Name: a modified murine heterotopic heart transplant protocol matching contemporary standards of aseptic technique, anesthesia, and analgesia
Uploaded: 2022-09-28T13:20:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Modified Murine Heterotopic Heart Transplant Protocol Matching Contemporary Standards of Aseptic Technique, Anesthesia, and Analgesia at JoVE.com

يود المؤلفون أن يعربوا عن تقديرهم للجهود الرائعة التي بذلها موظفو رعاية الحيوانات في جامعة غرب أستراليا ومعهد هاري بيركنز للأبحاث الطبية ، الذين ساهم تفانيهم وخبرتهم في جدوى ونجاح هذه العمليات الجراحية.

تم إجراء هذا البحث وفقا لمدونة قواعد الممارسة لرعاية واستخدام الحيوانات للأغراض العلمية15 وتمت الموافقة عليها بموجب بروتوكولات أخلاقيات الحيوان RA/3/100/1568 و AE173 (لجنة أخلاقيات الحيوان بجامعة غرب أستراليا ولجنة أخلاقيات الحيوان التابعة لمعهد هاري بيركنز للبحوث الطبية ، على الت?...

<ol>
	<li>Mann, F. C., Priestley, J. T., Markowitz, J., Yater, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+the+intact+mammalian+heart.">Transplantation of the intact mammalian heart.</a> Archives of Surgery. 26 (2), 219-224 (1933).</li><li>Neptune, W. B., Cookson, B. A., Bailey, C. P., Appler, R., Rajkowski, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complete+homologous+heart+transplantation.">Complete homologous heart transplantation.</a> A.M.A. Archives of Surgery. 66 (2), 174-178 (1953).</li><li>Downie, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Homotransplantation+of+the+dog+heart.">Homotransplantation of the dog heart.</a> A.M.A. Archives of Surgery. 66 (5), 624-636 (1953).</li><li>Blanco, G., Adam, A., Rodriguezperez, D., Fernandez, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complete+homotransplantation+of+canine+heart+and+lungs.">Complete homotransplantation of canine heart and lungs.</a> A.M.A. Archives of Surgery. 76 (1), 20-23 (1958).</li><li>Abbott, C. P., Lindsey, E. S., Creech, O., Dewitt, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+technique+for+heart+transplantation+in+the+rat.">A technique for heart transplantation in the rat.</a> Archives of Surgery. 89, 645-652 (1964).</li><li>Ono, K., Lindsey, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+technique+of+heart+transplantation+in+rats.">Improved technique of heart transplantation in rats.</a> The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 57 (2), 225-229 (1969).</li><li>Corry, R. J., Winn, H. J., Russell, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primarily+vascularized+allografts+of+hearts+in+mice.+The+role+of+H-2D,+H-2K,+and+non-H-2+antigens+in+rejection.">Primarily vascularized allografts of hearts in mice. The role of H-2D, H-2K, and non-H-2 antigens in rejection.</a> Transplantation. 16 (4), 343-350 (1973).</li><li>Joffre, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevention+of+acute+and+chronic+allograft+rejection+with+CD4+CD25+Foxp3++regulatory+T+lymphocytes.">Prevention of acute and chronic allograft rejection with CD4+CD25+Foxp3+ regulatory T lymphocytes.</a> Nature Medicine. 14 (1), 88-92 (2008).</li><li>Gregori, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulatory+T+cells+induced+by+1+alpha,25-dihydroxyvitamin+D3+and+mycophenolate+mofetil+treatment+mediate+transplantation+tolerance.">Regulatory T cells induced by 1 alpha,25-dihydroxyvitamin D3 and mycophenolate mofetil treatment mediate transplantation tolerance.</a> The Journal of Immunology. 167 (4), 1945-1953 (2001).</li><li>Niimi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+technique+for+heterotopic+cardiac+transplantation+in+mice:+Experience+of+3000+operations+by+one+surgeon.">The technique for heterotopic cardiac transplantation in mice: Experience of 3000 operations by one surgeon.</a> The Journal of Heart and Lung Transplantation. 20 (10), 1123-1128 (2001).</li><li>Hasegawa, T., Visovatti, S. H., Hyman, M. C., Hayasaki, T., Pinsky, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterotopic+vascularized+murine+cardiac+transplantation+to+study+graft+arteriopathy.">Heterotopic vascularized murine cardiac transplantation to study graft arteriopathy.</a> Nature Protocols. 2 (3), 471-480 (2007).</li><li>Hoogstraten-Miller, S. L., Brown, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Techniques+in+aseptic+rodent+surgery.">Techniques in aseptic rodent surgery.</a> Current Protocols in Immunology. 82, 1-14 (2008).</li><li>Navarro, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+anesthesia:+The+art+and+science.">Mouse anesthesia: The art and science.</a> ILAR Journal. , (2021).</li><li>Adams, S., Pacharinsak, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+anesthesia+and+analgesia.">Mouse anesthesia and analgesia.</a> Current Protocols in Mouse Biology. 5 (1), 51-63 (2015).</li><li>Australian code for the care and use of animals for scientific purposes. NHMRC Available from: <a target="_blank" href="https://www.nhmrc.gov.au/about-us/publications/australian-code-care-and-use-animals-scientific-purposes">https://www.nhmrc.gov.au/about-us/publications/australian-code-care-and-use-animals-scientific-purposes</a> (2013)</li><li>Prosser, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+changes+to+tissue-resident+immunity+after+MHC-matched+and+MHC-mismatched+solid+organ+transplantation.">Dynamic changes to tissue-resident immunity after MHC-matched and MHC-mismatched solid organ transplantation.</a> Cell Reports. 35 (7), 109141 (2021).</li></ol>

نموذج زرع القلب التقويمي للفئران هو نموذج قوي قبل سريري يستخدم في المقام الأول للتحقيق في آثار عدم تطابق MHC على مستوى وطبيعة الرفض المناعي ، ومؤخرا ، تأثير الزرع على الاحتفاظ بالمناعة المقيمة في أنسجةالكسب غير المشروع 16. بينما نتبع في البداية عن كثب بروتوكول Corry et al.7<...

نحن مدينون بالكثير من فهمنا لعلم المناعة وزرع الأعضاء للبحث القائم على النماذج التجريبية لزراعة الأعضاء الصلبة باستخدام الحيوانات. منذ الوصف الأول لزراعة القلب الوعائي في الثدييات1 ، ساهمت هذه النماذج في المعرفة في مجالات واسعة النطاق ، بما في ذلك التطبيق العلاجي لانخفاض حرارة الجسم2 ، وفوائد استخدام الغرز المتخصصة3 ، وتقنيات زرع الرئة والقلب الكلي4. قدم تطوير نماذج زرع القلب في الفئران 5,6 نطاقا أوسع للتجارب المناعية بسبب توفر خطوط تكاثر مختلفة. أدى النطاق الأوسع بكثير من سلالات الفئران الفطرية والطافرة المتاحة إلى قيام Corry et al.7 بتطوير تقنية زرع القلب غير المتجانس للفئران بسبب المزايا الكبيرة التي يجلبها هذا النطاق لأبحاث الزرع. تم استخدام هذا النموذج على نطاق واسع وساهم في فهم أكبر لرفض الكسب غير المشروع8 والعلاجات9. ومع ذلك ، منذ وصفها الأول ، ظلت التقنية دون تغيير إلى حد كبير بخلاف بعض التفاصيل الفنية البسيطة مثل التعديلات على موضع مواقع المفاغرة10,11.
منذ دمج تقنية Corry et al.7 في تجاربنا ، حددنا مجالات واعدة لتحسين البروتوكول ، وهي تقنية التعقيم والتخدير وتسكين الألم. كان من المتوقع أن تقدم التحسينات في هذه المجالات تأثيرا إيجابيا على النتائج التجريبية وتحسين رفاهية الحيوان. وقد ظهر هذا سابقا عند استخدام تقنية التعقيم في جراحات الحيوانات الصغيرة لأنها تساعد في الحد من التهابات ما بعد الجراحة12 ، والتي لا تؤثر فقط على المراضة والوفيات ولكن يمكن أن تعرض أيضا التجارب المصممة لتقييم الاستجابة المناعية بعد جراحة الزرع. من وجهة نظر التخدير والمسكنات ، يساعد استخدام نظام مكرر على تقليل التكلفة على الحيوانات وتحقيق التوازن بين الحجة الأخلاقية لهذا النموذج الجراحي من خلال تخفيف آلام ومعاناة الأشخاص التجريبيين. علاوة على ذلك ، يحد التخدير المناسب وتسكين الألم من استجابة الإجهاد المرتبطة بالألم ، مما يحسن جودة التعافي بعد الجراحة ، وفي النهاية يزيد من معدل النجاح الجراحي13.
بهدف تحسين كل من رعاية الحيوان والنتائج التجريبية ، تم تطوير بروتوكول مع تعديلات لسد هذه الفجوات. تم تكييف هذا البروتوكول من البروتوكول الذي وصفه في الأصل Corry et al.7 بالتشاور مع طبيب التخدير البيطري ومع إيلاء الاعتبار الواجب لكل من آثار ومدة تأثيرات التدخلات الدوائية المستخدمة في نظام التخدير والمسكنات. استند النهج إلى مبادئ التخدير المتوازن وتسكين الألم متعدد الوسائط لضمان الرعاية المناسبة المحيطة بالجراحة14. بالإضافة إلى تطبيق تقنية التعقيم ، تم إعطاء البوبرينورفين الأفيوني وبوبيفاكايين المخدر الموضعي بشكل استباقي. تم إجراء التخدير العام باستخدام عامل التخدير المستنشق إيزوفلوران.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>2030 Rycroft irrigating cannula 30 G</td>
			<td>McFarlane</td>
			<td>56005HU</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Braided surgical silk 7-0</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bulldog clamp curved - 35 mm&#160;</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-7441-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bupivacaine 0.25%&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Castroviejo needle holder catch curved -&#160; 145 mm</td>
			<td>Haag-Streit</td>
			<td>11.62.15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chlorhexidine 5% solution</td>
			<td>Ebos</td>
			<td>JJ61371</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton-tipped applicator - 7.5 cm</td>
			<td>Dove</td>
			<td>SN109510</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol 70% solution</td>
			<td>Ebos</td>
			<td>WH130192EE</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gauze 5 x 5 cm white</td>
			<td>Aero</td>
			<td>AGS50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gelfoam 80 mm x 125 mm&#160;</td>
			<td>Pfizer</td>
			<td>7481D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hair clipper</td>
			<td>Wahl</td>
			<td>9860L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin 1,000 IU in 1 mL</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris SuperCut scissors straight - 11.5 cm&#160;&#160;</td>
			<td>Inka Surgical&#160;</td>
			<td>11550.11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane vaporiser</td>
			<td>Darvall</td>
			<td>9176</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro bulldog clamp - 3.7 cm</td>
			<td>Greman</td>
			<td>14119-G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro scissors curved 105 mm&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micropore plain paper surgical tape - 2.5 cm wide</td>
			<td>Ebos</td>
			<td>7810L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsurgical scissors - curved tip</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monofilament polyprolene suture - 5/0</td>
			<td>Surgipro</td>
			<td>P-205-X</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Myweigh i101 Precision Scale 100 g x 0.005 g</td>
			<td>Myweigh</td>
			<td>Kit00053</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle - 30 G x 0.5 inch</td>
			<td>BD</td>
			<td>BD304000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needleholder 15 cm curved &#34;super fine&#34;</td>
			<td>Surgical Specialists</td>
			<td>ST-B-15-8.2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nylene 10/0 x 15 cm on 3.8 mm 3/8 circle round bodied taper (diam 0.07mm) CV300</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round body suture forceps curved 0.3 mm 120 mm</td>
			<td>B. Braun</td>
			<td>FD281R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round body suture forceps straight 0.3 mm 120 mm</td>
			<td>B. Braun</td>
			<td>FD280R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round handled vannas spring scissors-str/12.5 cm</td>
			<td></td>
			<td>15400-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spring scissors-Cvd Sm blades</td>
			<td></td>
			<td>15001-08</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stevens scissors blunt straight 110 mm</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical backboard</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Rigid laminated cardboard. 15 x 15 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical drapes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Cut into two sizes. 25 cm x 25 cm, and 25 cm x 40 cm&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical microscope</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe - 1 mL</td>
			<td>BD</td>
			<td>592696</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe - 3 mL</td>
			<td>Leica</td>
			<td>M651</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Toothed forceps</td>
			<td>BD</td>
			<td>309657</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>University of Wisconsin Solution</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Warming pad</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Far infrared warming pad 20 x 25 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Westcott spring scissors</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yasargil clip applier bayonet</td>
			<td>Aesculap</td>
			<td>FE582K</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yasargil titanium clip perm 6.6 mm</td>
			<td>Aesculap</td>
			<td>A19FT222T</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse usage</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Strain/SEX/Weight</td>
			<td>Donor</td>
			<td>Recipent</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BALB/c, female, 19-23 g</td>
			<td>7</td>
			<td>21</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6, female, 17-20 g</td>
			<td>7</td>
			<td>0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD45.1 BALB/c, female, 17-21 g</td>
			<td>5</td>
			<td>0</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a modified murine heterotopic heart transplant protocol matching contemporary standards of aseptic technique, anesthesia, and analgesia

ساهم تطوير النماذج التجريبية لزراعة القلب في الحيوانات في العديد من التطورات في مجالات علم المناعة وزرع الأعضاء الصلبة. في حين تم استخدام نموذج زرع قلب الفئران الوعائية غير المتجانسة في البداية في دراسات رفض الكسب غير المشروع باستخدام مجموعات من سلالات الفئران الفطرية غير المتطابقة ، فإن الوصول إلى السلالات المعدلة وراثيا والطرائق العلاجية يمكن أن يوفر رؤى جديدة قوية قبل السريرية. في الأساس ، لم تتغير المنهجية الجراحية لهذه التقنية منذ تطويرها ، خاصة فيما يتعلق بالعوامل المهمة مثل تقنية التعقيم والتخدير وتسكين الألم ، والتي لها تأثيرات مادية على المراضة والوفيات بعد الجراحة. بالإضافة إلى ذلك ، من المتوقع أن توفر التحسينات في الإدارة المحيطة بالجراحة تحسينات في كل من رعاية الحيوان والنتائج التجريبية. تقدم هذه الورقة تقريرا عن بروتوكول تم تطويره بالتعاون مع خبير متخصص في التخدير البيطري وتصف التقنية الجراحية مع التركيز على الإدارة المحيطة بالجراحة. بالإضافة إلى ذلك ، نناقش الآثار المترتبة على هذه التحسينات ونقدم تفاصيل حول استكشاف الأخطاء وإصلاحها الخطوات الجراحية الهامة لهذا الإجراء.

لتحديد فعالية التقنية الجراحية في تعزيز النتائج الجيدة لالتئام الجروح واستعادة الفئران ، حددت التجارب المبكرة في المختبر خصائص البقاء على قيد الحياة لمجموعة من ترقيع القلب ذات المناعة المتغيرة للمتلقي. وشملت هذه الطعوم الخلقية (ن = 5) و syngenec (n = 5) ، والتي تشترك في نفس علامات معقد التوافق ال?...

Watch this Scientific Journal Video about A Modified Murine Heterotopic Heart Transplant Protocol Matching Contemporary Standards of Aseptic Technique, Anesthesia, and Analgesia at JoVE.com

A Modified Murine Heterotopic Heart Transplant Protocol Matching Contemporary Standards of Aseptic Technique, Anesthesia, and Analgesia

تصف هذه الورقة تقنية معدلة لزراعة القلب الوعائي غير المتجانس مع تقنية معقمة محدثة وتسكين الألم والتخدير.

بروتوكول معدل لزراعة القلب غير المتجانس للفأر يتوافق مع المعايير المعاصرة لتقنية التعقيم والتخدير وتسكين الألم

The development of experimental models of cardiac transplantation in animals has contributed to many advances in the fields of immunology and solid organ ...

هذا نموذج اقتصادي وقابل للتكرار لزراعة القلب. يمكن استخدامه لتحسين مهارات الجراحة المجهرية والسماح باستخدام سلالات الفئران المعدلة وراثيا كمتبرعين أو متلقين. تشمل هذه التقنية على نطاق واسع جميع إدارة الألم وتعقيد التخدير للجراحة البشرية العادية للحد من المراضة بعد الجراحة.هذا النموذج مهم لدراسة المناعة المستحثة جراحيا ، وتأثير عدم التطابق على رفض الزرع ، وطول عمر الزرع. يمكن تطبيق الأساليب الجراحية العامة لهذا النموذج في شكل معدل على عمليات زرع الأعضاء الصلبة الأخرى للفئران. يترك المقياس المجهري والقيود الزمنية المرتبطة به هامشا صغيرا من الخطأ.مفتاح النجاح هو الممارسة المنتظمة مع الإشراف المهني ، وتقديم ملاحظات محددة حول مجالات الصعوبة. وستقوم السيدة ليو ليو، وهي مساعدة باحثة من مختبري، بتوضيح الإجراء. سيساعد في العمليات الجراحية الدكتور ون هوا هوانغ والسيدة جاس كور والسيدة شياو تشانغ.بعد تخدير الفأر وإزالته من غرفة الحث ، قم بإزالة الشعر عن طريق حلق البطن البطني عن كثب باستخدام كليبرز . في حالة المتبرع ، احلق المنطقة الممتدة من الأعضاء التناسلية إلى الهامش العلوي للصدر البطني. تأكد من أن المنطقة المحلوقة تصل إلى خط منتصف الإبط بشكل جانبي.راقب درجة الحرارة عن طريق إدخال مسبار مستقيمي مشحم نظيف في مستقيم الحيوان ثم تثبيته على اللوحة الجراحية باستخدام شريط micropore. تقييم عمق التخدير من خلال مراقبة الاستجابات لتحفيز المخلب أو الذيل من الضغط الذي يطبقه الملقط الرضحي ، والمنعكس الجفني ، وتوتر العضلات. قياس معدل التنفس من خلال مراقبة حركة جدار الصدر مع مراقبة الجهد التنفسي لتقييم حجم المد والجزر ، ثم حساب معدل التنفس كما هو موضح في المخطوطة.بمجرد تطهير موقع الجراحة باستخدام أدوات تطبيق معقمة ذات رؤوس قطنية ، ضع الكلورهيكسيدين بحركة دائرية من مركز موقع الجراحة إلى الحواف ثلاث مرات ، متبوعا بمزيج من الكلورهيكسيدين والإيثانول بنفس النمط. قم بإعداد المجال الجراحي عن طريق وضع ستائر جراحية معقمة على جانبي اللوحة الجراحية كموقع لوضع الأدوات المعقمة. بعد عمل فتحة صغيرة بيضاوية الشكل في الستارة ، ضع الستارة المزخرفة في موقع الشق المقترح.بعد تحضير الحيوان كما هو موضح سابقا ، ضع مواد تشحيم العين. باستخدام حقنة أنسولين قياس 29 على طول موقع الشق المخطط له ، قم بحقن جرعة من البوبيفاكايين تحت الجلد في البطن البطني وابحث عن خط مستقيم من الفقاعة المرئية التي تغطي مدى الشق المخطط له. بعد ذلك ، استخدم شفرة مشرط جراحية معقمة لعمل شق جلدي في خط الوسط البطني تحت التكبير ثماني مرات.تأكد من أن بضع البطن يمتد أسفل البطن إلى الهامش الساحلي. وأدخل ضامنا لتعظيم المجال الجراحي. بلل جزء الشاش المعقم بمحلول كلوريد الصوديوم الدافئ بنسبة 0.9٪ وضعه في الجانب العلوي من موقع الجراحة.الآن ، استخدم براعم قطنية معقمة مبللة لنزع الأمعاء بلطف. ضعهم فوق هذا الشاش ولف الشاش حول العضو. باستخدام مزيج من أدوات التطبيق ذات الرؤوس القطنية وملقط خياطة الجسم المستدير ، حرر وحرر الشريان الأورطي البطني والوريد الأجوف السفلي من الأنسجة المحيطة بتقنية تشريح حادة.تأكد من أن منطقة الخلوص تقع بين الجانب تحت السفلي للأوعية وفوق تشعب الشريان الأورطي. بعد تحديد الأوعية البطنية الخلفية ، اسحب الشريان الأورطي برفق في اتجاه بعيدا عن العمود الفقري باستخدام الملقط. اصنع قناة على جانبي هذه الأوعية رأسيا عن طريق تمرير الملقط المنحني الخلفي إلى الأوعية البطنية.تم تحديد كل وعاء وتعبئته في منطقة المفاغرة المخطط لها باستخدام أطوال من النايلون 10-O مربوطة بأدوات في عقدة الجراح برمية إضافية واحدة. عزل موقع المفاغرة عن الدورة الدموية عن طريق تثبيت مشبك جراحي على رأس الوعاء البطني ونهايات التدليل. تأكد من أن المشابك تعبر كلا السفينتين بدرجة كافية لضمان الانسداد الكامل.استخدم ملقط في اليد غير المهيمنة لتثبيت الشريان الأورطي. إجراء بضع الأبهر باستخدام إبرة قياس 30 في الجانب الأمامي من الشريان الأورطي. تمديد بضع الأبهر باستخدام مقص جراحي مجهري مستقيم الرأس.لإجراء بضع الغد ، استخدم ملقط مستقيم وقم بتطبيق الجر الأمامي اللطيف على الوريد الأجوف السفلي عند النقطة التي تتماشى مع منتصف بضع الأبهر. استخدم مقص الجراحة المجهرية المنحنية بحيث يكون الجانب المقعر مواجها للأمام لإزالة جزء من الوريد الأجوف السفلي بطول متساو مع بضع الأبهر. اغسل الأجزاء الداخلية من الأوعية المفتوحة للدم المتبقي بمحلول كلوريد الصوديوم الهيبارين.ضع قلب المتبرع في البطن وتأكد من أن الشريان الأورطي الصاعد بجانب بضع الأبهر البطني مباشرة ويتم تدوير القلب ، بحيث يمكن سحب الشريان الرئوي عبر المفاغرة الثانية. باستخدام نايلون 10-O ، ضع خياطة البقاء بين موضع 12:00 من بضع الأبهر والطرف المقابل من تجويف الشريان الأورطي الصاعد. باستخدام ملقط مستقيم الرأس في حامل إبرة مجهري ، اربطه بثلاث رميات لاحقة من عقدة الجراح واقطع الأطراف لترك ما يقرب من ملليمترين من الخيط.ضع خياطة إقامة ثانية بين الموضع 6:00 لبضع الأبهر والجانب المقابل من الشريان الأورطي الصاعد. نظرا لأن هذا الخيط سيكون أيضا بمثابة قاعدة للخيوط اللاحقة ، اترك ما لا يقل عن 10 ملليمترات من الذيل للربط النهائي. ضع خياطة جري مستمرة من نايلون 10-O بطريقة تصاعدية لمعارضة الحافة اليمنى التشريحية لبضع الأبهر والحافة الحرة المقابلة للشريان الأورطي الصاعد.نفذ هذا الإجراء بعناية واستخدم ما يقرب من أربع رميات لهذا الخط. مرر الطرف الحر للخياطة حول خياطة البقاء البعيدة قبل وضع خياطة الجري المستمرة الثانية أسفل الجانب الأيسر التشريحي للتأثير على الوضع مع الحافة الحرة المتبقية من بضع الأبهر. اربط الخيط بالذيل باستخدام عقدة الجراح برميتين إضافيتين.ضع خياطة البقاء بين موضع 12:00 من الوريد الأجوف السفلي ، بضع الوريد ، والطرف المقابل من تجويف الشريان الرئوي. من نقطة الربط هذه ، ضع خياطة جارية مستمرة بشكل مميز بين الحافة اليسرى التشريحية للشريان الرئوي والحافة المقابلة لبضع الوريد. مرر الإبرة من خلال الموضع 6:00 من بضع الوريد والطرف المقابل من تجويف الشريان الرئوي.بطريقة تصاعدية ، مرر الإبرة عبر الحافة الحرة المتبقية للشريان الرئوي واليمين التشريحي للوريد. استخدم ما معدله أربع رميات لهذا الخط ثم ارسم الحواف الحرة النهائية للشريان الرئوي وبضع الوريد معا. اربط الطرف الحر للخياطة بالمرساة ، وباستخدام أداة ، اربط عقدة الجراح برميتين إضافيتين واقطع الخيط الإضافي.تحقق من الأوعية بحثا عن التواء ، مما قد يتداخل مع تدفق الدم. ضع رغوة الجل فوق خط الخياطة. ضع قطعتين من رغوة الجل التي يبلغ قطرها ملليمترين تقريبا حولها وقم بتشكيلها بحيث يتم تغطية جميع خطوط الخياطة المرئية.حرر المشابك الوعائية بدءا من مشبك التدليل ثم مشبك الرأس. نظرا لأنه من المتوقع حدوث كمية صغيرة من النزف ، ضع أدوات التطبيق ذات الرؤوس القطنية بشكل استباقي فوق مواقع المفاغرة لتوفير الضغط. بعد إصلاح التسريبات المرئية ، افحص القلب بحثا عن النبض.إذا كان غائبا ، افحص الأوعية القلبية بحثا عن التواء ، ثم أعد وضع الأمعاء فوق القلب وحوله ، وقم بترطيب التجويف البريتوني بمحلول كلوريد الصوديوم الدافئ إذا بدا جافا. باستخدام التقنية المستمرة غير المنقطعة ، أغلق تجويف البطن باستخدام خيوط أحادية البرولين 6-O غير القابلة للامتصاص عن طريق خياطة الطبقة العضلية أولا ، تليها الجلد. بمجرد إزالة المتلقي من اللوحة الجراحية والخروج من المخدر ، قم بتطبيق ملليلتر واحد من المحلول الملحي الدافئ تحت الجلد وضع المتلقي في قفص مجهز مع الاحترار للمراقبة وفقا لبروتوكولات التعافي بعد الجراحة.لوحظ الشفاء التام والقبول في حالة عمليات زرع قلب الفئران غير المتجانسة والمتجانسة لمدة 100 يوم بعد الجراحة. ومع ذلك ، لوحظ الرفض السريع في وقت مبكر بعد سبعة أيام من الجراحة في حالة عمليات زرع قلب الفئران غير المتجانسة الرئيسية. أثناء المفاغرة ، يجب أن تحافظ على الوعي بمكان خياطتك في المجال الجراحي.يمكن أن يؤدي عدم القيام بذلك إلى أضرار جسيمة للهياكل أو تشابك الخياطة. هذه التقنيات المجهرية للتشريح والمفاغرة قابلة للتطبيق بشكل كبير على النماذج الجراحية الأخرى للثدييات الصغيرة ، بما في ذلك الكلى غير المتجانسة وزرع الكبد التقويمي ، مما يسمح للباحثين بدراسة رفض الكسب غير المشروع.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

A Protocol for Collecting and Staining Hemocytes from the Yellow Fever Mosquito Aedes aegypti

A Protocol for Collecting and Staining Hemocytes from the Yellow Fever Mosquito Aedes aegypti

بروتوكول لجمع ويلطخ Hemocytes من الحمى الصفراء البعوض الزاعجة المصرية</em

 Mosquitoes are vectors for a number  of disease-causing pathogens such as the yellow fever virus, malaria parasites  and filarial worms. Laboratories are ...

Reverse Genetics Mediated Recovery of Infectious Murine Norovirus

علم الوراثة العكسية الاسترداد بوساطة من نوروفيروس الفئران المعدية

Human noroviruses are responsible for most cases of human gastroenteritis (GE) worldwide and are recurrent problem in environments where close ...

Isolation of Cortical Microglia with Preserved Immunophenotype and Functionality From Murine Neonates

عزل الخلايا الدبقية الصغيرة القشرية مع نمط ظاهري مناعي المحفوظة وظيفة من الفئران حديثي الولادة

Isolation of microglia from CNS tissue is a powerful investigative tool used to study microglial biology ex vivo. The present method details a procedure ...

Isolation, Identification, and Purification of Murine Thymic Epithelial Cells

العزلة، تحديد الهوية، وتنقية خلايا الفئران التوتة طلائي

The thymus is a vital organ for T lymphocyte development. Of thymic stromal cells, thymic epithelial cells (TECs) are particularly crucial at multiple ...

Isolation of Murine Lymph Node Stromal Cells

عزل خلايا الفئران العقدة الليمفاوية اللحمية

Secondary lymphoid organs including lymph nodes are composed of stromal cells that provide a structural environment for homeostasis, activation and ...

Generation of Two-color Antigen Microarrays for the Simultaneous Detection of IgG and IgM Autoantibodies

جيل من اللونين مستضد ميكروأرس للكشف في وقت واحد من مفتش والغلوبولين المناعي الأجسام المضادة الذاتية

Autoantibodies, which are antibodies against self-antigens, are present in many disease states and can serve as markers for disease activity. The levels ...

An Optimized Protocol to Analyze Glycolysis and Mitochondrial Respiration in Lymphocytes

بروتوكول الأمثل لتحليل تحلل السكر والميتوكوندريا التنفس في الخلايا اللمفاوية

Lymphocytes respond to a variety of stimuli by activating intracellular signaling pathways, which in turn leads to rapid cellular proliferation, migration ...

Isolation of Extracellular Vesicles from Murine Bronchoalveolar Lavage Fluid Using an Ultrafiltration Centrifugation Technique

عزل حويصلات خارج الخلية من السوائل مورين للفيسيولوجيا الغسل باستخدام أسلوب الطرد المركزي أولترافيلتريشن

Extracellular vesicles (EVs) are newly discovered subcellular components that play important roles in many biological signaling functions during ...

An Immunological Model for Heterotopic Heart and Cardiac Muscle Cell Transplantation in Rats

نموذج مناعي لزرع خلايا القلب الهيترولوجي وخلايا عضلة القلب في الفئران

Heterotopic heart transplantation in rats has been a commonly used model for diverse immunological studies for more than 50 years. Several modifications ...

Optimization of the Cuff Technique for Murine Heart Transplantation

تحسين تقنية الكفة لزراعة القلب مورين

Murine cardiac transplantation has been performed for more than 40 years. With advancements in microsurgery, certain new techniques have been used to ...