Name: real-time quantitative measurement of tumor cell migration and invasion following synthetic mrna transfection
Uploaded: 2023-06-23T13:10:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Real-Time Quantitative Measurement of Tumor Cell Migration and Invasion Following Synthetic mRNA Transfection at JoVE.com

Forfatterne takker Medical Writing Center ved Children's Mercy Kansas City for å redigere dette manuskriptet. Dette arbeidet ble støttet av Natalie's ART Foundation (til TP) og av en MCA Partners Advisory Board tilskudd fra Children's Mercy Hospital (CMH) og University of Kansas Cancer Center (KUCC) (til TP).

1. Syntese av mRNA
MERK: For mRNA-syntesen må alle reagensene og utstyret behandles spesielt for å inaktivere RNasene før bruk. Se materialfortegnelsen for detaljer om alle materialer, instrumenter og reagenser som brukes i denne protokollen.
<ol><li>Linearisering av DNA MERK: Mus-cDNA fra CrkI og CrkL ble klonet inn i pFLAG-CMV-5a-ekspresjonsvektoren for å legge til FLAG-epitopkoden ved C-terminalen og subklonet inn i pcDNA3.1/myc-H...

<ol>
	<li>Palmer, T. D., Ashby, W. J., Lewis, J. D., Zijlstra, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+tumor+cell+motility+to+prevent+metastasis.">Targeting tumor cell motility to prevent metastasis.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 63 (8), 568-581 (2011).</li><li>Eccles, S. A., Box, C., Court, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+migration/invasion+assays+and+their+application+in+cancer+drug+discovery.">Cell migration/invasion assays and their application in cancer drug discovery.</a> Biotechnology Annual Review. 11, 391-421 (2005).</li><li>Kluiver, T. A., Alieva, M., van Vuurden, D. G., Wehrens, E. J., Rios, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Invaders+exposed:+Understanding+and+targeting+tumor+cell+invasion+in+diffuse+intrinsic+pontine+glioma.">Invaders exposed: Understanding and targeting tumor cell invasion in diffuse intrinsic pontine glioma.</a> Frontiers in Oncology. 10, 92 (2020).</li><li>Xie, Q., Mittal, S., Berens, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+adaptive+glioblastoma:+An+overview+of+proliferation+and+invasion.">Targeting adaptive glioblastoma: An overview of proliferation and invasion.</a> Neuro-Oncology. 16 (12), 1575-1584 (2014).</li><li>Wee, Y., Wang, T., Liu, Y., Li, X., Zhao, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+pan-cancer+study+of+copy+number+gain+and+up-regulation+in+human+oncogenes.">A pan-cancer study of copy number gain and up-regulation in human oncogenes.</a> Life Sciences. 211, 206-214 (2018).</li><li>Zhao, M., Liu, Y., Qu, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+epithelial-mesenchymal+transition-related+genes+increases+with+copy+number+in+multiple+cancer+types.">Expression of epithelial-mesenchymal transition-related genes increases with copy number in multiple cancer types.</a> Oncotarget. 7 (17), 24688-24699 (2016).</li><li>Pijuan, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+cell+migration,+invasion,+and+adhesion+assays:+From+cell+imaging+to+data+analysis.">In vitro cell migration, invasion, and adhesion assays: From cell imaging to data analysis.</a> Frontiers in Cell and Developmental Biology. 7, 107 (2019).</li><li>Park, T., Large, N., Curran, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+assessment+of+glioblastoma+phenotypes+in+vitro+establishes+cell+migration+as+a+robust+readout+of+Crk+and+CrkL+activity.">Quantitative assessment of glioblastoma phenotypes in vitro establishes cell migration as a robust readout of Crk and CrkL activity.</a> The Journal of Biological Chemistry. 296, 100390 (2021).</li><li>Urcan, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+xCELLigence+impedance+analysis+of+the+cytotoxicity+of+dental+composite+components+on+human+gingival+fibroblasts.">Real-time xCELLigence impedance analysis of the cytotoxicity of dental composite components on human gingival fibroblasts.</a> Dental Materials. 26 (1), 51-58 (2010).</li><li>Limame, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+analysis+of+dynamic+cell+viability,+migration+and+invasion+assessments+by+novel+real-time+technology+and+classic+endpoint+assays.">Comparative analysis of dynamic cell viability, migration and invasion assessments by novel real-time technology and classic endpoint assays.</a> PLoS One. 7 (10), e46536 (2012).</li><li>Mudduluru, G., Large, N., Park, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impedance-based+real-time+measurement+of+cancer+cell+migration+and+invasion.">Impedance-based real-time measurement of cancer cell migration and invasion.</a> Journal of Visualized Experiments. (158), e60997 (2020).</li><li>Feller, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Crk+family+adaptors-signalling+complex+formation+and+biological+roles.">Crk family adaptors-signalling complex formation and biological roles.</a> Oncogene. 20 (44), 6348-6371 (2001).</li><li>Park, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Crk+and+CrkL+as+therapeutic+targets+for+cancer+treatment.">Crk and CrkL as therapeutic targets for cancer treatment.</a> Cells. 10 (4), 739 (2021).</li><li>Verbeke, R., Lentacker, I., De Smedt, S. C., Dewitte, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+dawn+of+mRNA+vaccines:+The+COVID-19+case.">The dawn of mRNA vaccines: The COVID-19 case.</a> Journal of Controlled Release. 333, 511-520 (2021).</li><li>Heine, A., Juranek, S., Brossart, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+and+immunological+effects+of+mRNA+vaccines+in+malignant+diseases.">Clinical and immunological effects of mRNA vaccines in malignant diseases.</a> Molecular Cancer. 20 (1), 52 (2021).</li><li>Kwon, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emergence+of+synthetic+mRNA:+In+vitro+synthesis+of+mRNA+and+its+applications+in+regenerative+medicine.">Emergence of synthetic mRNA: In vitro synthesis of mRNA and its applications in regenerative medicine.</a> Biomaterials. 156, 172-193 (2018).</li><li>Campillo-Davo, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+ins+and+outs+of+messenger+RNA+electroporation+for+physical+gene+delivery+in+immune+cell-based+therapy.">The ins and outs of messenger RNA electroporation for physical gene delivery in immune cell-based therapy.</a> Pharmaceutics. 13 (3), 396 (2021).</li><li>Park, T., Koptyra, M., Curran, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibroblast+growth+requires+CT10+regulator+of+kinase+(Crk)+and+Crk-like+(CrkL).">Fibroblast growth requires CT10 regulator of kinase (Crk) and Crk-like (CrkL).</a> The Journal of Biological Chemistry. 291 (51), 26273-26290 (2016).</li><li>Park, T. J., Curran, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Essential+roles+of+Crk+and+CrkL+in+fibroblast+structure+and+motility.">Essential roles of Crk and CrkL in fibroblast structure and motility.</a> Oncogene. 33 (43), 5121-5132 (2014).</li><li>Chou, P. P., Jaynes, P. K., King, B. P., Chapman, E., Bailey, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Precision+comparison+between+conventional+(method-I)+and+reverse+(method-Ii)+pipetting.">Precision comparison between conventional (method-I) and reverse (method-Ii) pipetting.</a> Clinical Chemistry. 30 (6), 958 (1984).</li><li>Pushparaj, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Revisiting+the+micropipetting+techniques+in+biomedical+sciences:+A+fundamental+prerequisite+in+good+laboratory+practice.">Revisiting the micropipetting techniques in biomedical sciences: A fundamental prerequisite in good laboratory practice.</a> Bioinformation. 16 (1), 8-12 (2020).</li><li>Park, T. J., Curran, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Crk+and+Crk-like+play+essential+overlapping+roles+downstream+of+disabled-1+in+the+Reelin+pathway.">Crk and Crk-like play essential overlapping roles downstream of disabled-1 in the Reelin pathway.</a> The Journal of Neuroscience. 28 (50), 13551-13562 (2008).</li><li>Huang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CRK+proteins+selectively+regulate+T+cell+migration+into+inflamed+tissues.">CRK proteins selectively regulate T cell migration into inflamed tissues.</a> The Journal of Clinical Investigation. 125 (3), 1019-1032 (2015).</li><li>Wang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Signaling+adaptor+protein+Crk+is+indispensable+for+malignant+feature+of+glioblastoma+cell+line+KMG4.">Signaling adaptor protein Crk is indispensable for malignant feature of glioblastoma cell line KMG4.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 362 (4), 976-981 (2007).</li><li>Kumar, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reciprocal+regulation+of+Abl+kinase+by+Crk+Y251+and+Abi1+controls+invasive+phenotypes+in+glioblastoma.">Reciprocal regulation of Abl kinase by Crk Y251 and Abi1 controls invasive phenotypes in glioblastoma.</a> Oncotarget. 6 (35), 37792-37807 (2015).</li><li>Kumar, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Crk+tyrosine+phosphorylation+regulates+PDGF-BB-inducible+Src+activation+and+breast+tumorigenicity+and+metastasis.">Crk tyrosine phosphorylation regulates PDGF-BB-inducible Src activation and breast tumorigenicity and metastasis.</a> Molecular Cancer Research. 16 (1), 173-183 (2018).</li><li>Raudenska, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engine+shutdown:+Migrastatic+strategies+and+prevention+of+metastases.">Engine shutdown: Migrastatic strategies and prevention of metastases.</a> Trends in Cancer. 9 (4), 293-308 (2023).</li><li>Decaestecker, C., Debeir, O., Van Ham, P., Kiss, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Can+anti-migratory+drugs+be+screened+in+vitro?+A+review+of+2D+and+3D+assays+for+the+quantitative+analysis+of+cell+migration.">Can anti-migratory drugs be screened in vitro? A review of 2D and 3D assays for the quantitative analysis of cell migration.</a> Medicinal Research Reviews. 27 (2), 149-176 (2007).</li><li>Farasani, A., Darbre, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+exposure+to+triclosan+increases+migration+and+invasion+of+human+breast+epithelial+cells+in+vitro.">Long-term exposure to triclosan increases migration and invasion of human breast epithelial cells in vitro.</a> Journal of Applied Toxicology. 41 (7), 1115-1126 (2021).</li><li>Hanusova, V., Skalova, L., Kralova, V., Matouskova, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+flubendazole+on+adhesion+and+migration+in+SW480+and+SW620+colon+cancer+cells.">The effect of flubendazole on adhesion and migration in SW480 and SW620 colon cancer cells.</a> Anti-Cancer Agents in Medicinal Chemistry. 18 (6), 837-846 (2018).</li><li>Lago-Baameiro, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PARK7/DJ-1+inhibition+decreases+invasion+and+proliferation+of+uveal+melanoma+cells.">PARK7/DJ-1 inhibition decreases invasion and proliferation of uveal melanoma cells.</a> Tumori. 109 (1), 47-53 (2023).</li><li>Escalona, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Knock+down+of+TIMP-2+by+siRNA+and+CRISPR/Cas9+mediates+diverse+cellular+reprogramming+of+metastasis+and+chemosensitivity+in+ovarian+cancer.">Knock down of TIMP-2 by siRNA and CRISPR/Cas9 mediates diverse cellular reprogramming of metastasis and chemosensitivity in ovarian cancer.</a> Cancer Cell International. 22 (1), 422 (2022).</li><li>Mosca, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+S-adenosyl-L-methionine+on+the+invasion+and+migration+of+head+and+neck+squamous+cancer+cells+and+analysis+of+the+underlying+mechanisms.">Effects of S-adenosyl-L-methionine on the invasion and migration of head and neck squamous cancer cells and analysis of the underlying mechanisms.</a> International Journal of Oncology. 56 (5), 1212-1224 (2020).</li><li>Zhao, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=VEGI174+protein+and+its+functional+domain+peptides+exert+antitumour+effects+on+renal+cell+carcinoma.">VEGI174 protein and its functional domain peptides exert antitumour effects on renal cell carcinoma.</a> International Journal of Oncology. 54 (1), 390-398 (2019).</li><li>Witte, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TGF-beta1-induced+cell+migration+in+pancreatic+carcinoma+cells+is+RAC1+and+NOX4-dependent+and+requires+RAC1+and+NOX4-dependent+activation+of+p38+MAPK.">TGF-beta1-induced cell migration in pancreatic carcinoma cells is RAC1 and NOX4-dependent and requires RAC1 and NOX4-dependent activation of p38 MAPK.</a> Oncology Reports. 38 (6), 3693-3701 (2017).</li><li>Bui, L. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+aquaporin+3+expression+by+the+AhR+pathway+is+critical+to+cell+migration.">Regulation of aquaporin 3 expression by the AhR pathway is critical to cell migration.</a> Toxicological Sciences. 149 (1), 158-166 (2016).</li><li>Tsuji, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+different+cell-detaching+methods+on+the+viability+and+cell+surface+antigen+expression+of+synovial+mesenchymal+stem+cells.">Effects of different cell-detaching methods on the viability and cell surface antigen expression of synovial mesenchymal stem cells.</a> Cell Transplantation. 26 (6), 1089-1102 (2017).</li><li>Frandsen, S. K., McNeil, A. K., Novak, I., McNeil, P. L., Gehl, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Difference+in+membrane+repair+capacity+between+cancer+cell+lines+and+a+normal+cell+line.">Difference in membrane repair capacity between cancer cell lines and a normal cell line.</a> The Journal of Membrane Biology. 249 (4), 569-576 (2016).</li></ol>

Migrasjon og invasjon er viktige trekk ved tumorceller. Måling av motiliteten til tumorceller og forståelse av den underliggende mekanismen som styrer tumorcellemotilitet gir kritisk innsikt i terapeutiske inngrep 2,27. Det er utviklet flere metoder for å studere cellemigrasjon7. Sårhelingsanalysen ved hjelp av riper eller kulturinnlegg er en enkel og ofte brukt metode som gir kontrasterende bilder av hulllukking. Den individuelle cell...

Tumorcellemotilitet spiller en avgjørende rolle i metastase 1,2. Spredning av tumorceller til nærliggende og fjerntliggende friske vev gjør kreftbehandling vanskelig og bidrar til tilbakefall 3,4. Derfor er det viktig å forstå mekanismene for tumorcellemotilitet og utvikle relevante terapeutiske strategier. Siden mange tumorceller har endrede genuttrykksprofiler, er det avgjørende å forstå hvilke endringer i genuttrykksprofilen som fører til endret tumorcellemotilitet 5,6.
Flere analyser er utviklet for å måle cellemigrasjon in vitro. Noen analyser gir bare begrenset informasjon på grunn av bare å tillate målinger på bestemte tidspunkter, mens andre tilbyr omfattende informasjon om tumorcellemotilitet i sanntid7. Selv om mange av disse cellemotilitetsanalysene kan gi kvantitative resultater på et gitt tidspunkt eller endepunktet, klarer de ikke å gi tilstrekkelig detaljert informasjon om dynamiske endringer i hastigheten på cellemigrasjon over den eksperimentelle perioden. I tillegg kan det være vanskelig å undersøke potensielle endringer i cellemigrasjonshastigheten avhengig av eksperimentell design, celletyper og celletall. Videre kan effekten av ukompliserte behandlinger undersøkes ved enkel kvantifisering av tradisjonelle motilitetsanalyser, men mer sofistikert kvantifisering kan være nødvendig for å studere de komplekse effektene av ulike kombinerte behandlinger8.
Et instrument for å overvåke den elektriske strømmen til en mikrotiterplate som er godt dekket med mikroelektroder er utviklet9. Adhesjonen av celler til overflaten av brønnen hindrer elektronstrømmen, og impedansen korrelerer med den kvantitative og kvalitative bindingen av cellene. Tilstedeværelsen av mikroelektrodene på brønnbunnen muliggjør måling av celleadhesjon, spredning og spredning. Tilstedeværelsen av mikroelektrodene under en mikroporøs membran i det øvre kammeret muliggjør måling av cellemigrasjon og invasjon i det nedre kammeret, med det øvre kammeret belagt med ekstracellulære matriksproteiner (ECM) for å tillate invasjon10.
Tidligere ble det demonstrert at impedansbaserte sanntidsmålinger av tumorcellemigrasjon og invasjon gir sanntidsdata under hele eksperimentet, samt umiddelbare sammenligninger og kvantifiseringer under ulike eksperimentelle forhold11. I den metodeoppgaven ble genknockdown indusert for å teste rollen til proteiner av interesse for tumorcellemigrasjon og invasjon. Siden en fullblåst gen-knockdown-effekt under de testede eksperimentelle forholdene tok 3-4 dager etter elektroporering med små forstyrrende RNA (siRNAer)8, ble cellene replisert etter elektroporeringen og høstet på nytt 3 dager senere for impedansbasert sanntidsmåling av tumorcellemigrasjon og invasjon.
CT10-regulator av kinase (Crk) og Crk-lignende (CrkL) er adaptorproteiner som medierer protein-protein-interaksjoner nedstrøms for ulike vekstfaktorreseptorkinaseveier og ikke-reseptortyrosinkinaseveier12. Forhøyede nivåer av Crk- og CrkL-proteiner bidrar til dårlig prognose i flere humane kreftformer, inkludert glioblastom13. Det er imidlertid uklart hvordan forhøyede Crk- og CrkL-proteiner fører til dårlig prognose. Derfor er det viktig å definere effekten av Crk og CrkL overekspresjon på tumorcellefunksjoner. Tidligere ble det utført en gen-knockdown-studie for å demonstrere at endogene nivåer av Crk- og CrkL-proteiner er nødvendige for glioblastomcellemigrasjon og invasjon8. Her er det utviklet et modifisert analysesystem for å adressere effekten av Crk og CrkL-overekspresjon på tumorcellemigrasjon og invasjon.
Nylig har in vitro-syntesen av mRNA og dens terapeutiske anvendelser fått fornyet oppmerksomhet på grunn av utviklingen av mRNA-vaksinene mot SARS-CoV-2 (gjennomgått av Verbeke et al.14). I tillegg er det gjort bemerkelsesverdige fremskritt ved bruk av syntetisk mRNA i kreft og andre sykdommer15,16. Elektroporering av celler er en effektiv metode for å levere syntetisk mRNA og indusere forbigående genetisk modifikasjon (gjennomgått av Campillo-Davo et al.17), og bruk av syntetisk mRNA muliggjør rask og effektiv genekspresjon i udødeliggjorte fibroblaster 18. Denne metodeartikkelen kombinerer genoverekspresjon ved hjelp av syntetisk mRNA med sanntids celleanalyser for å studere tumorcellemigrasjon og invasjon. Imidlertid virker det eksperimentelle skjemaet som brukes til siRNA ikke med syntetisk mRNA-transfeksjon, da nivået av eksogene proteiner øker raskt og reduseres gradvis ved syntetisk mRNA-transfeksjon18. Derfor har metoden blitt modifisert for å utføre sanntidsanalyse av cellemigrasjon og invasjon rett etter transfeksjonen uten å dyrke cellene i tillegg.
Denne metodeartikkelen demonstrerer at kombinasjon av impedansbaserte sanntidsmålinger med transfeksjon av tumorceller med syntetiske mRNA gir en rask og omfattende analyse av effekten av genoppregulering på tumorcellemigrasjon og invasjon. Denne metodeartikkelen beskriver detaljerte prosedyrer for å måle hvordan migrasjon og invasjon av glioblastomceller påvirkes av overekspresjon av Crk og CrkL. Ved å undersøke de konsentrasjonsavhengige effektene av syntetisk mRNA på tumorcellemigrasjon, beskriver papiret tydelig hvordan en økning i proteinnivåer stimulerer tumorcellemigrasjon. I tillegg presenteres en tilnærming med varierende konsentrasjon av ECM-gelen for å vurdere effekten av endringer i genuttrykk på tumorcelleinvasjon.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>AlphaImager HP</td>
			<td>ProteinSimple</td>
			<td>92-13823-00</td>
			<td>Agarose gel imaging system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#945;-Tubulin antibody</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T9026</td>
			<td>Used to detect &#945;-tubulin protein (dilution 1:3,000)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CIM-plate 16</td>
			<td>Agilent Technologies, Inc</td>
			<td>5665825001</td>
			<td>Cell invasion and migration plates</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Crk antibody</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>610035</td>
			<td>Used to detect CrkI and CrkII proteins (dilution 1:1,500)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CrkL antibody</td>
			<td>Santa Cruz</td>
			<td>sc-319</td>
			<td>Used to detect CrkL protein (dilution 1:1,500)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#8217;s Modified Eagle&#8217;s Medium (DMEM)</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>302002</td>
			<td>Cell culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s phosphate-buffered saline (DPBS)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>21-031-CV</td>
			<td>Buffer used to wash cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Hyclone</td>
			<td>SH30910.03</td>
			<td>Culture medium supplement</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heracell VIOS 160i CO2 incubator</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>51030285</td>
			<td>CO2 incubator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IRDye 800CW goat anti-mouse IgG secondary antibody</td>
			<td>Li-Cor</td>
			<td>926-32210</td>
			<td>Secondary antibody for Western blot analysis (dilution 1:10,000)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IRDye 800CW goat anti-rabbit IgG secondary antibody</td>
			<td>Li-Cor</td>
			<td>926-32211</td>
			<td>Secondary antibody for Western blot analysis&#160; (dilution 1:10,000)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lithium chloride&#160;</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AM9480</td>
			<td>Used for RNA precipitation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel matrix</td>
			<td>Corning</td>
			<td>354234</td>
			<td>Extracellular matrix (ECM) gel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEGAscript T7 transcription kit</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AM1334</td>
			<td>Used for RNA synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Millennium RNA markers</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AM7150</td>
			<td>Used for formaldehyde agarose gel electrophoresis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mini centrifuge</td>
			<td>ISC BioExpress</td>
			<td>C1301P-ISC</td>
			<td>Used to spin down cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse brain QUICK-Clone cDNA</td>
			<td>TaKaRa</td>
			<td>637301</td>
			<td>Source of genes (inserts) for cloning</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NanoQuant</td>
			<td>Tecan</td>
			<td>M200PRO</td>
			<td>Nucleic acid quantification system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neon electroporation system&#160;</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>MPK5000</td>
			<td>Electroporation system1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neon transfection system 10 &#181;L kit</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>MPK1025</td>
			<td>Electroporation kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neon transfection system 100 &#181;L kit</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>MPK10096</td>
			<td>Electroporation kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NorthernMax denaturing gel buffer</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AM8676</td>
			<td>Used for formaldehyde agarose gel electrophoresis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NorthernMax formaldehyde load dye</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AM8552</td>
			<td>Used for formaldehyde agarose gel electrophoresis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NorthernMax running buffer</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AM8671</td>
			<td>Used for formaldehyde agarose gel electrophoresis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nuclease-free water</td>
			<td>Teknova</td>
			<td>W3331</td>
			<td>Used for various reactions during mRNA synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Odyssey CLx Imager</td>
			<td>Li-Cor</td>
			<td></td>
			<td>Imager for Western blot analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pcDNA3.1/myc-His</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>V80020</td>
			<td>The vector into which inserts (mouse CrkI and CrkL cDNAs) were cloned</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pFLAG-CMV-5a</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>E7523</td>
			<td>Source of the FLAG epitope tag</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenol:chloroform:isoamyl alcohol&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P2069</td>
			<td>Used for DNA extraction</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PmeI</td>
			<td>New England BioLabs</td>
			<td>R0560L</td>
			<td>Used to linearize the plasmids for mRNA synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poly(A) tailing kit</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AM1350</td>
			<td>Used for poly(A) tail reaction</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polystyrene tissue culture dish (100 x 20 mm style)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353003</td>
			<td>Used for culturing cells before transfection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polystyrene tissue culture dish (35 x 10 mm style)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353001</td>
			<td>Used for culturing transfected cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Proteinase K</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>25530049</td>
			<td>Used to remove protein in the reaction mixture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Purifier Axiom Class II, Type C1</td>
			<td>Labconco Corporation</td>
			<td>304410001</td>
			<td>Biosafety cabinet for sterile handling of cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Resuspension Buffer R</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td></td>
			<td>A buffer included in the electroporation kits, MPK1025 and MPK10096. The buffer is used to resupend cells before electroporation, and its composition is proprietary information.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNaseZap</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AM9780</td>
			<td>RNA decontamination solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scepter</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>C85360</td>
			<td>Handheld automated cell counter&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ScriptCap 2&#39;-O-methyltransferase kit</td>
			<td>Cellscript</td>
			<td>C-SCMT0625</td>
			<td>Used for capping reaction</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ScriptCap m7G capping system</td>
			<td>Cellscript</td>
			<td>C-SCCE0625</td>
			<td>Used for capping reaction</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium dodecyl sulfate solution</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>15553-035</td>
			<td>Detergent used for the proteinase K reaction</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sorvall Legend XT centrifuge</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>75004532</td>
			<td>Benchtop centrifuge to spin down cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-EDTA</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>25300-054</td>
			<td>Used for dissociation of cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>U-118MG&#160;</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>HTB15</td>
			<td>An adherent cell line derived from a human glioblastoma patient</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vinculin antibody</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>V9131</td>
			<td>Used to detect vinculin protein (dilution 1:100,000)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>xCELLigence RTCA DP</td>
			<td>Agilent Technologies, Inc</td>
			<td>380601050</td>
			<td>Instrument used for real-time cell analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1Electroporation parameters and other related information for various cell lines are available on the manufacturer&#39;s homepage (https://www.thermofisher.com/us/en/home/life-science/cell-culture/transfection/neon-transfection-system/neon-transfection-system-cell-line-data.html?).</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

real-time quantitative measurement of tumor cell migration and invasion following synthetic mrna transfection

Tumorceller er svært bevegelige og invasive og viser endrede genuttrykksmønstre. Kunnskap om hvordan endringer i genuttrykk regulerer tumorcellemigrasjon og invasjon er avgjørende for å forstå mekanismene for tumorcelleinfiltrasjon i nærliggende friskt vev og metastase. Tidligere ble det demonstrert at genknockdown etterfulgt av impedansbasert sanntidsmåling av tumorcellemigrasjon og invasjon muliggjør identifisering av gener som kreves for tumorcellemigrasjon og invasjon. Den siste tiden har mRNA-vaksinene mot SARS-CoV-2 økt interessen for å bruke syntetisk mRNA til terapeutiske formål. Her ble metoden ved hjelp av syntetisk mRNA revidert for å studere effekten av genoverekspresjon på tumorcellemigrasjon og invasjon. Denne studien viser at forhøyet genuttrykk med syntetisk mRNA-transfeksjon etterfulgt av impedansbasert sanntidsmåling kan bidra til å identifisere gener som stimulerer tumorcellemigrasjon og invasjon. Denne metodeartikkelen gir viktige detaljer om prosedyrene for å undersøke effekten av endret genuttrykk på tumorcellemigrasjon og invasjon.

Crk og CrkL proteiner spiller viktige roller i motiliteten til mange celletyper, inkludert nevroner22, T-celler23, fibroblaster 18,19 og en rekke tumorceller13. Siden Crk- og CrkL-proteiner har blitt rapportert å være forhøyet i glioblastom24,25,26, ble effekten av overekspresjon av CrkI, en spleisevariant av Crk,...

Watch this Scientific Journal Video about Real-Time Quantitative Measurement of Tumor Cell Migration and Invasion Following Synthetic mRNA Transfection at JoVE.com

Real-Time Quantitative Measurement of Tumor Cell Migration and Invasion Following Synthetic mRNA Transfection

Mange oppregulerte gener stimulerer tumorcellemigrasjon og invasjon, noe som fører til dårlig prognose. Å bestemme hvilke gener som regulerer tumorcellemigrasjon og invasjon er kritisk. Denne protokollen presenterer en metode for å undersøke effekten av økt ekspresjon av et gen på migrasjon og invasjon av tumorceller i sanntid.

Sanntids kvantitativ måling av tumorcellemigrasjon og invasjon etter syntetisk mRNA-transfeksjon

Tumor cells are highly motile and invasive and display altered gene expression patterns. Knowledge of how changes in gene expression regulate tumor cell ...

Denne protokollen viser at kombinasjon av sensasjonsbudbringer-RNA-transaksjon med impedansbaserte sanntidsmålinger av cellemigrasjon og invasjon letter identifiseringen av gen som stimulerer tumorcellemigrasjon og invasjon. Det impedansbaserte sanntidscelleanalysesystemet muliggjør kvantitativ, kontinuerlig og omfattende overvåking av tumorcellemigrasjon ved genuttrykksendringer. Gener som er over uttrykkende svulster og stimulerer tumorcellemigrasjon kan identifiseres som potensielt mål for å hemme metastase i kreftbehandling.For å begynne, tilsett 10 mikroliter 10x reaksjonsbuffer, 1,5 mikroliter PNE en og 10 mikrogram av et plasmid-DNA til et mikrosentrifugerør for å linearisere plasmid-DNA med restriksjonsenzymet. Tilsett nukleasefritt vann for å bringe reaksjonsvolumet til 100 mikroliter. Bland det ved å banke og spinne det ned før du inkuberer reaksjonsblandingen ved 37 grader Celsius over natten.Igjen, spinn ned og tilsett fem mikroliter 10% SDS og en mikroliter på 20 milligram per milliliter RNA-klasse proteinase K til reaksjonsblandingen før du blander den og spinner den ned. Etter 30 minutters inkubasjon ved 50 grader Celsius, tilsett to mikroliter hver med 10x transkripsjonsbuffer, ATP, GTP, UTP, CTP og T7, og ett mikrogram av et linearisert DNA til et mikrosentrifugerør for T7 RNA-polymerasemediert RNA-syntese. Tilsett nukleasefritt vann for å bringe reaksjonsvolumet til 20 mikroliter.Etter en spin down, inkuber reaksjonsblandingen ved 37 grader Celsius i to timer for RNA-syntese. Deretter spinner du ned og legger til en mikroliter DNA og trykker før 15 minutters inkubasjon ved 37 grader Celsius for å fjerne mal-DNA. Begynn litiumkloridutfellingen av RNA ved å tilsette 10 mikroliter 7,5 molær litiumklorid til reaksjonsblandingen.Etter tapping og spinning ned, inkuber reaksjonsblandingen ved minus 20 grader Celsius i 30 minutter. For å kappe varme RNA-prøven ved 65 grader Celsius i 10 minutter og legg den deretter på is for avkjøling. Deretter legger du til capping reaksjonskomponenter og blander ved å tappe.Spinn ned og inkuber reaksjonsblandingen ved 37 grader Celsius i en time. For poly-A tailing, spinn ned prøven og legg til poly-A tailing reaksjonskomponenter. Deretter tapper, spinner ned og inkuberer reaksjonsblandingen ved 37 grader Celsius i to timer.For litiumkloridutfelling og kvantifisering av det syntetiske mRNA, tilsett 50 mikroliter 7,5 molar litiumklorid og utfør litiumkloridutfellingen. Fjern en aliquot av ECM gel lager fra fryseren og hold den på is. Fortynn ECM-gelen på 10 milligram per liter til en arbeidskonsentrasjon ved å blande 990 mikroliter DMEM med 10 mikroliter ECM-gel i et mikrosentrifugerør.Bland med forsiktig pipettering. Tilsett 60 mikroliter fortynnet ECM-gel til hver av de 16 brønnene i CIM platens øvre kammer. Plasser det øvre kammeret på CIM-platen med platedekselet av på et beskyttende plastark inne i en karbondioksidinkubator i omtrent fire timer for å danne et gellag.For elektroporering, tilsett en milliliter DPBS til tumorcellesuspensjonen i hvert rør. Trykk på cellefjæringen og spinn ned tre ganger i 10 sekunder. Fjern supernatanten ved hjelp av en mikropipette.Tilsett 110 mikroliter resuspensjonsbuffer R til cellepelleten for å oppnå 0,1 millioner celler i 10 mikroliter. Tilsett syntetisk mRNA til cellepelleten for å oppnå konsentrasjonen på 0,2 til 20 nanogram per mikroliter avhengig av ønsket uttrykksnivå. Bland og resuspender cellepelleten forsiktig ved å banke.Deretter elektroporerer du 10 mikroliter av celleopphenget med et elektroporasjonssystem ved 1.350 volt i 10 millisekunder med tre pulser hver gang. Når du er ferdig, overfør de elektroporerte cellene til et nytt mikrosentrifugerør med 1,1 milliliter DMEM inneholdende 0,5% FBS. Åpne analyseprogrammet ved å dobbeltklikke på sanntids celleanalyseprogramvareikon.Når du har åpnet standardalternativet for oppsett av eksperimentmønster, velger du alternativet for å kjøre tre eksperimenter separat. Åpne hver vugge ved å klikke på nummerfanen. Deretter klikker du på fanen Eksperimentnotater.Velg mappen og lagre dataene ved å skrive inn eksperimentets navn. Klikk på layoutfanen og velg fire brønner om gangen for å sette opp quad dupliserte brønner for hver behandlingstilstand. Skriv inn eksempelinformasjonen og klikk på bruk.Klikk på tidsplanfanen, og legg deretter til et trinn for å konfigurere totrinnsmodus for celleimpedansmålingene. Klikk deretter på Bruk for å konfigurere det første trinnet. Klikk på legg til et trinn igjen og skriv inn 10 minutter for intervallet og 48 timer for varigheten av migrasjon og invasjon.Klikk deretter på Bruk for å sette opp det andre trinnet. En time før celleimpedansmålingen, tilsett 160 mikroliter DMEM inneholdende 10% serum eller andre kjemoattraktanter til brønnene i det nedre kammeret på CIM-platen. Monter det øvre kammeret som inneholder ECM gelbelagte brønner for invasjon eller ubelagte brønner for migrasjon med underkammeret.For cellemigrasjonsanalysen, tilsett 50 mikroliter lavt serummedium til brønnene i CIM platens øvre kammer. Plasser CIM-platen og systemets vugge i CO2-inkubatoren. Klikk på meldingsfanen.Når tilkoblingen er i orden, vises meldingen, er CIM-platen klar for eksperimentet. Pre-inkubere den monterte CIM-platen i karbondioksidinkubatoren i 30 til 60 minutter før sanntidscelleanalysen for å akklimatisere CIM-platen til kulturtilstanden. For grunnlinjeavlesningen klikker du startknappen for hver holder.Når vinduet lagre som vises, lagrer du eksperimentfilen for å utføre grunnlinjeavlesningen. For cellesitteplasser, fjern CIM-platen fra holderen og plasser den i biosikkerhetsskapet på plateholderen. Deretter tilsettes 100 mikroliter elektroporerte celler som inneholder 100.000 celler til brønnene i CIM platens øvre kammer, og la CIM-platen ligge under biosikkerhetsskapet i 30 minutter ved romtemperatur.Mål celleimpedansen ved å flytte den ferdigmonterte CIM-platen tilbake til den respektive holderen. Start måling av celleimpedans for det andre trinnet ved å klikke på holderens startknapp og på tegnefanen. Klikk deretter på Legg til alle-knappen og velg gjennomsnitts- og standardavviksboksene for å visualisere dataene i sanntid.Elektroporering av U 118 mg glioblastomceller med varierende konsentrasjoner av syntetisk crack en mRNA resulterte i en konsentrasjonsavhengig økning i flaggmerket crack ett protein en dag etter transfeksjon. 0,2 og to nanogram per mikroliter mRNA førte til et udetekterbart eller beskjedent uttrykk for det eksogene knekke ett protein. 20 nanogram per mikroliter mRNA resulterte i et høyere ekspresjonsnivå enn det endogene crack one-proteinet.Cellemigrasjonsanalysen indikerte at elektroporeringen var 0, 2 eller to nanogram per mikroliter sprekk, ett mRNA påvirket ikke cellemigrasjonen sterkt. Imidlertid førte elektroporering med 20 nanogram per mikroliter sprekk en mRNA til en klar stimulering av cellemigrasjon med flere celler som migrerte mellom to og 13 timer, noe som avslørte at glioblastomcellemigrasjon ble stimulert av økningen i crack one-proteinnivået. Elektroporeringen med syntetisk sprekk L mRNA førte til et robust uttrykk for flaggmerket crack L-protein en dag etter transfeksjon.Invasjonen av kontrollcellene avtok med den økte ECM-proteinkonsentrasjonen. Sprekk L over ekspresserende celler viste en ECM-gelkonsentrasjonsavhengig reduksjon i celleinvasjon. Sammenligningen mellom kontroll og sprekk L over ekspresjonsceller ved forskjellige ECM-gelkonsentrasjoner indikerte at sprekk L-overekspresjon generelt stimulerte celleinvasjon gjennom ECM-gellaget.Resultatene antydet også at de to cellepopulasjonene ble differensielt påvirket av økende ECM-gelkonsentrasjon på forskjellige tidspunkter. Celler bør resuspenderes raskt, forsiktig og helt i den resuspenderte boblen R fordi lang inkubasjon av celler i den resuspenderte boblen R gjør cellene usunne. Raske og langsomt migrerende tumorceller kan isoleres for å karakterisere forskjeller mellom de to cellepopulasjonene.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Evaluation of the Cell Invasion and Migration Process: A Comparison of the Video Microscope-based Scratch Wound Assay and the Boyden Chamber Assay

Evaluering av cellen invasjonen og overføringsprosessen: en sammenligning av Video mikroskop-baserte Scratch sår analysen og Boyden kammeret analysen

The invasion and migration abilities of tumor cells are main contributors to cancer progression and recurrence. Many studies have explored the migration ...

Serum and Plasma Copy Number Detection Using Real-time PCR

Plasmaprøver kopiere nummer Detection bruke sanntid PCR

Serum and plasma cell free DNA (cfDNA) has been shown as an informative, non-invasive source of biomarkers for cancer diagnosis, prognosis, monitoring, ...

Live-Cell Imaging Assays to Study Glioblastoma Brain Tumor Stem Cell Migration and Invasion

Live-celle Imaging analyser studie Glioblastoma hjerne svulst stamcelleforskningen migrasjon og invasjon

Glioblastoma (GBM) is an aggressive brain tumor that is poorly controlled with the currently available treatment options. Key features of GBMs include ...

Real Time Detection of In Vitro Tumor Cell Apoptosis Induced by CD8+ T Cells to Study Immune Suppressive Functions of Tumor-infiltrating Myeloid Cells

Real Time Detection of In Vitro Tumor Cell Apoptosis Induced by CD8+ T Cells to Study Immune Suppressive Functions of Tumor-infiltrating Myeloid Cells

Sanntid påvisning av i Vitro svulst celle apoptose indusert av CD8+ T celler å studere immun undertrykkende funksjoner av svulst-infiltrere myeloide celler

Potentiation of the tumor-killing ability of CD8+ T cells in tumors, along with their efficient tumor infiltration, is a key element of successful ...

A Simple Migration/Invasion Workflow Using an Automated Live-cell Imager

En enkel overføring/invasjonen arbeidsflyt ved hjelp av en automatisert Live-celle-Imager

Cancer cell mobility is crucial for the initiation of metastasis. Therefore, investigation of the cell movement and invasive capacity is of great ...

Fully Human Tumor-based Matrix in Three-dimensional Spheroid Invasion Assay

Fullt Human tumor-baserte Matrix i tredimensjonale spheroid Invasion analysen

Two-dimensional cell culture-based assays are commonly used in in vitro cancer research. However, they lack several basic elements that form the tumor ...

Real-Time Monitoring of Human Glioma Cell Migration on Dorsal Root Ganglion Axon-Oligodendrocyte Co-Cultures

Real-Time overvåking av Human glioma Cell migrasjon på rygg rot Ganglion axon-Oligodendrocyte co-kulturer

Glioblastoma is one of the most aggressive human cancers due to extensive cellular heterogeneity and the migration properties of hGCs. In order to better ...

Characterization of the Effects of Migrastatic Inhibitors on 3D Tumor Spheroid Invasion by High-resolution Confocal Microscopy

Karakterisering av effekter av Migrastatic hemmere på 3D tumor spheroid Invasion av høy oppløsning Konfokalmikroskopi mikroskopi

Drug discovery and development in cancer research is increasingly being based on drug screens in a 3D format. Novel inhibitors targeting the migratory and ...

Impedance-based Real-time Measurement of Cancer Cell Migration and Invasion

Impedansbasert sanntidsmåling av kreftcellemigrasjon og invasjon

Cancer arises due to uncontrolled proliferation of cells initiated by genetic instability, mutations, and environmental and other stress factors. These ...

Measuring Real-time Drug Response in Organotypic Tumor Tissue Slices

Måle sanntids narkotikarespons i organotypic tumor vev skiver

Tumor tissues are composed of cancerous cells, infiltrated immune cells, endothelial cells, fibroblasts, and extracellular matrix. This complex milieu ...