Name: real-time quantitative measurement of tumor cell migration and invasion following synthetic mrna transfection
Uploaded: 2023-06-23T13:10:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Real-Time Quantitative Measurement of Tumor Cell Migration and Invasion Following Synthetic mRNA Transfection at JoVE.com

Författarna tackar Medical Writing Center vid Children's Mercy Kansas City för redigeringen av detta manuskript. Detta arbete stöddes av Natalie's A.R.T. Foundation (till T.P.) och av ett MCA Partners Advisory Board-bidrag från Children's Mercy Hospital (CMH) och University of Kansas Cancer Center (KUCC) (till T.P.).

1. Syntes av mRNA
OBS: För mRNA-syntesen måste alla reagenser och utrustning specialbehandlas för att inaktivera RNaserna före användning. Se materialtabellen för detaljer om alla material, instrument och reagenser som används i detta protokoll.
<ol><li>Linjärisering av DNA OBS: Mus-cDNA från CrkI och CrkL klonades in i pFLAG-CMV-5a-uttrycksvektorn för att lägga till FLAG-epitoptaggen vid C-terminalen och subklonades till pcDNA3.1/myc-...

<ol>
	<li>Palmer, T. D., Ashby, W. J., Lewis, J. D., Zijlstra, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+tumor+cell+motility+to+prevent+metastasis.">Targeting tumor cell motility to prevent metastasis.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 63 (8), 568-581 (2011).</li><li>Eccles, S. A., Box, C., Court, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+migration/invasion+assays+and+their+application+in+cancer+drug+discovery.">Cell migration/invasion assays and their application in cancer drug discovery.</a> Biotechnology Annual Review. 11, 391-421 (2005).</li><li>Kluiver, T. A., Alieva, M., van Vuurden, D. G., Wehrens, E. J., Rios, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Invaders+exposed:+Understanding+and+targeting+tumor+cell+invasion+in+diffuse+intrinsic+pontine+glioma.">Invaders exposed: Understanding and targeting tumor cell invasion in diffuse intrinsic pontine glioma.</a> Frontiers in Oncology. 10, 92 (2020).</li><li>Xie, Q., Mittal, S., Berens, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+adaptive+glioblastoma:+An+overview+of+proliferation+and+invasion.">Targeting adaptive glioblastoma: An overview of proliferation and invasion.</a> Neuro-Oncology. 16 (12), 1575-1584 (2014).</li><li>Wee, Y., Wang, T., Liu, Y., Li, X., Zhao, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+pan-cancer+study+of+copy+number+gain+and+up-regulation+in+human+oncogenes.">A pan-cancer study of copy number gain and up-regulation in human oncogenes.</a> Life Sciences. 211, 206-214 (2018).</li><li>Zhao, M., Liu, Y., Qu, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+epithelial-mesenchymal+transition-related+genes+increases+with+copy+number+in+multiple+cancer+types.">Expression of epithelial-mesenchymal transition-related genes increases with copy number in multiple cancer types.</a> Oncotarget. 7 (17), 24688-24699 (2016).</li><li>Pijuan, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+cell+migration,+invasion,+and+adhesion+assays:+From+cell+imaging+to+data+analysis.">In vitro cell migration, invasion, and adhesion assays: From cell imaging to data analysis.</a> Frontiers in Cell and Developmental Biology. 7, 107 (2019).</li><li>Park, T., Large, N., Curran, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+assessment+of+glioblastoma+phenotypes+in+vitro+establishes+cell+migration+as+a+robust+readout+of+Crk+and+CrkL+activity.">Quantitative assessment of glioblastoma phenotypes in vitro establishes cell migration as a robust readout of Crk and CrkL activity.</a> The Journal of Biological Chemistry. 296, 100390 (2021).</li><li>Urcan, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+xCELLigence+impedance+analysis+of+the+cytotoxicity+of+dental+composite+components+on+human+gingival+fibroblasts.">Real-time xCELLigence impedance analysis of the cytotoxicity of dental composite components on human gingival fibroblasts.</a> Dental Materials. 26 (1), 51-58 (2010).</li><li>Limame, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+analysis+of+dynamic+cell+viability,+migration+and+invasion+assessments+by+novel+real-time+technology+and+classic+endpoint+assays.">Comparative analysis of dynamic cell viability, migration and invasion assessments by novel real-time technology and classic endpoint assays.</a> PLoS One. 7 (10), e46536 (2012).</li><li>Mudduluru, G., Large, N., Park, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impedance-based+real-time+measurement+of+cancer+cell+migration+and+invasion.">Impedance-based real-time measurement of cancer cell migration and invasion.</a> Journal of Visualized Experiments. (158), e60997 (2020).</li><li>Feller, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Crk+family+adaptors-signalling+complex+formation+and+biological+roles.">Crk family adaptors-signalling complex formation and biological roles.</a> Oncogene. 20 (44), 6348-6371 (2001).</li><li>Park, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Crk+and+CrkL+as+therapeutic+targets+for+cancer+treatment.">Crk and CrkL as therapeutic targets for cancer treatment.</a> Cells. 10 (4), 739 (2021).</li><li>Verbeke, R., Lentacker, I., De Smedt, S. C., Dewitte, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+dawn+of+mRNA+vaccines:+The+COVID-19+case.">The dawn of mRNA vaccines: The COVID-19 case.</a> Journal of Controlled Release. 333, 511-520 (2021).</li><li>Heine, A., Juranek, S., Brossart, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+and+immunological+effects+of+mRNA+vaccines+in+malignant+diseases.">Clinical and immunological effects of mRNA vaccines in malignant diseases.</a> Molecular Cancer. 20 (1), 52 (2021).</li><li>Kwon, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emergence+of+synthetic+mRNA:+In+vitro+synthesis+of+mRNA+and+its+applications+in+regenerative+medicine.">Emergence of synthetic mRNA: In vitro synthesis of mRNA and its applications in regenerative medicine.</a> Biomaterials. 156, 172-193 (2018).</li><li>Campillo-Davo, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+ins+and+outs+of+messenger+RNA+electroporation+for+physical+gene+delivery+in+immune+cell-based+therapy.">The ins and outs of messenger RNA electroporation for physical gene delivery in immune cell-based therapy.</a> Pharmaceutics. 13 (3), 396 (2021).</li><li>Park, T., Koptyra, M., Curran, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibroblast+growth+requires+CT10+regulator+of+kinase+(Crk)+and+Crk-like+(CrkL).">Fibroblast growth requires CT10 regulator of kinase (Crk) and Crk-like (CrkL).</a> The Journal of Biological Chemistry. 291 (51), 26273-26290 (2016).</li><li>Park, T. J., Curran, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Essential+roles+of+Crk+and+CrkL+in+fibroblast+structure+and+motility.">Essential roles of Crk and CrkL in fibroblast structure and motility.</a> Oncogene. 33 (43), 5121-5132 (2014).</li><li>Chou, P. P., Jaynes, P. K., King, B. P., Chapman, E., Bailey, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Precision+comparison+between+conventional+(method-I)+and+reverse+(method-Ii)+pipetting.">Precision comparison between conventional (method-I) and reverse (method-Ii) pipetting.</a> Clinical Chemistry. 30 (6), 958 (1984).</li><li>Pushparaj, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Revisiting+the+micropipetting+techniques+in+biomedical+sciences:+A+fundamental+prerequisite+in+good+laboratory+practice.">Revisiting the micropipetting techniques in biomedical sciences: A fundamental prerequisite in good laboratory practice.</a> Bioinformation. 16 (1), 8-12 (2020).</li><li>Park, T. J., Curran, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Crk+and+Crk-like+play+essential+overlapping+roles+downstream+of+disabled-1+in+the+Reelin+pathway.">Crk and Crk-like play essential overlapping roles downstream of disabled-1 in the Reelin pathway.</a> The Journal of Neuroscience. 28 (50), 13551-13562 (2008).</li><li>Huang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CRK+proteins+selectively+regulate+T+cell+migration+into+inflamed+tissues.">CRK proteins selectively regulate T cell migration into inflamed tissues.</a> The Journal of Clinical Investigation. 125 (3), 1019-1032 (2015).</li><li>Wang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Signaling+adaptor+protein+Crk+is+indispensable+for+malignant+feature+of+glioblastoma+cell+line+KMG4.">Signaling adaptor protein Crk is indispensable for malignant feature of glioblastoma cell line KMG4.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 362 (4), 976-981 (2007).</li><li>Kumar, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reciprocal+regulation+of+Abl+kinase+by+Crk+Y251+and+Abi1+controls+invasive+phenotypes+in+glioblastoma.">Reciprocal regulation of Abl kinase by Crk Y251 and Abi1 controls invasive phenotypes in glioblastoma.</a> Oncotarget. 6 (35), 37792-37807 (2015).</li><li>Kumar, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Crk+tyrosine+phosphorylation+regulates+PDGF-BB-inducible+Src+activation+and+breast+tumorigenicity+and+metastasis.">Crk tyrosine phosphorylation regulates PDGF-BB-inducible Src activation and breast tumorigenicity and metastasis.</a> Molecular Cancer Research. 16 (1), 173-183 (2018).</li><li>Raudenska, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engine+shutdown:+Migrastatic+strategies+and+prevention+of+metastases.">Engine shutdown: Migrastatic strategies and prevention of metastases.</a> Trends in Cancer. 9 (4), 293-308 (2023).</li><li>Decaestecker, C., Debeir, O., Van Ham, P., Kiss, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Can+anti-migratory+drugs+be+screened+in+vitro?+A+review+of+2D+and+3D+assays+for+the+quantitative+analysis+of+cell+migration.">Can anti-migratory drugs be screened in vitro? A review of 2D and 3D assays for the quantitative analysis of cell migration.</a> Medicinal Research Reviews. 27 (2), 149-176 (2007).</li><li>Farasani, A., Darbre, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+exposure+to+triclosan+increases+migration+and+invasion+of+human+breast+epithelial+cells+in+vitro.">Long-term exposure to triclosan increases migration and invasion of human breast epithelial cells in vitro.</a> Journal of Applied Toxicology. 41 (7), 1115-1126 (2021).</li><li>Hanusova, V., Skalova, L., Kralova, V., Matouskova, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+flubendazole+on+adhesion+and+migration+in+SW480+and+SW620+colon+cancer+cells.">The effect of flubendazole on adhesion and migration in SW480 and SW620 colon cancer cells.</a> Anti-Cancer Agents in Medicinal Chemistry. 18 (6), 837-846 (2018).</li><li>Lago-Baameiro, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PARK7/DJ-1+inhibition+decreases+invasion+and+proliferation+of+uveal+melanoma+cells.">PARK7/DJ-1 inhibition decreases invasion and proliferation of uveal melanoma cells.</a> Tumori. 109 (1), 47-53 (2023).</li><li>Escalona, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Knock+down+of+TIMP-2+by+siRNA+and+CRISPR/Cas9+mediates+diverse+cellular+reprogramming+of+metastasis+and+chemosensitivity+in+ovarian+cancer.">Knock down of TIMP-2 by siRNA and CRISPR/Cas9 mediates diverse cellular reprogramming of metastasis and chemosensitivity in ovarian cancer.</a> Cancer Cell International. 22 (1), 422 (2022).</li><li>Mosca, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+S-adenosyl-L-methionine+on+the+invasion+and+migration+of+head+and+neck+squamous+cancer+cells+and+analysis+of+the+underlying+mechanisms.">Effects of S-adenosyl-L-methionine on the invasion and migration of head and neck squamous cancer cells and analysis of the underlying mechanisms.</a> International Journal of Oncology. 56 (5), 1212-1224 (2020).</li><li>Zhao, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=VEGI174+protein+and+its+functional+domain+peptides+exert+antitumour+effects+on+renal+cell+carcinoma.">VEGI174 protein and its functional domain peptides exert antitumour effects on renal cell carcinoma.</a> International Journal of Oncology. 54 (1), 390-398 (2019).</li><li>Witte, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TGF-beta1-induced+cell+migration+in+pancreatic+carcinoma+cells+is+RAC1+and+NOX4-dependent+and+requires+RAC1+and+NOX4-dependent+activation+of+p38+MAPK.">TGF-beta1-induced cell migration in pancreatic carcinoma cells is RAC1 and NOX4-dependent and requires RAC1 and NOX4-dependent activation of p38 MAPK.</a> Oncology Reports. 38 (6), 3693-3701 (2017).</li><li>Bui, L. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+aquaporin+3+expression+by+the+AhR+pathway+is+critical+to+cell+migration.">Regulation of aquaporin 3 expression by the AhR pathway is critical to cell migration.</a> Toxicological Sciences. 149 (1), 158-166 (2016).</li><li>Tsuji, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+different+cell-detaching+methods+on+the+viability+and+cell+surface+antigen+expression+of+synovial+mesenchymal+stem+cells.">Effects of different cell-detaching methods on the viability and cell surface antigen expression of synovial mesenchymal stem cells.</a> Cell Transplantation. 26 (6), 1089-1102 (2017).</li><li>Frandsen, S. K., McNeil, A. K., Novak, I., McNeil, P. L., Gehl, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Difference+in+membrane+repair+capacity+between+cancer+cell+lines+and+a+normal+cell+line.">Difference in membrane repair capacity between cancer cell lines and a normal cell line.</a> The Journal of Membrane Biology. 249 (4), 569-576 (2016).</li></ol>

Migration och invasion är viktiga egenskaper hos tumörceller. Att mäta tumörcellers rörlighet och förstå den underliggande mekanismen som styr tumörcellernas rörlighet ger viktiga insikter om terapeutiska interventioner 2,27. Flera metoder har utvecklats för att studera cellmigration7. Sårläkningsanalysen med repor eller odlingsinsatser är en enkel och ofta använd metod som ger kontrasterande bilder av spaltförslutning. Den ...

Tumörcellernas rörlighet spelar en avgörande roll vid metastasering 1,2. Spridningen av tumörceller till närliggande och avlägsna friska vävnader försvårar cancerbehandling och bidrar till återfall 3,4. Därför är det viktigt att förstå mekanismerna för tumörcellernas rörlighet och utveckla relevanta terapeutiska strategier. Eftersom många tumörceller har förändrade genuttrycksprofiler är det viktigt att förstå vilka förändringar i genuttrycksprofilen som leder till förändrad tumörcellsrörlighet 5,6.
Flera analyser har utvecklats för att mäta cellmigration in vitro. Vissa analyser ger endast begränsad information på grund av att de endast tillåter mätningar vid specifika tidpunkter, medan andra erbjuder omfattande information om tumörcellernas rörlighet i realtid7. Även om många av dessa cellmotilitetsanalyser kan ge kvantitativa resultat vid en given tidpunkt eller slutpunkt, ger de inte tillräckligt detaljerad information om dynamiska förändringar i cellmigrationshastigheten under experimentperioden. Dessutom kan det vara svårt att undersöka potentiella förändringar i cellmigrationshastigheten beroende på experimentell design, celltyper och cellantal. Dessutom kan effekterna av okomplicerade behandlingar undersökas genom enkel kvantifiering av traditionella motilitetsanalyser, men mer sofistikerad kvantifiering kan krävas för att studera de komplexa effekterna av olika kombinerade behandlingar8.
Ett instrument för att övervaka den elektriska strömmen i en mikrotiterplattas botten täckt med mikroelektroderhar utvecklats. Vidhäftningen av celler till brunnens yta hindrar elektronflödet, och impedansen korrelerar med den kvantitativa och kvalitativa bindningen av cellerna. Närvaron av mikroelektroderna på brunnens botten möjliggör mätning av cellvidhäftning, spridning och proliferation. Närvaron av mikroelektroderna under ett mikroporöst membran i den övre kammaren möjliggör mätning av cellmigration och invasion i den nedre kammaren, med den övre kammaren belagd med extracellulära matrisproteiner (ECM) för att möjliggöra invasion10.
Tidigare har det visats att impedansbaserade realtidsmätningar av tumörcellers migration och invasion ger realtidsdata under hela experimentet, såväl som omedelbara jämförelser och kvantifieringar under olika experimentella förhållanden11. I den metodartikeln inducerades genknockdown för att testa vilken roll proteiner av intresse spelar för tumörcellers migration och invasion. Eftersom en fullskalig genknockdown-effekt under de testade experimentella förhållandena tog 3-4 dagar efter elektroporering med små interfererande RNA (siRNA)8, ompläterades cellerna efter elektroporeringen och återskördades 3 dagar senare för impedansbaserad realtidsmätning av tumörcellmigration och invasion.
CT10-regulator av kinas (Crk) och Crk-liknande (CrkL) är adapterproteiner som förmedlar protein-proteininteraktioner nedströms olika tillväxtfaktorreceptorkinasvägar och icke-receptortyrosinkinasvägar12. Förhöjda nivåer av Crk- och CrkL-proteiner bidrar till dålig prognos vid flera humana cancerformer, inklusive glioblastom13. Det är dock oklart hur förhöjda Crk- och CrkL-proteiner leder till en dålig prognos. Därför är det viktigt att definiera effekten av Crk och CrkL-överuttryck på tumörcellsfunktioner. Tidigare har en genknockdown-studie utförts för att visa att endogena nivåer av Crk- och CrkL-proteiner krävs för glioblastomcellmigration och invasion8. Här har ett modifierat analyssystem utvecklats för att ta itu med effekten av Crk- och CrkL-överuttryck på tumörcellsmigration och invasion.
På senare tid har in vitro-syntesen av mRNA och dess terapeutiska tillämpningar fått förnyad uppmärksamhet på grund av utvecklingen av mRNA-vaccinerna mot SARS-CoV-2 (granskad av Verbeke et al.14). Dessutom har anmärkningsvärda framsteg gjorts när det gäller att använda syntetiskt mRNA vid cancer och andra sjukdomar15,16. Elektroporering av celler är en effektiv metod för att leverera syntetiskt mRNA och inducera övergående genetisk modifiering (granskad av Campillo-Davo et al.17), och användningen av syntetiskt mRNA möjliggör snabbt och effektivt genuttryck i odödliga fibroblaster18. Denna metodartikel kombinerar genöveruttryck med hjälp av syntetiskt mRNA med cellanalyser i realtid för att studera tumörcellers migration och invasion. Det experimentella schemat som används för siRNA fungerar dock inte med syntetisk mRNA-transfektion, eftersom nivån av exogena proteiner ökar snabbt och minskar gradvis vid syntetisk mRNA-transfektion18. Därför har metoden modifierats för att utföra realtidsanalys av cellmigration och invasion direkt efter transfektionen utan att ytterligare odla cellerna.
Denna metodartikel visar att en kombination av impedansbaserade realtidsmätningar med transfektion av tumörceller med syntetiska mRNA ger en snabb och omfattande analys av effekterna av genuppreglering på tumörcellers migration och invasion. Denna metodartikel beskriver detaljerade procedurer för att mäta hur glioblastomcellernas migration och invasion påverkas av överuttryck av Crk och CrkL. Genom att undersöka de koncentrationsberoende effekterna av syntetiskt mRNA på tumörcellsmigration beskriver artikeln tydligt hur en ökning av proteinnivåerna stimulerar tumörcellmigration. Dessutom presenteras ett tillvägagångssätt för att variera koncentrationen av ECM-gelen för att bedöma effekterna av förändringar i genuttryck på tumörcellsinvasion.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>AlphaImager HP</td>
			<td>ProteinSimple</td>
			<td>92-13823-00</td>
			<td>Agarose gel imaging system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#945;-Tubulin antibody</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T9026</td>
			<td>Used to detect &#945;-tubulin protein (dilution 1:3,000)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CIM-plate 16</td>
			<td>Agilent Technologies, Inc</td>
			<td>5665825001</td>
			<td>Cell invasion and migration plates</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Crk antibody</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>610035</td>
			<td>Used to detect CrkI and CrkII proteins (dilution 1:1,500)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CrkL antibody</td>
			<td>Santa Cruz</td>
			<td>sc-319</td>
			<td>Used to detect CrkL protein (dilution 1:1,500)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#8217;s Modified Eagle&#8217;s Medium (DMEM)</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>302002</td>
			<td>Cell culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s phosphate-buffered saline (DPBS)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>21-031-CV</td>
			<td>Buffer used to wash cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Hyclone</td>
			<td>SH30910.03</td>
			<td>Culture medium supplement</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heracell VIOS 160i CO2 incubator</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>51030285</td>
			<td>CO2 incubator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IRDye 800CW goat anti-mouse IgG secondary antibody</td>
			<td>Li-Cor</td>
			<td>926-32210</td>
			<td>Secondary antibody for Western blot analysis (dilution 1:10,000)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IRDye 800CW goat anti-rabbit IgG secondary antibody</td>
			<td>Li-Cor</td>
			<td>926-32211</td>
			<td>Secondary antibody for Western blot analysis&#160; (dilution 1:10,000)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lithium chloride&#160;</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AM9480</td>
			<td>Used for RNA precipitation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel matrix</td>
			<td>Corning</td>
			<td>354234</td>
			<td>Extracellular matrix (ECM) gel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEGAscript T7 transcription kit</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AM1334</td>
			<td>Used for RNA synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Millennium RNA markers</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AM7150</td>
			<td>Used for formaldehyde agarose gel electrophoresis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mini centrifuge</td>
			<td>ISC BioExpress</td>
			<td>C1301P-ISC</td>
			<td>Used to spin down cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse brain QUICK-Clone cDNA</td>
			<td>TaKaRa</td>
			<td>637301</td>
			<td>Source of genes (inserts) for cloning</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NanoQuant</td>
			<td>Tecan</td>
			<td>M200PRO</td>
			<td>Nucleic acid quantification system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neon electroporation system&#160;</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>MPK5000</td>
			<td>Electroporation system1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neon transfection system 10 &#181;L kit</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>MPK1025</td>
			<td>Electroporation kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neon transfection system 100 &#181;L kit</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>MPK10096</td>
			<td>Electroporation kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NorthernMax denaturing gel buffer</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AM8676</td>
			<td>Used for formaldehyde agarose gel electrophoresis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NorthernMax formaldehyde load dye</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AM8552</td>
			<td>Used for formaldehyde agarose gel electrophoresis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NorthernMax running buffer</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AM8671</td>
			<td>Used for formaldehyde agarose gel electrophoresis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nuclease-free water</td>
			<td>Teknova</td>
			<td>W3331</td>
			<td>Used for various reactions during mRNA synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Odyssey CLx Imager</td>
			<td>Li-Cor</td>
			<td></td>
			<td>Imager for Western blot analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pcDNA3.1/myc-His</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>V80020</td>
			<td>The vector into which inserts (mouse CrkI and CrkL cDNAs) were cloned</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pFLAG-CMV-5a</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>E7523</td>
			<td>Source of the FLAG epitope tag</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenol:chloroform:isoamyl alcohol&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P2069</td>
			<td>Used for DNA extraction</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PmeI</td>
			<td>New England BioLabs</td>
			<td>R0560L</td>
			<td>Used to linearize the plasmids for mRNA synthesis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poly(A) tailing kit</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AM1350</td>
			<td>Used for poly(A) tail reaction</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polystyrene tissue culture dish (100 x 20 mm style)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353003</td>
			<td>Used for culturing cells before transfection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polystyrene tissue culture dish (35 x 10 mm style)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353001</td>
			<td>Used for culturing transfected cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Proteinase K</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>25530049</td>
			<td>Used to remove protein in the reaction mixture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Purifier Axiom Class II, Type C1</td>
			<td>Labconco Corporation</td>
			<td>304410001</td>
			<td>Biosafety cabinet for sterile handling of cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Resuspension Buffer R</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td></td>
			<td>A buffer included in the electroporation kits, MPK1025 and MPK10096. The buffer is used to resupend cells before electroporation, and its composition is proprietary information.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNaseZap</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AM9780</td>
			<td>RNA decontamination solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scepter</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>C85360</td>
			<td>Handheld automated cell counter&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ScriptCap 2&#39;-O-methyltransferase kit</td>
			<td>Cellscript</td>
			<td>C-SCMT0625</td>
			<td>Used for capping reaction</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ScriptCap m7G capping system</td>
			<td>Cellscript</td>
			<td>C-SCCE0625</td>
			<td>Used for capping reaction</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium dodecyl sulfate solution</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>15553-035</td>
			<td>Detergent used for the proteinase K reaction</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sorvall Legend XT centrifuge</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>75004532</td>
			<td>Benchtop centrifuge to spin down cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-EDTA</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>25300-054</td>
			<td>Used for dissociation of cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>U-118MG&#160;</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>HTB15</td>
			<td>An adherent cell line derived from a human glioblastoma patient</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vinculin antibody</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>V9131</td>
			<td>Used to detect vinculin protein (dilution 1:100,000)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>xCELLigence RTCA DP</td>
			<td>Agilent Technologies, Inc</td>
			<td>380601050</td>
			<td>Instrument used for real-time cell analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1Electroporation parameters and other related information for various cell lines are available on the manufacturer&#39;s homepage (https://www.thermofisher.com/us/en/home/life-science/cell-culture/transfection/neon-transfection-system/neon-transfection-system-cell-line-data.html?).</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

real-time quantitative measurement of tumor cell migration and invasion following synthetic mrna transfection

Tumörceller är mycket rörliga och invasiva och uppvisar förändrade genuttrycksmönster. Kunskap om hur förändringar i genuttryck reglerar tumörcellers migration och invasion är avgörande för att förstå mekanismerna för tumörcellers infiltration i närliggande friska vävnader och metastaser. Tidigare har det visats att genknockdown följt av impedansbaserad realtidsmätning av tumörcellers migration och invasion möjliggör identifiering av de gener som krävs för tumörcellers migration och invasion. På senare tid har mRNA-vaccinerna mot SARS-CoV-2 ökat intresset för att använda syntetiskt mRNA i terapeutiskt syfte. Här reviderades metoden med syntetiskt mRNA för att studera effekten av överuttryck av gener på tumörcellers migration och invasion. Denna studie visar att förhöjt genuttryck med syntetisk mRNA-transfektion följt av impedansbaserad realtidsmätning kan hjälpa till att identifiera de gener som stimulerar tumörcellsmigration och invasion. Denna metodartikel ger viktiga detaljer om procedurerna för att undersöka effekten av förändrat genuttryck på tumörcellsmigration och invasion.

Crk- och CrkL-proteiner spelar viktiga roller i motiliteten hos många celltyper, inklusive neuroner22, T-celler23, fibroblaster 18,19 och en mängd olika tumörceller13. Eftersom Crk- och CrkL-proteiner har rapporterats vara förhöjda i glioblastom24,25,26, studerades effekterna av överuttryck av CrkI, en skarvvariant av Crk,<sup c...

Watch this Scientific Journal Video about Real-Time Quantitative Measurement of Tumor Cell Migration and Invasion Following Synthetic mRNA Transfection at JoVE.com

Real-Time Quantitative Measurement of Tumor Cell Migration and Invasion Following Synthetic mRNA Transfection

Många uppreglerade gener stimulerar tumörcellers migration och invasion, vilket leder till dålig prognos. Att avgöra vilka gener som reglerar tumörcellers migration och invasion är avgörande. Detta protokoll presenterar en metod för att undersöka effekterna av det ökade uttrycket av en gen på migration och invasion av tumörceller i realtid.

Kvantitativ mätning i realtid av tumörcellsmigration och invasion efter syntetisk mRNA-transfektion

Tumor cells are highly motile and invasive and display altered gene expression patterns. Knowledge of how changes in gene expression regulate tumor cell ...

Detta protokoll visar att en kombination av förnimmelsebudbärar-RNA-transaktion med impedansbaserade realtidsmätningar av cellmigration och invasion underlättar identifieringen av gener som stimulerar tumörcellmigration och invasion. Det impedansbaserade cellanalyssystemet i realtid möjliggör kvantitativ, kontinuerlig och omfattande övervakning av tumörcellmigration vid genuttrycksförändringar. Gener som överuttrycker tumörer och stimulerar tumörcellsmigration kan identifieras som ett potentiellt mål för att hämma metastasering vid cancerbehandling.Till att börja med, tillsätt 10 mikroliter 10x reaktionsbuffert, 1.5 mikroliter PNE one och 10 mikrogram av ett plasmid-DNA till ett mikrocentrifugrör för att linjärisera plasmid-DNA med restriktionsenzymet. Tillsätt nukleasfritt vatten för att få reaktionsvolymen till 100 mikroliter. Blanda den genom att knacka och snurra ner den innan du inkuberar reaktionsblandningen vid 37 grader Celsius över natten.Återigen, snurra ner och tillsätt fem mikroliter 10% SDS och en mikroliter 20 milligram per milliliter RNA-proteinas K till reaktionsblandningen innan du blandar den och snurrar ner den. Efter 30 minuters inkubation vid 50 grader Celsius, tillsätt två mikroliter vardera av 10x transkriptionsbuffert, ATP, GTP, UTP, CTP och T7, och ett mikrogram av ett linjäriserat DNA till ett mikrocentrifugrör för T7 RNA-polymerasmedierad RNA-syntes. Tillsätt nukleasfritt vatten för att få reaktionsvolymen till 20 mikroliter.Efter en nedrullning inkuberas reaktionsblandningen vid 37 grader Celsius i två timmar för RNA-syntes. Snurra sedan ner och tillsätt en mikroliter DNA och knacka före 15 minuters inkubation vid 37 grader Celsius för att ta bort mall-DNA. Börja litiumkloridutfällningen av RNA genom att tillsätta 10 mikroliter 7,5 molar litiumklorid till reaktionsblandningen.Efter knackning och centrifugering ner, inkubera reaktionsblandningen vid minus 20 grader Celsius i 30 minuter. För täckmantel, värm RNA-provet vid 65 grader Celsius i 10 minuter och lägg det sedan på is för kylning. Tillsätt sedan kapsylerande reaktionskomponenter och blanda genom att knacka.Snurra ner och inkubera reaktionsblandningen vid 37 grader Celsius i en timme. För poly-A-anrikning, spinn ner provet och tillsätt poly-A-restreaktionskomponenterna. Knacka sedan på, snurra ner och inkubera reaktionsblandningen vid 37 grader Celsius i två timmar.För utfällning av litiumklorid och kvantifiering av det syntetiska mRNA:t, tillsätt 50 mikroliter 7,5 molar litiumklorid och utför utfällningen av litiumklorid. Ta ut en del ECM-gelbuljong ur frysen och lägg den på is. Späd ECM-gelen på 10 milligram per liter till en arbetskoncentration genom att blanda 990 mikroliter DMEM med 10 mikroliter ECM-gel i ett mikrocentrifugrör.Blanda genom att pipettera försiktigt. Tillsätt 60 mikroliter utspädd ECM-gel till var och en av de 16 brunnarna i CIM-plattans övre kammare. Placera den övre kammaren på CIM-plattan med plattskyddet av på en skyddande plastskiva inuti en koldioxidinkubator i cirka fyra timmar för att bilda ett gelskikt.För elektroporering, tillsätt en milliliter DPBS till tumörcellssuspensionen i varje rör. Tryck på cellsuspensionen och snurra nedåt tre gånger i 10 sekunder. Ta bort supernatanten med hjälp av en mikropipett.Tillsätt 110 mikroliter resuspensionsbuffert R till cellpelleten för att erhålla 0,1 miljoner celler i 10 mikroliter. Tillsätt syntetiskt mRNA till cellpelleten för att erhålla koncentrationen på 0,2 till 20 nanogram per mikroliter beroende på önskad uttrycksnivå. Blanda och återsuspendera cellpelleten försiktigt genom att knacka.Elektroporera sedan 10 mikroliter av cellsuspensionen med ett elektroporeringssystem vid 1,350 volt i 10 millisekunder med tre pulser varje gång. När du är klar, överför de elektroporerade cellerna till ett nytt mikrocentrifugrör med 1.1 milliliter DMEM som innehåller 0.5%FBS. Öppna analysprogrammet genom att dubbelklicka på ikonen för cellanalysprogram i realtid.När du har öppnat standardalternativet för konfiguration av experimentmönster väljer du alternativet för att köra tre experiment separat. Öppna varje vagga genom att klicka på sifferfliken. Klicka sedan på fliken experimentanteckningar.Välj mappen och spara data genom att ange experimentets namn. Klicka på layoutfliken och välj fyra brunnar åt gången för att ställa in de fyra dubblettbrunnarna för varje behandlingstillstånd. Ange exempelinformationen och klicka på använd.Klicka på fliken schema och lägg sedan till ett steg för att ställa in tvåstegsläget för cellimpedansmätningarna. Klicka sedan på tillämpa för att ställa in det första steget. Klicka på lägg till ett steg igen och ange 10 minuter för intervallet och 48 timmar för varaktigheten av migration och invasion.Klicka sedan på tillämpa för att ställa in det andra steget. En timme före mätningen av cellimpedansen, tillsätt 160 mikroliter DMEM innehållande 10 % serum eller andra kemoattraherande medel till brunnarna i CIM-plattans nedre kammare. Montera den övre kammaren som innehåller ECM-gelbelagda brunnar för invasion eller obelagda brunnar för migration med den nedre kammaren.För cellmigrationsanalysen, tillsätt 50 mikroliter lågt serummedium till brunnarna i CIM-plattans övre kammare. Placera CIM-plattan och systemets vagga i CO2-inkubatorn. Klicka på meddelandefliken.När anslutningen är okej visas ett meddelande, CIM-plattan är redo för experimentet. Förinkubera den monterade CIM-plattan i koldioxidinkubatorn i 30 till 60 minuter före cellanalysen i realtid för att acklimatisera CIM-plattan till odlingsförhållandena. För baslinjeavläsningen, klicka på startknappen för varje vagga.När fönstret Spara som visas sparar du experimentfilen för att utföra baslinjeläsningen. För cellplacering, ta bort CIM-plattan från vaggan och placera den i biosäkerhetsskåpet på platthållaren. Tillsätt sedan 100 mikroliter elektroporerade celler som innehåller 100 000 celler till brunnarna i CIM-plattans övre kammare och lämna CIM-plattan under biosäkerhetsskåpet i 30 minuter i rumstemperatur.Mät cellimpedansen genom att flytta tillbaka den färdigmonterade CIM-plattan till respektive vagga. Börja cellimpedansmätningen för det andra steget genom att klicka på vaggans startknapp och på plottningsfliken. Klicka sedan på knappen Lägg till alla och välj rutorna för medelvärde och standardavvikelse för att visualisera data i realtid.Elektroporeringen av U 118 mg glioblastomceller med varierande koncentrationer av syntetiskt crack one-mRNA resulterade i en koncentrationsberoende ökning av flaggmärkt crack one-protein en dag efter transfektion. 0,2 och två nanogram per mikroliter mRNA ledde till ett odetekterbart eller blygsamt uttryck av det exogena crack one-proteinet. 20 nanogram per mikroliter mRNA resulterade i en högre uttrycksnivå än det endogena crack one-proteinet.Cellmigrationsanalysen indikerade att elektroporationen var 0,2 eller två nanogram per mikroliter spricka, ett mRNA påverkade inte cellmigrationen nämnvärt. Elektroporering med 20 nanogram per mikroliter crack one mRNA ledde dock till en tydlig stimulering av cellmigrationen med fler celler som migrerade mellan två och 13 timmar, vilket avslöjade att glioblastomcellernas migration stimulerades av ökningen av crack one-proteinnivån. Elektroporationen med syntetiskt crack L-mRNA ledde till ett robust uttryck av flaggmärkt crack L-protein en dag efter transfektion.Invasionen av kontrollcellerna avtog med den ökade koncentrationen av ECM-proteiner. Crack L över uttryckande celler visade en ECM-gelkoncentrationsberoende minskning av cellinvasionen. Jämförelsen mellan kontrollen och crack L över uttryckande celler vid olika ECM-gelkoncentrationer indikerade att crack L-överuttryck i allmänhet stimulerade cellinvasion genom ECM-gelskiktet.Resultaten tydde också på att de två cellpopulationerna påverkades på olika sätt av att öka ECM-gelkoncentrationen vid olika tidpunkter. Celler bör återsuspenderas snabbt, försiktigt och fullständigt i den återsuspenderade bubblan R människor elektroporering eftersom lång inkubation av celler i den återsuspenderade bubblan R gör cellerna ohälsosamma. Snabbt och långsamt migrerande tumörceller kan isoleras för att karakterisera skillnader mellan de två cellpopulationerna.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Evaluation of the Cell Invasion and Migration Process: A Comparison of the Video Microscope-based Scratch Wound Assay and the Boyden Chamber Assay

Utvärdering av Cell Invasion och migreringsprocessen: en jämförelse av Video Mikroskop-baserade Scratch sår Assay och Boyden kammare analysen

The invasion and migration abilities of tumor cells are main contributors to cancer progression and recurrence. Many studies have explored the migration ...

Serum and Plasma Copy Number Detection Using Real-time PCR

Serum och Plasma kopia nummer detektering med realtids-PCR

Serum and plasma cell free DNA (cfDNA) has been shown as an informative, non-invasive source of biomarkers for cancer diagnosis, prognosis, monitoring, ...

Live-Cell Imaging Assays to Study Glioblastoma Brain Tumor Stem Cell Migration and Invasion

Live-Cell Imaging analyser för studien Glioblastoma hjärnan tumören Stem cellmigration och Invasion

Glioblastoma (GBM) is an aggressive brain tumor that is poorly controlled with the currently available treatment options. Key features of GBMs include ...

Real Time Detection of In Vitro Tumor Cell Apoptosis Induced by CD8+ T Cells to Study Immune Suppressive Functions of Tumor-infiltrating Myeloid Cells

Real Time Detection of In Vitro Tumor Cell Apoptosis Induced by CD8+ T Cells to Study Immune Suppressive Functions of Tumor-infiltrating Myeloid Cells

Realtid upptäcka i Vitro tumör Cell apoptos induceras av CD8+ T celler att studera suppressiv immunförsvaret av tumör-infiltrera myeloida celler

Potentiation of the tumor-killing ability of CD8+ T cells in tumors, along with their efficient tumor infiltration, is a key element of successful ...

A Simple Migration/Invasion Workflow Using an Automated Live-cell Imager

En enkel Migration/Invasion arbetsflöde med hjälp av en automatiserad Live-cell Imager

Cancer cell mobility is crucial for the initiation of metastasis. Therefore, investigation of the cell movement and invasive capacity is of great ...

Fully Human Tumor-based Matrix in Three-dimensional Spheroid Invasion Assay

Helt mänsklig tumör-baserade Matrix i tredimensionell sfäroid invasion assay

Two-dimensional cell culture-based assays are commonly used in in vitro cancer research. However, they lack several basic elements that form the tumor ...

Real-Time Monitoring of Human Glioma Cell Migration on Dorsal Root Ganglion Axon-Oligodendrocyte Co-Cultures

Real tidsövervakning av humana Glioma cell migration på dorsala root ganglion Axon-Oligodendrocyte Co-kulturer

Glioblastoma is one of the most aggressive human cancers due to extensive cellular heterogeneity and the migration properties of hGCs. In order to better ...

Characterization of the Effects of Migrastatic Inhibitors on 3D Tumor Spheroid Invasion by High-resolution Confocal Microscopy

Karakterisering av effekterna av Migrastatiska hämmare på 3D-tumör spheroid invasion av högupplöst Konfokal mikroskopi

Drug discovery and development in cancer research is increasingly being based on drug screens in a 3D format. Novel inhibitors targeting the migratory and ...

Impedance-based Real-time Measurement of Cancer Cell Migration and Invasion

Impedansbaserad realtidsmätning av cancercellmigration och invasion

Cancer arises due to uncontrolled proliferation of cells initiated by genetic instability, mutations, and environmental and other stress factors. These ...

Measuring Real-time Drug Response in Organotypic Tumor Tissue Slices

Mätning i realtid läkemedelsrespons i organotypiska tumörvävnad skivor

Tumor tissues are composed of cancerous cells, infiltrated immune cells, endothelial cells, fibroblasts, and extracellular matrix. This complex milieu ...