Name: generation of a mouse artificial decidualization model with ovariectomy for endometrial decidualization research
Uploaded: 2022-07-27T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Generation of a Mouse Artificial Decidualization Model with Ovariectomy for Endometrial Decidualization Research at JoVE.com

يرغب المؤلفون في الاعتراف بالدعم المقدم من المؤسسة الوطنية لعلوم الطبيعة في الصين (82001629 ، XQS) ، وبرنامج الشباب لمؤسسة العلوم الطبيعية في مقاطعة جيانغسو (BK20200116 ، XQS) ، وتمويل أبحاث ما بعد الدكتوراه في مقاطعة جيانغسو (2021K277B ، XQS).

تمت الموافقة على جميع التجارب على الحيوانات الموصوفة من قبل مستشفى برج الطبل التابع للجنة كلية الطب بجامعة نانجينغ حول استخدام ورعاية الحيوانات (رقم 20171202). تتبع جميع العمليات وكالة رعاية واستخدام الحيوانات المناسبة والمبادئ التوجيهية الوطنية.
ملاحظة: تمت تربية الفئران في ...

<ol>
	<li>Carson, S. A., Kallen, A. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnosis+and+management+of+infertility:+A+review.">Diagnosis and management of infertility: A review.</a> JAMA. 326 (1), 65-76 (2021).</li><li>Yatsenko, S. A., Rajkovic, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetics+of+human+female+infertility+dagger.">Genetics of human female infertility dagger.</a> Biology of Reproduction. 101 (3), 549-566 (2019).</li><li>Sang, Y., Li, Y., Xu, L., Li, D., Du, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulatory+mechanisms+of+endometrial+decidualization+and+pregnancy-related+diseases.">Regulatory mechanisms of endometrial decidualization and pregnancy-related diseases.</a> Acta Biochimica et Biophysica Sinica. 52 (2), 105-115 (2020).</li><li>Ng, S. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endometrial+decidualization:+The+primary+driver+of+pregnancy+health.">Endometrial decidualization: The primary driver of pregnancy health.</a> International Journal of Molecular Sciences. 21 (11), 4092 (2020).</li><li>Birgit, G., Brosens, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cyclic+decidualization+of+the+human+endometrium+in+reproductive+health+and+failure.">Cyclic decidualization of the human endometrium in reproductive health and failure.</a> Endocrine Reviews. 35 (6), 851-905 (2014).</li><li>Owusu-Akyaw, A., Krishnamoorthy, K., Goldsmith, L. T., Morelli, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+mesenchymal-epithelial+transition+in+endometrial+function.">The role of mesenchymal-epithelial transition in endometrial function.</a> Human Reproduction Update. 25 (1), 114-133 (2019).</li><li>Paulson, E. E., Comizzoli, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endometrial+receptivity+and+embryo+implantation+in+carnivores-commonalities+and+differences+with+other+mammalian+species.">Endometrial receptivity and embryo implantation in carnivores-commonalities and differences with other mammalian species.</a> Biology of Reproduction. 104 (4), 771-783 (2021).</li><li>Kelleher, A. M., Milano-Foster, J., Behura, S. K., Spencer, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Uterine+glands+coordinate+on-time+embryo+implantation+and+impact+endometrial+decidualization+for+pregnancy+success.">Uterine glands coordinate on-time embryo implantation and impact endometrial decidualization for pregnancy success.</a> Nature Communications. 9 (1), 2435 (2018).</li><li>Tian, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Attenuated+monoamine+oxidase+a+impairs+endometrial+receptivity+in+women+with+adenomyosis+via+downregulation+of+FOXO1dagger.">Attenuated monoamine oxidase a impairs endometrial receptivity in women with adenomyosis via downregulation of FOXO1dagger.</a> Biology of Reproduction. 105 (6), 1443-1457 (2021).</li><li>Large, M. J., DeMayo, F. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+regulation+of+embryo+implantation+and+endometrial+decidualization+by+progesterone+receptor+signaling.">The regulation of embryo implantation and endometrial decidualization by progesterone receptor signaling.</a> Molecular and Cellular Endocrinology. 358 (2), 155-165 (2012).</li><li>Dunn, C. L., Kelly, R. W., Critchley, H. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decidualization+of+the+human+endometrial+stromal+cell:+an+enigmatic+transformation.">Decidualization of the human endometrial stromal cell: an enigmatic transformation.</a> Reproductive BioMedicine Online. 7 (2), 151-161 (2003).</li><li>Zhu, H., Hou, C. C., Luo, L. F., Hu, Y. J., Yang, W. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endometrial+stromal+cells+and+decidualized+stromal+cells:+Origins,+transformation+and+functions.">Endometrial stromal cells and decidualized stromal cells: Origins, transformation and functions.</a> Gene. 551 (1), 1-14 (2014).</li><li>Jose, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endometrial+and+decidual+stromal+precursors+show+a+different+decidualization+capacity.">Endometrial and decidual stromal precursors show a different decidualization capacity.</a> Reproduction. 160 (1), 83-91 (2020).</li><li>Pan-Castillo, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphophysical+dynamics+of+human+endometrial+cells+during+decidualization.">Morphophysical dynamics of human endometrial cells during decidualization.</a> Nanomedicine. 14 (7), 2235-2245 (2018).</li><li>Wang, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+analysis+of+mouse+decidualization+models+at+the+molecular+level.">Comparative analysis of mouse decidualization models at the molecular level.</a> Genes. 11 (8), 935 (2020).</li><li>De Clercq, K., Hennes, A., Vriens, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+mouse+endometrial+epithelial+and+stromal+cells+for+in+vitro+decidualization.">Isolation of mouse endometrial epithelial and stromal cells for in vitro decidualization.</a> Journal of Visualized Experiments. (121), e55168 (2017).</li><li>Kerger, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microvascular+oxygen+delivery+and+interstitial+oxygenation+during+sodium+pentobarbital+anesthesia.">Microvascular oxygen delivery and interstitial oxygenation during sodium pentobarbital anesthesia.</a> Anesthesiology. 86 (2), 372-386 (1997).</li><li>Filant, J., Spencer, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endometrial+glands+are+essential+for+blastocyst+implantation+and+decidualization+in+the+mouse+uterus.">Endometrial glands are essential for blastocyst implantation and decidualization in the mouse uterus.</a> Biology of Reproduction. 88 (4), 93 (2013).</li><li>Sheng, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mitochondrial+protease+LONP1+maintains+oocyte+development+and+survival+by+suppressing+nuclear+translocation+of+AIFM1+in+mammals.">The mitochondrial protease LONP1 maintains oocyte development and survival by suppressing nuclear translocation of AIFM1 in mammals.</a> EBioMedicine. 75, 103790 (2022).</li><li>Grogg, E., Pearse, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coupling+azo+dye+methods+for+histochemical+demonstration+of+alkaline+phosphatase.">Coupling azo dye methods for histochemical demonstration of alkaline phosphatase.</a> Nature. 170 (4327), 578-579 (1952).</li><li>Labarta, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+serum+and+endometrial+progesterone+in+determining+endometrial+receptivity.">Analysis of serum and endometrial progesterone in determining endometrial receptivity.</a> Human Reproduction. 36 (11), 2861-2870 (2021).</li></ol>

إزالة الترسبات في الفئران هي عملية عفوية تعتمد على وجود الأجنة ، والتي تختلف عن البشر. ومع ذلك ، فقد وجد أن التحفيز الاصطناعي مثل حقن الرحم من الخرز الزجاجي وتمزق الرحم يمكن أن يؤدي إلى إزالة بطانة الرحم بدلا من الأجنة. بالإضافة إلى ذلك ، وجد الباحثون أن العديد من العوامل يمكن أن تحفز العشر?...

مع تطور التكنولوجيا الإنجابية بمساعدة الإنسان ، وصل معدل الحمل السريري الحالي لنقل الأجنة في المختبر (IVF-ET) إلى أو حتى تجاوز معدل الحمل الطبيعي. على الرغم من ذلك ، لا يزال العديد من المرضى في الممارسة السريرية للمساعدة على الإنجاب يخضعون لعمليات نقل أجنة متعددة لكنهم يفشلون في تحقيق الحمل على النحو المطلوب. ومع ذلك ، لا تزال آليته الجزيئية المحددة غير واضحة ، لذا فإن التدخل السريري غير فعال ، وهو أحد التحديات الكبيرة التي تواجه الطب التناسلي 1,2.
تمثل عوامل بطانة الرحم حوالي ثلثي أسباب فشل التلقيح الاصطناعي3. ينقسم زرع الجنين البشري إلى ثلاث مراحل: تحديد المواقع والالتصاق والغزو4،5،6. يخضع بطانة الرحم للأم لسلسلة من التغييرات لتلبية وصول الجنين. يوفر تشكيل "فترة نافذة" الزرع ظروفا مواتية لزرع الجنين 7,8.
في معظم الثدييات ، بعد التصاق الكيسة الأريمية بالظهارة اللمعية للرحم ، تبدأ الخلايا اللحمية المحيطة بالكيس الأريمي في التكاثر والتمايز بسرعة ، وتغير إعادة التشكيل السريعة للحمة المتوسطة شكلها ووظيفتها ، مما يؤدي إلى زرع الجنين5،9،10. تسمح الزيادة السريعة في حجم الموقع ووزنه للكيسة الأريمية بأن تصبح جزءا لا يتجزأ من سدى الرحم ، وهي عملية تعرف باسم إزالة الترسبات11. تتمايز سدى بطانة الرحم وتعيد تشكيلها استعدادا للحمل ، بينما يوفر انتقال الخلايا اللحمية مساحة ووصلات إشارات جديدة للخلايا النفضية لأداء وظائفها12,13. تتحول الخلايا اللحمية إلى خلايا نفضية وتفرز العديد من العوامل المميزة مثل البرولاكتين (PRL) والبروتين المرتبط بعامل النمو الشبيه بالأنسولين 1 (Igfbp1) وما إلى ذلك. أظهرت الدراسات أن إزالة الترسبات غير الطبيعية هي أحد الأسباب الرئيسية لفشل زرع الجنين ، لكن سبب إزالة الترسبات غير الطبيعية لا يزال غير واضح ويحتاج إلى مزيد من التوضيح1،14.
يعد نموذج إزالة الترسيب الاصطناعي للفأر ضروريا لدراسة العملية الفسيولوجية والآليات الجزيئية الكامنة وراء إزالة الترسيب. يشير نزع الترسبات الاصطناعي (AD) بشكل أساسي إلى عملية إزالة بطانة الرحم التي أنشأتها طرق اصطناعية لمحاكاة الحمل أو الدورة الشهرية. من حيث التشكل ، هناك فرق عام بسيط بين إزالة الترسبات أثناء الحمل وإزالة الترسبات الاصطناعية15,16. توجد الغدد الرحمية في بطانة الرحم قبل شكل decidua وتختفي بعد إزالة الترسبات. فيما يتعلق بالتعبير الجيني ، يتم تحديد اختلاف طفيف فقط بين إزالة الحمل الطبيعي (NPD) و AD15. وبالتالي ، يمكن لنموذج إزالة الترسبات الاصطناعي في الفئران محاكاة إزالة الترسبات أثناء الحمل لاستكشاف التسبب غير المعروف والعلاج الجديد للأمراض التناسلية البشرية.
NPD و AD و decidualization في المختبر (IVD) هي ثلاث طرق لتحقيق إزالة الترسبات من الماوس. يعتمد نموذج NPD على الحمل الطبيعي وهو الأقرب إلى الحالة الفسيولوجية للأم ، بما في ذلك تأثيرات الأجنة. تعد مقارنة الاختلافات بين مواقع الزرع وغير المزروعة طريقة فسيولوجية ومريحة أكثر لدراسة إزالة الترسيب. تم تطوير نموذج مرض الزهايمر باستخدام حقن زيت السمسم داخل الرحم كمنشط للحث على إزالة الترسبات في أنثى فأر حامل كاذبة تتزاوج مع ذكور تم قطع القناة المنوية لتجنب تأثير الأجنة. يلعب كل من نماذج NPD و AD أدوارا أساسية في أغراض بحثية مختلفة ، لكنهما لا يستطيعان تجنب فشل التزاوج والاختلافات داخل المجموعة الناتجة عن الأنشطة المختلفة لعملية التمثيل الغذائي لهرمون الأم. IVD هي طريقة تعتمد على علاج هرمون الاستروجين والبروجستيرون مجتمعين على المستوى الخلوي ، الأمر الذي يتطلب ظروفا تجريبية أكثر صرامة وقدرة تشغيلية. ومع ذلك ، لا يمكن للنموذج في المختبر محاكاة الاستجابة العشرية بشكل كامل في ظل الظروف الفسيولوجية15. لذلك ، نقترح طريقة تحريض بسيطة ومحسنة معدلة من مرض الزهايمر التقليدي لتقليل تأثير الهرمونات الداخلية على إزالة الترسيب. بناء على ضمان نجاح تحريض إزالة الترسبات ، فهو أقرب إلى الحالة الفسيولوجية وأكثر ملاءمة للتجارب التي تحتاج إلى استبعاد عوامل الجنين.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr >
			<td >Estrogen</td>
			<td >Sigma</td>
			<td >E2758</td>
			<td >Hormone supplement</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Progesterone</td>
			<td >Sigma</td>
			<td >P0130</td>
			<td>Hormone supplement</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Sesame oil&#160;</td>
			<td >Sigma</td>
			<td>S3547</td>
			<td>Hormone supplement</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Sodium pentobarbital&#160;</td>
			<td >Dainippon Sumitomo Pharma Co.,Ltd.</td>
			<td ></td>
			<td>Anaesthesia</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Meloxicam injection</td>
			<td >Qilu Animal Health Products Co., Ltd</td>
			<td ></td>
			<td>Analgesia</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Alkaline phophatase stain kit(kaplow&#39;s/azo coupling method)</td>
			<td >Solarbio</td>
			<td>G1480</td>
			<td>Alkaline phophatase stain</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Eosin</td>
			<td >Servicebio</td>
			<td>G1005-2</td>
			<td>HE stain</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Hematoxylin</td>
			<td >Servicebio</td>
			<td >G1005-1</td>
			<td>HE stain</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >ChamQ Universal SYBR qPCR Master Mix</td>
			<td >Vazyme</td>
			<td>Q711-02</td>
			<td>qPCR</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >70% ethanol</td>
			<td >Lircon</td>
			<td>ZH1120090</td>
			<td>Disinfect</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Iodophor</td>
			<td >Runzekang</td>
			<td >RZK-DF</td>
			<td>Disinfect</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Erythromycin Eye Ointment</td>
			<td >Guangzhou Baiyunshan</td>
			<td ></td>
			<td>Mice eyeball protect</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >4-0 suture</td>
			<td >Ethicon</td>
			<td >W329</td>
			<td>Incision suture</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >10% formalin</td>
			<td >Yulu</td>
			<td >L25010118</td>
			<td>Tissue fix</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Optimal cutting temperature compound</td>
			<td >Sakura</td>
			<td >4583</td>
			<td>Ssection</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Trizol reagent</td>
			<td >Ambion</td>
			<td >15596018</td>
			<td>qPCR</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

generation of a mouse artificial decidualization model with ovariectomy for endometrial decidualization research

إزالة بطانة الرحم هي عملية تمايز فريدة من نوعها في بطانة الرحم ، ترتبط ارتباطا وثيقا بالحيض والحمل. يؤدي ضعف إزالة الترسبات إلى اضطرابات بطانة الرحم المختلفة ، مثل العقم والإجهاض المتكرر والولادة المبكرة. كان تطوير واستخدام نموذج إزالة بطانة الرحم في الدراسات الإنجابية من أبرز ما يميز الباحثين الإنجابيين لفترة طويلة. تم استخدام الفأر على نطاق واسع في دراسة التكاثر وإزالة الترسيبات. هناك ثلاثة نماذج راسخة للفأر فيما يتعلق بإزالة الترسبات ، وهي إزالة الترسبات الطبيعية للحمل (NPD) ، وإزالة الترسبات الاصطناعية (AD) ، وإزالة الترسبات في المختبر (IVD). من بينها ، يعتبر AD نموذجا موثوقا به لإزالة الفأر ، وهو سهل التنفيذ وقريب من NPD. يركز هذا البحث على طريقة معدلة لعملية توليد وتطبيق نموذج إزالة الترسيب الاصطناعي للفأر مع استئصال المبيض لتجنب تأثيرات المبيض ، والتي يمكن أن تحصل على نتائج قابلة للتكرار بدرجة كبيرة مع اختلافات صغيرة داخل المجموعة. توفر هذه الطريقة نموذجا حيوانيا جيدا وموثوقا به لدراسة إزالة بطانة الرحم.

تتضمن مؤشرات نموذج إزالة الترسبات من الفأر التشكل العام للرحم ، ونسبة كتلة الرحم المنزوع الترسبي وغير المنزوع الترسبي ، والتشكل النسيجي لبطانة الرحم ، ومستوى التعبير عن جزيئات علامة إزالة الترسب. التشكل العام للرحم الاصطناعي المنزوع الرواسب للفئران التي يسببها الزيت أقرب إلى الرحم أثنا...

Watch this Scientific Journal Video about Generation of a Mouse Artificial Decidualization Model with Ovariectomy for Endometrial Decidualization Research at JoVE.com

Generation of a Mouse Artificial Decidualization Model with Ovariectomy for Endometrial Decidualization Research

هنا ، نصف طريقة توليد نموذج إزالة الترسبات الاصطناعي باستخدام الفأر المبيض ، وهي تجربة كلاسيكية لإزالة ترسبات بطانة الرحم في مجال أبحاث إزالة ترسبات بطانة الرحم.

توليد نموذج إزالة الترسيب الاصطناعي للفأر مع استئصال المبيض لأبحاث إزالة ترسبات بطانة الرحم

Endometrial decidualization is a unique differentiation process of the endometrium, closely related to menstruation and pregnancy. Impairment of ...

ضعف اللامركزية يؤدي إلى فيروس من اضطرابات بطانة الرحم كما هو الحال في الوفيات ، والإجهاض المتكرر. توفر هذه الطريقة نموذجا حيوانيا جيدا وموثوقا لدراسة لامركزية بطانة الرحم. يمكن لنموذج اللامركزية الاصطناعي هذا مع استئصال المبيض تجنب تأثير أنجلينا على الهرمونات التي يمكن أن تؤدي في كثير من الأحيان إلى نتائج قابلة للتكرار بشكل كبير مع اختلافات طفيفة داخل المجموعة.البدء بتعقيم الأدوات الجراحية بجهاز تعقيم بدرجة حرارة عالية وضغط مرتفع قبل العملية بيوم واحد. ضع مرهم العين الواقي على مقل العيون لمنع الجفاف أثناء التخدير. ابدأ العملية عندما يتم تخدير الفئران تماما.ضع الفئران في وضعية الانبطاح على سطح التشغيل وحلق الشعر على الظهر بعد ترطيبها بالماء والصابون. تطهير الجلد مع 70 ٪ من الإيثانول. ابحث عن موقع شق العملية على بعد 0.5 سم على الحافة العلوية لجذر الفخذ لكلا الطرفين الخلفيين الموازيين للعمود الفقري.خذ موقع الشق كمركز وقم بتطهير منطقة الشق باستخدام اليودوفور ثلاث مرات. قم بعمل شق طولي من حوالي 0.5 إلى سنتيمتر واحد باستخدام المقص. قطع اللفافة وفصل العضلات بشكل سلبي مع ملاقط.ابحث عن قطعة من وسادة الدهون البيضاء في حقل الشق بالقرب من القطب السفلي للكلية من خلال طبقة العضلات الرقيقة. قم بتثبيت كتلة الدهون بمقاطع مرقئ واسحب المبيض الملفوف بواسطة وسادة الدهون من الشق. قم بتثبيت تقاطع قناتي المبيض وفالوب بملاقط منحنية وإزالة المبيض على طول عنيق المبيض بالمقص.توقف عن النزيف باستخدام قلم التخثير الكهربائي أو إبرة من حقنة ملليلتر واحدة يتم تسخينها على مصباح الكحول. شطف الشق الجراحي بمحلول ملحي طبيعي لمنع التصاق الأنسجة. استخدم خياطة 4-0 لزرع العضلات والجلد على التوالي وتطهير الشق الجراحي باستخدام اليودوفور مرة أخرى.ضع الفئران في وضعية الانبطاح في القفص وأنعشها في حاضنة 25 درجة مئوية. مجهزة بمصدر ضوء ونظام تهوية لمدة ساعتين تقريبا. انتبه للفئران بعد العملية.ضعهم مرة أخرى في مكان التغذية الأصلي بمفردهم حتى يتعافوا تماما ويعطيهم ما يكفي من الماء والطعام. حقن تحت الجلد 100 نانوغرام من هرمون الاستروجين في 50 ميكرولتر من زيت السمسم في كل فأر لمدة ثلاثة أيام تليها يومين من الراحة. حقن ملليغرام واحد من هرمون البروجسترون و 10 نانوغرام من هرمون الاستروجين في 50 ميكرولتر من زيت السمسم في كل فأر لمدة ثلاثة أيام أخرى.تشغيل الفئران للحث على نموذج البقايا الاصطناعية بعد ست ساعات من الحقن الثالث لهرمون الاستروجين البروجسترون مجتمعة. ابحث عن قرن الرحم في الطرف السفلي من قناة فالوب وحقن 20 ميكرولترا من زيت السمسم ببطء على طول قرن الرحم. ادفع الأنسجة للخلف ، وخيط الشق واسمح للفأر بالتعافي.ثبت ثلاثة إلى خمسة ملليلتر من أنسجة الرحم مع 10٪ فورمالين مضمن في البارافين وقسمها. تلطيخ المقاطع مع الهيماتوكسيلين ويوزين لمراقبة التغيرات المورفولوجية. قم بتضمين ثلاثة إلى خمسة ملليمترات أخرى من أنسجة الرحم في درجة حرارة القطع المثلى تجميد مركب في النيتروجين السائل وتخزينها في الثلاجة ناقص 80 درجة مئوية.قسم المجمدة الأنسجة في 10 ميكرومتر والكشف عن نشاط الفوسفاتيز القلوية في أنسجة الرحم عن طريق طريقة اقتران آزو. التشكل العام للرحم اللامركزي الاصطناعي للفئران الناجم عن الزيت أقرب إلى الرحم أثناء الحمل. يصبح جسم الرحم سميكا ويصبح تجويف الرحم أصغر من الجانب غير المستحث.حجم ووزن قرن الرحم المستحث أعلى بكثير من الجانب غير المستحث. أظهر تلطيخ الهيماتوكسيلين ويوزين لأنسجة الرحم أن الغدد تختفي وأن خلايا انسجة بطانة الرحم النهائية على الممزقة المستحثة متمايزة إلى خلايا سيتوبلازمية كبيرة مستديرة وخلايا نفضية متعددة النوى مع حدود خلايا غير واضحة. تظهر المقاطع الجانبية غير المستحثة مورفولوجيا أنسجة بطانة الرحم في حالة فسيولوجية طبيعية.أظهرت نتيجة طريقة اقتران Azo أن محتوى الفوسفاتيز القلوي للجانب المستحث بالزيت كان أعلى بكثير من الجانب غير المستحث. أظهرت نتائج QPCR أن تعبير mRNA ل PRL-8-A-2 و ALPL و IGFBP-1 في القرن المستحث كان أعلى بكثير من التعبير في القرن غير المستحث ، مما يشير إلى أن الزيت يمكن أن يحفز اللامركزية الاصطناعية في الفئران. مكملات هومو هي عملية طويلة تتطلب اهتماما خاصا التلوث بين هوموس وهو مفتاح النجاح.على أساس هذا النموذج يمكن إجراء حقن قرن الرحم من الفيروس الغدي الذي يمكن دراسة الآلية ذات الصلة لجزيئات محددة تنظم التبقية.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Generation of Induced Pluripotent Stem Cells from Frozen Buffy Coats using Non-integrating Episomal Plasmids

جيل من المستحثة متعددة القدرات الخلايا الجذعية من المجمدة بافي معاطف استخدام غير دمج-Episomal البلازميدات

Somatic cells can be reprogrammed into induced pluripotent stem cells (iPSCs) by forcing the expression of four transcription factors (Oct-4, Sox-2, ...

Isolation of Mouse Endometrial Epithelial and Stromal Cells for In Vitro Decidualization

Isolation of Mouse Endometrial Epithelial and Stromal Cells for In Vitro Decidualization

عزل ماوس بطانة الرحم طلائي واللحمية خلايا ل<em&gt; في المختبر</em&gt; Decidualization

Decidualization is a progesterone-dependent differentiation process of endometrial stromal cells and is a prerequisite for successful embryo implantation. ...

Generation of iPSC-derived Human Brain Organoids to Model Early Neurodevelopmental Disorders

جيل المستمدة IPSC-Organoids الدماغ البشري لنموذج اضطرابات النمو العصبي في وقت مبكر

The restricted availability of suitable in vitro models that can reliably represent complex human brain development is a significant bottleneck that ...

Three-dimensional Rendering and Analysis of Immunolabeled, Clarified Human Placental Villous Vascular Networks

التقديم ثلاثي الأبعاد وتحليل إيمونولابيليد، أوضح البشري شبكات الأوعية الدموية فيلوس المشيمية

Nutrient and gas exchange between mother and fetus occurs at the interface of the maternal intervillous blood and the vast villous capillary network that ...

Generation of Scaffold-free, Three-dimensional Insulin Expressing Pancreatoids from Mouse Pancreatic Progenitors In Vitro

Generation of Scaffold-free, Three-dimensional Insulin Expressing Pancreatoids from Mouse Pancreatic Progenitors In Vitro

جيل بانكريتويدس التعبير عن الأنسولين خالية من السقالة، ثلاثي الأبعاد من الماوس المتكفل البنكرياس في المختبر

The pancreas is a complex organ composed of many different cell types that work together to regulate blood glucose homeostasis and digestion. These cell ...

Isolation of Human Endometrial Stromal Cells for In Vitro Decidualization

Isolation of Human Endometrial Stromal Cells for In Vitro Decidualization

عزل الخلايا اللحمية الرحم البشرية في المختبر ديسيدواليزيشن

The differentiation of human endometrial stromal cells (HESC) from fibroblast-like appearance into secretory decidua is a transformation required for ...

A Mouse Distraction Osteogenesis Model

نموذج تكون العظم الهاء الماوس

Distraction osteogenesis (DO) is a surgical procedure that involves skeletal tissue regeneration without cell transplantation. A DO model consists of the ...

In Vitro Generation of Somite Derivatives from Human Induced Pluripotent Stem Cells

في المختبر توليد المشتقات سميط من البشرية التي يسببها الخلايا الجذعية Pluripotent

In response to signals such as WNTs, bone morphogenetic proteins (BMPs), and sonic hedgehog (SHH) secreted from surrounding tissues, somites (SMs) give ...

Generation of Organoids from Mouse Extrahepatic Bile Ducts

جيل أورجانويدس من القنوات الصفراوية اكستراهيباتيك الماوس

Cholangiopathies, which affect extrahepatic bile ducts (EHBDs), include biliary atresia, primary sclerosing cholangitis, and cholangiocarcinoma. They have ...

Generation of Multicellular Human Primary Endometrial Organoids

توليد العضوية متعددة الخلايا الإنسان الاساسيه بطانة الرحم

The human endometrium is one of the most hormonally responsive tissues in the body and is essential for the establishment of pregnancy. This tissue can ...