Name: syngeneic mouse orthotopic allografts to model pancreatic cancer
Uploaded: 2022-10-04T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Syngeneic Mouse Orthotopic Allografts to Model Pancreatic Cancer at JoVE.com

ברצוננו להודות למתקן בעלי החיים TUM ולמתקן ליבת ההדמיה של המחלקה לרפואה גרעינית, Klinikum rechts der Isar, על תמיכה טכנית מעולה. מחקר זה נתמך על ידי קונסורציום הסרטן הגרמני (DKTK), Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG SA 1374/4-2, DFG SA 1374/6-1, SFB 1321 Project-ID 329628492 P06, P11 ו-S01) ל-D.S., קרן וילהלם סנדר (2020.174.1 ו-2017.091.2) ל-D.S. ומועצת המחקר האירופית (ERC CoG מס' 648521, ל-D.S.).

הניסויים בבעלי חיים אושרו על ידי הוועדות המוסדיות לטיפול ושימוש בבעלי חיים (IACUCs) של הרשויות המקומיות של האוניברסיטה הטכנית של מינכן ורג'ירונג פון אוברבאיירן.
1. מידע שיש לקחת בחשבון לפני ההליך
<ol><li>להבטיח את אישור פרוטוקול בעלי החיים וכוח האדם על ידי הרשויות המקומ?...

<ol>
	<li>Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+statistics,+2020.">Cancer statistics, 2020.</a> CA: A Cancer Journal for Clinicians. 70 (1), 7-30 (2020).</li><li>Quaresma, M., Coleman, M. P., Rachet, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=40-year+trends+in+an+index+of+survival+for+all+cancers+combined+and+survival+adjusted+for+age+and+sex+for+each+cancer+in+England+and+Wales,+1971-2011:+A+population-based+study.">40-year trends in an index of survival for all cancers combined and survival adjusted for age and sex for each cancer in England and Wales, 1971-2011: A population-based study.</a> Lancet. 385 (9974), 1206-1218 (2015).</li><li>Rahib, L., Wehner, M. R., Matrisian, L. M., Nead, K. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estimated+projection+of+US+cancer+incidence+and+death+to+2040.">Estimated projection of US cancer incidence and death to 2040.</a> JAMA Network Open. 4 (4), 214708 (2021).</li><li>Schneider, G., Schmidt-Supprian, M., Rad, R., Saur, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue-specific+tumorigenesis:+Context+matters.">Tissue-specific tumorigenesis: Context matters.</a> Nature Reviews Cancer. 17 (4), 239-253 (2017).</li><li>Olive, K. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+Hedgehog+signaling+enhances+delivery+of+chemotherapy+in+a+mouse+model+of+pancreatic+cancer.">Inhibition of Hedgehog signaling enhances delivery of chemotherapy in a mouse model of pancreatic cancer.</a> Science. 324 (5933), 1457-1461 (2009).</li><li>Ruscetti, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Senescence-induced+vascular+remodeling+creates+therapeutic+vulnerabilities+in+pancreas+cancer.">Senescence-induced vascular remodeling creates therapeutic vulnerabilities in pancreas cancer.</a> Cell. 181 (2), 424-441 (2020).</li><li>Aung, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genomics-driven+precision+medicine+for+advanced+pancreatic+cancer:+Early+results+from+the+COMPASS+trial.">Genomics-driven precision medicine for advanced pancreatic cancer: Early results from the COMPASS trial.</a> Clinical Cancer Research. 24 (6), 1344-1354 (2018).</li><li>Chan-Seng-Yue, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcription+phenotypes+of+pancreatic+cancer+are+driven+by+genomic+events+during+tumor+evolution.">Transcription phenotypes of pancreatic cancer are driven by genomic events during tumor evolution.</a> Nature Genetics. 52 (2), 231-240 (2020).</li><li>Kalimuthu, S. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphological+classification+of+pancreatic+ductal+adenocarcinoma+that+predicts+molecular+subtypes+and+correlates+with+clinical+outcome.">Morphological classification of pancreatic ductal adenocarcinoma that predicts molecular subtypes and correlates with clinical outcome.</a> Gut. 69 (2), 317-328 (2020).</li><li>Hayashi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+unifying+paradigm+for+transcriptional+heterogeneity+and+squamous+features+in+pancreatic+ductal+adenocarcinoma.">A unifying paradigm for transcriptional heterogeneity and squamous features in pancreatic ductal adenocarcinoma.</a> Nature Cancer. 1 (1), 59-74 (2020).</li><li>Mueller, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolutionary+routes+and+KRAS+dosage+define+pancreatic+cancer+phenotypes.">Evolutionary routes and KRAS dosage define pancreatic cancer phenotypes.</a> Nature. 554 (7690), 62-68 (2018).</li><li>Falcomata, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+multi-kinase+inhibition+sensitizes+mesenchymal+pancreatic+cancer+to+immune+checkpoint+blockade+by+remodeling+the+tumor+microenvironment.">Selective multi-kinase inhibition sensitizes mesenchymal pancreatic cancer to immune checkpoint blockade by remodeling the tumor microenvironment.</a> Nature Cancer. 3 (3), 318-336 (2022).</li><li>Erstad, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+and+heterotopic+murine+models+of+pancreatic+cancer+and+their+different+responses+to+FOLFIRINOX+chemotherapy.">Orthotopic and heterotopic murine models of pancreatic cancer and their different responses to FOLFIRINOX chemotherapy.</a> Disease Models &amp; Mechanisms. 11 (7), (2018).</li><li>von Burstin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=E-cadherin+regulates+metastasis+of+pancreatic+cancer+in+vivo+and+is+suppressed+by+a+SNAIL/HDAC1/HDAC2+repressor+complex.">E-cadherin regulates metastasis of pancreatic cancer in vivo and is suppressed by a SNAIL/HDAC1/HDAC2 repressor complex.</a> Gastroenterology. 137 (1), 361-371 (2009).</li><li>Mallya, K., Gautam, S. K., Aithal, A., Batra, S. K., Jain, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+pancreatic+cancer+in+mice+for+experimental+therapeutics.">Modeling pancreatic cancer in mice for experimental therapeutics.</a> Biochimica et Biophysica Acta - Reviews on Cancer. 1876 (1), 188554 (2021).</li></ol>

אלושתלים אורתוטופיים סינגניים של עכברים מייצגים מודל חזק למחקרים פרה-קליניים בשל עלות-תועלתם, יכולת השחזור שלהם והליכי ניסוי פשוטים יחסית13,15. מודלים אלה לא רק מאפשרים לחקור אינטראקציות גידול-מארח, אלא גם מבטיחים את שימור ההטרוגניות הגנטית של הגידולים שמהם...

לאחרונה, PDAC הפך לגורם השלישי המוביל למוות הקשור לסרטן בעולם המערבי1. זה גורם לשיעור התמותה הגבוה ביותר מבין כל סוגי הסרטן ולשיעור הישרדות כולל של 10 שנים של ~1%, שלא השתנה במשך עשרות שנים2. בשל חוסר ההתקדמות בטיפול ב- PDAC, מחלה זו צפויה להפוך לגורם השני המוביל למוות הקשור לסרטן בעשור הבא3.
גידולי PDAC הם ישויות מורכבות המאופיינות במיקרו-סביבה גידולית מגוונת (TME) המורכבת מהרכבה הטרוגנית של רכיבי מטריצה סטרומה, כלי דם, חיסוניים וחוץ-תאיים4. הבדלים בהרכב ה-TME משפיעים על פרוגנוזה של המחלה ועל התגובה לטיפול 4,5,6. ואכן, מחקרים רבים הראו כי תת-הסוג הבסיסי והמזנכימלי של PDAC קשור ל-TME מדכא מערכת החיסון ומראה ירידה בהישרדות וחוסר תגובה לטיפולים 7,8,9,10,11,12. לכן, הבנה עמוקה יותר של ההבדלים בהרכב TME וכיצד תכונות אלה משפיעות על הביולוגיה של הגידול נותרה גורם חשוב לפיתוח טיפולים מדויקים מולקולרית. כדי להבין טוב יותר את הביולוגיה שמאחורי פנוטיפ מורכב זה ולזהות אסטרטגיות טיפוליות המסוגלות להתגבר על המחסום שה- TME של PDAC מהווה, מודלים in vivo הם הכרחיים.
היבט מרכזי עבור כל מערכת מודל פרה-קליני של סרטן הוא שהיא צריכה לחקות פנוטיפים אנושיים, לשחזר הן את ההטרוגניות הגנטית והן את הסביבה המשלבת את ריבוי אוכלוסיות הסטרומה והחיסון המרכיבות את TME. לכן, בעת בחירת מודלים עכבר למחקר פרה-קליני, יש לקחת בחשבון מספר היבטים. כדי לחקור את האינטראקציה בין הגידול למערכת החיסון, ניתן להזריק שורות תאים סרטניים תואמות היסטו לעכברים סינגניים בעלי יכולת חיסונית. ברוב המקרים, אלה מוזרקים תת עורית לתוך האגף של העכבר, המאפשר ניטור קל של הגידול על ידי מישוש או בדיקה חזותית. עם זאת, המודלים המתקבלים אינם מחקים את הצמיחה של תאים סרטניים באיבר המוצא שלהם. לכן, השתלות אורתוטופיות הפכו לתקן הזהב עבור מודלים allograft.
לאלוגרפים אורתוטופיים של עכברים יש מספר יתרונות: הם חסכוניים, ניתן ליצור אותם בהליך פשוט יחסית, והתוצאה היא מודלים עם הרכב מולקולרי ידוע, כמו גם התקדמות ופנוטיפ גידול הניתנים לשחזור וצפויים. ואכן, בעוד שמודלים של קסנוגרפט שמקורם במטופלים מייצגים את ההתנהגות של תאי PDAC אנושיים בצורה מדויקת, הצורך בהשתלה בעכברים מדוכאי חיסון כדי למנוע דחיית שתלים מגביל את ניתוח האינטראקציות בין גידול-חיסון לגידול-סטרומה, ומאפשר לחוקרים ללכוד תמונה חלקית בלבד של מורכבות גידולים אלה. לאלוגרפים אורתוטופיים סינגניים של PDAC יש יתרון בהקשר זה גם בהשוואה למודלים של עכברים מהונדסים גנטית (GEMM). GEMMs משחזרים במדויק גידולי PDAC אנושיים ואת ההטרוגניות שנצפתה בחולי PDAC. עם זאת, בגלל תכונות אלה, גידולי GEMM יכולים להראות שונות גבוהה בהרכב הגנטי שלהם, התקדמות הגידול, אגרסיביות, התמיינות היסטולוגית והרכב TME. בעוד שזה יכול להיות יתרון במחקרים מסוימים, זה מגביל מחקרי גנוטיפ לפנוטיפ ואת החקירה הממוקדת של פנוטיפים PDAC13. לכן, אלושתלים אורתוטופיים של עכברים מהווים פשרה טובה ומודל לביצוע מחקרי גידול-מארח וטיפול in vivo. מאמר זה מתאר פרוטוקול לניסויי השתלה אורתוטופיים של תאי PDAC מורינים בלבלב העכבר.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>27 G cannula</td>
			<td>B.Braun</td>
			<td>08915992</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Atipamezole (Antisedan 5 mg/mL)</td>
			<td>Orion Corporation</td>
			<td>23554.00.00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autoclip Stainless Steel Wound Clips, 9 mm</td>
			<td>Braintree Scientific</td>
			<td>NC9334081</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco`s Modified Eagle Medium&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D5796-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eye cream (Bepanthen)</td>
			<td>Bayer Vital GmbH</td>
			<td>1578675</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S0615</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fentanyl (50 &#181;g/mL)</td>
			<td>Eurovet Animal Health BV</td>
			<td>9113473</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flumazenile (Flumazenil-hameln 0.1 mg/mL)</td>
			<td>Hameln pharma</td>
			<td>09611975</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medetomidine (Sedator 1 mg/mL)</td>
			<td>Eurovet Animal Health BV</td>
			<td>400926.00.00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Meloxicam (Metacam 5 mg/mL)</td>
			<td>Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH</td>
			<td>3937902</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microliter syringe</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>HT80908</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Midazolam (5 mg/mL)</td>
			<td>Hexal</td>
			<td>00886423</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>B. Braun</td>
			<td>2737756</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Naloxone (Naloxon-hameln 0.4 mg/mL)</td>
			<td>hameln pharma</td>
			<td>04464535</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P7059-1L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P4333-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture (Ethilon)</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>9999034</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TrypZean Solution 1x</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T3449</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

syngeneic mouse orthotopic allografts to model pancreatic cancer

אדנוקרצינומה של צינור הלבלב (PDAC) היא מחלה מורכבת מאוד המאופיינת במיקרו-סביבה הטרוגנית של הגידול המורכבת ממגוון רחב של סטרומה, תאי מערכת החיסון, כלי הדם, העצבים ומרכיבי מטריצה חוץ-תאיים. במהלך השנים פותחו מודלים עכבריים שונים של PDAC כדי להתמודד עם האתגרים שמציבים התקדמותו, הפוטנציאל הגרורתי וההטרוגניות הפנוטיפית שלו. השתלות אורתוטופיות של PDAC בעכברים בעלי יכולת חיסונית הראו הבטחה טובה הודות להתקדמות הגידול המהירה והניתנת לשחזור שלהם בהשוואה למודלים של עכברים מהונדסים גנטית. יתר על כן, בשילוב עם יכולתם לחקות את התכונות הביולוגיות שנצפו ב- PDAC אוטוכתוני, מודלים של עכברי אלוגרפט אורתוטופיים מבוססי קו תאים מאפשרים ניסויים בקנה מידה גדול in vivo . לפיכך, מודלים אלה נמצאים בשימוש נרחב במחקרים פרה-קליניים לניתוח גנוטיפ-פנוטיפ מהיר וניתוח תגובה לתרופות. מטרת פרוטוקול זה היא לספק גישה ניתנת לשחזור וחזקה להזרקה מוצלחת של תרביות תאי PDAC ראשוניים של עכברים ללבלב של עכברים מושתלים סינגניים. בנוסף לפרטים הטכניים, ניתן מידע חשוב שיש לקחת בחשבון לפני ביצוע ניסויים אלה.

בהקשר של מחקר בקנה מידה גדול של תגובה לתרופות, השתלנו בהצלחה יותר מ-170 עכברים (עכברים מושתלי C75Bl6/J, מין עכברים זכר ונקבה שהותאמו לשורות תאי PDAC שהוזרקו) באמצעות הפרוטוקול המתואר לעיל, שהודגם בשלבים העיקריים שלו באיור 112. בפרוטוקול זה, השתלנו אורתוטופית שלושה קווי ...

Watch this Scientific Journal Video about Syngeneic Mouse Orthotopic Allografts to Model Pancreatic Cancer at JoVE.com

Syngeneic Mouse Orthotopic Allografts to Model Pancreatic Cancer

אלושתלים אורתוטופיים סינגניים של אדנוקרצינומה צינורית הלבלב (PDAC) משחזרים את הביולוגיה, הפנוטיפים והתגובות הטיפוליות של תת-סוגי מחלות. בשל התקדמות הגידול המהירה והניתנת לשחזור, הם נמצאים בשימוש נרחב במחקרים פרה-קליניים. כאן, אנו מראים שיטות עבודה נפוצות ליצירת מודלים אלה, הזרקת תרביות PDAC מורין סינגני לתוך הלבלב.

Syngeneic Mouse Orthotopic Allografts למודל סרטן הלבלב

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) is a very complex disease characterized by a heterogeneous tumor microenvironment made up of a diverse stroma, ...

פרוטוקול זה מספק מודלים של PDAC in vivo הניתנים לשחזור, בעלי יכולת חיסונית, המתאימים למחקרי גנוטיפ, פנוטיפ ותגובה לתרופות. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא יכולתה לסייע בחקירת התקדמות הגידול עם מיקרו-סביבה ביולוגית סינגנית של הגידול תוך שמירה על יכולת השחזור של הניסוי. מי שידגימו את ההליך יהיו סטפני ברתל וקיארה פלקומטה, שתיהן מהמעבדה שלנו.התחל את הכנת תאי הגידול על ידי שטיפת אדנוקרצינומה צינורית הלבלב, או תאי PDAC, גדל בבקבוק תרבית T75 עם מלח חוצץ פוספט או PBS. לאחר מכן להוסיף 0.5 מיליליטר של טריפסין במשך חמש עד 10 דקות כדי לנתק מן הצלוחית. יש להשהות מחדש את התאים המנותקים ב-10 מיליליטר DMEM עם 10% נסיוב בקר עוברי, או FBS, ו-0.1% פניצילין סטרפטומיצין לפני העברת תרחיף התאים לצינור של 15 מיליליטר.צנטריפוגו את מתלה התא ב-200G למשך חמש דקות ושאפו את הסופרנטנט. להשעות מחדש את גלולת התא ב- DMEM ללא תוספים, בהתבסס על הריכוז הסופי הנדרש של התאים להזרקה. ספרו את התאים ב-10 מיקרוליטר של השעיית תאים, באמצעות תא נויבאואר וחשבו את מספר התאים הזמינים.מעבירים מיליליטר אחד של התרחיף המדולל, לפי הריכוז הסופי הנדרש, לצינור של 1.5 מיליליטר. הניחו את הצינור על מסובב עד להשתלה כדי למנוע צבירת תאים. להשתלה אורתוטופית של תאי PDAC, יש למרוח קרם עיניים על העכבר בזמן שהעכבר ישן.בדוק את analgosedation מספיק לפני גילוח האגף השמאלי לטרלי הבטן של העכבר analgosedated. הניחו את העכבר, שוכב על צד ימין, על משטח חימום סטרילי והדביקו את הרגליים אל פני השטח. ללבוש כפפות חדשות ולחטא אותם.בעזרת מספריים כירורגיים, חותכים כסנטימטר אחד של העור ורקמת שומן תת עורית לאורך בצד שמאל שבו הטחול מוקרן. באמצעות מספריים ומלקחיים, להפריד את העור מן הצפק כדי לקבל גישה קלה יותר הצפק. שנה את זוג מספריים לפני פתיחת הצפק במיקום הטחול עם חתך אורכי של סנטימטר אחד.בעת גיוס הטחול והלבלב המחובר באמצעות מלקחיים קהים ועדינים, יש לוודא שהאיברים אינם מחוברים לרקמות אחרות. בדוק גם את כלי הדם המספקים כדי למנוע פגיעה בכלי הדם או ברקמה שמסביב בעת הטיפול בלבלב. משכו בזהירות את הלבלב מהחתך כדי לאפשר גישה קלה יותר לזנב האיבר והתבוננו בטחול בעקבות הלבלב.ודא כי האיבר אינו מקופל במהלך ההזרקה ואת הקפסולה של האיבר מוחזק תחת מתח באתר חדירת המחט כדי למנוע שפיכה. יש לכוון לחתיכת רקמת לבלב בין כלי הדם הנראים לעין כדי למזער את הסיכון לניקוב או הזרקת כלי הדם. בעזרת היד הדומיננטית, חודרים בזהירות לקפסולת האיבר עם צינורית 27 מד ומזרק 50 מיקרוליטר בעקבות ציר האורך של האיבר.לאחר הזרקת 20 מיקרוליטר של השעיה המכילה 2, 500 תאים לאזור הזנב של הלבלב, לשמור את הלבלב ואת מזרק מוכנס עדיין במשך כדקה אחת כדי למנוע שפיכת תאי הגידול. לאחר מכן, הסר את המחט מאתר ההזרקה. לאחר מכן, בזהירות לארגן מחדש את האיברים בתוך הבטן מבלי לפגוע ברקמה כדי למנוע שפיכת התאים.הימנע הידבקות איברים על ידי שפיכת מיליליטר אחד של 0.9% נתרן כלורי על האיברים. לאחר תפירת הצפק בטכניקת התפר הקטוע הפשוטה, סגור את העור באמצעות שניים עד שלושה אטבי פצע נירוסטה תשעה מ"מ. ואז אנטגוניזם את analgosedation עם midazolam, medetomadine, ופנטניל, או MMF, עם הזרקה תת עורית של AFN על פי משקל הגוף של העכבר.לאחר שתסיים, הכנס את העכבר לתא מחומם של 37 מעלות צלזיוס עד שהוא ער ופעיל לחלוטין. החזירו את העכבר הפעיל לכלוב המקורי ועקבו אחר מצבו הבריאותי של העכבר על ידי בדיקת הפרווה, צבע העור והפעילות, וחזרו על הפעולה שלוש עד ארבע שעות לאחר הניתוח. ב-MRI של עכבר מושתל, השתלת תאי PDAC מיששה את הבטן מוקדם ביותר בערך שבעה ימים לאחר הניתוח, תלוי במספר התאים שהוזרקו ובמאפייני האגרסיביות והגדילה של קו התאים המחוסן.הישרדותם של העכברים המושתלים שהתקבלה השתנתה בהתאם לתכונות הפנימיות של תאי הגידול של קווי התא. זריקות תוך לבלב מוצלחות הובילו לגידולים מלאים בלבלב העכבר. לעומת זאת, השתלות לא מוצלחות גרמו להיעדר גידולים בלבלב בגלל הזרקה של תאים שאינם ברי קיימא, דחייה של התאים המושתלים או הזרקה של מספר לא מספיק של תאים.זכרו לשים לב לא לשפוך תאים במהלך הזריקות ולא לפגוע ברקמה שמסביב כדי למנוע תאים להתפשט בתוך הבטן. לאחר הליך זה, מחקרי in vivo, כמו מחקרי תגובה פרה-קליניים לתרופות, יכולים להתבצע בעכברים בעלי יכולת חיסונית, ולאחר מכן, למשל, עובדות, ריצוף או ניתוח היסטולוגי כדי לחקור אינטראקציות בין מארחי גידולים.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Fluorescent Orthotopic Mouse Model of Pancreatic Cancer

Fluorescent Orthotopic Mouse Model of Pancreatic Cancer Video (Video) | JoVE

דגם פלורסנט Orthotopic עכבר של סרטן הלבלב

Pancreatic cancer remains one of the cancers for which survival has not improved substantially in the last few decades. Only 7% of diagnosed patients will ...

A Syngeneic Mouse Model of Metastatic Renal Cell Carcinoma for Quantitative and Longitudinal Assessment of Preclinical Therapies

A Syngeneic Mouse Model of Metastatic Renal Cell Carcinoma for Quantitative and Longitudinal Assessment of Preclinical Therapies Video (Video) | JoVE

קרצינומה תא syngeneic עכבר הדגם של גרורתי כליות עבור הערכה כמותית אורך ורוחב של טיפולים פרה-קליניים

Renal cell carcinoma (RCC) affects &#62; 60,000 people in the United States annually, and ~ 30% of RCC patients have multiple metastases at the time of ...

Isolation of Circulating Tumor Cells in an Orthotopic Mouse Model of Colorectal Cancer

Isolation of Circulating Tumor Cells in an Orthotopic Mouse Model of Colorectal Cancer Video (Video) | JoVE

בידוד של תאים סרטניים במחזור מודל עכבר אורתופטי של סרטן המעי הגס

Despite the advantages of easy applicability and cost-effectiveness, subcutaneous mouse models have severe limitations and do not accurately simulate ...

A Syngeneic Pancreatic Cancer Mouse Model to Study the Effects of Irreversible Electroporation

דגם העכבר סרטן הלבלב Syngeneic ללמוד את השפעות בלתי הפיכות אלקטרופורציה

Pancreatic cancer (PC), a disease which kills approximately 40,000 patients each year in the US, has successfully evaded several therapeutic approaches ...

A Bioluminescent and Fluorescent Orthotopic Syngeneic Murine Model of Androgen-dependent and Castration-resistant Prostate Cancer

דגם Syngeneic Orthotopic זוהרים, פלורסנט מאתר של סירוס עמידים ו אנדרוגן תלויי סרטן הערמונית

Orthotopic tumor modeling is a valuable tool for pre-clinical prostate cancer research, as it has multiple advantages over both subcutaneous and ...

Immunophenotyping of Orthotopic Homograft (Syngeneic) of Murine Primary KPC Pancreatic Ductal Adenocarcinoma by Flow Cytometry

Immunophenotyping of Orthotopic Homograft Syngeneic of Murine Primary KPC Pancreatic Ductal Adenocarcinoma by Flow Cytometry

Immunophenotyping של Orthotopic מאותו מין (Syngeneic) של KPC העיקרי מאתר אדנוקרצינומה Ductal הלבלב על ידי Cytometry זרימה

Homograft (syngeneic) tumors are the workhorse of today&#39;s immuno-oncology (I/O) preclinical research. The tumor microenvironment (TME), particularly ...

Orthotopic Transplantation of Syngeneic Lung Adenocarcinoma Cells to Study PD-L1 Expression

Orthotopic השתלת ריאות Syngeneic תאים אדנוקרצינומה ללמוד ביטוי PD-L1

The use of mouse models is indispensable for studying the pathophysiology of various diseases. With respect to lung cancer, several models are available, ...

A Syngeneic Mouse B-Cell Lymphoma Model for Pre-Clinical Evaluation of CD19 CAR T Cells

עכבר Syngeneic B-Cell לימפומה מודל להערכת קליניים בתאי T המכונית CD19

The astonishing clinical success of CD19 chimeric antigen receptor (CAR) T-cell therapy has led to the approval of two second generation chimeric antigen ...

Studying Triple Negative Breast Cancer Using Orthotopic Breast Cancer Model

לומדת משולשת סרטן השד שלילי באמצעות אורתובנושא שד סרטן השד מודל

Triple-negative breast cancer (TNBC) is an aggressive breast cancer subtype with limited therapeutic options. When compared to patients with less ...

Ultrasound-Guided Orthotopic Implantation of Murine Pancreatic Ductal Adenocarcinoma

אולטרה סאונד-הדרכה אורתודפית של הלבלב מורלין אדנוקרצינומה

The recent success of immune checkpoint blockade in melanoma and lung adenocarcinoma has galvanized the field of immuno-oncology as well as revealed the ...