Name: technical applications of microelectrode array and patch clamp recordings on human induced pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes
Uploaded: 2022-08-04T14:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Technical Applications of Microelectrode Array and Patch Clamp Recordings on Human Induced Pluripotent Stem Cell-Derived Cardiomyocytes at JoVE.com

אנו מודים לבלייק וו על הגהת כתב היד. עבודה זו נתמכה על ידי המכונים הלאומיים לבריאות (NIH) R01 HL113006, R01 HL141371, R01 HL163680, R01 HL141851, U01FD005978, ונאס"א NNX16A069A (JCW), ו 872244 מלגת פוסט-דוקטורט של AHA (GMP).

1. הכנת מדיה ופתרונות
<ol><li>הכן מדיום תחזוקה hiPSC-CM על ידי ערבוב בקבוק 10 מ"ל של תוסף 50x B27 ו 500 מ"ל של RPMI 1640 בינוני. יש לאחסן את המדיום בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס ולהשתמש בו תוך חודש. יש לאזן את הטמפרטורה הבינונית עד לטמפרטורת החדר (RT) לפני השימוש.</li>
	<li>הכן מדיום זריעה hiPSC-CM על ידי ערבוב 20 מ"...

<ol>
	<li>Wouters, O. J., McKee, M., Luyten, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estimated+research+and+development+investment+needed+to+bring+a+new+medicine+to+market,+2009-2018.">Estimated research and development investment needed to bring a new medicine to market, 2009-2018.</a> Journal of the American Medical Association. 323 (9), 844-853 (2020).</li><li>Pang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Workshop+report:+FDA+workshop+on+improving+cardiotoxicity+assessment+with+human-relevant+platforms.">Workshop report: FDA workshop on improving cardiotoxicity assessment with human-relevant platforms.</a> Circulation Research. 125 (9), 855-867 (2019).</li><li>Mamoshina, P., Rodriguez, B., Bueno-Orovio, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toward+a+broader+view+of+mechanisms+of+drug+cardiotoxicity.">Toward a broader view of mechanisms of drug cardiotoxicity.</a> Cell Reports Medicine. 2 (3), 100216 (2021).</li><li>Paik, D. T., Chandy, M., Wu, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patient+and+disease-specific+induced+pluripotent+stem+cells+for+discovery+of+personalized+cardiovascular+drugs+and+therapeutics.">Patient and disease-specific induced pluripotent stem cells for discovery of personalized cardiovascular drugs and therapeutics.</a> Pharmacological Reviews. 72 (1), 320-342 (2020).</li><li>Kaese, S., Verheule, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+electrophysiology+in+mice:+a+matter+of+size.">Cardiac electrophysiology in mice: a matter of size.</a> Frontiers in Physiology. 3, 345 (2012).</li><li>Clark, W. A., Chizzonite, R. A., Everett, A. W., Rabinowitz, M., Zak, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Species+correlations+between+cardiac+isomyosins.+A+comparison+of+electrophoretic+and+immunological+properties.">Species correlations between cardiac isomyosins. A comparison of electrophoretic and immunological properties.</a> Journal of Biological Chemistry. 257 (10), 5449-5454 (1982).</li><li>Werfel, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+circular+RNAs+in+human,+mouse,+and+rat+hearts.">Characterization of circular RNAs in human, mouse, and rat hearts.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 98, 103-107 (2016).</li><li>Burridge, P. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemically+defined+generation+of+human+cardiomyocytes.">Chemically defined generation of human cardiomyocytes.</a> Nature Methods. 11 (8), 855-860 (2014).</li><li>Sharma, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Derivation+of+highly+purified+cardiomyocytes+from+human+induced+pluripotent+stem+cells+using+small+molecule-modulated+differentiation+and+subsequent+glucose+starvation.">Derivation of highly purified cardiomyocytes from human induced pluripotent stem cells using small molecule-modulated differentiation and subsequent glucose starvation.</a> Journal of Visualized Experiments. (97), e52628 (2015).</li><li>Itzhaki, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modelling+the+long+QT+syndrome+with+induced+pluripotent+stem+cells.">Modelling the long QT syndrome with induced pluripotent stem cells.</a> Nature. 471 (7337), 225-229 (2011).</li><li>Lan, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Abnormal+calcium+handling+properties+underlie+familial+hypertrophic+cardiomyopathy+pathology+in+patient-specific+induced+pluripotent+stem+cells.">Abnormal calcium handling properties underlie familial hypertrophic cardiomyopathy pathology in patient-specific induced pluripotent stem cells.</a> Cell Stem Cell. 12 (1), 101-113 (2013).</li><li>Wu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modelling+diastolic+dysfunction+in+induced+pluripotent+stem+cell-derived+cardiomyocytes+from+hypertrophic+cardiomyopathy+patients.">Modelling diastolic dysfunction in induced pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes from hypertrophic cardiomyopathy patients.</a> European Heart Journal. 40 (45), 3685-3695 (2019).</li><li>Lee, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+PDGF+pathway+links+LMNA+mutation+to+dilated+cardiomyopathy.">Activation of PDGF pathway links LMNA mutation to dilated cardiomyopathy.</a> Nature. 572 (7769), 335-340 (2019).</li><li>Sun, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patient-specific+induced+pluripotent+stem+cells+as+a+model+for+familial+dilated+cardiomyopathy.">Patient-specific induced pluripotent stem cells as a model for familial dilated cardiomyopathy.</a> Science Translational Medicine. 4 (130), (2012).</li><li>Chen, S. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+PDGFRA+signaling+contributes+to+filamin+C-related+arrhythmogenic+cardiomyopathy.">Activation of PDGFRA signaling contributes to filamin C-related arrhythmogenic cardiomyopathy.</a> Science Advances. 8 (8), (2022).</li><li>Sharma, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+screening+of+tyrosine+kinase+inhibitor+cardiotoxicity+with+human+induced+pluripotent+stem+cells.">High-throughput screening of tyrosine kinase inhibitor cardiotoxicity with human induced pluripotent stem cells.</a> Science Translational Medicine. 9 (377), (2017).</li><li>Burridge, P. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+induced+pluripotent+stem+cell-derived+cardiomyocytes+recapitulate+the+predilection+of+breast+cancer+patients+to+doxorubicin-induced+cardiotoxicity.">Human induced pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes recapitulate the predilection of breast cancer patients to doxorubicin-induced cardiotoxicity.</a> Nature Medicine. 22 (5), 547-556 (2016).</li><li>Kitani, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human-induced+pluripotent+stem+cell+model+of+trastuzumab-induced+cardiac+dysfunction+in+patients+with+breast+cancer.">Human-induced pluripotent stem cell model of trastuzumab-induced cardiac dysfunction in patients with breast cancer.</a> Circulation. 139 (21), 2451-2465 (2019).</li><li>Matsa, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptome+profiling+of+patient-specific+human+iPSC-cardiomyocytes+predicts+individual+drug+safety+and+efficacy+responses+in+vitro.">Transcriptome profiling of patient-specific human iPSC-cardiomyocytes predicts individual drug safety and efficacy responses in vitro.</a> Cell Stem Cell. 19 (3), 311-325 (2016).</li><li>Stillitano, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+susceptibility+to+drug-induced+long+QT+with+a+panel+of+subject-specific+induced+pluripotent+stem+cells.">Modeling susceptibility to drug-induced long QT with a panel of subject-specific induced pluripotent stem cells.</a> Elife. 6, (2017).</li><li>Zhang, J. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protocol+to+measure+contraction,+calcium,+and+action+potential+in+human-induced+pluripotent+stem+cell-derived+cardiomyocytes.">Protocol to measure contraction, calcium, and action potential in human-induced pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes.</a> STAR Protocols. 2 (4), 100859 (2021).</li><li>Blinova, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=International+multisite+study+of+human-induced+pluripotent+stem+cell-derived+cardiomyocytes+for+drug+proarrhythmic+potential+assessment.">International multisite study of human-induced pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes for drug proarrhythmic potential assessment.</a> Cell Reports. 24 (13), 3582-3592 (2018).</li><li>Greensmith, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ca+analysis:+an+Excel+based+program+for+the+analysis+of+intracellular+calcium+transients+including+multiple,+simultaneous+regression+analysis.">Ca analysis: an Excel based program for the analysis of intracellular calcium transients including multiple, simultaneous regression analysis.</a> Computer Methods and Programs in Biomedicine. 113 (1), 241-250 (2014).</li><li>Ma, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determining+the+pathogenicity+of+a+genomic+variant+of+uncertain+significance+using+CRISPR/Cas9+and+human-induced+pluripotent+stem+cells.">Determining the pathogenicity of a genomic variant of uncertain significance using CRISPR/Cas9 and human-induced pluripotent stem cells.</a> Circulation. 138 (23), 2666-2681 (2018).</li><li>Lam, C. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identifying+the+transcriptome+signatures+of+calcium+channel+blockers+in+human+induced+pluripotent+stem+cell-derived+cardiomyocytes.">Identifying the transcriptome signatures of calcium channel blockers in human induced pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes.</a> Circulation Research. 125 (2), 212-222 (2019).</li><li>Seeger, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+premature+termination+codon+mutation+in+MYBPC3+causes+hypertrophic+cardiomyopathy+via+chronic+activation+of+nonsense-mediated+decay.">A premature termination codon mutation in MYBPC3 causes hypertrophic cardiomyopathy via chronic activation of nonsense-mediated decay.</a> Circulation. 139 (6), 799-811 (2019).</li><li>Zhang, J. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+cryopreservation+on+human+induced+pluripotent+stem+cell-derived+cardiomyocytes+for+assessing+drug+safety+response+profiles.">Effects of cryopreservation on human induced pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes for assessing drug safety response profiles.</a> Stem Cell Reports. 16 (1), 168-181 (2021).</li><li>Yu, B., Zhao, S. R., Yan, C. D., Zhang, M., Wu, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deconvoluting+the+cells+of+the+human+heart+with+iPSC+technology:+cell+types,+protocols,+and+uses.">Deconvoluting the cells of the human heart with iPSC technology: cell types, protocols, and uses.</a> Current Cardiology Reports. 24 (5), 487-496 (2022).</li><li>Thomas, D., Cunningham, N. J., Shenoy, S., Wu, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human-induced+pluripotent+stem+cells+in+cardiovascular+research:+current+approaches+in+cardiac+differentiation,+maturation+strategies,+and+scalable+production.">Human-induced pluripotent stem cells in cardiovascular research: current approaches in cardiac differentiation, maturation strategies, and scalable production.</a> Cardiovascular Research. 118 (1), 20-36 (2022).</li><li>Zhu, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physical+developmental+cues+for+the+maturation+of+human+pluripotent+stem+cell-derived+cardiomyocytes.">Physical developmental cues for the maturation of human pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes.</a> Stem Cell Research &amp; Therapy. 5 (5), 117 (2014).</li><li>Feyen, D. A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metabolic+maturation+media+improve+physiological+function+of+human+iPSC-derived+cardiomyocytes.">Metabolic maturation media improve physiological function of human iPSC-derived cardiomyocytes.</a> Cell Reports. 32 (3), 107925 (2020).</li><li>Gintant, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+human+induced+pluripotent+stem+cell-derived+cardiomyocytes+in+preclinical+cancer+drug+cardiotoxicity+testing:+a+scientific+statement+from+the+American+Heart+Association.">Use of human induced pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes in preclinical cancer drug cardiotoxicity testing: a scientific statement from the American Heart Association.</a> Circulation Research. 125 (10), 75-92 (2019).</li><li>Kussauer, S., David, R., Lemcke, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=hiPSCs+Derived+cardiac+cells+for+drug+and+toxicity+screening+and+disease+modeling:+what+micro-+electrode-array+analyses+can+tell+us.">hiPSCs Derived cardiac cells for drug and toxicity screening and disease modeling: what micro- electrode-array analyses can tell us.</a> Cells. 8 (11), (2019).</li><li>Ng, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+phenotyping+of+heteromeric+human+ether-a-go-go-related+gene+potassium+channel+variants+can+discriminate+pathogenic+from+rare+benign+variants.">High-throughput phenotyping of heteromeric human ether-a-go-go-related gene potassium channel variants can discriminate pathogenic from rare benign variants.</a> Heart Rhythm. 17 (3), 492-500 (2020).</li><li>Obergrussberger, A., Friis, S., Bruggemann, A., Fertig, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+patch+clamp+in+drug+discovery:+major+breakthroughs+and+innovation+in+the+last+decade.">Automated patch clamp in drug discovery: major breakthroughs and innovation in the last decade.</a> Expert Opinion on Drug Discovery. 16 (1), 1-5 (2021).</li><li>Kozek, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+discovery+of+trafficking-deficient+variants+in+the+cardiac+potassium+channel+KV11.1.">High-throughput discovery of trafficking-deficient variants in the cardiac potassium channel KV11.1.</a> Heart Rhythm. 17 (12), 2180-2189 (2020).</li><li>Heyne, H. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Predicting+functional+effects+of+missense+variants+in+voltage-gated+sodium+and+calcium+channels.">Predicting functional effects of missense variants in voltage-gated sodium and calcium channels.</a> Science Translational Medicine. 12 (556), (2020).</li><li>Li, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+an+automated+patch-clamp+platform+for+electrophysiological+and+pharmacological+evaluation+of+hiPSC-CMs.">Establishment of an automated patch-clamp platform for electrophysiological and pharmacological evaluation of hiPSC-CMs.</a> Stem Cell Research. 41, 101662 (2019).</li><li>Li, W., Luo, X., Ulbricht, Y., Guan, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blebbistatin+protects+iPSC-CMs+from+hypercontraction+and+facilitates+automated+patch-clamp+based+electrophysiological+study.">Blebbistatin protects iPSC-CMs from hypercontraction and facilitates automated patch-clamp based electrophysiological study.</a> Stem Cell Research. 56, 102565 (2021).</li><li>Milligan, C. J., M&#246;ller, C., Gamper, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Ion Channels: Methods and Protocols. , 171-187 (2013).</li></ol>

טכנולוגיית iPSC אנושית התפתחה כפלטפורמה רבת עוצמה למידול מחלות ובדיקת תרופות. כאן נתאר פרוטוקול מפורט למדידת התכווצות hiPSC-CM, פוטנציאל שדה, פוטנציאל פעולה ו-Ca2+ חולף. פרוטוקול זה מספק אפיון מקיף של התכווצות hiPSC-CM ואלקטרופיזיולוגיה. מבחנים פונקציונליים אלה יושמו בפרסומים מרובים מהקבוצה ?...

פיתוח תרופות הוא תהליך ארוך ויקר. מחקר של תרופות טיפוליות חדשות שאושרו על ידי מנהל המזון והתרופות האמריקאי (FDA) בין השנים 2009 ל-2018 דיווח כי העלות החציונית המשוערת של מחקרים וניסויים קליניים מהוונים הייתה 985 מיליון דולר למוצר1. קרדיוטוקסיות הנגרמת על ידי תרופות היא הגורם המוביל להתשה של תרופות ולגמילה מהשוק2. יש לציין כי קרדיוטוקסיות מדווחת בקרב סוגים רבים של תרופות טיפוליות3. לכן, הערכת בטיחות הלב היא מרכיב מכריע בתהליך פיתוח התרופה. הפרדיגמה הנוכחית להערכת בטיחות הלב עדיין תלויה מאוד במודלים של בעלי חיים. עם זאת, הבדלים בין מינים מהשימוש במודלים של בעלי חיים מוכרים יותר ויותר כגורם עיקרי לתחזיות לא מדויקות עבור קרדיוטוקסיות הנגרמות על ידי תרופות בחולים אנושיים4. לדוגמה, המורפולוגיה של פוטנציאל הפעולה הלבבית שונה באופן מהותי בין בני אדם לעכברים בשל התרומות של זרמי רפולריזציה שונים5. בנוסף, איזופורמים דיפרנציאליים של מיוזין לב ורנ"א מעגלי שיכולים להשפיע על הפיזיולוגיה של הלב תועדו היטב בקרב מינים 6,7. כדי לגשר על פערים אלה, חובה לבסס מודל אמין, יעיל ומבוסס אדם להערכת בטיחות לב פרה-קלינית.
ההמצאה פורצת הדרך של טכנולוגיית תאי גזע פלוריפוטנטיים מושרים (iPSC) יצרה פלטפורמות חסרות תקדים לבדיקת תרופות ומידול מחלות. במהלך העשור האחרון, שיטות ליצירת קרדיומיוציטים פלוריפוטנטיים הנגרמים על ידי האדם (hiPSC-CMs) הפכו מבוססות היטב 8,9. hiPSC-CMs משכו עניין רב ביישומים הפוטנציאליים שלהם במידול מחלות, בדיקת קרדיוטוקסיות הנגרמת על ידי תרופות ורפואה מדויקת. לדוגמה, hiPSC-CMs שימשו למודל הפנוטיפים הפתולוגיים של מחלות לב הנגרמות על ידי ירושה גנטית, כגון תסמונת QT ארוכה10, קרדיומיופתיה היפרטרופית 11,12, וקרדיומיופתיה מורחבת13,14,15. כתוצאה מכך, זוהו מסלולי איתות מרכזיים המעורבים בפתוגנזה של מחלות לב, מה שיכול לשפוך אור על אסטרטגיות טיפוליות פוטנציאליות לטיפול יעיל. יתר על כן, hiPSC-CMs שימשו לבדיקת קרדיוטוקסיות הנגרמת על ידי תרופות הקשורות לסוכנים אנטי סרטניים, כולל דוקסורוביצין, טרסטוזומאב ומעכבי טירוזין קינאז16,17,18; אסטרטגיות להפחתת קרדיוטוקסיות כתוצאה מכך נמצאות בחקירה. לבסוף, המידע הגנטי שנשמר ב- hiPSC-CMs מאפשר סריקה וחיזוי של קרדיוטוקסיות הנגרמות על ידי תרופות הן ברמת הפרט והן ברמת האוכלוסייה19,20. באופן קולקטיבי, hiPSC-CMs הוכיחו את עצמם ככלי רב ערך לחיזוי בטיחות לב מותאם אישית.
המטרה הכוללת של פרוטוקול זה היא לבסס מתודולוגיות כדי לחקור באופן מקיף ויעיל את המאפיינים הפונקציונליים של hiPSC-CMs, שהם בעלי חשיבות רבה ביישום hiPSC-CMs לקראת מודלים של מחלות, בדיקת קרדיוטוקסיות הנגרמת על ידי תרופות ורפואה מדויקת. כאן אנו מפרטים מערך של מבחנים פונקציונליים כדי להעריך את התכונות הפונקציונליות של hiPSC-CMs, כולל מדידת התכווצות, פוטנציאל שדה, פוטנציאל פעולה וטיפול בסידן (Ca2+) (איור 1).

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>35 mm glass bottom dish with 20 mm micro-well #1.5 cover glass</td>
			<td>Cellvis</td>
			<td>D35-20-1.5-N</td>
			<td>Patch clamp</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50x B27 supplements</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>17504-044</td>
			<td>hiPSC-CM culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-well culture plate</td>
			<td>E &#38; K Scientific</td>
			<td>EK-27160</td>
			<td>hiPSC-CM culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-well flat clear bottom black polystyrene TC-treated microplates</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3603</td>
			<td>Contraction motion measurement</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Accutase</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A6964</td>
			<td>Enzymatic dissociation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Axion&#39;s Integrated Studio (AxIS)</td>
			<td>Axion Biosystems</td>
			<td></td>
			<td>navigator software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Borosilicate glass capillaries</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>BF 100-50-10,</td>
			<td>Patch clamp</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2 1 M in H2O</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>21115</td>
			<td>Tyrode&#8217;s solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell counting chamber slides</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>C10228</td>
			<td>Cell counting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CytoView 48-well MEA plates</td>
			<td>Axion Biosystems</td>
			<td>M768-tMEA-48B</td>
			<td>MEA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM/F12</td>
			<td>Gibco/Life Technologies</td>
			<td>12634028</td>
			<td>Extracellular matrix medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DPBS, no calcium, no magnesium</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-190-250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EGTA</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>E3889</td>
			<td>Intracellular pipette solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EPC 10 USB&#160;patch clamp amplifier</td>
			<td>Warner Instruments</td>
			<td>89-5000</td>
			<td>Patch clamp</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fura-2, AM, cell permeant</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>F1221</td>
			<td>Ca2+ transient measurement</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G8270</td>
			<td>Tyrode&#8217;s solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H3375</td>
			<td>Tyrode&#8217;s solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hiPSCs</td>
			<td>Stanford Cardiovascular Institute iPSC Biobank</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>529552</td>
			<td>Tyrode&#8217;s solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KnockOut Serum Replacement</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>10828-028</td>
			<td>hiPSC-CM seeding medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KOH 8&#160;M</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P4494</td>
			<td>Intracellular pipette solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lambda DG 4</td>
			<td>Sutter Instrument Company</td>
			<td></td>
			<td>Ca2+ transient measurement; ultra-high-speed wavelength switching light source</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luna-FL automated fluorescence cell counter</td>
			<td>WISBIOMED</td>
			<td>LB-L20001</td>
			<td>Cell counting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Maestro Pro&#160;MEA system</td>
			<td>Axion Biosystems</td>
			<td></td>
			<td>MEA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel Growth Factor Reduced (GFR) Basement Membrane Matrix</td>
			<td>Corning</td>
			<td>356231</td>
			<td>Extracellular matrix medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgATP</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A9187</td>
			<td>Intracellular pipette solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgCl2</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M8266</td>
			<td>Tyrode&#8217;s solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S9888</td>
			<td>Tyrode&#8217;s solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaOH 10&#160;M</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>72068</td>
			<td>Tyrode&#8217;s solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NIS Elements AR</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pluronic F-127 (20% Solution in DMSO)</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>P3000MP</td>
			<td>Ca2+ transient measurement</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI 1640 medium</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>11875-119</td>
			<td>hiPSC-CM culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sony SI8000 Cell Motion Imaging System</td>
			<td>Sony Biotechnology</td>
			<td></td>
			<td>Contraction motion measurement</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sutter Micropipette puller</td>
			<td>Sutter Instruments</td>
			<td>P-97</td>
			<td>Patch clamp</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan blue stain</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>T10282</td>
			<td>Cell counting</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

technical applications of microelectrode array and patch clamp recordings on human induced pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes

קרדיוטוקסיות הנגרמת על ידי תרופות היא הגורם המוביל להתשה של תרופות ולגמילה מהשוק. לכן, שימוש במודלים מתאימים להערכת בטיחות הלב הפרה-קלינית הוא צעד קריטי במהלך פיתוח תרופות. נכון לעכשיו, הערכת בטיחות הלב עדיין תלויה מאוד במחקרים בבעלי חיים. עם זאת, מודלים של בעלי חיים סובלים מספציפיות ירודה של בני אדם בשל הבדלים ספציפיים למינים, במיוחד במונחים של מאפיינים אלקטרופיזיולוגיים לבביים. לפיכך, יש צורך דחוף לפתח מודל אמין, יעיל ומבוסס אדם להערכת בטיחות לב פרה-קלינית. קרדיומיוציטים שמקורם בתאי גזע פלוריפוטנטיים המושרים על-ידי בני אדם (hiPSC-CMs) התגלו כמודל חוץ-גופי שלא יסולא בפז לבדיקת קרדיוטוקסיות הנגרמת על-ידי תרופות ולמידול מחלות. ניתן לקבל hiPSC-CMs מאנשים עם רקע גנטי מגוון ומצבים חולים שונים, מה שהופך אותם לפונדקאית אידיאלית להערכת קרדיוטוקסיות הנגרמת על ידי תרופות בנפרד. לכן, מתודולוגיות כדי לחקור באופן מקיף את המאפיינים הפונקציונליים של hiPSC-CMs צריך להיות מבוסס. בפרוטוקול זה אנו מפרטים מבחנים פונקציונליים שונים שניתן להעריך ב- hiPSC-CMs, כולל מדידת התכווצות, פוטנציאל שדה, פוטנציאל פעולה וטיפול בסידן. באופן כללי, לשילוב של hiPSC-CMs בהערכת בטיחות לב פרה-קלינית יש פוטנציאל לחולל מהפכה בפיתוח תרופות.

פרוטוקול זה מתאר כיצד למדוד את תנועת הכיווץ, פוטנציאל השדה, פוטנציאל הפעולה ו-Ca2+ חולף של hiPSC-CMs. דיאגרמה סכמטית הכוללת עיכול אנזימטי, זריעת תאים, תחזוקה והולכת בדיקה תפקודית מוצגת באיור 1. היווצרות החד-שכבתית hiPSC-CM נחוצה למדידת תנועת ההתכווצות (איור 2B). ע?...

Watch this Scientific Journal Video about Technical Applications of Microelectrode Array and Patch Clamp Recordings on Human Induced Pluripotent Stem Cell-Derived Cardiomyocytes at JoVE.com

Technical Applications of Microelectrode Array and Patch Clamp Recordings on Human Induced Pluripotent Stem Cell-Derived Cardiomyocytes

קרדיומיוציטים שמקורם בתאי גזע פלוריפוטנטיים המושרים על ידי בני אדם (hiPSC-CMs) התגלו כמודל מבטיח במבחנה לבדיקת קרדיוטוקסיות הנגרמת על ידי תרופות ומידול מחלות. כאן אנו מפרטים פרוטוקול למדידת התכווצות ואלקטרופיזיולוגיה של hiPSC-CMs.

יישומים טכניים של מערך מיקרו-אלקטרודות והקלטות מהדקי טלאים על קרדיומיוציטים שמקורם בתאי גזע פלוריפוטנטיים המושרים על-ידי בני אדם

Drug-induced cardiotoxicity is the leading cause of drug attrition and withdrawal from the market. Therefore, using appropriate preclinical cardiac safety ...

הערכת בטיחות הלב היא מרכיב מכריע בתהליך פיתוח התרופה. קרדיומיוציטים שמקורם ב-iPSC אנושי הוכיחו את עצמם כמודל אמין, יעיל ומבוסס על בני אדם להערכת בטיחות לב פרה-קלינית. הקמנו מתודולוגיות כדי לחקור באופן מקיף את המאפיין הפונקציונלי של קרדיומיוציטים שמקורם ב- iPSC אנושי, שהם בעלי מודלים חשובים מאוד של מחלות, בדיקת רעילות אירובית הנגרמת על ידי תרופות ורפואה מדויקת.השילוב הגובר של קרדיומיוציטים שמקורם ב-iPSC אנושי בתהליך הערכות הבטיחות הפרה-קליניות הסטנדרטיות הוא בעל פוטנציאל לשפר את הדיוק של חיזוי רעילות של תרכובות של מועמד. התחל על ידי culturing iPSC נגזר iPSC אנושי cardiomyocytes לפחות 10 ימים לפני ביצוע המדידה. הפעל את בקר הטמפרטורה והגדר אותו על 37 מעלות צלזיוס.הפעל את המיקרוסקופ, המצלמה ואספקת הפחמן הדו-חמצני. מלאו את מעיל המים של מחזיק הצלחת בכמות מתאימה של מים סטריליים שעברו דה-יוניזציה. מניחים את צלחת 96 הבאר על מחזיק הצלחת, ודוגרים את התאים במשך חמש דקות לפחות.פתח את תוכנת התצוגה ולאחר מכן הגדר את קצב המסגרות של המצלמה ל-75 פריימים לשנייה, ואת רזולוציית הווידאו או התמונה ל-1024 x 1024 פיקסלים. החל את פונקציות המיקוד האוטומטי והבהירות האוטומטית, הקלט סרטונים ותמונות של קרדיומיוציטים שמקורם ב- iPSC אנושי. הנח בזהירות טיפת שמונה מיקרוליטר של תמיסת ציפוי מטריצה תאית נוספת על שטח אלקטרודת ההקלטה של כל באר של 48 לוחות מערך מיקרואלקטרודות היטב.לאחר מכן הוסיפו שלושה מיליליטר של מים סטריליים שעברו דה-יוניזציה לאזור המקיף את הבארות כדי למנוע אידוי תמיסת ציפוי. באמצעות קצה פיפטה של 200 מיקרוליטר, הסר את רוב מדיום המטריצה התאית הנוספת משטח הבאר באותה שורה או עמודה בודדת מבלי לגעת באלקטרודות. זרע 50, 000 תאים לכל באר בטיפה של שמונה מיקרוליטר של מדיום זריעה מעל אזור אלקטרודת ההקלטה.חוזרים על הפעולה עד שכל הבארות מצופות בתאים. לאחר מכן דגרו את לוחות מערך המיקרואלקטרודות באינקובטור של תרביות תאים לחות. הוסיפו באיטיות 150 מיקרוליטרים של מדיום זריעה לכל באר של לוחות מערך המיקרואלקטרודות.ביום 10 לאחר הציפוי, בדוק את הצפיפות של הכאה ספונטנית אנושית iPSC CM monolayer תחת מיקרוסקופ. הנח את צלחת מערך 48 המיקרואלקטרודות היטב במכשיר ההקלטה. ודא שהטמפרטורה היא 37 מעלות צלזיוס והפחמן הדו חמצני הוא 5% פתח את תוכנת הנווט.בחלון ההתקנה הניסיונית, בחר תצורה בזמן אמת של הלב והקלטות פוטנציאליות בשדה. החל תצורות ספונטניות או הדבקות. בפרמטרים של זיהוי פעימות, הגדר את סף הזיהוי ל-300 מיקרו-וולט, את תקופת ההכאה המינימלית ל-250 אלפיות השנייה ואת משך ההכאה המרבי לחמש שניות.בחר רגרסיה פולינומית לחישוב משך פוטנציאל השדה. בדוק אם אות הפעילות החשמלית הבסיסית בוגר ויציב, ורכוש את פעילות הלב הבסיסית למשך דקה עד שלוש דקות. בצע את ההקלטה 10 ימים לאחר הציפוי.החלף את מדיום התחזוקה האנושי iPSC CM בתמיסה של טירוד, ואפשר לתאים להתאקלם למשך 15 דקות. הכנס את חיישני הטמפרטורה לתא, והכנס את צלחת 35 המילימטר פנימה. כוונן את הטמפרטורה ל 37 מעלות צלזיוס.משוך את המיקרו פיפטות מנימי זכוכית בורוסיליקט באמצעות מושך מיקרו פיפטה. מלאו את המיקרו-פיפטות בתמיסה התוך-תאית, והכניסו אותן למחזיק המחובר לשלב הראשי של מגבר המדבקה. פתח את תוכנת הרכישה, טען את פרוטוקול הקלטת פוטנציאל הפעולה ובחר את תצורת מהדק המתח.הכנס את המיקרו פיפטה לתמיסת האמבטיה, ובחר CMs iPSC אנושיים בודדים מתאימים. התאם והנמיך את מיקום המיקרו פיפטה ליד התא שנבחר באמצעות מיקרומניפולטור. כאשר קצה הפיפטה מוכנס לתמיסת האמבטיה, בדוק את עמידות הפיפטה על צג האוסצילוסקופ.מקם את הפיפטה קרוב לתא, והפולסים הנוכחיים יפחתו מעט כדי לשקף את התנגדות האטם הגוברת. החל יניקה עדינה עם לחץ שלילי כדי להגביר את ההתנגדות. זה יהווה ג'יגה-זל.לאחר מכן החל את פונקציית האיטום. החל יניקה נוספת כדי לשבור את הממברנה כדי לקבל תצורת הקלטה של תא שלם. בשלב זה, עבור ממצב מהדק מתח למצב מהדק זרם, או ללא הזרקת זרם באמצעות דיאלוג המגבר.לחץ על כפתור ההקלטה כדי ליצור ולשמור את קבצי ההקלטה הפוטנציאליים של הפעולה. יש לבצע את מדידת הסידן החולפת לפחות 10 ימים לאחר הציפוי. הכינו את הפתרון של טירוד טרי ואת פתרון הטעינה Fura-2 AM.שאפו את מדיום התחזוקה האנושי של iPSC CM, ושטפו את התאים בתמיסה של טירוד פעמיים. יש למרוח 100 מיקרוליטרים של תמיסת ההעמסה Fura-2 AM ולדגור במשך 10 דקות בטמפרטורת החדר. החלף את תמיסת ההעמסה Fura-2 AM בתמיסה של tyrode ודגירה למשך חמש דקות לפחות לצורך דה-אסטרציה מלאה של Fura-2 AM. הוסיפו טיפה של שמן טבילה על מטרת טבילת השמן פי 40 של מיקרוסקופ אפיפלואורסצנטי הפוך.מניחים את תא התא במתאם הבמה של המיקרוסקופ. התקן את חוטי בקר הטמפרטורה לתא האמבטיה, והגדר אותו ל -37 מעלות צלזיוס. התקן את אלקטרודות גירוי השדה החשמלי, והגדר את הפולסים על 0.5 הרץ עם משך של 20 אלפיות השנייה.הפעל את מקור האור המחליף אורכי גל במהירות גבוהה במיוחד, והגדר אותו למצב מיתוג מהיר של 340 ננומטר ו-380 ננומטר. החל זמן חשיפה של 20 אלפיות השנייה עבור שני אורכי הגל, וזמן הקלטה של 20 שניות. הקלט את הסרטון המשקף שינויים בזמן אמת של סידן חולף, ייצא את הנתונים לגיליון אלקטרוני לניתוח.מונולייר קרדיומיוציטים אנושי שמקורו ב-iPSC שימש למדידת תנועת הכיווץ. ניתוח של עקבות של תנועת הרפיית הכיווץ באמצעות תוכנת האנליזה זיהה את התחלת הצירים, שיא הכיווץ, סוף הכיווץ, שיא ההרפיה וסוף ההרפיה. כיסוי מלא של מונולאייר קרדיומיוציטים שמקורו ב- iPSC אנושי נצפה על כל האלקטרודות בתוך לוחות מערך המיקרואלקטרודות.צורות הגל הבוגרות שנרשמו על ידי כל אלקטרודה שיקפו את פוטנציאל שדה הלב בעל המאפיינים הניתנים לזיהוי. לאחר ניתוח התקבלו תקופת פעימה, משך פוטנציאל שדה ומשרעת ספייק. הקלטות מהדקי טלאי תאים שלמים במצב הידוק הנוכחי תיעדו את פוטנציאל הפעולה הספונטני של קרדיומיוציטים בודדים.לאחר הניתוח התקבלו מספר פרמטרים, כולל המשרעת, הפוטנציאל הדיאסטולי המרבי ומשך פוטנציאל הפעולה. לאחר ניתוח של הדמיית סידן, F340 על ידי F380 יחס לאורך זמן התקבל, ועקבות גולמיים של ארעי סידן מגורה הותאמו. בנוסף, התקבלו פרמטרים כגון משרעת, סידן דיאסטולי ודעיכת סידן.חשוב להשתמש בקרדיומיוציטים הנגזרים מ- iPSC אנושיים הנמצאים בתנאי מכות טובים, כמו גם כדי להבטיח את הטוהר הגבוה של הקרדיומיוציטים האנושיים שמקורם ב- iPSC. פרוטוקול זה כולל ארבע טכניקות ספציפיות לחקר פונקציונליות קרדיומיוציטים שמקורה ב- iPSC אנושי, תצורה אחרת, או אוטומטית אם לחקור זרמים יוניים לבביים הממלאים תפקיד מכריע בלב

Research

JoVE Journal

Medicine

Formation of Human Prostate Epithelium Using Tissue Recombination of Rodent Urogenital Sinus Mesenchyme and Human Stem Cells

היווצרות של האפיתל ערמונית אנושי באמצעות רקומבינציה של רקמות ואברי מין מכרסם mesenchyme סינוס ותאי גזע אנושיים

Progress in prostate cancer research is severely  limited by the availability of human-derived and hormone-na&iuml;ve model systems,  which limit our ...

Isolation and Functional Characterization of Human Ventricular Cardiomyocytes from Fresh Surgical Samples

בידוד ואפיון פונקציונלי של אדם חדרית שריר לב מדוגמאות כירורגי טריות

Cardiomyocytes from diseased hearts are subjected to complex remodeling processes involving changes in cell structure, excitation contraction coupling and ...

Tissue-simulating Phantoms for Assessing Potential Near-infrared Fluorescence Imaging Applications in Breast Cancer Surgery

רקמות המדמים מטוסי פנטום להערכת יישומי דימות פלואורסצנטי קרוב אינפרא אדום פוטנציאליים בכירורגיה סרטן השד

Inaccuracies in intraoperative tumor localization and evaluation of surgical margin status result in suboptimal outcome of breast-conserving surgery ...

Multi-electrode Array Recordings of Human Epileptic Postoperative Cortical Tissue

הקלטות מערך רב-אלקטרודה של רקמה האנושית אפילפטיים לאחר הניתוח בקליפת המוח

Epilepsy, affecting about 1% of the population, comprises a group of neurological disorders characterized by the periodic occurrence of seizures, which ...

Generation of Induced Pluripotent Stem Cells from Muscular Dystrophy Patients: Efficient Integration-free Reprogramming of Urine Derived Cells

דור של גזע תאים המושרה pluripotent מחולי ניוון שרירים: תכנות מחדש ללא אינטגרציה יעילה של תאים שתן נגזר

Dystrophic cardiomyopathy is a poorly understood consequence of muscular dystrophy. Generating induced Pluripotent Stem Cells (iPSCs) from patients with ...

Rapid and Efficient Generation of Recombinant Human Pluripotent Stem Cells by Recombinase-mediated Cassette Exchange in the AAVS1 Locus

Rapid and Efficient Generation of Recombinant Human Pluripotent Stem Cells by Recombinase-mediated Cassette Exchange in the AAVS1 Locus

הדור מהיר ויעיל של תאי גזע פלוריפוטנטיים רקומביננטי אנושי ידי recombinase בתיווך המרת קלטת ב<em&gt; AAVS1</em&gt; לוקוס

Even with the revolution of gene-targeting technologies led by CRISPR-Cas9, genetic modification of human pluripotent stem cells&#160;(hPSCs)&#160;is ...

Targeted and Selective Treatment of Pluripotent Stem Cell-derived Teratomas Using External Beam Radiation in a Small-animal Model

טיפול ממוקד, סלקטיבי של Teratomas נגזר תאי גזע Pluripotent באמצעות קרינה חיצוני קרן במודל של חיית-קטן

The growing number of victims of &#34;stem cell tourism,&#34; the unregulated transplantation of stem cells worldwide, has raised concerns about the ...

Sarcomere Shortening of Pluripotent Stem Cell-Derived Cardiomyocytes using Fluorescent-Tagged Sarcomere Proteins.

קיצור סרקומר של קרדיומיוציטים שמקורם בתאי גזע פלוריפוטנטים באמצעות חלבוני סרקומר מתויגים פלואורסצנטיים.

Pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes (PSC-CMs) can be produced from both embryonic and induced pluripotent stem (ES/iPS) cells. These cells ...

Directed Induction of Retinal Organoids from Human Pluripotent Stem Cells

אינדוקציה מכוונת של אורגנואידים ברשתית מתאי גזע פלוריפוטנטיים אנושיים

Retinal cell transplantation is a promising therapeutic approach, which could restore the retinal architecture and stabilize or even improve the visual ...

Microelectrode Array Recording of Sinoatrial Node Firing Rate to Identify Intrinsic Cardiac Pacemaking Defects in Mice

הקלטה של מערך Microelectrode של קצב הירי של צמת Sinoatrial כדי לזהות פגמים מהותיים בקצב הלב בעכברים

The sinoatrial node (SAN), located in the right atrium, contains the pacemaker cells of the heart, and dysfunction of this region can cause tachycardia or ...