Name: quantification of immunostained caspase-9 in retinal tissue
Uploaded: 2022-07-25T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Quantification of Immunostained Caspase-9 in Retinal Tissue at JoVE.com

Este trabajo fue apoyado por el Programa de Becas de Investigación de Posgrado de la Fundación Nacional de Ciencias (NSF-GRFP) subvención DGE - 1644869 y el Instituto Nacional de Trastornos Neurológicos y Accidentes Cerebrovasculares (NINDS) de los Institutos Nacionales de Salud (NIH), número de premio F99NS124180 NIH NINDS Diversity Specialized F99 (a CKCO), el Instituto Nacional del Ojo (NEI) 5T32EY013933 (a AMP), el Instituto Nacional de Trastornos Neurológicos y Accidentes Cerebrovasculares (RO1 NS081333, R03 NS099920 a CMT), y el Departamento de Defensa del Ejército / Fuerza Aérea (DURIP a CMT).

Este protocolo sigue la declaración de la Asociación para la Investigación en Visión y Oftalmología (ARVO) para el uso de animales en la investigación oftálmica y de la visión. Los experimentos con roedores fueron aprobados y monitoreados por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales (IACUC) de la Universidad de Columbia.
1. Preparación de tejido retiniano y criosección
<ol><li>Eutanasia a los animales mediante la administración de anestesia intraperit...

<ol>
	<li>Van Opdenbosch, N., Lamkanfi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Caspases+in+cell+death,+inflammation,+and+disease.">Caspases in cell death, inflammation, and disease.</a> Immunity. 50 (6), 1352-1364 (2019).</li><li>Ramirez, M. L. G., Salvesen, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+primer+on+caspase+mechanisms.">A primer on caspase mechanisms.</a> Seminars in Cell &amp; Developmental Biology. 82, 79-85 (2018).</li><li>Troy, C. M., Jean, Y. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Caspases:+therapeutic+targets+in+neurologic+disease.">Caspases: therapeutic targets in neurologic disease.</a> Neurotherapeutics. 12 (1), 42-48 (2015).</li><li>Avrutsky, M. I., Troy, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Caspase-9:+a+multimodal+therapeutic+target+with+diverse+cellular+expression+in+human+disease.">Caspase-9: a multimodal therapeutic target with diverse cellular expression in human disease.</a> Frontiers in Pharmacology. 12, 1728 (2021).</li><li>Fuchs, Y., Steller, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Programmed+cell+death+in+animal+development+and+disease.">Programmed cell death in animal development and disease.</a> Cell. 147 (4), 742-758 (2011).</li><li>Troy, C. M., Akpan, N., Jean, Y. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+caspases+in+the+nervous+system:+implications+for+functions+in+health+and+disease.">Regulation of caspases in the nervous system: implications for functions in health and disease.</a> Progress in Molecular Biology and Translational Science. 99, 265-305 (2011).</li><li>Avrutsky, M. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+activation+of+caspase-9+promotes+neurovascular+injury+in+retinal+vein+occlusion.">Endothelial activation of caspase-9 promotes neurovascular injury in retinal vein occlusion.</a> Nature Communications. 11 (1), 3173 (2020).</li><li>Colon Ortiz, C., Potenski, A., Lawson, J. M., Smart, J., Troy, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+the+retinal+vein+occlusion+mouse+model+to+limit+variability.">Optimization of the retinal vein occlusion mouse model to limit variability.</a> Journal of Visualized Experiments. (174), e62980 (2021).</li><li>Tisch, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Caspase-8+modulates+physiological+and+pathological+angiogenesis+during+retina+development.">Caspase-8 modulates physiological and pathological angiogenesis during retina development.</a> The Journal of Clinical Investigation. 129 (12), 5092-5107 (2019).</li><li>Chi, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HMGB1+promotes+the+activation+of+NLRP3+and+caspase-8+inflammasomes+via+NF-kappaB+pathway+in+acute+glaucoma.">HMGB1 promotes the activation of NLRP3 and caspase-8 inflammasomes via NF-kappaB pathway in acute glaucoma.</a> Journal of Neuroinflammation. 12, 137 (2015).</li><li>Thomas, C. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Caspase-2+mediates+site-specific+retinal+ganglion+cell+death+after+blunt+ocular+injury.">Caspase-2 mediates site-specific retinal ganglion cell death after blunt ocular injury.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 59 (11), 4453-4462 (2018).</li><li>Akpan, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intranasal+delivery+of+caspase-9+inhibitor+reduces+caspase-6-dependent+axon/neuron+loss+and+improves+neurological+function+after+stroke.">Intranasal delivery of caspase-9 inhibitor reduces caspase-6-dependent axon/neuron loss and improves neurological function after stroke.</a> Journal of Neuroscience. 31 (24), 8894-8904 (2011).</li><li>London, A., Benhar, I., Schwartz, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+retina+as+a+window+to+the+brain-from+eye+research+to+CNS+disorders.">The retina as a window to the brain-from eye research to CNS disorders.</a> Nature Reviews Neurology. 9 (1), 44-53 (2013).</li><li>Song, P., Xu, Y., Zha, M., Zhang, Y., Rudan, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+epidemiology+of+retinal+vein+occlusion:+a+systematic+review+and+meta-analysis+of+prevalence,+incidence,+and+risk+factors.">Global epidemiology of retinal vein occlusion: a systematic review and meta-analysis of prevalence, incidence, and risk factors.</a> Journal of Global Health. 9 (1), 010427 (2019).</li><li>Akpan, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intranasal+delivery+of+caspase-9+inhibitor+reduces+caspase-6-dependent+axon/neuron+loss+and+improves+neurological+function+after+stroke.">Intranasal delivery of caspase-9 inhibitor reduces caspase-6-dependent axon/neuron loss and improves neurological function after stroke.</a> The Journal of neuroscience. 31 (24), 8894-8904 (2011).</li><li>Gage, G. J., Kipke, D. R., Shain, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole+animal+perfusion+fixation+for+rodents.">Whole animal perfusion fixation for rodents.</a> Journal of Visualized Experiments. (65), e3564 (2012).</li><li>McStay, G. P., Salvesen, G. S., Green, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overlapping+cleavage+motif+selectivity+of+caspases:+implications+for+analysis+of+apoptotic+pathways.">Overlapping cleavage motif selectivity of caspases: implications for analysis of apoptotic pathways.</a> Cell Death &amp; Differentiation. 15 (2), 322-331 (2007).</li><li>Kuida, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduced+apoptosis+and+cytochrome+c-mediated+caspase+activation+in+mice+lacking+caspase+9.">Reduced apoptosis and cytochrome c-mediated caspase activation in mice lacking caspase 9.</a> Cell. 94 (3), 325-337 (1998).</li><li>Troy, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Death+in+the+balance:+alternative+participation+of+the+caspase-2+and+-9+pathways+in+neuronal+death+induced+by+nerve+growth+factor+deprivation.">Death in the balance: alternative participation of the caspase-2 and -9 pathways in neuronal death induced by nerve growth factor deprivation.</a> Journal of Neuroscience. 21 (14), 5007-5016 (2001).</li></ol>

Las caspasas son una familia de proteasas de varios miembros mejor estudiada por su papel en la muerte celular y la inflamación; Sin embargo, más recientemente se han descubierto una variedad de funciones no mortales para algunos miembros de la familia 4,5. Gran parte de nuestra comprensión de la función de la caspasa se deriva del trabajo en cultivo celular y de datos inferenciales de enfermedades humanas. Si bien se aprecia que hay inducción, activación o...

Las caspasas son una familia de proteasas que regulan la muerte celular del desarrollo, las respuestas inmunes y la muerte celular aberrante en la enfermedad 1,2. Si bien es bien sabido que los miembros de la familia de las caspasas son inducidos en una variedad de enfermedades neurodegenerativas, comprender qué caspasa impulsa la patología de la enfermedad es más difícil3. Tales estudios requieren herramientas para identificar, caracterizar y validar la función de los miembros individuales de la familia de caspasas. El análisis de las caspasas individuales relevantes es importante tanto desde un punto de vista mecanicista como terapéutico, ya que la literatura tiene múltiples estudios que proporcionan evidencia de los diversos roles de las caspasas 4,5. Por lo tanto, si el objetivo es apuntar a una caspasa en una enfermedad para obtener un beneficio terapéutico, es fundamental tener una orientación específica de los miembros relevantes de la familia. Las técnicas tradicionales para detectar los niveles de caspasa en el tejido incluyen Western blot y enfoques enzimáticos y fluorométricos 3,6. Sin embargo, ninguna de estas medidas permite la detección específica de células de los niveles de caspasas, y en algunos escenarios, las caspasas escindidas a menudo no pueden detectarse mediante las medidas tradicionales de análisis de proteínas. Se sabe que las caspasas pueden desempeñar diferentes funciones apoptóticas y no apoptóticas en el mismo tejido7, por lo tanto, se necesita una caracterización cuidadosa de los niveles de caspasa específicos de las células para una comprensión precisa de las vías de desarrollo y enfermedad.
Este estudio muestra la activación y función de la caspasa en un modelo de hipoxia-isquemia neurovascular - oclusión de la vena retiniana (OVR)7,8. En un tejido complejo como la retina, hay múltiples tipos de células que pueden verse afectadas por la hipoxia-isquemia inducida en la OVR, incluidas las células gliales, las neuronas y la vasculatura7. En la retina del ratón adulto, hay muy poca expresión de caspasas evidentes en el tejido sano, medida por inmunohistoquímica (IHC)7, pero ese no es el caso durante el desarrollo9 o en modelos de enfermedad retiniana10,11. IHQ es una técnica bien establecida en la investigación biomédica y ha permitido la validación de dianas patológicas y de enfermedades, la identificación de nuevos roles a través de la localización espacial y la cuantificación de proteínas. En los casos en que los productos de caspasa escindidos no puedan detectarse mediante Western blot o análisis fluorométrico, ni la ubicación celular específica de distintas caspasas o la interrogación de las vías de señalización de caspasas a través de la localización, entonces se debe usar IHQ.
Para determinar la(s) caspasa(s) funcional(es) relevante(s) en la RVO, se utilizó IHQ con anticuerpos validados para caspasas y marcadores celulares. Los estudios previos realizados en el laboratorio mostraron que la caspasa-9 se activó rápidamente en un modelo de accidente cerebrovascular isquémico e inhibición de caspasa-9 con un inhibidor altamente específico protegido de la disfunción neuronal y la muerte12. Debido a que la retina es parte del sistema nervioso central (SNC), sirve como un sistema modelo para consultar e investigar más a fondo el papel de la caspasa-9 en las lesiones neurovasculares13. Con este fin, se utilizó el modelo de ratón de RVO para estudiar la ubicación y distribución específica de la célula de la caspasa-9 y su implicación en la lesión neurovascular. La OVR es una causa común de ceguera en adultos en edad laboral que resulta de una lesión vascular14. Se encontró que la caspasa-9 se expresó de manera no apoptótica en las células endoteliales, pero no en las neuronas.
Como tejido, la retina tiene la ventaja de ser visualizada como un montaje plano, que permite la apreciación de las redes vasculares, o como secciones transversales, que resaltan las capas neuronales de la retina. La cuantificación de la expresión de la proteína caspasa en secciones transversales proporciona un contexto con respecto a qué caspasa es potencialmente crítica en la conectividad neuronal de la retina y la función de la visión mediante la identificación de la localización de la caspasa (s) en la retina. Después de la identificación y validación, la focalización de la caspasa de interés se logra mediante la deleción inducible específica de la célula de la caspasa identificada. Para posibles indagaciones terapéuticas, se probó la relevancia de las caspasas de interés utilizando herramientas específicas para inhibir la caspasa activada. Para la caspasa-9 se utilizó un inhibidor altamente selectivo 7,15 de la célula que significaba Pen1-XBIR3. Para este informe, se utilizó cepa C57BL/6J masculina de 2 meses de edad y cepa knockout endotelial 9 inducible por tamoxifeno (iEC Casp9KO) con antecedentes C57BL/6J. Estos animales fueron expuestos al modelo de ratón de RVO y C57BL / 6J fueron tratados con el inhibidor selectivo de caspasa-9, Pen1-XBir3. La metodología descrita puede ser aplicada a otros modelos de enfermedad en los sistemas central y periférico 7,15.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>anti-Caspase-7 488</td>
			<td>Novus Biologicals</td>
			<td>NB-56529AF488</td>
			<td>use at 1:150</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-cl-Caspase-9</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>9505-S</td>
			<td>use at 1:800</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-CD31</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
			<td>553370</td>
			<td>use at 1:50</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal Spinning Disc Microscope</td>
			<td>Biovision</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FIJI 2.3.0</td>
			<td>open source</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluormount G</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>50-187-88</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forcep</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-5015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>iCasp9FL/FL X VECad-CreERT2 mice</td>
			<td>lab generated</td>
			<td></td>
			<td>see Avrutsky 2020</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isolectin (594, 649)</td>
			<td>Vector</td>
			<td>DL-1207</td>
			<td>use at 1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine Hydrochloride</td>
			<td>Henry Schein</td>
			<td>NDC: 11695-0702-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Perfusion pump&#160;</td>
			<td>Masterflex</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pen1-XBir3</td>
			<td>lab generated</td>
			<td></td>
			<td>see Avrutsky 2020</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prism 9.1</td>
			<td>GraphPad</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek O.C.T.</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>14-373-65</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vis-a-View 4.0</td>
			<td>Visitron Systems</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine</td>
			<td>Akorn</td>
			<td>NDCL 59399-110-20</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

quantification of immunostained caspase-9 in retinal tissue

Se sabe que la familia de caspasas media muchas vías celulares más allá de la muerte celular, incluida la diferenciación celular, la búsqueda de caminos axonales y la proliferación. Desde la identificación de la familia de proteasas de muerte celular, se han buscado herramientas para identificar y ampliar la función de miembros específicos de la familia en estados de desarrollo, salud y enfermedad. Sin embargo, muchas de las herramientas de caspasa disponibles comercialmente actualmente que se utilizan ampliamente no son específicas para la caspasa dirigida. En este informe, delineamos el enfoque que hemos utilizado para identificar, validar y atacar la caspasa-9 en el sistema nervioso utilizando un nuevo inhibidor y enfoques genéticos con lecturas inmunohistoquímicas. Específicamente, utilizamos el tejido neuronal retiniano como modelo para identificar y validar la presencia y función de las caspasas. Este enfoque permite la interrogación de las funciones apoptóticas y no apoptóticas específicas de tipo celular caspasa-9 y se puede aplicar a otros tejidos complejos y caspasas de interés. Comprender las funciones de las caspasas puede ayudar a ampliar el conocimiento actual en biología celular, y también puede ser ventajoso para identificar posibles objetivos terapéuticos debido a su participación en la enfermedad.

El protocolo descrito permite al usuario analizar y cuantificar los niveles de caspasa-9 en el tejido retiniano. Además, presenta herramientas para identificar, validar y apuntar específicamente a la caspasa-9 y los sustratos aguas abajo. Los pasos resumidos permiten un análisis cuantificable de los niveles de caspasa y la especificidad celular en fotomicrografías fluorescentes. Todas las figuras muestran fotomicrografías representativas y cuantificación de los niveles indicados de caspasa en la retina total, las c...

Watch this Scientific Journal Video about Quantification of Immunostained Caspase-9 in Retinal Tissue at JoVE.com

Quantification of Immunostained Caspase-9 in Retinal Tissue

Aquí se presenta un protocolo detallado de inmunohistoquímica para identificar, validar y apuntar a caspasas funcionalmente relevantes en tejidos complejos.

Cuantificación de caspasa-9 inmunoteñida en tejido retiniano

The family of caspases is known to mediate many cellular pathways beyond cell death, including cell differentiation, axonal pathfinding, and ...

Este protocolo proporciona un método inmunohistoquímico detallado para identificar, validar y atacar caspasas funcionalmente relevantes en tejidos complejos. La principal ventaja de esta técnica es que permite interrogar las funciones específicas de caspasa-9 apoptóticas y no apoptóticas de tipo celular y se puede aplicar a otros tejidos complejos y caspasas de interés. Comprender las funciones de las caspasas puede ayudar a ampliar el conocimiento actual en biología celular y también puede ser ventajoso para identificar posibles objetivos terapéuticos debido a su participación en la enfermedad.Comience a cuantificar los niveles de caspasa utilizando imágenes de microscopía confocal de secciones retinianas teñidas. Para ello, arrastre los archivos de imagen de los canales 405, 470, 555 y 640 a la consola de Fiji. Haga clic en las pestañas Imagen, Color y Combinar canales para asignar colores a los archivos.A continuación, comprima la pila Z haciendo clic en la pila de imágenes y el proyecto Z. Seleccione el tipo de proyección como intensidad máxima. Abra la interfaz del canal haciendo clic en la imagen seguida de la herramienta del canal de color.A continuación, abra la interfaz de brillo y contraste. Para seleccionar los parámetros por canal, vaya a la pestaña del canal y elija un canal. Coloque el cursor encima del fondo y anote el valor del píxel.Luego coloque el cursor en la celda expresada por la caspasa y anote el valor del píxel. Para probar los parámetros, vaya a la interfaz de brillo y contraste y haga clic en seleccionar. Introduzca el valor mínimo mostrado o el valor de píxeles de la celda expresada por la caspasa.A continuación, introduzca el valor máximo mostrado o el valor del píxel de fondo antes de hacer clic en Aceptar. Elija las imágenes aleatorias del tejido cegado y repita la selección de parámetros por canal para probar los parámetros de todos los canales. Una vez establecidos los parámetros, abra los archivos de imagen y comprima la pila Z.Agregue los parámetros de brillo y contraste para el canal de caspasa y la isolectina para el canal marcador vascular. Utilice la herramienta de puntos y cuantifique el número de áreas vasculares positivas utilizando la colocalización del marcador vascular con expresión de caspasa como lectura de áreas positivas. Luego, utilizando ganchos como marcador de áreas neuronales positivas, cuantificar el número de áreas vasculares positivas.Anote los valores de una hoja de cálculo por imagen y promedie los valores por sección. Promedie los valores de sección, que serán la lectura por ojo. El protocolo identificó la localización celular de las caspasas y las capas neuronales de la retina en las que se expresan las caspasas.La sección transversal retiniana permitió la visualización de los núcleos retinianos en la capa ganglionar retiniana o RGL, capa internuclear o INL, y la capa nuclear externa o ONL cuando se tiñe con ganchos. En la sección transversal, los vasos sanguíneos retinianos aparecieron desconectados y separados suministrando las capas plexiformes entre la RGL y la INL y entre la INL y la ONL. Las secciones transversales de la retina también identificaron la caspasa-9 altamente regulada, un día después de la oclusión de la vena retiniana.La inhibición de la caspasa-9 fue más efectiva para reducir la expresión neuronal de caspasa-7 en ratones knockout de células endoteliales, lo que validó la relevancia funcional de la caspasa-9 endotelial. El análisis representativo mostró que la inhibición de la actividad de la caspasa-9 bloqueó farmacológicamente la expresión de caspasa-7 después de la oclusión de la vena retiniana. El éxito de la técnica se basa en la preparación cuidadosa del tejido, así como en la IHQ y las imágenes microscópicas para garantizar la consistencia, validez y confiabilidad de los datos.Este método podría combinarse con el análisis western blotting para la comparación semicuantitativa de la señalización de caspasas. La técnica proporcionó los pasos para interrogar la eficacia de un enfoque terapéutico dirigido a la caspasa-9 activa en la OVR. Este enfoque también se puede aplicar a otros tejidos, incluido el cerebro.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Transfection of Mouse Retinal Ganglion Cells by in vivo Electroporation

Transfection of Mouse Retinal Ganglion Cells by in vivo Electroporation

La transfección de células de ratón del ganglio de la retina por In vivo La electroporación

The targeting and refinement of RGC projections to the midbrain is a popular and powerful model system for studying how precise patterns of neural ...

Investigación

Neurociencias

Morphometric Analyses of Retinal Sections

Los análisis morfométricos de las Secciones de retina

Morphometric analyses of retinal sections have been used in examining retinal diseases. For examples, neuronal cells were significantly lost in the ...

Automated Quantification of Synaptic Fluorescence in C. elegans

Automated Quantification of Synaptic Fluorescence in C. elegans

La cuantificación automática de la fluorescencia en el Synaptic<em&gt; C. elegans</em

Synapse strength refers to the amplitude of postsynaptic responses to presynaptic neurotransmitter release events, and has a major impact on overall ...

Dissection, Culture, and Analysis of Xenopus laevis Embryonic Retinal Tissue

Dissection, Culture, and Analysis of Xenopus laevis Embryonic Retinal Tissue

Disección, Cultura y Análisis de<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; Tejido de la retina embrionaria

The process by which  the anterior region of the neural plate gives rise to the vertebrate retina  continues to be a major focus of both clinical and ...

Quantification of Filamentous Actin (F-actin) Puncta in Rat Cortical Neurons

Quantification of Filamentous Actin F-actin Puncta in Rat Cortical Neurons

La cuantificación de la actina filamentosa (F-actina) puntos lagrimales en las neuronas corticales de rata

Filamentous actin protein (F-actin) plays a major role in spinogenesis, synaptic plasticity, and synaptic stability. Changes in dendritic F-actin rich ...

Quantification of Endosome and Lysosome Motilities in Cultured Neurons Using Fluorescent Probes

Cuantificación de endosomas y de las motilidades de los lisosomas en neuronas cultivadas utilizando sondas fluorescentes

In the brain, membrane trafficking systems play important roles in regulating neuronal functions, such as neuronal morphology, synaptic plasticity, ...

Purification of H3 and H4 Histone Proteins and the Quantification of Acetylated Histone Marks in Cells and Brain Tissue

Purificación de proteínas de histona H4, H3 y la cuantificación de las marcas acetilado histonas en las células y el tejido cerebral

In all eukaryotic organisms, chromatin, the physiological template of all genetic information, is essential for heredity. Chromatin is subject to an array ...

Preparation of Mouse Retinal Cryo-sections for Immunohistochemistry

Preparación de criosecciones retinianas de ratón para inmunohistoquímica

Preparation of high-quality mouse eye sections for immunohistochemistry (IHC) is critical for assessing the retinal structure and function and for ...

Subretinal Transplantation of Human Embryonic Stem Cell-Derived Retinal Tissue in a Feline Large Animal Model

Trasplante subretiniano de tejido retiniano derivado de células madre embrionarias humanas en un modelo felino de animales grandes

Retinal degenerative (RD) conditions associated with photoreceptor loss such as age-related macular degeneration (AMD), retinitis pigmentosa (RP) and ...

A Hydrophobic Tissue Clearing Method for Rat Brain Tissue

Un método de limpieza de tejido hidrófobo para el tejido cerebral de rata

Hydrophobic tissue clearing methods are easily adjustable, fast, and low-cost procedures that allows for the study of a molecule of interest in unaltered ...