Name: a modified murine heterotopic heart transplant protocol matching contemporary standards of aseptic technique, anesthesia, and analgesia
Uploaded: 2022-09-28T13:20:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Modified Murine Heterotopic Heart Transplant Protocol Matching Contemporary Standards of Aseptic Technique, Anesthesia, and Analgesia at JoVE.com

De auteurs willen graag de uitstekende inspanningen erkennen van het dierenverzorgingspersoneel van de Universiteit van West-Australië en van het Harry Perkins Institute of Medical Research, wiens toewijding en expertise hebben bijgedragen aan de haalbaarheid en het succes van deze operaties.

Dit onderzoek werd uitgevoerd in overeenstemming met de Code of Practice for the Care and Use of Animals for Scientific Purposes15 en goedgekeurd onder animal ethics protocols RA/3/100/1568 en AE173 (respectievelijk de Animal Ethics Committee van de University of Western Australia en de Harry Perkins Institute of Medical Research Animal Ethics Committee). Zie de Tabel met materialen voor details over alle materialen, instrumenten en dieren die in dit protocol worden gebruikt.
...

<ol>
	<li>Mann, F. C., Priestley, J. T., Markowitz, J., Yater, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+the+intact+mammalian+heart.">Transplantation of the intact mammalian heart.</a> Archives of Surgery. 26 (2), 219-224 (1933).</li><li>Neptune, W. B., Cookson, B. A., Bailey, C. P., Appler, R., Rajkowski, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complete+homologous+heart+transplantation.">Complete homologous heart transplantation.</a> A.M.A. Archives of Surgery. 66 (2), 174-178 (1953).</li><li>Downie, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Homotransplantation+of+the+dog+heart.">Homotransplantation of the dog heart.</a> A.M.A. Archives of Surgery. 66 (5), 624-636 (1953).</li><li>Blanco, G., Adam, A., Rodriguezperez, D., Fernandez, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complete+homotransplantation+of+canine+heart+and+lungs.">Complete homotransplantation of canine heart and lungs.</a> A.M.A. Archives of Surgery. 76 (1), 20-23 (1958).</li><li>Abbott, C. P., Lindsey, E. S., Creech, O., Dewitt, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+technique+for+heart+transplantation+in+the+rat.">A technique for heart transplantation in the rat.</a> Archives of Surgery. 89, 645-652 (1964).</li><li>Ono, K., Lindsey, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+technique+of+heart+transplantation+in+rats.">Improved technique of heart transplantation in rats.</a> The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 57 (2), 225-229 (1969).</li><li>Corry, R. J., Winn, H. J., Russell, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primarily+vascularized+allografts+of+hearts+in+mice.+The+role+of+H-2D,+H-2K,+and+non-H-2+antigens+in+rejection.">Primarily vascularized allografts of hearts in mice. The role of H-2D, H-2K, and non-H-2 antigens in rejection.</a> Transplantation. 16 (4), 343-350 (1973).</li><li>Joffre, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevention+of+acute+and+chronic+allograft+rejection+with+CD4+CD25+Foxp3++regulatory+T+lymphocytes.">Prevention of acute and chronic allograft rejection with CD4+CD25+Foxp3+ regulatory T lymphocytes.</a> Nature Medicine. 14 (1), 88-92 (2008).</li><li>Gregori, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulatory+T+cells+induced+by+1+alpha,25-dihydroxyvitamin+D3+and+mycophenolate+mofetil+treatment+mediate+transplantation+tolerance.">Regulatory T cells induced by 1 alpha,25-dihydroxyvitamin D3 and mycophenolate mofetil treatment mediate transplantation tolerance.</a> The Journal of Immunology. 167 (4), 1945-1953 (2001).</li><li>Niimi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+technique+for+heterotopic+cardiac+transplantation+in+mice:+Experience+of+3000+operations+by+one+surgeon.">The technique for heterotopic cardiac transplantation in mice: Experience of 3000 operations by one surgeon.</a> The Journal of Heart and Lung Transplantation. 20 (10), 1123-1128 (2001).</li><li>Hasegawa, T., Visovatti, S. H., Hyman, M. C., Hayasaki, T., Pinsky, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterotopic+vascularized+murine+cardiac+transplantation+to+study+graft+arteriopathy.">Heterotopic vascularized murine cardiac transplantation to study graft arteriopathy.</a> Nature Protocols. 2 (3), 471-480 (2007).</li><li>Hoogstraten-Miller, S. L., Brown, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Techniques+in+aseptic+rodent+surgery.">Techniques in aseptic rodent surgery.</a> Current Protocols in Immunology. 82, 1-14 (2008).</li><li>Navarro, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+anesthesia:+The+art+and+science.">Mouse anesthesia: The art and science.</a> ILAR Journal. , (2021).</li><li>Adams, S., Pacharinsak, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+anesthesia+and+analgesia.">Mouse anesthesia and analgesia.</a> Current Protocols in Mouse Biology. 5 (1), 51-63 (2015).</li><li>Australian code for the care and use of animals for scientific purposes. NHMRC Available from: <a target="_blank" href="https://www.nhmrc.gov.au/about-us/publications/australian-code-care-and-use-animals-scientific-purposes">https://www.nhmrc.gov.au/about-us/publications/australian-code-care-and-use-animals-scientific-purposes</a> (2013)</li><li>Prosser, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+changes+to+tissue-resident+immunity+after+MHC-matched+and+MHC-mismatched+solid+organ+transplantation.">Dynamic changes to tissue-resident immunity after MHC-matched and MHC-mismatched solid organ transplantation.</a> Cell Reports. 35 (7), 109141 (2021).</li></ol>

Het murine orthotopische harttransplantatiemodel is een robuust preklinisch model dat voornamelijk wordt gebruikt om de effecten van MHC-mismatch op het niveau en de aard van immunologische afstoting en, meer recent, het effect van transplantatie op het behoud van immuniteit van transplantaatweefsel te onderzoeken16. Hoewel we in eerste instantie het Corry et al.7-protocol op de voet volgden, hebben we het protocol verfijnd om best-practice normen voor aseptische techniek, ...

We hebben veel van ons begrip van immunologie en transplantatie te danken aan onderzoek op basis van experimentele modellen van solide orgaantransplantatie met behulp van dierlijke proefpersonen. Sinds de eerste beschrijving van gevasculariseerde harttransplantatie bij zoogdieren1 hebben dergelijke modellen bijgedragen aan kennis in uiteenlopende domeinen, waaronder de therapeutische toepassing van hypothermie2, de voordelen van het gebruik van gespecialiseerde hechtingen3 en technieken voor totale long- en harthomotransplantaties4. De ontwikkeling van harttransplantatiemodellen bij ratten 5,6 bood bredere mogelijkheden voor immunologische experimenten vanwege de beschikbaarheid van verschillende foklijnen. Het aanzienlijk bredere scala aan beschikbare inteelt- en mutante muizenstammen bracht Corry et al.7 ertoe een techniek van murine heterotope harttransplantatie te ontwikkelen vanwege de aanzienlijke voordelen die dit bereik biedt voor transplantatieonderzoek. Dit model is op grote schaal gebruikt en heeft bijgedragen aan een beter begrip van transplantaatafstoting8 en therapeutica9. Sinds de eerste beschrijving is de techniek echter grotendeels ongewijzigd gebleven, afgezien van enkele kleine technische details zoals aanpassingen aan de positie van anastomotische sites10,11.
Sinds de integratie van de techniek van Corry et al.7 in onze experimenten, hebben we veelbelovende gebieden geïdentificeerd voor het verbeteren van het protocol, namelijk die van aseptische techniek, anesthesie en analgesie. Verwacht werd dat verbeteringen op deze gebieden een positief effect zouden hebben op de experimentele resultaten en het dierenwelzijn zouden verbeteren. Dit is eerder aangetoond wanneer aseptische techniek wordt gebruikt bij operaties met kleine dieren, omdat het helpt bij het verminderen van postoperatieve infecties12, wat niet alleen van invloed is op morbiditeit en mortaliteit, maar ook experimenten kan compromitteren die zijn ontworpen om de immuunrespons na transplantatiechirurgie te beoordelen. Vanuit een anesthesie- en analgetisch oogpunt helpt het gebruik van een verfijnd regime om de kosten voor dieren te verlagen en het ethische argument van dit chirurgische model in evenwicht te brengen door de pijn en het lijden van proefpersonen te verzachten. Verder beperken geschikte anesthesie en analgesie de pijngerelateerde stressrespons, waardoor de kwaliteit van postoperatief herstel wordt verbeterd en uiteindelijk het chirurgische succespercentage wordt verhoogd13.
Met als doel zowel het dierenwelzijn als de experimentele uitkomsten te verbeteren, is een protocol ontwikkeld met aanpassingen om deze hiaten te overbruggen. Dit protocol is aangepast aan het oorspronkelijk beschreven door Corry et al.7 met raadpleging van een veterinaire anesthesist en met inachtneming van zowel de effecten als de duur van de effecten van de farmacologische interventies die worden gebruikt in het anesthesie- en analgetische regime. De aanpak was gebaseerd op de principes van evenwichtige anesthesie en multimodale analgesie om passende perioperatieve zorg te garanderen14. Naast de toepassing van aseptische techniek werden de opioïde buprenorfine en het lokale verdovingsmiddel bupivacaïne preventief toegediend. Algemene anesthesie werd uitgevoerd met behulp van het inhalatie-anestheticum isofluraan.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>2030 Rycroft irrigating cannula 30 G</td>
			<td>McFarlane</td>
			<td>56005HU</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Braided surgical silk 7-0</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bulldog clamp curved - 35 mm&#160;</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-7441-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bupivacaine 0.25%&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Castroviejo needle holder catch curved -&#160; 145 mm</td>
			<td>Haag-Streit</td>
			<td>11.62.15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chlorhexidine 5% solution</td>
			<td>Ebos</td>
			<td>JJ61371</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton-tipped applicator - 7.5 cm</td>
			<td>Dove</td>
			<td>SN109510</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol 70% solution</td>
			<td>Ebos</td>
			<td>WH130192EE</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gauze 5 x 5 cm white</td>
			<td>Aero</td>
			<td>AGS50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gelfoam 80 mm x 125 mm&#160;</td>
			<td>Pfizer</td>
			<td>7481D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hair clipper</td>
			<td>Wahl</td>
			<td>9860L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin 1,000 IU in 1 mL</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris SuperCut scissors straight - 11.5 cm&#160;&#160;</td>
			<td>Inka Surgical&#160;</td>
			<td>11550.11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane vaporiser</td>
			<td>Darvall</td>
			<td>9176</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro bulldog clamp - 3.7 cm</td>
			<td>Greman</td>
			<td>14119-G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro scissors curved 105 mm&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micropore plain paper surgical tape - 2.5 cm wide</td>
			<td>Ebos</td>
			<td>7810L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsurgical scissors - curved tip</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monofilament polyprolene suture - 5/0</td>
			<td>Surgipro</td>
			<td>P-205-X</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Myweigh i101 Precision Scale 100 g x 0.005 g</td>
			<td>Myweigh</td>
			<td>Kit00053</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle - 30 G x 0.5 inch</td>
			<td>BD</td>
			<td>BD304000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needleholder 15 cm curved &#34;super fine&#34;</td>
			<td>Surgical Specialists</td>
			<td>ST-B-15-8.2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nylene 10/0 x 15 cm on 3.8 mm 3/8 circle round bodied taper (diam 0.07mm) CV300</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round body suture forceps curved 0.3 mm 120 mm</td>
			<td>B. Braun</td>
			<td>FD281R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round body suture forceps straight 0.3 mm 120 mm</td>
			<td>B. Braun</td>
			<td>FD280R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round handled vannas spring scissors-str/12.5 cm</td>
			<td></td>
			<td>15400-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spring scissors-Cvd Sm blades</td>
			<td></td>
			<td>15001-08</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stevens scissors blunt straight 110 mm</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical backboard</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Rigid laminated cardboard. 15 x 15 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical drapes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Cut into two sizes. 25 cm x 25 cm, and 25 cm x 40 cm&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical microscope</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe - 1 mL</td>
			<td>BD</td>
			<td>592696</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe - 3 mL</td>
			<td>Leica</td>
			<td>M651</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Toothed forceps</td>
			<td>BD</td>
			<td>309657</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>University of Wisconsin Solution</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Warming pad</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Far infrared warming pad 20 x 25 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Westcott spring scissors</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yasargil clip applier bayonet</td>
			<td>Aesculap</td>
			<td>FE582K</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yasargil titanium clip perm 6.6 mm</td>
			<td>Aesculap</td>
			<td>A19FT222T</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse usage</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Strain/SEX/Weight</td>
			<td>Donor</td>
			<td>Recipent</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BALB/c, female, 19-23 g</td>
			<td>7</td>
			<td>21</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6, female, 17-20 g</td>
			<td>7</td>
			<td>0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD45.1 BALB/c, female, 17-21 g</td>
			<td>5</td>
			<td>0</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a modified murine heterotopic heart transplant protocol matching contemporary standards of aseptic technique, anesthesia, and analgesia

De ontwikkeling van experimentele modellen van harttransplantatie bij dieren heeft bijgedragen aan vele vooruitgang op het gebied van immunologie en solide orgaantransplantatie. Hoewel het heterotope gevasculariseerde murine harttransplantatiemodel aanvankelijk werd gebruikt in studies naar transplantaatafstoting met combinaties van niet-overeenkomende inteeltstammen, kan toegang tot genetisch gemodificeerde stammen en therapeutische modaliteiten krachtige nieuwe preklinische inzichten bieden. Fundamenteel is de chirurgische methodologie voor deze techniek niet veranderd sinds de ontwikkeling ervan, vooral met betrekking tot belangrijke factoren zoals aseptische techniek, anesthesie en analgesie, die materiële gevolgen hebben voor postoperatieve morbiditeit en mortaliteit. Bovendien wordt verwacht dat verbeteringen in perioperatief management zullen leiden tot verbeteringen in zowel dierenwelzijn als experimentele resultaten. Dit artikel rapporteert over een protocol dat is ontwikkeld in samenwerking met een materiedeskundige in veterinaire anesthesie en beschrijft de chirurgische techniek met de nadruk op perioperatief management. Daarnaast bespreken we de implicaties van deze verfijningen en geven we details over het oplossen van kritieke chirurgische stappen voor deze procedure.

Om de effectiviteit van de chirurgische techniek te bepalen bij het bevorderen van goede resultaten van wondgenezing en muisherstel, bepaalden vroege experimenten in het laboratorium de overlevingskenmerken van een reeks harttransplantaten met variabele immunogeniciteit voor de ontvanger. Deze omvatten congene (n = 5) en syngene (n = 5) grafts, die dezelfde major histocompatibility complex (MHC) markers delen als de ontvanger, en major mismatch grafts (n = 9), waarbij het transplantaat en de ontvanger verschillende MHC-m...

Watch this Scientific Journal Video about A Modified Murine Heterotopic Heart Transplant Protocol Matching Contemporary Standards of Aseptic Technique, Anesthesia, and Analgesia at JoVE.com

A Modified Murine Heterotopic Heart Transplant Protocol Matching Contemporary Standards of Aseptic Technique, Anesthesia, and Analgesia

Dit artikel beschrijft een aangepaste techniek voor heterotope gevasculariseerde harttransplantatie met bijgewerkte aseptische techniek, analgesie en anesthesie.

Een gemodificeerd muizen heterotopisch harttransplantatieprotocol dat overeenkomt met hedendaagse normen voor aseptische techniek, anesthesie en analgesie

The development of experimental models of cardiac transplantation in animals has contributed to many advances in the fields of immunology and solid organ ...

Dit is een economisch en reproduceerbaar model van harttransplantatie. Het kan zowel worden gebruikt om microchirurgische vaardigheden te verbeteren als om het gebruik van genetisch gemodificeerde muizenstammen als donor of ontvanger mogelijk te maken. De techniek omvat in grote lijnen alle pijnbestrijding en anesthetische complexiteit van normale menselijke chirurgie om de morbiditeit na een operatie te beperken.Dit model is van cruciaal belang voor het bestuderen van chirurgisch geïnduceerde immuniteit, het effect van mismatch op transplantaatafstoting en de levensduur van transplantaties. De algemene chirurgische benaderingen van dit model kunnen in een gewijzigde vorm worden toegepast op andere solide orgaantransplantaties van muizen. Microscopische schaal en bijbehorende tijdsdruk zorgen voor een kleine foutmarge.De sleutel tot succes is regelmatig oefenen met professionele supervisie, waarbij specifieke feedback wordt gegeven op probleemgebieden. De procedure wordt gedemonstreerd door mevrouw Liu Liu, een onderzoeksassistent van mijn laboratorium. Dr.Wen Hua Huang, Ms.Jas Kaur en Ms.Xiao Zhang zullen de chirurgische ingrepen assisteren.Na het verdoven en verwijderen van de muis uit de inductiekamer, verwijdert u het haar door de ventrale buik nauw te scheren met behulp van een tondeuse. In het geval van de donor, scheer het gebied dat zich uitstrekt van de genitaliën tot de bovenste rand van de ventrale thorax. Zorg ervoor dat het geschoren gebied de midaxillaire lijn zijdelings bereikt.Controleer de temperatuur door een schoon gesmeerde rectale sonde in het rectum van het dier in te brengen en deze vervolgens met microporiëntape aan de operatieplaat te bevestigen. Beoordeel de anesthetische diepte door reacties te observeren op stimulatie van de poot of staart van druk uitgeoefend door traumatische tang, de palpebrale reflex en spiertonus. Meet de ademhalingsfrequentie door de beweging van de borstwand te observeren terwijl u de ademhalingsinspanning observeert om het getijdenvolume te beoordelen en bereken vervolgens de ademhalingsfrequentie zoals beschreven in het manuscript.Zodra de chirurgische site is gedesinfecteerd met steriele applicatoren met katoenpunt, brengt u chloorhexidine driemaal aan in een cirkelvormige beweging van het centrum van de chirurgische plaats naar de randen, gevolgd door een combinatie van chloorhexidine en ethanol in hetzelfde patroon. Bereid het chirurgische veld voor door steriele chirurgische gordijnen aan weerszijden van de operatieplaat te plaatsen als de plaats om steriele instrumenten te plaatsen. Nadat u een kleine ovaalvormige opening in het gordijn hebt gemaakt, plaatst u het fenestrated gordijn op de voorgestelde incisieplaats.Na het voorbereiden van het dier zoals eerder gedemonstreerd, breng je oogglijmiddel aan. Gebruik een 29-gauge insulinespuit langs de geplande incisieplaats, injecteer subcutaan een op gewicht gebaseerde dosis bupivacaïne in de ventrale buik en zoek naar een rechte lijn van zichtbare blebbing die de omvang van de geplande incisie bedekt. Gebruik vervolgens een steriel chirurgisch scalpelmes om een ventrale middellijnhuidincisie te maken onder acht keer vergroting.Zorg ervoor dat de laparotomie de onderbuik overspant tot aan de ribbenmarge. En plaats een retractor om het chirurgische veld te maximaliseren. Bevochtig het segment steriel gaas met verwarmde 0,9% natriumchlorideoplossing en plaats het op het superieure aspect van de chirurgische plaats.Gebruik nu vochtige steriele wattenstaafjes om de darmen voorzichtig te verwijderen. Leg ze bovenop dit gaas en wikkel het gaas om het orgel. Met behulp van een combinatie van katoenen applicatoren en ronde lichaamshechttangen, bevrijd en mobiliseer de abdominale aorta en inferieure vena cava uit omliggende weefsels met een stompe dissectietechniek.Zorg ervoor dat het vrije gebied zich tussen het infrarenale aspect van de vaten en boven de bifurcatie van de aorta bevindt. Nadat u de achterste buikvaten hebt geïdentificeerd, trekt u de aorta voorzichtig in een richting weg van de wervelkolom met behulp van een tang. Maak cefacalcaal een kanaal aan weerszijden van deze vaten door de gebogen tang achteraan naar de buikvaten te brengen.Ligate elk vat geïdentificeerd en gemobiliseerd in de geplande anastomotische zone met behulp van lengtes van 10-O nylon gebonden met instrumenten in de knopen van de chirurg met een extra worp. Isoleer de anastomotische plaats van circulatie door een chirurgische klem op het hoofd van het buikvat en de kokeruiteinden te installeren. Zorg ervoor dat de klemmen beide vaten in voldoende mate kruisen om volledige occlusie te garanderen.Gebruik een tang in de niet-dominante hand om de aorta stabiel te houden. Voer een aortotomie uit met behulp van een naald van 30 gauge aan het voorste aspect van de aorta. Verleng de aorthotomie met een microchirurgische schaar met rechte punt.Om adenotomie uit te voeren, gebruikt u een rechte tang en past u zachte anterieure tractie toe op de inferieure vena cava op het punt in lijn met het midden van de aortotomie. Gebruik een gebogen microchirurgische schaar met de concave kant naar buiten gericht om een segment van inferieure vena cava van gelijke lengte als de aortotomie te verwijderen. Was de binnenkant van de open bloedvaten met resterend bloed met gehepariniseerde natriumchlorideoplossing.Plaats het donorhart in de buik en zorg ervoor dat de opgaande aorta direct naast de abdominale aortomie ligt en het hart wordt gedraaid, zodat de longslagader kan worden overgetrokken voor de tweede anastomose. Plaats met behulp van 10-O nylon een verblijfhechting tussen de 12:00-positie van de aorthotomie en het overeenkomstige uiteinde van het lumen van de opgaande aorta. Gebruik een tang met rechte punt in een microchirurgische naaldhouder, bind deze vast met drie opeenvolgende worpen van de knoop van een chirurg en snijd de uiteinden door om ongeveer twee millimeter hechtdraad achter te laten.Plaats een tweede verblijfhechting tussen de 6:00-positie van de aorthotomie en het overeenkomstige aspect van de opgaande aorta. Omdat deze hechting ook als basis zal dienen voor volgende lopende hechtingen, laat je minstens 10 millimeter van de staart over voor de ultieme binding. Plaats een doorlopende lopende hechting van 10-O nylon op een oplopende manier om de anatomische rechterrand van de aortotomie en de overeenkomstige vrije rand van de opgaande aorta tegen te werken.Voer deze procedure zorgvuldig uit en gebruik ongeveer vier worpen voor deze lijn. Passeer het vrije uiteinde van de hechting rond de distale verblijfhechting voordat u een tweede doorlopende lopende hechting langs de anatomische linkerkant plaatst om de appositie met de resterende vrije rand van de aortomie te beïnvloeden. Bind de hechting aan de staart af met behulp van een chirurgenknoop met twee extra worpen.Plaats een verblijfhechting tussen de 12:00-positie van de inferieure vena cava, venotomie en het overeenkomstige uiteinde van het lumen van de longslagader. Plaats vanaf dit ankerpunt een doorlopende lopende hechting tussen de anatomische linkerrand van de longslagader en de overeenkomstige rand van de venotomie. Passeer de naald door de 6:00-positie van de venotomie en de overeenkomstige extremiteit van het lumen van de longslagader.Ga op een oplopende manier door de naald door de resterende vrije rand van de longslagader en anatomisch recht van de venotomie. Gebruik gemiddeld vier worpen voor deze lijn en teken vervolgens de laatste vrije randen van de longslagader en venotomie samen. Bind het vrije uiteinde van de hechtdraad aan het anker af en bind met behulp van een instrument de knoop van de chirurg met twee extra worpen en knip de extra draad door.Controleer de bloedvaten op draaien, wat de bloedstroom zou verstoren. Plaats gelschuim over de hechtlijn. Plaats er twee stukken gelschuim van ongeveer twee millimeter omheen en vorm zodat alle zichtbare hechtlijnen bedekt zijn.Laat de vaatklemmen los, te beginnen met de kokerklem en vervolgens de cephal-klem. Als een kleine hoeveelheid bloeding wordt verwacht, plaatst u preventief katoenen applicators over de anastomotische plaatsen om druk uit te oefenen. Controleer na het repareren van de zichtbare lekken het hart op pulsatie.Als het afwezig is, controleer dan de hartvaten op draaien, plaats vervolgens de darmen over en rond het hart en bevochtig de peritoneale holte met verwarmde natriumchlorideoplossing als deze droog lijkt. Met behulp van de continue niet-onderbroken techniek sluit u de buikholte met niet-absorbeerbare 6-O proleenmonofilament door eerst de spierlaag te hechten, gevolgd door de huid. Zodra de ontvanger uit de operatieplaat en uit de verdoving is verwijderd, dient u subcutaan een milliliter warme zoutoplossing toe en plaatst u de ontvanger in een voorbereide kooi met opwarming voor observatie volgens postoperatieve herstelprotocollen.Volledig herstel en acceptatie werden waargenomen in het geval van syngenetische en congene heterotope muizenharttransplantaties gedurende 100 dagen na de operatie. Snelle afstoting werd echter al zeven dagen na de operatie waargenomen in het geval van grote mismatched heterotope muizenharttransplantaties. Tijdens anastomose moet u zich bewust blijven van waar uw hechting zich bevindt binnen het chirurgische veld.Als u dit niet doet, kan dit leiden tot kritieke schade aan structuren of klitten van de hechtdraad. Deze microchirurgische technieken van dissectie en anastomose zijn zeer toepasbaar op andere chirurgische modellen van kleine zoogdieren, waaronder heterotope nier- en orthotopische levertransplantatie, waardoor onderzoekers transplantaatafstoting kunnen bestuderen.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

A Protocol for Collecting and Staining Hemocytes from the Yellow Fever Mosquito Aedes aegypti

A Protocol for Collecting and Staining Hemocytes from the Yellow Fever Mosquito Aedes aegypti

Een protocol voor het verzamelen en Kleuring Hemocytes uit de Yellow Fever Mosquito Aedes aegypti</em

 Mosquitoes are vectors for a number  of disease-causing pathogens such as the yellow fever virus, malaria parasites  and filarial worms. Laboratories are ...

Reverse Genetics Mediated Recovery of Infectious Murine Norovirus

Reverse genetics Mediated Herstel van infectieuze Murine Norovirus

Human noroviruses are responsible for most cases of human gastroenteritis (GE) worldwide and are recurrent problem in environments where close ...

Isolation of Cortical Microglia with Preserved Immunophenotype and Functionality From Murine Neonates

Isolatie van corticale Microglia met Conserven immunofenotype en functionaliteit van Muriene Pasgeborenen

Isolation of microglia from CNS tissue is a powerful investigative tool used to study microglial biology ex vivo. The present method details a procedure ...

Isolation, Identification, and Purification of Murine Thymic Epithelial Cells

Isolatie, identificatie en zuivering van Muriene thymus epitheelcellen

The thymus is a vital organ for T lymphocyte development. Of thymic stromal cells, thymic epithelial cells (TECs) are particularly crucial at multiple ...

Isolation of Murine Lymph Node Stromal Cells

Isolatie van muizen lymfkliertest stromale cellen

Secondary lymphoid organs including lymph nodes are composed of stromal cells that provide a structural environment for homeostasis, activation and ...

Generation of Two-color Antigen Microarrays for the Simultaneous Detection of IgG and IgM Autoantibodies

Genereren van tweekleurige Antigen Microarrays voor de simultane detectie van IgG en IgM Autoantistoffen

Autoantibodies, which are antibodies against self-antigens, are present in many disease states and can serve as markers for disease activity. The levels ...

An Optimized Protocol to Analyze Glycolysis and Mitochondrial Respiration in Lymphocytes

Een geoptimaliseerde Protocol Analyseer glycolyse en mitochondriale Ademhaling in lymfocyten

Lymphocytes respond to a variety of stimuli by activating intracellular signaling pathways, which in turn leads to rapid cellular proliferation, migration ...

Isolation of Extracellular Vesicles from Murine Bronchoalveolar Lavage Fluid Using an Ultrafiltration Centrifugation Technique

Isolatie van extracellulaire blaasjes aan de lymfkliertest Bronchoalveolar Lavage vloeistof met behulp van een techniek van ultrafiltratie centrifugeren

Extracellular vesicles (EVs) are newly discovered subcellular components that play important roles in many biological signaling functions during ...

An Immunological Model for Heterotopic Heart and Cardiac Muscle Cell Transplantation in Rats

Een immunologisch model voor heterotopische hart- en hartspierceltransplantatie bij ratten

Heterotopic heart transplantation in rats has been a commonly used model for diverse immunological studies for more than 50 years. Several modifications ...

Optimization of the Cuff Technique for Murine Heart Transplantation

Optimalisatie van de Cuff Techniek voor Murine Heart Transplantation

Murine cardiac transplantation has been performed for more than 40 years. With advancements in microsurgery, certain new techniques have been used to ...