Name: a modified murine heterotopic heart transplant protocol matching contemporary standards of aseptic technique, anesthesia, and analgesia
Uploaded: 2022-09-28T13:20:00
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作者要感谢西澳大利亚大学和哈里·珀金斯医学研究所的动物护理人员的出色努力，他们的奉献精神和专业知识为这些手术的可行性和成功做出了贡献。

这项研究是根据《科学目的照顾和使用动物业务守则》15 进行的，并根据动物伦理协议RA/3/100/1568和AE173（分别是西澳大利亚大学动物伦理委员会和哈里·珀金斯医学研究所动物伦理委员会）批准。有关本协议中使用的所有材料、仪器和动物的详细信息，请参阅 材料表 。
1. 准备手术动物
注意：人员致力于在整个过...

<ol>
	<li>Mann, F. C., Priestley, J. T., Markowitz, J., Yater, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+the+intact+mammalian+heart.">Transplantation of the intact mammalian heart.</a> Archives of Surgery. 26 (2), 219-224 (1933).</li><li>Neptune, W. B., Cookson, B. A., Bailey, C. P., Appler, R., Rajkowski, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complete+homologous+heart+transplantation.">Complete homologous heart transplantation.</a> A.M.A. Archives of Surgery. 66 (2), 174-178 (1953).</li><li>Downie, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Homotransplantation+of+the+dog+heart.">Homotransplantation of the dog heart.</a> A.M.A. Archives of Surgery. 66 (5), 624-636 (1953).</li><li>Blanco, G., Adam, A., Rodriguezperez, D., Fernandez, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complete+homotransplantation+of+canine+heart+and+lungs.">Complete homotransplantation of canine heart and lungs.</a> A.M.A. Archives of Surgery. 76 (1), 20-23 (1958).</li><li>Abbott, C. P., Lindsey, E. S., Creech, O., Dewitt, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+technique+for+heart+transplantation+in+the+rat.">A technique for heart transplantation in the rat.</a> Archives of Surgery. 89, 645-652 (1964).</li><li>Ono, K., Lindsey, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+technique+of+heart+transplantation+in+rats.">Improved technique of heart transplantation in rats.</a> The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 57 (2), 225-229 (1969).</li><li>Corry, R. J., Winn, H. J., Russell, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primarily+vascularized+allografts+of+hearts+in+mice.+The+role+of+H-2D,+H-2K,+and+non-H-2+antigens+in+rejection.">Primarily vascularized allografts of hearts in mice. The role of H-2D, H-2K, and non-H-2 antigens in rejection.</a> Transplantation. 16 (4), 343-350 (1973).</li><li>Joffre, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevention+of+acute+and+chronic+allograft+rejection+with+CD4+CD25+Foxp3++regulatory+T+lymphocytes.">Prevention of acute and chronic allograft rejection with CD4+CD25+Foxp3+ regulatory T lymphocytes.</a> Nature Medicine. 14 (1), 88-92 (2008).</li><li>Gregori, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulatory+T+cells+induced+by+1+alpha,25-dihydroxyvitamin+D3+and+mycophenolate+mofetil+treatment+mediate+transplantation+tolerance.">Regulatory T cells induced by 1 alpha,25-dihydroxyvitamin D3 and mycophenolate mofetil treatment mediate transplantation tolerance.</a> The Journal of Immunology. 167 (4), 1945-1953 (2001).</li><li>Niimi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+technique+for+heterotopic+cardiac+transplantation+in+mice:+Experience+of+3000+operations+by+one+surgeon.">The technique for heterotopic cardiac transplantation in mice: Experience of 3000 operations by one surgeon.</a> The Journal of Heart and Lung Transplantation. 20 (10), 1123-1128 (2001).</li><li>Hasegawa, T., Visovatti, S. H., Hyman, M. C., Hayasaki, T., Pinsky, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterotopic+vascularized+murine+cardiac+transplantation+to+study+graft+arteriopathy.">Heterotopic vascularized murine cardiac transplantation to study graft arteriopathy.</a> Nature Protocols. 2 (3), 471-480 (2007).</li><li>Hoogstraten-Miller, S. L., Brown, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Techniques+in+aseptic+rodent+surgery.">Techniques in aseptic rodent surgery.</a> Current Protocols in Immunology. 82, 1-14 (2008).</li><li>Navarro, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+anesthesia:+The+art+and+science.">Mouse anesthesia: The art and science.</a> ILAR Journal. , (2021).</li><li>Adams, S., Pacharinsak, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+anesthesia+and+analgesia.">Mouse anesthesia and analgesia.</a> Current Protocols in Mouse Biology. 5 (1), 51-63 (2015).</li><li>Australian code for the care and use of animals for scientific purposes. NHMRC Available from: <a target="_blank" href="https://www.nhmrc.gov.au/about-us/publications/australian-code-care-and-use-animals-scientific-purposes">https://www.nhmrc.gov.au/about-us/publications/australian-code-care-and-use-animals-scientific-purposes</a> (2013)</li><li>Prosser, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+changes+to+tissue-resident+immunity+after+MHC-matched+and+MHC-mismatched+solid+organ+transplantation.">Dynamic changes to tissue-resident immunity after MHC-matched and MHC-mismatched solid organ transplantation.</a> Cell Reports. 35 (7), 109141 (2021).</li></ol>

小鼠原位心脏移植模型是一种强大的临床前模型，主要用于研究MHC错配对免疫排斥反应水平和性质的影响，以及最近移植对移植物组织驻留免疫保留的影响16。虽然最初严格遵循Corry等人7方案， 但我们改进了该方案，以纳入无菌技术，镇痛和麻醉的最佳实践标准。这些新做法的更新是通过额外的培训、提供无菌手术手套、长袍和手术单、应用额外的麻醉以及更?...

我们对免疫学和移植的理解很大程度上归功于基于使用动物受试者的实体器官移植实验模型的研究。自从首次描述哺乳动物血管化心脏移植1以来，这些模型为广泛领域的知识做出了贡献，包括低温的治疗应用2，使用专用缝合线的益处3以及全肺和心脏同源移植技术4。由于不同育种系的可用性，大鼠5,6中心脏移植模型的开发为免疫学实验提供了更广泛的空间。可用的近交和突变小鼠品系的范围要广泛得多，导致Corry等人7开发了一种小鼠异位心脏移植技术，因为该技术范围为移植研究带来了相当大的优势。该模型已被广泛使用，有助于更好地了解移植排斥反应8和治疗9。然而，自首次描述以来，该技术除了一些次要的技术细节（例如调整吻合口位置10,11）外，基本保持不变。
自从将Corry等人7的技术整合到我们的实验中以来 ，我们已经确定了改进该方案的希望领域，即无菌技术，麻醉和镇痛。预计这些领域的改进将对实验结果产生积极影响并改善动物福利。以前，当无菌技术用于小动物手术时，已经证明了这一点，因为它有助于减少术后感染12，这不仅会影响发病率和死亡率，而且还可能损害旨在评估移植手术后免疫反应的实验。从麻醉和镇痛的角度来看，使用精细的方案有助于降低动物的成本，并通过减轻实验对象的痛苦和痛苦来平衡这种手术模型的伦理论点。此外，适当的麻醉和镇痛限制了与疼痛相关的应激反应，提高了术后恢复的质量，并最终提高了手术成功率13。
为了改善动物福利和实验结果，制定了一项方案，并进行了调整以弥合这些差距。该方案已根据Corry等人最初描述的方案进行了改编，并咨询了兽医麻醉师，并适当考虑了麻醉和镇痛方案中使用的药物干预的效果和持续时间。该方法基于平衡麻醉和多模式镇痛的原则，以确保适当的围手术期护理14。除了应用无菌技术外，还先发制人地给予阿片类药物丁丙诺啡和局部麻醉剂布比卡因。全身麻醉使用吸入麻醉剂异氟醚进行。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>2030 Rycroft irrigating cannula 30 G</td>
			<td>McFarlane</td>
			<td>56005HU</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Braided surgical silk 7-0</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bulldog clamp curved - 35 mm&#160;</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-7441-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bupivacaine 0.25%&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Castroviejo needle holder catch curved -&#160; 145 mm</td>
			<td>Haag-Streit</td>
			<td>11.62.15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chlorhexidine 5% solution</td>
			<td>Ebos</td>
			<td>JJ61371</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton-tipped applicator - 7.5 cm</td>
			<td>Dove</td>
			<td>SN109510</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol 70% solution</td>
			<td>Ebos</td>
			<td>WH130192EE</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gauze 5 x 5 cm white</td>
			<td>Aero</td>
			<td>AGS50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gelfoam 80 mm x 125 mm&#160;</td>
			<td>Pfizer</td>
			<td>7481D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hair clipper</td>
			<td>Wahl</td>
			<td>9860L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin 1,000 IU in 1 mL</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris SuperCut scissors straight - 11.5 cm&#160;&#160;</td>
			<td>Inka Surgical&#160;</td>
			<td>11550.11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane vaporiser</td>
			<td>Darvall</td>
			<td>9176</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro bulldog clamp - 3.7 cm</td>
			<td>Greman</td>
			<td>14119-G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro scissors curved 105 mm&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micropore plain paper surgical tape - 2.5 cm wide</td>
			<td>Ebos</td>
			<td>7810L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsurgical scissors - curved tip</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monofilament polyprolene suture - 5/0</td>
			<td>Surgipro</td>
			<td>P-205-X</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Myweigh i101 Precision Scale 100 g x 0.005 g</td>
			<td>Myweigh</td>
			<td>Kit00053</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle - 30 G x 0.5 inch</td>
			<td>BD</td>
			<td>BD304000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needleholder 15 cm curved &#34;super fine&#34;</td>
			<td>Surgical Specialists</td>
			<td>ST-B-15-8.2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nylene 10/0 x 15 cm on 3.8 mm 3/8 circle round bodied taper (diam 0.07mm) CV300</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round body suture forceps curved 0.3 mm 120 mm</td>
			<td>B. Braun</td>
			<td>FD281R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round body suture forceps straight 0.3 mm 120 mm</td>
			<td>B. Braun</td>
			<td>FD280R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round handled vannas spring scissors-str/12.5 cm</td>
			<td></td>
			<td>15400-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spring scissors-Cvd Sm blades</td>
			<td></td>
			<td>15001-08</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stevens scissors blunt straight 110 mm</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical backboard</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Rigid laminated cardboard. 15 x 15 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical drapes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Cut into two sizes. 25 cm x 25 cm, and 25 cm x 40 cm&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical microscope</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe - 1 mL</td>
			<td>BD</td>
			<td>592696</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe - 3 mL</td>
			<td>Leica</td>
			<td>M651</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Toothed forceps</td>
			<td>BD</td>
			<td>309657</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>University of Wisconsin Solution</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Warming pad</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Far infrared warming pad 20 x 25 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Westcott spring scissors</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yasargil clip applier bayonet</td>
			<td>Aesculap</td>
			<td>FE582K</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yasargil titanium clip perm 6.6 mm</td>
			<td>Aesculap</td>
			<td>A19FT222T</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse usage</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Strain/SEX/Weight</td>
			<td>Donor</td>
			<td>Recipent</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BALB/c, female, 19-23 g</td>
			<td>7</td>
			<td>21</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6, female, 17-20 g</td>
			<td>7</td>
			<td>0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD45.1 BALB/c, female, 17-21 g</td>
			<td>5</td>
			<td>0</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a modified murine heterotopic heart transplant protocol matching contemporary standards of aseptic technique, anesthesia, and analgesia

动物心脏移植实验模型的发展为免疫学和实体器官移植领域的许多进展做出了贡献。虽然异位血管化鼠心脏移植模型最初用于使用不匹配的近交小鼠品系组合的移植排斥反应研究，但获得转基因菌株和治疗方式可以提供强大的新临床前见解。从根本上说，该技术的手术方法自开发以来没有改变，特别是在无菌技术、麻醉和镇痛等重要因素方面，这些因素对术后发病率和死亡率产生重大影响。此外，围手术期管理的改善有望改善动物福利和实验结果。本文报告了与兽医麻醉主题专家合作制定的方案，并描述了手术技术，重点是围手术期管理。此外，我们还讨论了这些改进的含义，并提供了有关排除此手术关键手术步骤的详细信息。

为了确定手术技术在促进伤口愈合和小鼠恢复的良好结果方面的有效性，实验室的早期实验确定了一系列具有不同免疫原性的心脏移植物对受体的存活特征。这些包括同源（n = 5）和同源（n = 5）移植物，它们与受体共享相同的主要组织相容性复合体（MHC）标记，以及主要错配移植物（n = 9），其中移植物和受体具有不同的MHC标记。我们使用异位腹心跳的直接触诊来评估正在进行的移植功能和活力?...

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A Modified Murine Heterotopic Heart Transplant Protocol Matching Contemporary Standards of Aseptic Technique, Anesthesia, and Analgesia

本文描述了一种改良的异位血管化心脏移植技术，包括更新的无菌技术、镇痛和麻醉。

符合当代无菌技术、麻醉和镇痛标准的改良小鼠异位心脏移植方案

The development of experimental models of cardiac transplantation in animals has contributed to many advances in the fields of immunology and solid organ ...

这是一种经济且可重复的心脏移植模型。它既可用于提高显微外科技能，又允许使用转基因小鼠品系作为供体或受体。该技术广泛包括正常人类手术的所有疼痛管理和麻醉复杂性，以限制手术后的发病率。该模型对于研究手术诱导的免疫、错配对移植排斥反应的影响和移植寿命至关重要。该模型的一般手术方法可以以修改的形式应用于其他小鼠实体器官移植。微观尺度和相关的时间限制留下了很小的误差幅度。成功的关键是在专业监督下定期练习，对困难领域提供具体反馈。演示该程序的将是我实验室的研究助理刘女士。协助外科手术的将是黄文华医生、贾斯考尔女士和张晓女士。麻醉并将小鼠从诱导室中取出后，通过使用剪刀紧密剃除腹腹部来去除毛发。在捐赠者的情况下，剃掉从生殖器延伸到腹侧胸上缘的区域。确保剃光的区域横向到达腋中线。通过将清洁润滑的直肠探头插入动物的直肠，然后使用微孔胶带将其固定在手术板上来监测温度。通过观察创伤钳施加的压力对爪子或尾巴刺激的反应、睑反射和肌张力来评估麻醉深度。通过观察胸壁运动来测量呼吸频率，同时观察呼吸努力以评估潮气量，然后计算手稿中所述的呼吸频率。使用无菌棉头涂抹器对手术部位进行消毒后，从手术部位中心到边缘以圆周运动涂抹洗必泰三次，然后以相同的模式组合洗必泰和乙醇。通过在手术板的两侧放置无菌手术单作为放置无菌器械的部位来准备手术区域。在窗帘上开一个小椭圆形开口后，将开窗窗布放在建议的切口部位。如前所述准备好动物后，涂抹眼睛润滑剂。沿计划的切口部位使用 29 号胰岛素注射器，皮下注射基于体重剂量的布比卡因到腹腹，并寻找覆盖计划切口范围的可见水泡直线。然后，使用无菌手术刀刀片在八倍放大镜下做腹侧中线皮肤切口。确保剖腹手术从下腹部延伸到肋缘。并插入牵开器以最大化手术区域。用温热的0.9%氯化钠溶液润湿无菌纱布段，并将其放置在手术部位的上侧。现在，使用湿润的无菌棉签轻轻地掏空肠道。将它们放在纱布的顶部，然后将纱布缠绕在风琴周围。使用棉头涂抹器和圆形身体缝合钳的组合，通过钝性解剖技术从周围组织中释放和移动腹主动脉和下腔静脉。确保间隙区域位于血管肾下侧和主动脉分叉上方。识别后腹血管后，使用镊子轻轻地将主动脉拉向远离椎柱的方向。通过将弯曲的镊子向后穿过腹部血管，在这些血管的头尾两侧形成一个通道。使用长度的10-O尼龙将每个血管连接在计划的吻合区，并用器械绑在外科医生的结中，再投掷一次。通过在腹血管的头部和吩咐末端安装手术夹，将吻合口部位与循环隔离开来。确保夹子穿过两个容器的程度足以确保完全遮挡。使用非惯用手的镊子来稳定主动脉。在主动脉前侧使用 30 号针进行主动脉切开术。使用直头显微外科剪刀延长主动脉切开术。要进行腺切开术，请使用直钳子，并在与主动脉切开术中间对齐的点处对下腔静脉施加温和的前牵引。使用弯曲的显微外科剪刀，凹面朝前，切除一段与主动脉切开术长度相等的下腔静脉。用肝素化氯化钠溶液清洗剩余血液的开放血管的内部。将供体心脏放入腹部，并确保升主动脉直接与腹主动脉切开术相邻，并且心脏旋转，以便可以抽出肺动脉进行第二次吻合。使用 10-O 尼龙，在主动脉切开术的 12：00 位置和升主动脉管腔的相应肢体之间放置一条固定缝合线。在显微外科针架中使用直尖镊子，将其与外科医生的结进行三次后续投掷，并切割末端以留下大约两毫米的缝合线。在主动脉切开术的 6：00 位置和升主动脉的相应方面之间放置第二次停留缝合线。由于这条缝合线也将作为后续缝合线的基础，因此至少留出 10 毫米的尾巴以进行最终的绑扎。以升序方式放置10-O尼龙的连续运行缝合线，以对合主动脉切开术的解剖学右边缘和升主动脉的相应自由边缘。请仔细执行此过程，并为此行使用大约四次投掷。将缝合线的自由端穿过远端保持缝合线，然后沿着解剖左侧放置第二条连续的缝合线，以影响与主动脉切开术剩余自由边缘的对位。用外科医生的结将缝合线绑在尾巴上，再投掷两次。在下腔静脉的 12：00 位置、静脉切开术和肺动脉管腔的相应肢体之间放置一条保持缝合线。从这个锚点开始，在肺动脉的解剖学左边缘和静脉切开术的相应边缘之间明显地放置一条连续的缝合线。将针头穿过静脉切开术的6：00位置和肺动脉腔的相应肢体。以升序方式，将针穿过肺动脉的剩余自由边缘和静脉切开术的解剖右侧。对这条线平均使用四次投掷，然后将肺动脉和静脉切开术的最终自由边缘一起绘制。将缝合线的自由端绑在锚上，然后使用仪器将外科医生的结再绑上两个，然后剪下多余的线。检查血管是否扭曲，这会干扰血液流动。将凝胶泡沫放在缝合线上。在它们周围放置两块大约两毫米的凝胶泡沫并成型，以便覆盖所有可见的缝合线。松开血管夹，从娇娇夹开始，然后是头夹。当预计有少量出血时，应先发制人地将棉尖涂抹器放在吻合口部位以提供压力。修复可见泄漏后，检查心脏是否有脉动。如果没有，检查心脏血管是否扭曲，然后将肠道重新定位在心脏上方和周围，如果看起来干燥，则用温热的氯化钠溶液润湿腹膜腔。使用连续不间断技术，使用不可吸收的6-O肟烯单丝关闭腹腔，首先缝合肌肉层，然后缝合皮肤。一旦接受者从手术板上取出并离开麻醉剂，皮下注射一毫升温盐水，并将接受者置于准备好的笼子中，根据术后恢复方案进行加热观察。在同源和同源异位鼠心脏移植的情况下，观察到术后100天的完全恢复和接受。然而，早在手术后7天，在重大错配小鼠心脏移植的情况下，就观察到快速排斥反应。在吻合术期间，您必须保持对缝合线在手术区域内的位置的意识。否则可能导致结构严重损坏或缝合线缠结。这些夹层和吻合的显微外科技术高度适用于其他小型哺乳动物手术模型，包括异位肾和原位肝移植，使研究人员能够研究移植物排斥反应。

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