Name: syngeneic mouse orthotopic allografts to model pancreatic cancer
Uploaded: 2022-10-04T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Syngeneic Mouse Orthotopic Allografts to Model Pancreatic Cancer at JoVE.com

TUM hayvan tesisine ve Nükleer Tıp Anabilim Dalı Klinikum rechts der Isar'ın görüntüleme çekirdek tesisine mükemmel teknik destek için teşekkür ederiz. Bu çalışma Alman Kanser Konsorsiyumu (DKTK), Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG SA 1374/4-2, DFG SA 1374/6-1, SFB 1321 Project-ID 329628492 P06, P11 ve S01) tarafından D.S.'ye, Wilhelm Sander-Stiftung (2020.174.1 ve 2017.091.2) tarafından D.S.'ye ve Avrupa Araştırma Konseyi (ERC CoG No. 648521, D.S.) tarafından desteklenmiştir.

Hayvan deneyleri, Münih Teknik Üniversitesi ve Regierung von Oberbayern yerel makamlarının kurumsal hayvan bakım ve kullanım komiteleri (IACUC'ler) tarafından onaylandı.
1. İşlemden önce dikkat edilmesi gereken bilgiler
<ol><li>Herhangi bir hayvan deneyine başlamadan önce hayvan protokolünün ve personelinin yerel yetkililer tarafından onaylanmasını sağlayın.</li>
	<li>Alıcı fareleri seçin.<ol><li>İmplantasyon için benzer yaştaki fareleri seçin (2 a...

<ol>
	<li>Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+statistics,+2020.">Cancer statistics, 2020.</a> CA: A Cancer Journal for Clinicians. 70 (1), 7-30 (2020).</li><li>Quaresma, M., Coleman, M. P., Rachet, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=40-year+trends+in+an+index+of+survival+for+all+cancers+combined+and+survival+adjusted+for+age+and+sex+for+each+cancer+in+England+and+Wales,+1971-2011:+A+population-based+study.">40-year trends in an index of survival for all cancers combined and survival adjusted for age and sex for each cancer in England and Wales, 1971-2011: A population-based study.</a> Lancet. 385 (9974), 1206-1218 (2015).</li><li>Rahib, L., Wehner, M. R., Matrisian, L. M., Nead, K. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estimated+projection+of+US+cancer+incidence+and+death+to+2040.">Estimated projection of US cancer incidence and death to 2040.</a> JAMA Network Open. 4 (4), 214708 (2021).</li><li>Schneider, G., Schmidt-Supprian, M., Rad, R., Saur, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue-specific+tumorigenesis:+Context+matters.">Tissue-specific tumorigenesis: Context matters.</a> Nature Reviews Cancer. 17 (4), 239-253 (2017).</li><li>Olive, K. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+Hedgehog+signaling+enhances+delivery+of+chemotherapy+in+a+mouse+model+of+pancreatic+cancer.">Inhibition of Hedgehog signaling enhances delivery of chemotherapy in a mouse model of pancreatic cancer.</a> Science. 324 (5933), 1457-1461 (2009).</li><li>Ruscetti, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Senescence-induced+vascular+remodeling+creates+therapeutic+vulnerabilities+in+pancreas+cancer.">Senescence-induced vascular remodeling creates therapeutic vulnerabilities in pancreas cancer.</a> Cell. 181 (2), 424-441 (2020).</li><li>Aung, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genomics-driven+precision+medicine+for+advanced+pancreatic+cancer:+Early+results+from+the+COMPASS+trial.">Genomics-driven precision medicine for advanced pancreatic cancer: Early results from the COMPASS trial.</a> Clinical Cancer Research. 24 (6), 1344-1354 (2018).</li><li>Chan-Seng-Yue, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcription+phenotypes+of+pancreatic+cancer+are+driven+by+genomic+events+during+tumor+evolution.">Transcription phenotypes of pancreatic cancer are driven by genomic events during tumor evolution.</a> Nature Genetics. 52 (2), 231-240 (2020).</li><li>Kalimuthu, S. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphological+classification+of+pancreatic+ductal+adenocarcinoma+that+predicts+molecular+subtypes+and+correlates+with+clinical+outcome.">Morphological classification of pancreatic ductal adenocarcinoma that predicts molecular subtypes and correlates with clinical outcome.</a> Gut. 69 (2), 317-328 (2020).</li><li>Hayashi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+unifying+paradigm+for+transcriptional+heterogeneity+and+squamous+features+in+pancreatic+ductal+adenocarcinoma.">A unifying paradigm for transcriptional heterogeneity and squamous features in pancreatic ductal adenocarcinoma.</a> Nature Cancer. 1 (1), 59-74 (2020).</li><li>Mueller, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolutionary+routes+and+KRAS+dosage+define+pancreatic+cancer+phenotypes.">Evolutionary routes and KRAS dosage define pancreatic cancer phenotypes.</a> Nature. 554 (7690), 62-68 (2018).</li><li>Falcomata, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+multi-kinase+inhibition+sensitizes+mesenchymal+pancreatic+cancer+to+immune+checkpoint+blockade+by+remodeling+the+tumor+microenvironment.">Selective multi-kinase inhibition sensitizes mesenchymal pancreatic cancer to immune checkpoint blockade by remodeling the tumor microenvironment.</a> Nature Cancer. 3 (3), 318-336 (2022).</li><li>Erstad, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+and+heterotopic+murine+models+of+pancreatic+cancer+and+their+different+responses+to+FOLFIRINOX+chemotherapy.">Orthotopic and heterotopic murine models of pancreatic cancer and their different responses to FOLFIRINOX chemotherapy.</a> Disease Models &amp; Mechanisms. 11 (7), (2018).</li><li>von Burstin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=E-cadherin+regulates+metastasis+of+pancreatic+cancer+in+vivo+and+is+suppressed+by+a+SNAIL/HDAC1/HDAC2+repressor+complex.">E-cadherin regulates metastasis of pancreatic cancer in vivo and is suppressed by a SNAIL/HDAC1/HDAC2 repressor complex.</a> Gastroenterology. 137 (1), 361-371 (2009).</li><li>Mallya, K., Gautam, S. K., Aithal, A., Batra, S. K., Jain, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+pancreatic+cancer+in+mice+for+experimental+therapeutics.">Modeling pancreatic cancer in mice for experimental therapeutics.</a> Biochimica et Biophysica Acta - Reviews on Cancer. 1876 (1), 188554 (2021).</li></ol>

Sinjenik fare ortotopik allogreftleri, maliyet etkinlikleri, tekrarlanabilirlikleri ve nispeten basit deneysel prosedürleri nedeniyle klinik öncesi çalışmalar için sağlam bir model oluşturmaktadır13,15. Bu modeller sadece tümör-konakçı etkileşimlerinin incelenmesine izin vermekle kalmaz, aynı zamanda deney için birincil fare hücre kültürleri kullanıldığında ortaya çıktıkları tümörlerin genetik heterojenliğinin korunmasını da garant...

Son zamanlarda, PDAC batı dünyasında kansere bağlı ölümlerin üçüncü önde gelen nedeni haline geldi1. Tüm kanserler arasında en yüksek ölüm oranına ve on yıllardır değişmeyen ~% 1'lik 10 yıllık genel sağkalım oranına neden olur2. PDAC tedavisinde ilerleme kaydedilmemesi nedeniyle, bu hastalığın önümüzdeki on yılda kansere bağlı ölümlerin ikinci önde gelen nedeni haline gelmesi beklenmektedir3.
PDAC tümörleri, stroma, vasküler, immün ve hücre dışı matriks bileşenlerinin heterojen bir birleşiminden oluşan çeşitli tümör mikroçevresi (TME) ile karakterize kompleks antitelerdir4. TME'nin bileşimindeki farklılıklar hastalık prognozunu ve tedaviye yanıtı etkiler 4,5,6. Gerçekten de, birçok çalışma, PDAC'nin bazal benzeri, mezenkimal alt tipinin yüksek immünsüpresif bir TME ile ilişkili olduğunu ve sağkalımın azaldığını ve tedavilere yanıt eksikliğini gösterdiğini göstermiştir 7,8,9,10,11,12. Bu nedenle, TME kompozisyonundaki farklılıkların ve bu özelliklerin tümör biyolojisini nasıl etkilediğinin daha iyi anlaşılması, moleküler olarak kesin tedavilerin geliştirilmesi için önemli bir faktör olmaya devam etmektedir. Bu karmaşık fenotipin arkasındaki biyolojiyi daha iyi anlamak ve PDAC TME'sinin oluşturduğu engeli aşabilecek terapötik stratejileri tanımlamak için, in vivo modeller vazgeçilmezdir.
Herhangi bir kanser preklinik model sistemi için kilit bir husus, insan fenotiplerini taklit etmesi, hem genetik heterojenliği hem de TME'yi oluşturan çok sayıda stromal ve immün popülasyonu içeren ortamı özetlemesidir. Bu nedenle, klinik öncesi araştırmalar için fare modellerini seçerken, çeşitli hususlar dikkate alınmalıdır. Tümör-immün etkileşimini araştırmak için, histouyumlu kanser hücre hatları sinjenik immünokompetan farelere enjekte edilebilir. Çoğu durumda, bunlar farenin yan tarafına deri altından enjekte edilir ve palpasyon veya görsel muayene ile kolay tümör izlemesi sağlar. Bununla birlikte, ortaya çıkan modeller, menşe organlarındaki tümör hücrelerinin büyümesini taklit etmez. Bu nedenle ortotopik transplantasyonlar allogreft modelleri için altın standart haline gelmiştir.
Fare ortotopik allogreftlerinin birçok avantajı vardır: uygun maliyetlidirler, nispeten basit bir prosedürle üretilebilirler ve bilinen moleküler yapıya sahip modellerin yanı sıra tekrarlanabilir ve öngörülebilir bir tümör progresyonu ve fenotipine sahip modellerle sonuçlanırlar. Gerçekten de, hasta kaynaklı ksenogreft modelleri, insan PDAC hücrelerinin davranışını doğru bir şekilde temsil ederken, greft reddini önlemek için immün yetmezlikli farelere implantasyon ihtiyacı, tümör-immün ve tümör-stroma etkileşimlerinin analizini sınırlayarak, araştırmacıların bu tümörlerin karmaşıklığının yalnızca kısmi bir görüntüsünü yakalamalarına izin verir. PDAC'nin sinjenik ortotopik allogreftleri, genetiği değiştirilmiş fare modellerine (GEMM'ler) kıyasla bu konuda da avantajlıdır. GEMM'ler insan PDAC tümörigenezini ve PDAC hastalarında gözlenen heterojeniteyi doğru bir şekilde özetler. Ancak bu özelliklerinden dolayı GEMM tümörleri genetik yapılarında, tümör progresyonunda, agresifliğinde, histolojik farklılaşmasında ve TME kompozisyonunda yüksek varyans gösterebilir. Bu, bazı çalışmalarda bir avantaj olsa da, genotip-fenotip çalışmalarını ve PDAC fenotiplerinin odaklanmış araştırmasını sınırlar13. Bu nedenle fare ortotopik allogreftleri, tümör-konakçı ve tedavi çalışmalarını in vivo olarak gerçekleştirmek için iyi bir denge ve model oluşturmaktadır. Bu yazıda, murin PDAC hücrelerinin fare pankreasına ortotopik transplantasyon deneyleri için bir protokol özetlenmiştir.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>27 G cannula</td>
			<td>B.Braun</td>
			<td>08915992</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Atipamezole (Antisedan 5 mg/mL)</td>
			<td>Orion Corporation</td>
			<td>23554.00.00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autoclip Stainless Steel Wound Clips, 9 mm</td>
			<td>Braintree Scientific</td>
			<td>NC9334081</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco`s Modified Eagle Medium&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D5796-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eye cream (Bepanthen)</td>
			<td>Bayer Vital GmbH</td>
			<td>1578675</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S0615</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fentanyl (50 &#181;g/mL)</td>
			<td>Eurovet Animal Health BV</td>
			<td>9113473</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flumazenile (Flumazenil-hameln 0.1 mg/mL)</td>
			<td>Hameln pharma</td>
			<td>09611975</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medetomidine (Sedator 1 mg/mL)</td>
			<td>Eurovet Animal Health BV</td>
			<td>400926.00.00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Meloxicam (Metacam 5 mg/mL)</td>
			<td>Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH</td>
			<td>3937902</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microliter syringe</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>HT80908</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Midazolam (5 mg/mL)</td>
			<td>Hexal</td>
			<td>00886423</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>B. Braun</td>
			<td>2737756</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Naloxone (Naloxon-hameln 0.4 mg/mL)</td>
			<td>hameln pharma</td>
			<td>04464535</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P7059-1L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P4333-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture (Ethilon)</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>9999034</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TrypZean Solution 1x</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T3449</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

syngeneic mouse orthotopic allografts to model pancreatic cancer

Pankreatik duktal adenokarsinom (PDAC), çeşitli stroma, immün hücreler, damarlar, sinirler ve hücre dışı matriks bileşenlerinden oluşan heterojen bir tümör mikroçevresi ile karakterize çok karmaşık bir hastalıktır. Yıllar geçtikçe, ilerlemesinin, metastatik potansiyelinin ve fenotipik heterojenliğinin yarattığı zorlukları ele almak için farklı PDAC fare modelleri geliştirilmiştir. PDAC'nin immünkompetan fare ortotopik allogreftleri, genetiği değiştirilmiş fare modellerine kıyasla hızlı ve tekrarlanabilir tümör progresyonları nedeniyle iyi bir umut vaat etmektedir. Ayrıca, otokton PDAC'de gözlenen biyolojik özellikleri taklit etme yetenekleriyle birlikte, hücre çizgisi tabanlı ortotopik allogreft fare modelleri, büyük ölçekli in vivo deneylere olanak tanır. Bu nedenle, bu modeller hızlı genotip-fenotip ve ilaç-yanıt analizleri için klinik öncesi çalışmalarda yaygın olarak kullanılmaktadır. Bu protokolün amacı, birincil fare PDAC hücre kültürlerini sinjenik alıcı farelerin pankreasına başarılı bir şekilde enjekte etmek için tekrarlanabilir ve sağlam bir yaklaşım sağlamaktır. Teknik detayların yanı sıra bu deneyleri yapmadan önce dikkat edilmesi gereken önemli bilgiler de verilmektedir.

Büyük ölçekli bir ilaç yanıtı çalışması bağlamında, yukarıda açıklanan protokolü kullanarak, Şekil 112'deki ana adımlarında örneklenen 170'ten fazla fareyi (C75Bl6 / J alıcı fareler, enjekte edilen PDAC hücre hatlarıyla eşleşen erkek ve dişi farelerin cinsiyeti) başarıyla implante ettik. Bu protokolde, üç KrasG12D güdümlü PDAC hücre hattını (PDAC 1 ve 2: Ptf1aCre / +; LSL-KrasG12D/+; L...

Watch this Scientific Journal Video about Syngeneic Mouse Orthotopic Allografts to Model Pancreatic Cancer at JoVE.com

Syngeneic Mouse Orthotopic Allografts to Model Pancreatic Cancer

Pankreatik duktal adenokarsinomun (PDAC) sinjenik fare ortotopik allogreftleri, hastalık alt tiplerinin biyolojisini, fenotiplerini ve terapötik yanıtlarını özetler. Hızlı, tekrarlanabilir tümör progresyonları nedeniyle, preklinik çalışmalarda yaygın olarak kullanılmaktadırlar. Burada, pankreasa sinjenik murin PDAC kültürleri enjekte ederek bu modelleri oluşturmak için ortak uygulamalar gösteriyoruz.

Pankreas Kanserini Modellemek için Sinjenik Fare Ortotopik Allogreftleri

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) is a very complex disease characterized by a heterogeneous tumor microenvironment made up of a diverse stroma, ...

Bu protokol, genotip, fenotip ve ilaç yanıtı çalışmaları için uygun, tekrarlanabilir, immünokompetan PDAC in vivo modelleri sağlar. Bu tekniğin temel avantajı, deneyin tekrarlanabilirliğini korurken, sinjenik bir biyolojik tümör mikroçevresi ile tümör ilerlemesini araştırmaya yardımcı olma yeteneğidir. Prosedürü gösteren, her ikisi de laboratuvarımızdan olan Stefanie Barthel ve Chiara Falcomata olacaktır.Bir T75 kültür şişesinde yetiştirilen pankreatik duktal adenokarsinomu veya PDAC hücrelerini fosfat tamponlu salin veya PBS ile yıkayarak tümör hücrelerinin hazırlanmasına başlayın. Ardından, şişeden ayırmak için beş ila 10 dakika boyunca 0,5 mililitre tripsin ekleyin. Hücre süspansiyonunu 15 mililitrelik bir tüpe aktarmadan önce,% 10 fetal sığır serumu veya FBS ve% 0.1 penisilin streptomisin ile 10 mililitre DMEM'deki ayrılmış hücreleri tekrar askıya alın.Hücre süspansiyonunu 200G'de beş dakika boyunca santrifüj edin ve süpernatanı aspire edin. DMEM'deki hücre peletini, enjeksiyon için hücrelerin gerekli son konsantrasyonuna dayanarak, katkı maddeleri olmadan tekrar askıya alın. Neubauer Odası'nı kullanarak 10 mikrolitre hücre süspansiyonundaki hücreleri sayın ve mevcut hücrelerin sayısını hesaplayın.Seyreltilmiş süspansiyonun bir mililitresini, gerekli son konsantrasyona göre, 1,5 mililitrelik bir tüpe aktarın. Hücre agregasyonunu önlemek için tüpü implantasyona kadar bir rotatöre yerleştirin. PDAC hücrelerinin ortotopik implantasyonu için, fare uyurken analgosedate fareye göz kremi uygulayın.Analgozasyonlu farenin sol lateral karın kanadını tıraş etmeden önce yeterli analgozasyonu kontrol edin. Sağ tarafta yatan fareyi steril bir ısıtma paspasına yerleştirin ve bacakları yüzeye bantlayın. Yeni eldivenler giyin ve dezenfekte edin.Cerrahi makas kullanarak, dalağın yansıtıldığı sol kanatta derinin ve deri altı yağ dokusunun yaklaşık bir santimetresini uzunlamasına kesin. Makas ve forseps kullanarak, peritona daha kolay erişmek için cildi peritondan ayırın. Bir santimetre uzunlamasına kesimle dalağın bulunduğu yerde peritonu açmadan önce makas çiftini değiştirin.Dalağı ve bağlı pankreası künt, ince uçlu forseps kullanarak mobilize ederken, organların diğer dokulara bağlı olmadığından emin olun. Ayrıca, pankreası tutarken damarlara veya çevresindeki dokuya zarar vermemek için tedarik eden kan damarlarını kontrol edin. Organın kuyruğuna daha kolay erişim sağlamak için pankreası dikkatlice insizyondan çekin ve pankreası takip eden dalağı gözlemleyin.Enjeksiyon sırasında organın katlanmadığından ve dökülmeyi önlemek için organın kapsülünün iğne penetrasyon bölgesinde gerginlik altında tutulduğundan emin olun. Damarın delinmesi veya enjekte edilmesi riskini en aza indirmek için görünür kan damarları arasında bir pankreas dokusu parçası hedefleyin. Baskın eli kullanarak, organın kapsülüne, organın uzunlamasına eksenini takip eden 27 gauge kanül ve 50 mikrolitrelik bir şırınga ile dikkatlice nüfuz edin.2.500 hücre içeren 20 mikrolitrelik süspansiyonu pankreasın kuyruk bölgesine enjekte ettikten sonra, tümör hücrelerinin dökülmesini önlemek için pankreası ve yerleştirilen şırıngayı yaklaşık bir dakika boyunca sabit tutun. Ardından, iğneyi enjeksiyon bölgesinden çıkarın. Daha sonra, hücrelerin dökülmesini önlemek için dokuya zarar vermeden karın içindeki organları dikkatlice yeniden düzenleyin.Organlara bir mililitre% 0.9 sodyum klorür dökerek organ yapışmasını önleyin. Basit kesilmiş dikiş tekniğini kullanarak periton diktikten sonra, iki ila üç dokuz milimetre paslanmaz çelik yara klipsi kullanarak cildi kapatın. Daha sonra analgosedasyonu midazolam, medetomadin ve fentanil veya MMF ile, farenin vücut ağırlığına göre deri altı AFN enjeksiyonu ile antagonize edin.İşiniz bittiğinde, fareyi uyanık ve tamamen aktif olana kadar 37 santigrat derece ısıtılmış bir odaya yerleştirin. Aktif fareyi orijinal kafesine geri yerleştirin ve kürkü, ten rengini ve aktivitesini kontrol ederek farenin sağlık durumunu izleyin ve ameliyattan üç ila dört saat sonra tekrarlayın. İmplante edilmiş farenin MRG'sinde, PDAC hücrelerinin engraftasyonu, enjekte edilen hücre sayısına ve aşılanan hücre hattının agresifliğine ve büyüme özelliklerine bağlı olarak, ameliyattan yaklaşık yedi gün sonra en erken karın palpe edildi.Elde edilen implante farelerin sağkalımı, hücre hatlarının tümör hücresi intrinsik özelliklerine bağlı olarak değişmiştir. Başarılı pankreas içi enjeksiyonlar, fare pankreasında tam gelişmiş tümörlere yol açtı. Buna karşılık, başarısız implantasyonlar, canlı olmayan hücrelerin enjeksiyonu, implante edilen hücrelerin reddedilmesi veya yetersiz sayıda hücrenin enjeksiyonu nedeniyle pankreas tümörlerinin yokluğuna neden olmuştur.Enjeksiyonlar sırasında herhangi bir hücreyi dökmemeye ve hücrelerin karın içine yayılmasını önlemek için çevredeki dokulara zarar vermemeye dikkat etmeyi unutmayın. Bu prosedürü takiben, klinik öncesi ilaç yanıt çalışmaları gibi in vivo çalışmalar, immünkompetan farelerde gerçekleştirilebilir, ardından tümör konakçı etkileşimlerini araştırmak için örneğin gerçekler, dizileme veya histolojik analiz yapılabilir.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Fluorescent Orthotopic Mouse Model of Pancreatic Cancer

Fluorescent Orthotopic Mouse Model of Pancreatic Cancer Video (Video) | JoVE

Pankreas Kanseri Floresan Ortotopik Fare Modeli

Pancreatic cancer remains one of the cancers for which survival has not improved substantially in the last few decades. Only 7% of diagnosed patients will ...

A Syngeneic Mouse Model of Metastatic Renal Cell Carcinoma for Quantitative and Longitudinal Assessment of Preclinical Therapies

Preklinik Tedaviler Nicel ve Boyuna Değerlendirme A sinjeneik Fare Modeli Yapmış Bir Renal Hücreli Karsinom

Renal cell carcinoma (RCC) affects &#62; 60,000 people in the United States annually, and ~ 30% of RCC patients have multiple metastases at the time of ...

Isolation of Circulating Tumor Cells in an Orthotopic Mouse Model of Colorectal Cancer

Kolorektal kanserli bir Ortotopik Fare Modelinde Dolaşan Tümör Hücrelerinin İzolasyonu

Despite the advantages of easy applicability and cost-effectiveness, subcutaneous mouse models have severe limitations and do not accurately simulate ...

A Syngeneic Pancreatic Cancer Mouse Model to Study the Effects of Irreversible Electroporation

Geri dönüşü olmayan Elektroporasyon etkilerini incelemek için bir Syngeneic pankreas kanseri fare modeli

Pancreatic cancer (PC), a disease which kills approximately 40,000 patients each year in the US, has successfully evaded several therapeutic approaches ...

A Bioluminescent and Fluorescent Orthotopic Syngeneic Murine Model of Androgen-dependent and Castration-resistant Prostate Cancer

Kollarındaki ve floresan Orthotopic Syngeneic fare modeli androjen bağlı ve kısırlaştırma dayanıklı prostat kanseri

Orthotopic tumor modeling is a valuable tool for pre-clinical prostate cancer research, as it has multiple advantages over both subcutaneous and ...

Immunophenotyping of Orthotopic Homograft (Syngeneic) of Murine Primary KPC Pancreatic Ductal Adenocarcinoma by Flow Cytometry

Immunophenotyping of Orthotopic Homograft Syngeneic of Murine Primary KPC Pancreatic Ductal Adenocarcinoma by Flow Cytometry

Orthotopic Homogref (Syngeneic) fare birincil KPC pankreas duktal adenokarsinom, akış sitometresi tarafından Immunophenotyping

Homograft (syngeneic) tumors are the workhorse of today&#39;s immuno-oncology (I/O) preclinical research. The tumor microenvironment (TME), particularly ...

Orthotopic Transplantation of Syngeneic Lung Adenocarcinoma Cells to Study PD-L1 Expression

Orthotopic nakli PD-L1 ifade çalışmaya Syngeneic akciğer adenokarsinom hücre

The use of mouse models is indispensable for studying the pathophysiology of various diseases. With respect to lung cancer, several models are available, ...

A Syngeneic Mouse B-Cell Lymphoma Model for Pre-Clinical Evaluation of CD19 CAR T Cells

Syngeneic fare B hücreli lenfoma manken CD19 araba T hücrelerinin önceden klinik değerlendirme için

The astonishing clinical success of CD19 chimeric antigen receptor (CAR) T-cell therapy has led to the approval of two second generation chimeric antigen ...

Studying Triple Negative Breast Cancer Using Orthotopic Breast Cancer Model

Ortotopik Meme Kanseri Modeli Kullanarak Üçlü Negatif Meme Kanseri Eğitimi

Triple-negative breast cancer (TNBC) is an aggressive breast cancer subtype with limited therapeutic options. When compared to patients with less ...

Ultrasound-Guided Orthotopic Implantation of Murine Pancreatic Ductal Adenocarcinoma

Murine Pankreatik Duktal Adenokarsinomun Ultrason Eşliğinde Ortotopik İmplantasyonu

The recent success of immune checkpoint blockade in melanoma and lung adenocarcinoma has galvanized the field of immuno-oncology as well as revealed the ...