeni bir metodoloji sunmaktadır.

İnsan Kök Hücre Nakli ve Validasyonu için Ex vivo Model Olarak Yetişkin İnsan Korteksinin Organotipik Kültürleri

Neurodegenerative disorders are common and heterogeneous in terms of their symptoms and cellular affectation, making their study complicated due to the ...

İnsan yetişkin korteksinin organotipik kültürleri, şimdiye kadar, insan aşılanmış ve insan konakçı hücreleri arasındaki etkileşimi incelemeye izin veren hasarlı korteks için kök hücre tedavilerini test etmek için tek sistemdir. Hayvan modellerinde test edilen bir terapi, kemirgen ve insan hücreleri arasındaki farklılıklar nedeniyle klinik ortamlara çevrildiğinde genellikle başarısız olur. Burada, aşılanmış hücreleri, hayatta kalmayı, farklılaşmayı ve işlevselliği insandan insana bir ortamda inceleyebiliriz.Bu metodoloji, nöral devrenin insan beyninde nasıl çalıştığını anlamamıza yardımcı olacak ve ayrıca beyin hasarından sonra fonksiyonel iyileşmeyi iyileştirmek için bu bilginin klinik ortamlara çevrilmesini teşvik edecektir. Prosedürü gösteren, doktora öğrencisi Raquel Martinez-Curiel ve her ikisi de laboratuvarımdan yüksek lisans öğrencisi olan Costanza Aretio-Medina olacak. Başlamak için, kültür eklerini havalandırmalı bir başlığın altındaki hücre kültürü laboratuvarında forseps kullanarak altı delikli bir plakaya yerleştirin.Membranla temas edene kadar kesici ucun altına beş mililitre insan yetişkin kortikal ortam ekleyin. Kabarcık oluşumundan kaçının ve kesici ucun üstüne iki mililitre ortam ekleyin. Doku dilimlerini eklere aktarmadan önce, inkübatörde en az iki saat boyunca 37 santigrat derece ve% 5 karbondioksitte dengeleyin.Dokuyu ameliyathanedeki hastadan dondurulmuş, kabarcıklı ve ezilmiş bir kesme çözeltisi kabına toplayın. Kapalı kabı buz üzerinde hemen laboratuvarın kesme alanına aktarın. Dokuyu inceleyin ve kortikal tabakanın yönünü göz önünde bulundurarak, vibratomun kesme aşamasına yapıştırmak için en iyi yüzeyi bulun.Gerekirse, optimum dilim oryantasyonu için dokuyu sahneye yerleştirmek için düz olmayan yüzeyi neşterle kesin. Ardından, dokuyu doku yapıştırıcısı ile sahneye yapıştırın. Dilimleme odasına yerleştirin ve hemen soğuk, kabarcıklı kesme çözeltisi ile doldurun.Tüm kesme prosedürü boyunca köpürmeye devam edin. Şimdi makalede açıklandığı gibi dokudan bıçağa yönelime bağlı olarak koronal veya sagital dilimleri kesin. Dilimleri oda sıcaklığında köpüren kesme çözeltisi ile toplama odasına yerleştirin.Tüm doku kesildikten sonra, dilimlerden fazla sakkarozu çıkarmak ve hücre kültürü laboratuvarına taşımak için dilimleri oda sıcaklığında durulama çözeltisi ile steril bir Petri kabına aktarın. Daha sonra, doku dilimlerini ıslak ve batık eklerin üzerine ayrı ayrı yerleştirin. 24 saat sonra, kalan sakkaroz veya diğer artık maddeleri kesme prosedüründen çıkarmak için ortamı değiştirin.İki hafta sonra, gentamisinsiz insan yetişkin kortikal ortamı kullanın. Medyayı hücre kültürü şişesinden çıkarın. Farklılaşmanın yedinci gününde, kortikal olarak astarlanmış GFP-lt-NES hücrelerini 500 mikrolitre tripsin ekleyerek ayırın ve oda sıcaklığında 5 ila 10 dakika kuluçkaya yatırın.Daha sonra, tripsin inhibitörünün eşit bir hacmini ve ardından beş mililitre DDM ortamı ekleyin. Hücreleri yeniden askıya alın, hücre süspansiyonunu nazikçe 15 mililitrelik bir tüpe aktarın ve 300 G'de beş dakika boyunca santrifüj yapınBu arada, insan dokusunu içeren plakayı inkübatörden kaputa aktarın ve kesici ucun üstünden iki mililitre ortam çıkarın. Santrifüjlemenin sonunda, süpernatanı çıkarın, hücreleri soğuk, saf, bazal membran matrisinde yeniden askıya alın ve emekli aylığını daha küçük bir tüpe aktarın.Hücre süspansiyonunu, emme için kauçuk bir meme ucuna bağlı soğuk bir cam kılcal damara toplayın. Yarı kuru doku dilimini çeşitli bölgelere bıçaklayarak hücre süspansiyonunu küçük damlalar halinde enjekte edin. Jelin 30 dakika boyunca 37 santigrat derecede katılaşmasına izin verin.Daha sonra, plakayı inkübatörden tekrar davlumbaza aktarın ve dokuyu tamamen suya batırmak için kesici ucun üstüne dikkatlice iki mililitre insan yetişkin kortikal ortam ekleyin. Akut insan yetişkin kortikal dokusu, dokunun optimal korunmasını gösteren nöronların, oligodendrositlerin ve astrositlerin varlığını gösterdi. Doku, iki haftalık hücre kültüründen sonra nöronal belirteçler NeuN ve Map2'nin ekspresyonunu gösterdi.Tüm hücre yaması kelepçe kaydı, nöronların akut preparatlardan gelen nöronlarla karşılaştırılabilir şekilde, dinlenme zarı potansiyelini ve membran giriş direncini sürdürdüğünü gösterdi. Hücreler taze dokudan biraz daha az aktifti, ancak hücrelerin çoğu çoklu aksiyon potansiyeli olmasa da en az birini ateşleyebildi. Akut kortikal doku, mikroglial belirteçler Iba1 ve Tmem119'un ekspresyonunu gösterdi.Kültürde iki hafta sonra, mikroglia daha az ramifiye oldu ve akut dokudan daha aktif bir morfoloji kazandı. Ex vivo transplantasyondan dört hafta sonra, aşılanmış GFP-lt-NES hücreleri, tüm organotipik kültür boyunca geniş ve karmaşık arborizasyonlara sahip genişletilmiş nöritler sergiledi. Neredeyse hiç aşılanmış hücre kötü korunmuş dokuda hayatta kaldı.Enkaz ve antikorların ölü hücreler üzerindeki spesifik olmayan etiketlemesi, insan dilimi boyunca geniş çapta gözlendi. Başarılı bir transplantasyon durumunda, hücreler fonksiyonel olarak aktif hale geldi ve olgun nöronlar tekrarlayan ve sıklıkla spontan aksiyon potansiyelleri gösterdi. Hızlı içe doğru sodyum, yavaş dışa doğru potasyum akımları ve belirli bir sinaptik aktivite seviyesi, greftin aşılamadan dört hafta sonra konakçı doku ile fonksiyonel entegrasyonunu gösterir.İnsan dokusu ameliyathaneden çıktıktan sonra ne kadar hızlı işlenirse, sistemin yaşayabilirliği ve deneysel prosedürün başarısı o kadar yüksek olur.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Organotypic Cultures of Adult Human Cortex as an Ex vivo Model for Human Stem Cell Transplantation and Validation

Lentivirus-mediated Genetic Manipulation and Visualization of Olfactory Sensory Neurons in vivo

Lentivirus-mediated Genetic Manipulation and Visualization of Olfactory Sensory Neurons in vivo

Koku Duyu Nöronlar lentivirüs aracılı Genetik Manipülasyon ve Görselleştirme In vivo</em

Development of a precise olfactory circuit relies on accurate projection of olfactory sensory neuron (OSN) axons to their synaptic 
targets in the ...

Methods for Study of Neuronal Morphogenesis: Ex vivo RNAi Electroporation in Embryonic Murine Cerebral Cortex

Methods for Study of Neuronal Morphogenesis: Ex vivo RNAi Electroporation in Embryonic Murine Cerebral Cortex

Nöronal Morphogenesis Çalışması Yöntemleri:<em&gt; Ex vivo</emEmbriyonik Mürin Serebral Korteks olarak&gt; RNAi Elektroporasyon

The cerebral cortex directs higher cognitive functions. This six layered structure is generated in an inside-first, outside-last manner, in which the ...

Ex vivo Culturing of Whole, Developing Drosophila Brains

Ex vivo Culturing of Whole, Developing Drosophila Brains

Tüm ex vivo ekimi ise, Gelişmekte Drosophila Brains

We describe a method for ex vivo culturing of whole Drosophila brains. This can be used as a counterpoint to chronic genetic manipulations for ...

Ex vivo Live Imaging of Single Cell Divisions in Mouse Neuroepithelium

Ex vivo Live Imaging of Single Cell Divisions in Mouse Neuroepithelium

Ex vivo Fare neuroepithelium Tek Hücre Bölümler Canlı Görüntüleme

We developed a system that integrates live imaging of fluorescent markers and culturing slices of embryonic mouse neuroepithelium. We took advantage of ...

Mouse Hindbrain Ex Vivo Culture to Study Facial Branchiomotor Neuron Migration

Mouse Hindbrain Ex Vivo Culture to Study Facial Branchiomotor Neuron Migration

Fare Beyin<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Kültür Yüz Branchiomotor Nöron Göç Eğitim için

Embryonic neurons are born in the ventricular zone of the brain, but subsequently migrate to new destinations to reach appropriate targets. Deciphering ...

Feeder-free Derivation of Neural Crest Progenitor Cells from Human Pluripotent Stem Cells

İnsan Pluripotent dan Sinir Crest Progenitör Hücreler besleyici ücretsiz Derivasyon Kök Hücre

Human pluripotent stem cells (hPSCs) have great potential for studying human embryonic development, for modeling human diseases in the dish and as a ...

Organotypic Slice Cultures to Study Oligodendrocyte Dynamics and Myelination

Organotipik Dilim Kültürler Oligodendrosit Dinamikler ve miyelinasyonun incelemek için

NG2 expressing cells (polydendrocytes, oligodendrocyte precursor cells) are the fourth major glial cell population in the central nervous system. During ...

Development of a Refined Protocol for Trans-scleral Subretinal Transplantation of Human Retinal Pigment Epithelial Cells into Rat Eyes

Sıçan gözlerinin içine insan retina Pigment epitel hücrelerinin Trans-scleral Subretinal nakli için rafine bir protokol geliştirilmesi

Degenerative retinal diseases such as age-related macular degeneration (AMD) are the leading cause of irreversible vision loss worldwide. AMD is ...

Organotypic Hippocampal Slice Cultures As a Model to Study Neuroprotection and Invasiveness of Tumor Cells

Organotypic Hipokampal dilim kültürler çalışma Neuroprotection ve tümör hücrelerinin Invasiveness Model olarak

In organotypic hippocampal slice cultures (OHSC), the morphological and functional characteristics of both neurons and glial cells are well preserved. ...

Modelling Zika Virus Infection of the Developing Human Brain In Vitro Using Stem Cell Derived Cerebral Organoids

Modelling Zika Virus Infection of the Developing Human Brain In Vitro Using Stem Cell Derived Cerebral Organoids

Kök hücre kullanarak gelişmekte olan insan beyni Vitro Zika virüs enfeksiyonu modelleme serebral Organoids türetilmiş

The recent emergence of Zika virus (ZIKV) in susceptible populations has led to an abrupt increase in microcephaly and other neurodevelopmental conditions ...