Name: generation of a mouse artificial decidualization model with ovariectomy for endometrial decidualization research
Uploaded: 2022-07-27T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Generation of a Mouse Artificial Decidualization Model with Ovariectomy for Endometrial Decidualization Research at JoVE.com

Yazarlar, Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (82001629, XQS), Jiangsu Eyaleti Doğa Bilimleri Vakfı Gençlik Programı (BK20200116, XQS) ve Jiangsu Eyaleti Doktora Sonrası Araştırma Fonu'ndan (2021K277B, XQS) destek almak istemektedir.

Açıklanan tüm hayvan deneyleri, Nanjing Üniversitesi Tıp Fakültesi Hayvanların Kullanımı ve Bakımı Komitesi (No. 20171202) Bağlı Davul Kulesi Hastanesi tarafından onaylanmıştır. Tüm operasyonlar uygun hayvan bakımına ve kullanım ajansına ve ulusal yönergelere uygundur.
NOT: Fareler, 22 °C ± 1 °C sıcaklıkta,% 50 ±% 1 bağıl nem, 12 saat / 12 saatlik bir aydınlık / karanlık döngüsü ve yiyecek ve suya serbest erişim ile belirli bir patojensiz (SPF) ortamda yet...

<ol>
	<li>Carson, S. A., Kallen, A. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnosis+and+management+of+infertility:+A+review.">Diagnosis and management of infertility: A review.</a> JAMA. 326 (1), 65-76 (2021).</li><li>Yatsenko, S. A., Rajkovic, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetics+of+human+female+infertility+dagger.">Genetics of human female infertility dagger.</a> Biology of Reproduction. 101 (3), 549-566 (2019).</li><li>Sang, Y., Li, Y., Xu, L., Li, D., Du, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulatory+mechanisms+of+endometrial+decidualization+and+pregnancy-related+diseases.">Regulatory mechanisms of endometrial decidualization and pregnancy-related diseases.</a> Acta Biochimica et Biophysica Sinica. 52 (2), 105-115 (2020).</li><li>Ng, S. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endometrial+decidualization:+The+primary+driver+of+pregnancy+health.">Endometrial decidualization: The primary driver of pregnancy health.</a> International Journal of Molecular Sciences. 21 (11), 4092 (2020).</li><li>Birgit, G., Brosens, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cyclic+decidualization+of+the+human+endometrium+in+reproductive+health+and+failure.">Cyclic decidualization of the human endometrium in reproductive health and failure.</a> Endocrine Reviews. 35 (6), 851-905 (2014).</li><li>Owusu-Akyaw, A., Krishnamoorthy, K., Goldsmith, L. T., Morelli, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+mesenchymal-epithelial+transition+in+endometrial+function.">The role of mesenchymal-epithelial transition in endometrial function.</a> Human Reproduction Update. 25 (1), 114-133 (2019).</li><li>Paulson, E. E., Comizzoli, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endometrial+receptivity+and+embryo+implantation+in+carnivores-commonalities+and+differences+with+other+mammalian+species.">Endometrial receptivity and embryo implantation in carnivores-commonalities and differences with other mammalian species.</a> Biology of Reproduction. 104 (4), 771-783 (2021).</li><li>Kelleher, A. M., Milano-Foster, J., Behura, S. K., Spencer, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Uterine+glands+coordinate+on-time+embryo+implantation+and+impact+endometrial+decidualization+for+pregnancy+success.">Uterine glands coordinate on-time embryo implantation and impact endometrial decidualization for pregnancy success.</a> Nature Communications. 9 (1), 2435 (2018).</li><li>Tian, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Attenuated+monoamine+oxidase+a+impairs+endometrial+receptivity+in+women+with+adenomyosis+via+downregulation+of+FOXO1dagger.">Attenuated monoamine oxidase a impairs endometrial receptivity in women with adenomyosis via downregulation of FOXO1dagger.</a> Biology of Reproduction. 105 (6), 1443-1457 (2021).</li><li>Large, M. J., DeMayo, F. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+regulation+of+embryo+implantation+and+endometrial+decidualization+by+progesterone+receptor+signaling.">The regulation of embryo implantation and endometrial decidualization by progesterone receptor signaling.</a> Molecular and Cellular Endocrinology. 358 (2), 155-165 (2012).</li><li>Dunn, C. L., Kelly, R. W., Critchley, H. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decidualization+of+the+human+endometrial+stromal+cell:+an+enigmatic+transformation.">Decidualization of the human endometrial stromal cell: an enigmatic transformation.</a> Reproductive BioMedicine Online. 7 (2), 151-161 (2003).</li><li>Zhu, H., Hou, C. C., Luo, L. F., Hu, Y. J., Yang, W. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endometrial+stromal+cells+and+decidualized+stromal+cells:+Origins,+transformation+and+functions.">Endometrial stromal cells and decidualized stromal cells: Origins, transformation and functions.</a> Gene. 551 (1), 1-14 (2014).</li><li>Jose, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endometrial+and+decidual+stromal+precursors+show+a+different+decidualization+capacity.">Endometrial and decidual stromal precursors show a different decidualization capacity.</a> Reproduction. 160 (1), 83-91 (2020).</li><li>Pan-Castillo, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphophysical+dynamics+of+human+endometrial+cells+during+decidualization.">Morphophysical dynamics of human endometrial cells during decidualization.</a> Nanomedicine. 14 (7), 2235-2245 (2018).</li><li>Wang, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+analysis+of+mouse+decidualization+models+at+the+molecular+level.">Comparative analysis of mouse decidualization models at the molecular level.</a> Genes. 11 (8), 935 (2020).</li><li>De Clercq, K., Hennes, A., Vriens, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+mouse+endometrial+epithelial+and+stromal+cells+for+in+vitro+decidualization.">Isolation of mouse endometrial epithelial and stromal cells for in vitro decidualization.</a> Journal of Visualized Experiments. (121), e55168 (2017).</li><li>Kerger, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microvascular+oxygen+delivery+and+interstitial+oxygenation+during+sodium+pentobarbital+anesthesia.">Microvascular oxygen delivery and interstitial oxygenation during sodium pentobarbital anesthesia.</a> Anesthesiology. 86 (2), 372-386 (1997).</li><li>Filant, J., Spencer, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endometrial+glands+are+essential+for+blastocyst+implantation+and+decidualization+in+the+mouse+uterus.">Endometrial glands are essential for blastocyst implantation and decidualization in the mouse uterus.</a> Biology of Reproduction. 88 (4), 93 (2013).</li><li>Sheng, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mitochondrial+protease+LONP1+maintains+oocyte+development+and+survival+by+suppressing+nuclear+translocation+of+AIFM1+in+mammals.">The mitochondrial protease LONP1 maintains oocyte development and survival by suppressing nuclear translocation of AIFM1 in mammals.</a> EBioMedicine. 75, 103790 (2022).</li><li>Grogg, E., Pearse, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coupling+azo+dye+methods+for+histochemical+demonstration+of+alkaline+phosphatase.">Coupling azo dye methods for histochemical demonstration of alkaline phosphatase.</a> Nature. 170 (4327), 578-579 (1952).</li><li>Labarta, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+serum+and+endometrial+progesterone+in+determining+endometrial+receptivity.">Analysis of serum and endometrial progesterone in determining endometrial receptivity.</a> Human Reproduction. 36 (11), 2861-2870 (2021).</li></ol>

Farelerde desidualizasyon, insanlardan farklı olan embriyoların varlığına bağlı olarak kendiliğinden bir süreçtir. Bununla birlikte, cam boncukların uterus enjeksiyonu ve uterus yırtılması gibi yapay stimülasyonun, embriyolar yerine endometriyumun desidualizasyonuna neden olabileceği bulunmuştur. Ek olarak, araştırmacılar, steroid hormonlarının, prostaglandinlerin ve büyüme inhibitör faktörlerin uterus boşluğuna enjekte edilmesi gibi birçok faktörün desidual indükleyebileceğini veya desid...

İnsan destekli üreme teknolojisinin gelişmesiyle birlikte, in vitro fertilizasyon-embriyo transferinin (IVF-ET) mevcut klinik gebelik oranı, doğal gebeliğin seviyesine ulaşmış veya hatta aşmıştır. Buna rağmen, yardımcı üreme klinik pratiğindeki birçok hasta hala çoklu embriyo transferlerine maruz kalmaktadır, ancak istenildiği gibi gebelik elde edememektedir. Bununla birlikte, spesifik moleküler mekanizması hala belirsizdir, bu nedenle klinik müdahale etkisizdir, bu da üreme tıbbının karşılaştığı önemli zorluklardan biridir 1,2.
Endometriyal faktörler, IVF başarısızlığının nedenlerinin yaklaşık üçte ikisini oluşturur3. İnsan embriyosu implantasyonu üç aşamaya ayrılır: konumlandırma, yapışma ve istila 4,5,6. Maternal endometriyum, embriyonun gelişini karşılamak için bir dizi değişikliğe uğrar. İmplantasyon "pencere dönemi" oluşturmak, embriyo implantasyonu için uygun koşullar sağlar 7,8.
Çoğu memelide, blastosist uterusun luminal epiteline yapıştıktan sonra, blastosisti çevreleyen stromal hücreler hızla çoğalmaya ve farklılaşmaya başlar ve mezenkimin hızlı bir şekilde yeniden şekillenmesi şeklini ve işlevini değiştirerek embriyo implantasyonuna yol açar 5,9,10. Site hacmindeki ve ağırlığındaki hızlı artış, blastosistin desidualizasyon11 olarak bilinen bir süreç olan uterus stromasına gömülmesine izin verir. Endometriyal stroma gebeliğe hazırlık aşamasında farklılaşır ve yeniden şekillenirken, stromal hücrelerin geçişi, desidual hücrelerin işlevlerini yerine getirmeleri için alan ve yeni sinyal bağlantıları sağlar12,13. Stromal hücreler desidual hücrelere dönüşür ve prolaktin (PRL), insülin benzeri büyüme faktörü bağlayıcı protein 1 (Igfbp1) gibi birçok ikonik faktör salgılar. Çalışmalar, anormal desidualizasyonun embriyo implantasyon başarısızlığının temel nedenlerinden biri olduğunu göstermiştir, ancak anormal desidualizasyonun nedeni hala belirsizdir ve daha fazla aydınlatılması gerekmektedir 1,14.
Fare yapay desidualizasyon modeli, desidualizasyonun altında yatan fizyolojik süreci ve moleküler mekanizmaları incelemek için gereklidir. Yapay desidualizasyon (AD) esas olarak hamileliği veya adet döngüsünü simüle etmek için yapay yöntemlerle kurulan endometrial desidualizasyon sürecini ifade eder. Morfoloji açısından, gebelik desidualizasyonu ile yapay desidualizasyon arasında genel olarak çok az fark vardır15,16. Rahim bezleri desidua oluşmadan önce endometriyumda bulunur ve desidualizasyondan sonra kaybolur. Gen ekspresyonu ile ilgili olarak, doğal gebelik desidualizasyonu (NPD) ile AD15 arasında sadece küçük bir fark tespit edilmiştir. Sonuç olarak, farelerdeki yapay desidualizasyon modeli, bilinmeyen patogenezi ve insan üreme hastalıklarının yeni tedavisini araştırmak için gebelik desidualizasyonunu simüle edebilir.
NPD, AD ve in vitro desidualizasyon (IVD), fare desidualizasyonunu elde etmek için üç yöntemdir. NPD modeli doğal gebeliğe bağlıdır ve embriyoların etkileri de dahil olmak üzere maternal fizyolojik duruma en yakın olanıdır. İmplantasyon ve implantasyon dışı bölgeler arasındaki farkları karşılaştırmak, desidualizasyonu incelemek için daha fizyolojik ve uygun bir yaklaşımdır. AD modeli, embriyoların etkisinden kaçınmak için vazektomize erkeklerle çiftleştirilmiş sahte hamile bir dişi farede desidualizasyonu indüklemek için uyarıcı olarak intrauterin susam yağı enjeksiyonu kullanılarak geliştirilmiştir. Hem NPD hem de AD modelleri farklı araştırma amaçlarında önemli roller oynar, ancak çiftleşme başarısızlığından ve maternal hormon metabolizmasının farklı aktivitelerinin neden olduğu grup içi farklılıklardan kaçınamazlar. IVD, östrojen ve progesteronun kombine tedavisine hücresel düzeyde bağlı, daha sıkı deneysel koşullar ve ameliyat yeteneği gerektiren bir yöntemdir. Bununla birlikte, in vitro model, fizyolojik koşullar altında desidual yanıtı tam olarak simüle edemez15. Bu nedenle, endojen hormonların desidualizasyon üzerindeki etkisini azaltmak için geleneksel AD'den modifiye edilmiş basit ve geliştirilmiş bir indüksiyon yöntemi öneriyoruz. Desidualizasyon indüksiyonunun başarısını sağlamaya dayanarak, fizyolojik duruma daha yakındır ve embriyo faktörlerini dışlaması gereken deneyler için daha uygundur.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr >
			<td >Estrogen</td>
			<td >Sigma</td>
			<td >E2758</td>
			<td >Hormone supplement</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Progesterone</td>
			<td >Sigma</td>
			<td >P0130</td>
			<td>Hormone supplement</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Sesame oil&#160;</td>
			<td >Sigma</td>
			<td>S3547</td>
			<td>Hormone supplement</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Sodium pentobarbital&#160;</td>
			<td >Dainippon Sumitomo Pharma Co.,Ltd.</td>
			<td ></td>
			<td>Anaesthesia</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Meloxicam injection</td>
			<td >Qilu Animal Health Products Co., Ltd</td>
			<td ></td>
			<td>Analgesia</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Alkaline phophatase stain kit(kaplow&#39;s/azo coupling method)</td>
			<td >Solarbio</td>
			<td>G1480</td>
			<td>Alkaline phophatase stain</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Eosin</td>
			<td >Servicebio</td>
			<td>G1005-2</td>
			<td>HE stain</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Hematoxylin</td>
			<td >Servicebio</td>
			<td >G1005-1</td>
			<td>HE stain</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >ChamQ Universal SYBR qPCR Master Mix</td>
			<td >Vazyme</td>
			<td>Q711-02</td>
			<td>qPCR</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >70% ethanol</td>
			<td >Lircon</td>
			<td>ZH1120090</td>
			<td>Disinfect</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Iodophor</td>
			<td >Runzekang</td>
			<td >RZK-DF</td>
			<td>Disinfect</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Erythromycin Eye Ointment</td>
			<td >Guangzhou Baiyunshan</td>
			<td ></td>
			<td>Mice eyeball protect</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >4-0 suture</td>
			<td >Ethicon</td>
			<td >W329</td>
			<td>Incision suture</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >10% formalin</td>
			<td >Yulu</td>
			<td >L25010118</td>
			<td>Tissue fix</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Optimal cutting temperature compound</td>
			<td >Sakura</td>
			<td >4583</td>
			<td>Ssection</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Trizol reagent</td>
			<td >Ambion</td>
			<td >15596018</td>
			<td>qPCR</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

generation of a mouse artificial decidualization model with ovariectomy for endometrial decidualization research

Endometrial desidualizasyon, menstrüasyon ve gebelik ile yakından ilişkili olan endometriyumun benzersiz bir farklılaşma sürecidir. Desidualizasyonun bozulması infertilite, tekrarlayan düşük ve erken doğum gibi çeşitli endometriyal bozukluklara yol açar. Endometriyal desidualizasyon modelinin üreme çalışmalarında geliştirilmesi ve kullanılması, üreme araştırmacıları için uzun zamandır bir vurgu olmuştur. Fare, üreme ve desidualizasyonu incelemek için yaygın olarak kullanılmıştır. Desidualizasyon ile ilgili üç köklü fare modeli vardır, yani doğal gebelik desidualizasyonu (NPD), yapay desidualizasyon (AD) ve in vitro desidualizasyon (IVD). Bunlar arasında AD, uygulanması kolay ve NPD'ye yakın olan fare desidualizasyonu için güvenilir bir model olarak kabul edilir. Bu yazıda, yumurtalık etkilerinden kaçınmak için yumurtalık etkilerinden kaçınmak için fare yapay desidualizasyon modelinin yumurtalık ile oluşturulması ve uygulama sürecinin modifiye edilmiş bir yöntemine odaklanılmıştır, bu da grup içinde küçük varyanslarla yüksek oranda tekrarlanabilir sonuçlar elde edebilir. Bu yöntem, endometrial desidualizasyon çalışması için iyi ve güvenilir bir hayvan modeli sağlar.

Fare desidualizasyon modeli indeksleri, uterusun genel morfolojisini, desidualize ve desidualize olmayan uterusun kütle oranını, endometriyumun histolojik morfolojisini ve desidualizasyon belirteci moleküllerinin ekspresyon seviyesini içerir. Yağ tarafından indüklenen farelerin yapay desidualize uterusunun genel morfolojisi, hamilelikte uterusunkine daha yakındır. Uterus gövdesi kalınlaşır ve uterus boşluğu indüklenmeyen taraftan daha küçük hale gelir. İndüklenen uterus boynuzunun hacmi ve ağırlı...

Watch this Scientific Journal Video about Generation of a Mouse Artificial Decidualization Model with Ovariectomy for Endometrial Decidualization Research at JoVE.com

Generation of a Mouse Artificial Decidualization Model with Ovariectomy for Endometrial Decidualization Research

Burada, endometrial desidualizasyon araştırma alanında klasik bir endometrial desidualizasyon deneyi olan ovariektomize fareyi kullanarak yapay bir desidualizasyon modeli oluşturma yöntemini açıklıyoruz.

Endometrial Desidualizasyon Araştırması için Ovariektomi ile Fare Yapay Desidualizasyon Modelinin Oluşturulması

Endometrial decidualization is a unique differentiation process of the endometrium, closely related to menstruation and pregnancy. Impairment of ...

Ademi merkeziyetçiliğin bozulması, ölüm, tekrarlayan bir düşük gibi endometriyal bozuklukların virüsüne yol açar. Bu yöntem, endometriyal ademi merkeziyetçilik çalışması için iyi ve güvenilir bir hayvan modeli sağlar. Ovariektomi ile yapılan bu yapay ademi merkeziyetçilik modeli, angelina'nın hormonlar üzerindeki etkisini önleyebilir, bu da grup içinde küçük farklılıklarla genellikle yüksek oranda tekrarlanabilir sonuçlar doğurabilir.Ameliyattan bir gün önce cerrahi aletleri yüksek sıcaklık ve yüksek basınçlı sterilizatör ile sterilize etmeye başlamak. Anestezi sırasında kuruluğu önlemek için koruyucu göz merhemini göz kürelerine uygulayın. Fareler tamamen uyuşturulduğunda operasyona başlayın.Fareleri çalışma yüzeyinde yüzüstü konuma getirin ve saçları sabunlu suyla ıslattıktan sonra sırtında tıraş edin. Cildi% 70 etanol ile dezenfekte edin. Ameliyat kesi yerini, omurgaya paralel her iki arka ekstremitenin uyluk kökünün üst kenarında 0,5 santimetrede bulun.Kesi bölgesini merkez olarak alın ve kesi bölgesini üç kez iyotofor ile dezenfekte edin. Makas kullanarak yaklaşık 0,5 ila bir santimetre arasında uzunlamasına bir kesi yapın. Fasyayı kesin ve kasları cımbızla pasif olarak ayırın.İnce kas tabakasından böbreğin alt kutbuna yakın kesi alanında beyaz yağ yastığının bir parçasını bulun. Yağ kütlesini hemostatik klipslerle sıkıştırın ve yağ yastığı tarafından sarılmış yumurtalıkları insizyondan çekin. Yumurtalık ve fallop tüplerinin birleşme noktasını kavisli cımbızla kelepçeleyin ve yumurtalık pedikülü boyunca yumurtalıkları makasla çıkarın.Bir elektrokoagülasyon kalemi veya alkol lambasında ısıtılmış bir mililitrelik şırınganın iğnesini kullanarak kanamayı durdurun. Doku yapışmasını önlemek için cerrahi kesiyi normal salin ile durulayın. Sırasıyla kas ve cildi ekmek için 4-0'lık bir dikiş kullanın ve cerrahi kesiyi tekrar iyodofor ile dezenfekte edin.Fareleri kafeste yüzüstü konuma yerleştirin ve 25 santigrat derecelik bir inkübatörde canlandırın. Yaklaşık iki saat boyunca bir ışık kaynağı ve havalandırma sistemi ile donatılmıştır. Ameliyattan sonra farelere dikkat edin.Tamamen iyileşene kadar onları orijinal beslenme yerine geri koyun ve onlara yeterli su ve yiyecek verin. Her fareye üç gün boyunca 50 mikrolitre susam yağı içinde 100 nanogram östrojeni deri altından enjekte edin ve ardından iki gün dinlenin. Her fareye üç gün boyunca 50 mikrolitre susam yağı içinde bir miligram progesteron ve 10 nanogram östrojen enjekte edin.Üçüncü östrojen progesteron kombine enjeksiyonundan altı saat sonra yapay kalıntı modelini indüklemek için fareleri çalıştırın. Fallop tüplerinin alt ucundaki uterus boynuzunu bulun ve uterus boynuzu boyunca yavaşça 20 mikrolitre susam yağı enjekte edin. Dokuyu geriye doğru itin, kesiyi dikin ve farenin iyileşmesine izin verin.Rahim dokusunun üç ila beş mililitresini parafine gömülmüş% 10 formalin ile sabitleyin ve kesitleyin. Morfolojik değişiklikleri gözlemlemek için bölümleri hematoksilin ve eozin ile lekeleyin. Rahim dokusunun bir başka üç ila beş milimetresini optimum kesme sıcaklığına gömün, sıvı azotta dondurun ve eksi 80 santigrat derece dondurucuda saklayın.Dondurulmuş doku 10 mikrometrede kesitlenir ve Azo kuplajlama yöntemi ile uterus dokusundaki alkalen fosfataz aktivitesi tespit edilir. Yağ tarafından indüklenen farelerin yapay merkezi olmayan uterusunun genel morfolojisi, hamilelikte uterusunkine daha yakındır. Uterus gövdesi kalınlaşır ve uterus boşluğu indüklenmeyen taraftan daha küçük hale gelir.İndüklenen uterus boynuzunun hacmi ve ağırlığı, indüklenmeyen tarafınkinden önemli ölçüde daha yüksektir. Rahim dokusunun hematoksilin ve eozin boyaması bezlerin kaybolduğunu ve indüklenen yırtık üzerindeki son endometriyal stromal hücrelerin, hücre sınırları belirsiz olan büyük yuvarlak sitoplazmik ve çok çekirdekli desidual hücrelere farklılaştığını göstermiştir. İndüklenmeyen yan kesitler endometriyal doku morfolojisini normal fizyolojik bir durum altında gösterir.Azo kaplin yönteminin sonucu, yağın indüklediği tarafın alkalen fosfataz içeriğinin, indüklenmemiş tarafınkinden önemli ölçüde daha yüksek olduğunu göstermiştir. QPCR sonuçları, indüklenen boynuzdaki PRL-8-A-2, ALPL ve IGFBP-1'in mRNA ekspresyonunun, indüklenmemiş olandan önemli ölçüde daha yüksek olduğunu ve yağın farelerde yapay ademi merkeziyetçiliği indükleyebileceğini düşündürdüğünü göstermiştir. Homo takviyesi, başarının anahtarı olan homolar arasındaki kontaminasyona özel dikkat gerektiren uzun bir süreçtir.Bu modele dayanarak, rezidüalizasyonu düzenleyen spesifik moleküllerin ilgili mekanizmasını inceleyebilen Adenovirüsün uterus boynuzu enjeksiyonu yapılabilir.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Generation of Induced Pluripotent Stem Cells from Frozen Buffy Coats using Non-integrating Episomal Plasmids

Bütünleşmeyen episomal plasmidler kullanılarak dondurulmuş Buffy tüylerdeki uyarılmış pluripotent kök hücrelerin üretilmesi

Somatic cells can be reprogrammed into induced pluripotent stem cells (iPSCs) by forcing the expression of four transcription factors (Oct-4, Sox-2, ...

Isolation of Mouse Endometrial Epithelial and Stromal Cells for In Vitro Decidualization

Isolation of Mouse Endometrial Epithelial and Stromal Cells for In Vitro Decidualization

Fare Endometrial stromal ve epitelyal hücrelerin izolasyonu için<em&gt; İn Vitro</em&gt; sidualizasyonu

Decidualization is a progesterone-dependent differentiation process of endometrial stromal cells and is a prerequisite for successful embryo implantation. ...

Generation of iPSC-derived Human Brain Organoids to Model Early Neurodevelopmental Disorders

iPSC türetilmiş İnsan Beyin Organoids oluşturulması Erken Nörogelişimsel Bozuklukları Model

The restricted availability of suitable in vitro models that can reliably represent complex human brain development is a significant bottleneck that ...

Three-dimensional Rendering and Analysis of Immunolabeled, Clarified Human Placental Villous Vascular Networks

Üç boyutlu görüntü oluşturma ve çözümleme-in Immunolabeled, açıklık insan plasental Villous damar ağları

Nutrient and gas exchange between mother and fetus occurs at the interface of the maternal intervillous blood and the vast villous capillary network that ...

Generation of Scaffold-free, Three-dimensional Insulin Expressing Pancreatoids from Mouse Pancreatic Progenitors In Vitro

Generation of Scaffold-free, Three-dimensional Insulin Expressing Pancreatoids from Mouse Pancreatic Progenitors In Vitro

İskele-free, üç boyutlu insülin ifade Pancreatoids fare pankreas ataları Vitro gelen nesil

The pancreas is a complex organ composed of many different cell types that work together to regulate blood glucose homeostasis and digestion. These cell ...

Isolation of Human Endometrial Stromal Cells for In Vitro Decidualization

Isolation of Human Endometrial Stromal Cells for In Vitro Decidualization

Vitro Decidualization için insan endometrium Stromal hücre izolasyon

The differentiation of human endometrial stromal cells (HESC) from fibroblast-like appearance into secretory decidua is a transformation required for ...

A Mouse Distraction Osteogenesis Model

Bir fare oyalama Osteogenesis modeli

Distraction osteogenesis (DO) is a surgical procedure that involves skeletal tissue regeneration without cell transplantation. A DO model consists of the ...

In Vitro Generation of Somite Derivatives from Human Induced Pluripotent Stem Cells

Somite türevleri indüklenen insan nesil Vitro Pluripotent kök hücreler

In response to signals such as WNTs, bone morphogenetic proteins (BMPs), and sonic hedgehog (SHH) secreted from surrounding tissues, somites (SMs) give ...

Generation of Organoids from Mouse Extrahepatic Bile Ducts

Organoids fare Extrahepatic safra kanalları üzerinden nesil

Cholangiopathies, which affect extrahepatic bile ducts (EHBDs), include biliary atresia, primary sclerosing cholangitis, and cholangiocarcinoma. They have ...

Generation of Multicellular Human Primary Endometrial Organoids

Multicellular Human Primer Endometrial Organoidlerin Üretimi

The human endometrium is one of the most hormonally responsive tissues in the body and is essential for the establishment of pregnancy. This tissue can ...