Name: a modified murine heterotopic heart transplant protocol matching contemporary standards of aseptic technique, anesthesia, and analgesia
Uploaded: 2022-09-28T13:20:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Modified Murine Heterotopic Heart Transplant Protocol Matching Contemporary Standards of Aseptic Technique, Anesthesia, and Analgesia at JoVE.com

Forfatterne vil gerne anerkende den fremragende indsats fra dyreplejepersonalet ved University of Western Australia og Harry Perkins Institute of Medical Research, hvis engagement og ekspertise bidrog til gennemførligheden og succesen af disse operationer.

Denne forskning blev udført i overensstemmelse med Code of Practice for the Care and Use of Animals for Scientific Purpose15 og godkendt i henhold til Animal Ethics Protocols RA/3/100/1568 og AE173 (henholdsvis University of Western Australia Animal Ethics Committee og Harry Perkins Institute of Medical Research Animal Ethics Committee). Se materialefortegnelsen for detaljer om alle materialer, instrumenter og dyr, der anvendes i denne protokol.
...

<ol>
	<li>Mann, F. C., Priestley, J. T., Markowitz, J., Yater, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+the+intact+mammalian+heart.">Transplantation of the intact mammalian heart.</a> Archives of Surgery. 26 (2), 219-224 (1933).</li><li>Neptune, W. B., Cookson, B. A., Bailey, C. P., Appler, R., Rajkowski, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complete+homologous+heart+transplantation.">Complete homologous heart transplantation.</a> A.M.A. Archives of Surgery. 66 (2), 174-178 (1953).</li><li>Downie, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Homotransplantation+of+the+dog+heart.">Homotransplantation of the dog heart.</a> A.M.A. Archives of Surgery. 66 (5), 624-636 (1953).</li><li>Blanco, G., Adam, A., Rodriguezperez, D., Fernandez, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complete+homotransplantation+of+canine+heart+and+lungs.">Complete homotransplantation of canine heart and lungs.</a> A.M.A. Archives of Surgery. 76 (1), 20-23 (1958).</li><li>Abbott, C. P., Lindsey, E. S., Creech, O., Dewitt, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+technique+for+heart+transplantation+in+the+rat.">A technique for heart transplantation in the rat.</a> Archives of Surgery. 89, 645-652 (1964).</li><li>Ono, K., Lindsey, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+technique+of+heart+transplantation+in+rats.">Improved technique of heart transplantation in rats.</a> The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 57 (2), 225-229 (1969).</li><li>Corry, R. J., Winn, H. J., Russell, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primarily+vascularized+allografts+of+hearts+in+mice.+The+role+of+H-2D,+H-2K,+and+non-H-2+antigens+in+rejection.">Primarily vascularized allografts of hearts in mice. The role of H-2D, H-2K, and non-H-2 antigens in rejection.</a> Transplantation. 16 (4), 343-350 (1973).</li><li>Joffre, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevention+of+acute+and+chronic+allograft+rejection+with+CD4+CD25+Foxp3++regulatory+T+lymphocytes.">Prevention of acute and chronic allograft rejection with CD4+CD25+Foxp3+ regulatory T lymphocytes.</a> Nature Medicine. 14 (1), 88-92 (2008).</li><li>Gregori, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulatory+T+cells+induced+by+1+alpha,25-dihydroxyvitamin+D3+and+mycophenolate+mofetil+treatment+mediate+transplantation+tolerance.">Regulatory T cells induced by 1 alpha,25-dihydroxyvitamin D3 and mycophenolate mofetil treatment mediate transplantation tolerance.</a> The Journal of Immunology. 167 (4), 1945-1953 (2001).</li><li>Niimi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+technique+for+heterotopic+cardiac+transplantation+in+mice:+Experience+of+3000+operations+by+one+surgeon.">The technique for heterotopic cardiac transplantation in mice: Experience of 3000 operations by one surgeon.</a> The Journal of Heart and Lung Transplantation. 20 (10), 1123-1128 (2001).</li><li>Hasegawa, T., Visovatti, S. H., Hyman, M. C., Hayasaki, T., Pinsky, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterotopic+vascularized+murine+cardiac+transplantation+to+study+graft+arteriopathy.">Heterotopic vascularized murine cardiac transplantation to study graft arteriopathy.</a> Nature Protocols. 2 (3), 471-480 (2007).</li><li>Hoogstraten-Miller, S. L., Brown, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Techniques+in+aseptic+rodent+surgery.">Techniques in aseptic rodent surgery.</a> Current Protocols in Immunology. 82, 1-14 (2008).</li><li>Navarro, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+anesthesia:+The+art+and+science.">Mouse anesthesia: The art and science.</a> ILAR Journal. , (2021).</li><li>Adams, S., Pacharinsak, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+anesthesia+and+analgesia.">Mouse anesthesia and analgesia.</a> Current Protocols in Mouse Biology. 5 (1), 51-63 (2015).</li><li>Australian code for the care and use of animals for scientific purposes. NHMRC Available from: <a target="_blank" href="https://www.nhmrc.gov.au/about-us/publications/australian-code-care-and-use-animals-scientific-purposes">https://www.nhmrc.gov.au/about-us/publications/australian-code-care-and-use-animals-scientific-purposes</a> (2013)</li><li>Prosser, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+changes+to+tissue-resident+immunity+after+MHC-matched+and+MHC-mismatched+solid+organ+transplantation.">Dynamic changes to tissue-resident immunity after MHC-matched and MHC-mismatched solid organ transplantation.</a> Cell Reports. 35 (7), 109141 (2021).</li></ol>

Den murinortotopiske hjertetransplantationsmodel er en robust præklinisk model, der primært anvendes til at undersøge virkningerne af MHC-mismatch på niveauet og arten af immunologisk afstødning og for nylig effekten af transplantation på tilbageholdelsen af transplantatvævsresident immunitet16. Mens vi oprindeligt nøje fulgte Corry et al.7-protokollen , har vi raffineret protokollen til at inkorporere bedste praksisstandarder for aseptisk teknik, analgesi og anæst...

Vi skylder meget af vores forståelse af immunologi og transplantation forskning baseret på eksperimentelle modeller for fast organtransplantation ved hjælp af dyreforsøgspersoner. Siden den første beskrivelse af vaskulariseret hjertetransplantation hos pattedyr1 har sådanne modeller bidraget til viden inden for vidtrækkende domæner, herunder terapeutisk anvendelse af hypotermi2, fordelene ved at anvende specialiserede suturer3 og teknikker til total lunge- og hjertetransplantation4. Udviklingen af hjertetransplantationsmodeller i rotter 5,6 gav bredere muligheder for immunologiske eksperimenter på grund af tilgængeligheden af forskellige avlslinjer. Det betydeligt bredere udvalg af tilgængelige indavlede og mutante musestammer førte Corry et al.7 til at udvikle en teknik til murin heterotopisk hjertetransplantation på grund af de betydelige fordele, som dette interval bringer til transplantationsforskning. Denne model er blevet brugt bredt og har bidraget til en større forståelse af transplantatafvisning8 og terapi9. Siden den første beskrivelse er teknikken imidlertid stort set forblevet uændret bortset fra nogle mindre tekniske detaljer såsom justeringer af placeringen af anastomotiske steder10,11.
Siden integrationen af teknikken Corry et al.7 i vores eksperimenter har vi identificeret områder, der lover godt for at forbedre protokollen, nemlig aseptisk teknik, anæstesi og analgesi. Forbedringer på disse områder forventedes at have en positiv indvirkning på forsøgsresultaterne og forbedre dyrevelfærden. Dette er tidligere blevet vist, når aseptisk teknik anvendes i små dyreoperationer, da det hjælper med at reducere postoperative infektioner12, hvilket ikke kun påvirker sygelighed og dødelighed, men også kan kompromittere eksperimenter designet til at vurdere immunresponset efter transplantationskirurgi. Fra et anæstesi og smertestillende synspunkt hjælper brugen af et raffineret regime med at reducere omkostningerne for dyr og afbalancere det etiske argument i denne kirurgiske model ved at afbøde smerte og lidelse hos forsøgspersoner. Endvidere begrænser passende anæstesi og analgesi det smerteassocierede stressrespons, forbedrer kvaliteten af postoperativ genopretning og i sidste ende øger den kirurgiske succesrate13.
Med det formål at forbedre både dyrevelfærd og forsøgsresultater blev der udviklet en protokol med justeringer for at bygge bro over disse huller. Denne protokol er blevet tilpasset fra den, der oprindeligt blev beskrevet af Corry et al.7 med konsultation fra en veterinæranæstesilæge og under behørig hensyntagen til både virkningerne og varigheden af virkningerne af de farmakologiske interventioner, der anvendes i anæstesi- og smertestillende regime. Tilgangen var baseret på principperne om afbalanceret anæstesi og multimodal analgesi for at sikre passende perioperativ pleje14. Ud over anvendelsen af aseptisk teknik blev opioidet buprenorphin og lokalbedøvelsesmidlet bupivacain administreret forebyggende. Generel anæstesi blev udført under anvendelse af inhalationsbedøvelsesmidlet isofluran.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>2030 Rycroft irrigating cannula 30 G</td>
			<td>McFarlane</td>
			<td>56005HU</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Braided surgical silk 7-0</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bulldog clamp curved - 35 mm&#160;</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-7441-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bupivacaine 0.25%&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Castroviejo needle holder catch curved -&#160; 145 mm</td>
			<td>Haag-Streit</td>
			<td>11.62.15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chlorhexidine 5% solution</td>
			<td>Ebos</td>
			<td>JJ61371</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton-tipped applicator - 7.5 cm</td>
			<td>Dove</td>
			<td>SN109510</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol 70% solution</td>
			<td>Ebos</td>
			<td>WH130192EE</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gauze 5 x 5 cm white</td>
			<td>Aero</td>
			<td>AGS50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gelfoam 80 mm x 125 mm&#160;</td>
			<td>Pfizer</td>
			<td>7481D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hair clipper</td>
			<td>Wahl</td>
			<td>9860L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin 1,000 IU in 1 mL</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris SuperCut scissors straight - 11.5 cm&#160;&#160;</td>
			<td>Inka Surgical&#160;</td>
			<td>11550.11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane vaporiser</td>
			<td>Darvall</td>
			<td>9176</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro bulldog clamp - 3.7 cm</td>
			<td>Greman</td>
			<td>14119-G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro scissors curved 105 mm&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micropore plain paper surgical tape - 2.5 cm wide</td>
			<td>Ebos</td>
			<td>7810L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsurgical scissors - curved tip</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monofilament polyprolene suture - 5/0</td>
			<td>Surgipro</td>
			<td>P-205-X</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Myweigh i101 Precision Scale 100 g x 0.005 g</td>
			<td>Myweigh</td>
			<td>Kit00053</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle - 30 G x 0.5 inch</td>
			<td>BD</td>
			<td>BD304000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needleholder 15 cm curved &#34;super fine&#34;</td>
			<td>Surgical Specialists</td>
			<td>ST-B-15-8.2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nylene 10/0 x 15 cm on 3.8 mm 3/8 circle round bodied taper (diam 0.07mm) CV300</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round body suture forceps curved 0.3 mm 120 mm</td>
			<td>B. Braun</td>
			<td>FD281R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round body suture forceps straight 0.3 mm 120 mm</td>
			<td>B. Braun</td>
			<td>FD280R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round handled vannas spring scissors-str/12.5 cm</td>
			<td></td>
			<td>15400-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spring scissors-Cvd Sm blades</td>
			<td></td>
			<td>15001-08</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stevens scissors blunt straight 110 mm</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical backboard</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Rigid laminated cardboard. 15 x 15 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical drapes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Cut into two sizes. 25 cm x 25 cm, and 25 cm x 40 cm&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical microscope</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe - 1 mL</td>
			<td>BD</td>
			<td>592696</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe - 3 mL</td>
			<td>Leica</td>
			<td>M651</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Toothed forceps</td>
			<td>BD</td>
			<td>309657</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>University of Wisconsin Solution</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Warming pad</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Far infrared warming pad 20 x 25 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Westcott spring scissors</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yasargil clip applier bayonet</td>
			<td>Aesculap</td>
			<td>FE582K</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yasargil titanium clip perm 6.6 mm</td>
			<td>Aesculap</td>
			<td>A19FT222T</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse usage</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Strain/SEX/Weight</td>
			<td>Donor</td>
			<td>Recipent</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BALB/c, female, 19-23 g</td>
			<td>7</td>
			<td>21</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6, female, 17-20 g</td>
			<td>7</td>
			<td>0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD45.1 BALB/c, female, 17-21 g</td>
			<td>5</td>
			<td>0</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a modified murine heterotopic heart transplant protocol matching contemporary standards of aseptic technique, anesthesia, and analgesia

Udviklingen af eksperimentelle modeller for hjertetransplantation hos dyr har bidraget til mange fremskridt inden for immunologi og fast organtransplantation. Mens den heterotopiske vaskulariserede murin hjertetransplantationsmodel oprindeligt blev brugt i undersøgelser af transplantatafvisning ved hjælp af kombinationer af uoverensstemmende indavlede musestammer, kan adgang til genetisk modificerede stammer og terapeutiske modaliteter give kraftfuld ny præklinisk indsigt. Grundlæggende har den kirurgiske metode til denne teknik ikke ændret sig siden dens udvikling, især med hensyn til vigtige faktorer som aseptisk teknik, anæstesi og analgesi, som har væsentlig indflydelse på postkirurgisk sygelighed og dødelighed. Derudover forventes forbedringer i perioperativ forvaltning at give forbedringer i både dyrevelfærd og forsøgsresultater. Dette papir rapporterer om en protokol udviklet i samarbejde med en fagekspert i veterinærbedøvelse og beskriver den kirurgiske teknik med vægt på perioperativ styring. Derudover diskuterer vi konsekvenserne af disse forbedringer og giver detaljer om fejlfinding af kritiske kirurgiske trin til denne procedure.

For at bestemme effektiviteten af den kirurgiske teknik til at fremme gode resultater af sårheling og musegenopretning bestemte tidlige eksperimenter i laboratoriet overlevelseskarakteristika for en række hjertetransplantater med variabel immunogenicitet til modtageren. Disse omfattede kongene (n = 5) og syngeneiske (n = 5) transplantater, som deler de samme større histokompatibilitetskompleksmarkører (MHC) som modtageren, og større uoverensstemmelsestransplantater (n = 9), hvor transplantatet og modtageren har fors...

Watch this Scientific Journal Video about A Modified Murine Heterotopic Heart Transplant Protocol Matching Contemporary Standards of Aseptic Technique, Anesthesia, and Analgesia at JoVE.com

A Modified Murine Heterotopic Heart Transplant Protocol Matching Contemporary Standards of Aseptic Technique, Anesthesia, and Analgesia

Denne artikel beskriver en modificeret teknik til heterotopisk vaskulariseret hjertetransplantation med opdateret aseptisk teknik, analgesi og anæstesi.

En modificeret murin heterotopisk hjertetransplantationsprotokol, der matcher moderne standarder for aseptisk teknik, anæstesi og analgesi

The development of experimental models of cardiac transplantation in animals has contributed to many advances in the fields of immunology and solid organ ...

Dette er en økonomisk og reproducerbar model for hjertetransplantation. Det kan bruges både til at forbedre mikrokirurgiske færdigheder og give mulighed for brug af genetisk modificerede musestammer som donorer eller modtagere. Teknikken omfatter bredt al smertebehandling og anæstetisk kompleksitet ved normal menneskelig kirurgi for at begrænse sygelighed efter operation.Denne model er afgørende for at studere kirurgisk induceret immunitet, effekten af mismatch på transplantationsafstødning og transplantationens levetid. De generelle kirurgiske tilgange til denne model kan anvendes i en modificeret form til andre musefaste organtransplantationer. Mikroskopisk skala og tilhørende tidsbegrænsninger giver en lille fejlmargin.Nøglen til succes er regelmæssig praksis med professionelt tilsyn, der giver specifik feedback på problemområder. Demonstration af proceduren vil være fru Liu Liu, en forskningsassistent fra mit laboratorium. Assisterende de kirurgiske procedurer vil være Dr.Wen Hua Huang, fru Jas Kaur og fru Xiao Zhang.Efter bedøvelse og fjernelse af musen fra induktionskammeret skal du fjerne hår ved nøje at barbere den ventrale mave ved hjælp af klippere. I donorens tilfælde barberes området, der strækker sig fra kønsorganerne til den øvre margen af den ventrale thorax. Sørg for, at det barberede område når den midtaxillære linje sideværts.Overvåg temperaturen ved at indsætte en ren smurt rektal sonde i dyrets endetarm og derefter fastgøre den til operationspladen ved hjælp af mikroporetape. Vurder bedøvelsesdybden ved at observere reaktioner på stimulering af poten eller halen fra tryk påført af traumatiske tang, palpebralrefleksen og muskeltonen. Mål respirationsfrekvensen ved at observere brystvæggens bevægelse, mens du observerer åndedrætsindsatsen for at vurdere tidevandsvolumen, og beregn derefter respirationsfrekvensen som beskrevet i manuskriptet.Når det kirurgiske sted er desinficeret ved hjælp af sterile applikatorer med bomuldsspids, påføres chlorhexidin i en cirkulær bevægelse fra det kirurgiske steds centrum til kanterne tre gange efterfulgt af en kombination af chlorhexidin og ethanol i samme mønster. Forbered det kirurgiske felt ved at placere sterile kirurgiske gardiner på hver side af operationspladen som stedet for at placere sterile instrumenter. Efter at have lavet en lille ovalformet åbning i draperingen, skal du placere det fenestrerede drapering på det foreslåede snitsted.Efter tilberedning af dyret som tidligere demonstreret påføres øjensmøremiddel. Brug en 29-gauge insulinsprøjte langs det planlagte snitsted til subkutant at injicere en vægtbaseret dosis bupivacain i den ventrale abdomen og se efter en lige linje med synlig blæsning, der dækker omfanget af det planlagte snit. Brug derefter et sterilt kirurgisk skalpelblad til at lave et ventralt midterlinie hudsnit under otte gange forstørrelse.Sørg for, at laparotomien spænder over underlivet til costalmargenen. Og indsæt en retraktor for at maksimere det kirurgiske felt. Fugt segmentet af sterilt gasbind med opvarmet 0,9% natriumchloridopløsning og placer det på det overlegne aspekt af det kirurgiske sted.Brug nu fugtede sterile vatpinde til forsigtigt at udtage tarmene. Placer dem oven på denne gasbind og pakk gasbindet rundt om orgelet. Ved hjælp af en kombination af bomuldsspidsede applikatorer og runde kropssuturtang frigøres og mobiliseres abdominal aorta og ringere vena cava fra omgivende væv med en stump dissektionsteknik.Sørg for, at frirummet er mellem karrenes infrarenale aspekt og over bifurcationen af aorta. Efter at have identificeret de bageste abdominale kar, træk forsigtigt aorta i en retning væk fra rygsøjlen ved hjælp af tang. Lav en kanal på hver side af disse kar cephalocaudally ved at føre de buede tang bagtil abdominale kar.Ligate hvert fartøj identificeret og mobiliseret i den planlagte anastomotiske zone ved hjælp af længder af 10-O nylon bundet med instrumenter i kirurgens knuder med et ekstra kast. Isoler det anastomotiske sted fra cirkulation ved at installere en kirurgisk klemme ved abdominalbeholderens hoved og coddle ender. Sørg for, at klemmerne krydser begge kar i tilstrækkelig grad for at sikre fuldstændig okklusion.Brug tang i den ikke-dominerende hånd for at stabilisere aorta. Udfør en aortotomi ved hjælp af en 30-gauge nål på det forreste aspekt af aorta. Forlæng aortotomien ved hjælp af mikrokirurgisk saks med lige spids.For at udføre adenotomi skal du bruge lige tang og anvende blid forreste trækkraft på den ringere vena cava på det punkt i tråd med midten af aortotomien. Brug buet mikrokirurgisk saks med den konkave side vendt anteriort for at fjerne et segment af ringere vena cava af samme længde som aortotomien. Vask det indre af de åbne kar af resterende blod med hepariniseret natriumchloridopløsning.Placer donorhjertet i maven og sørg for, at den stigende aorta er direkte sammen med abdominal aortotomi, og hjertet roteres, så lungearterien kan trækkes på tværs for den anden anastomose. Brug 10-O nylon til at placere en opholdssutur mellem 12:00-positionen af aortotomien og den tilsvarende ekstremitet af lumen i den stigende aorta. Brug lige spids tang i en mikrokirurgisk nåleholder, bind den med tre efterfølgende kast af en kirurgs knude og skær enderne for at efterlade cirka to millimeter sutur.Placer en anden opholdssutur mellem 6:00-positionen af aortotomien og det tilsvarende aspekt af den stigende aorta. Da denne sutur også vil tjene som base for efterfølgende løbende suturer, skal du efterlade mindst 10 millimeter af halen til den ultimative binding. Anbring en kontinuerlig løbende sutur af 10-O nylon på en stigende måde for at modsætte sig den anatomiske højre kant af aortotomi og den tilsvarende frie kant af den stigende aorta.Udfør denne procedure omhyggeligt og brug cirka fire kast til denne linje. Før den frie ende af suturen rundt om den distale opholdssutur, inden du placerer en anden kontinuerlig løbende sutur ned ad den anatomiske venstre side for at påvirke appositionen med den resterende frie kant af aortotomien. Bind suturen til halen ved hjælp af en kirurgknude med to ekstra kast.Placer en opholdssutur mellem 12:00-positionen af den ringere vena cava, venotomi og den tilsvarende ekstremitet af lungearteriens lumen. Fra dette ankerpunkt placeres en kontinuerlig løbende sutur skarpt mellem den anatomiske venstre kant af lungearterien og den tilsvarende kant af venotomien. Før nålen gennem 6:00-positionen af venotomien og den tilsvarende ekstremitet af lungearteriens lumen.På en stigende måde føres nålen gennem den resterende frie kant af lungearterien og anatomisk højre for venotomien. Brug i gennemsnit fire kast til denne linje og træk derefter de sidste frie kanter af lungearterien og venotomien sammen. Bind den frie ende af suturen til ankeret, og bind kirurgens knude med to ekstra kast ved hjælp af et instrument og skær den ekstra tråd.Kontroller karrene for vridning, hvilket ville forstyrre blodgennemstrømningen. Placer gelskum over suturlinjen. Placer to stykker cirka to millimeter gelskum omkring dem og form, så alle de synlige suturlinjer er dækket.Slip de vaskulære klemmer startende med coddle clamp og derefter cephalo clamp. Da der forventes en lille blødning, skal du forebyggende placere applikatorer med bomuldsspids over de anastomotiske steder for at give tryk. Når du har fastgjort de synlige lækager, skal du kontrollere hjertet for pulsering.Hvis det er fraværende, skal du kontrollere hjertekarrene for vridning, derefter omplacere tarmene over og omkring hjertet og fugte bughulen med opvarmet natriumchloridopløsning, hvis den vises tør. Brug den kontinuerlige ikke-afbrudte teknik til at lukke bughulen ved hjælp af ikke-absorberbart 6-O prolenmonofilament ved først at suturere muskellaget efterfulgt af huden. Når modtageren er fjernet fra det kirurgiske bord og uden for bedøvelsesmidlet, skal du administrere en milliliter varmt saltvand subkutant og placere modtageren i et forberedt bur med opvarmning til observation i henhold til postoperative genopretningsprotokoller.Fuld helbredelse og accept blev observeret i tilfælde af syngeneiske og kongene heterotopiske murinhjertetransplantationer i 100 dage efter operationen. Imidlertid blev der observeret hurtig afstødning så tidligt som syv dage efter operationen i tilfælde af større uoverensstemmende heterotopiske murinhjertetransplantationer. Under anastomose skal du opretholde bevidstheden om, hvor din sutur er inden for det kirurgiske område.Undladelse af at gøre det kan føre til kritisk skade på strukturer eller sammenfiltring af suturen. Disse mikrokirurgiske teknikker til dissektion og anastomose er yderst anvendelige til andre små pattedyrkirurgiske modeller, herunder heterotopisk nyre- og ortopisk levertransplantation, så forskere kan studere transplantatafstødning.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

A Protocol for Collecting and Staining Hemocytes from the Yellow Fever Mosquito Aedes aegypti

A Protocol for Collecting and Staining Hemocytes from the Yellow Fever Mosquito Aedes aegypti

 Mosquitoes are vectors for a number  of disease-causing pathogens such as the yellow fever virus, malaria parasites  and filarial worms. Laboratories are ...

Reverse Genetics Mediated Recovery of Infectious Murine Norovirus

Human noroviruses are responsible for most cases of human gastroenteritis (GE) worldwide and are recurrent problem in environments where close ...

Isolation of Cortical Microglia with Preserved Immunophenotype and Functionality From Murine Neonates

Isolering af Cortical Mikroglia med bevarede immunofænotype og funktionalitet fra murine Nyfødte

Isolation of microglia from CNS tissue is a powerful investigative tool used to study microglial biology ex vivo. The present method details a procedure ...

Isolation, Identification, and Purification of Murine Thymic Epithelial Cells

Isolering, identifikation og oprensning af murine thymusepitelmonolag Celler

The thymus is a vital organ for T lymphocyte development. Of thymic stromal cells, thymic epithelial cells (TECs) are particularly crucial at multiple ...

Isolation of Murine Lymph Node Stromal Cells

Isolering af murine lymfeknuder stromacellers

Secondary lymphoid organs including lymph nodes are composed of stromal cells that provide a structural environment for homeostasis, activation and ...

Generation of Two-color Antigen Microarrays for the Simultaneous Detection of IgG and IgM Autoantibodies

Generation af tofarvede Antigen Microarrays til samtidig påvisning af IgG og IgM-autoantistoffer

Autoantibodies, which are antibodies against self-antigens, are present in many disease states and can serve as markers for disease activity. The levels ...

An Optimized Protocol to Analyze Glycolysis and Mitochondrial Respiration in Lymphocytes

En Optimeret protokol Analyser Glycolysis og mitokondrie Respiration i Lymfocytter

Lymphocytes respond to a variety of stimuli by activating intracellular signaling pathways, which in turn leads to rapid cellular proliferation, migration ...

Isolation of Extracellular Vesicles from Murine Bronchoalveolar Lavage Fluid Using an Ultrafiltration Centrifugation Technique

Isolering af ekstracellulære vesikler fra Murine Bronchoalveolar Lavage væske ved hjælp af en ultrafiltrering centrifugering teknik

Extracellular vesicles (EVs) are newly discovered subcellular components that play important roles in many biological signaling functions during ...

An Immunological Model for Heterotopic Heart and Cardiac Muscle Cell Transplantation in Rats

En immunologisk model for heterotopisk hjerte- og hjertemuskelcelletransplantation hos rotter

Heterotopic heart transplantation in rats has been a commonly used model for diverse immunological studies for more than 50 years. Several modifications ...

Optimization of the Cuff Technique for Murine Heart Transplantation

Optimering af cuffteknikken til Murine hjertetransplantation

Murine cardiac transplantation has been performed for more than 40 years. With advancements in microsurgery, certain new techniques have been used to ...