Name: a modified murine heterotopic heart transplant protocol matching contemporary standards of aseptic technique, anesthesia, and analgesia
Uploaded: 2022-09-28T13:20:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Modified Murine Heterotopic Heart Transplant Protocol Matching Contemporary Standards of Aseptic Technique, Anesthesia, and Analgesia at JoVE.com

המחברים מבקשים להודות על המאמצים המעולים של צוות הטיפול בבעלי חיים של אוניברסיטת מערב אוסטרליה ושל מכון הארי פרקינס למחקר רפואי, שמסירותם ומומחיותם תרמו להיתכנות ולהצלחה של ניתוחים אלה.

מחקר זה בוצע בהתאם לקוד העיסוק לטיפול ושימוש בבעלי חיים למטרות מדעיות15 ואושר תחת פרוטוקולים אתיקה של בעלי חיים RA/3/100/1568 ו-AE173 (ועדת האתיקה של בעלי חיים באוניברסיטת מערב אוסטרליה וועדת האתיקה של בעלי חיים במכון הארי פרקינס למחקר רפואי, בהתאמה). עיין בטבלת החומרים לקבלת ...

<ol>
	<li>Mann, F. C., Priestley, J. T., Markowitz, J., Yater, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+the+intact+mammalian+heart.">Transplantation of the intact mammalian heart.</a> Archives of Surgery. 26 (2), 219-224 (1933).</li><li>Neptune, W. B., Cookson, B. A., Bailey, C. P., Appler, R., Rajkowski, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complete+homologous+heart+transplantation.">Complete homologous heart transplantation.</a> A.M.A. Archives of Surgery. 66 (2), 174-178 (1953).</li><li>Downie, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Homotransplantation+of+the+dog+heart.">Homotransplantation of the dog heart.</a> A.M.A. Archives of Surgery. 66 (5), 624-636 (1953).</li><li>Blanco, G., Adam, A., Rodriguezperez, D., Fernandez, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complete+homotransplantation+of+canine+heart+and+lungs.">Complete homotransplantation of canine heart and lungs.</a> A.M.A. Archives of Surgery. 76 (1), 20-23 (1958).</li><li>Abbott, C. P., Lindsey, E. S., Creech, O., Dewitt, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+technique+for+heart+transplantation+in+the+rat.">A technique for heart transplantation in the rat.</a> Archives of Surgery. 89, 645-652 (1964).</li><li>Ono, K., Lindsey, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+technique+of+heart+transplantation+in+rats.">Improved technique of heart transplantation in rats.</a> The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 57 (2), 225-229 (1969).</li><li>Corry, R. J., Winn, H. J., Russell, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primarily+vascularized+allografts+of+hearts+in+mice.+The+role+of+H-2D,+H-2K,+and+non-H-2+antigens+in+rejection.">Primarily vascularized allografts of hearts in mice. The role of H-2D, H-2K, and non-H-2 antigens in rejection.</a> Transplantation. 16 (4), 343-350 (1973).</li><li>Joffre, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevention+of+acute+and+chronic+allograft+rejection+with+CD4+CD25+Foxp3++regulatory+T+lymphocytes.">Prevention of acute and chronic allograft rejection with CD4+CD25+Foxp3+ regulatory T lymphocytes.</a> Nature Medicine. 14 (1), 88-92 (2008).</li><li>Gregori, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulatory+T+cells+induced+by+1+alpha,25-dihydroxyvitamin+D3+and+mycophenolate+mofetil+treatment+mediate+transplantation+tolerance.">Regulatory T cells induced by 1 alpha,25-dihydroxyvitamin D3 and mycophenolate mofetil treatment mediate transplantation tolerance.</a> The Journal of Immunology. 167 (4), 1945-1953 (2001).</li><li>Niimi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+technique+for+heterotopic+cardiac+transplantation+in+mice:+Experience+of+3000+operations+by+one+surgeon.">The technique for heterotopic cardiac transplantation in mice: Experience of 3000 operations by one surgeon.</a> The Journal of Heart and Lung Transplantation. 20 (10), 1123-1128 (2001).</li><li>Hasegawa, T., Visovatti, S. H., Hyman, M. C., Hayasaki, T., Pinsky, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterotopic+vascularized+murine+cardiac+transplantation+to+study+graft+arteriopathy.">Heterotopic vascularized murine cardiac transplantation to study graft arteriopathy.</a> Nature Protocols. 2 (3), 471-480 (2007).</li><li>Hoogstraten-Miller, S. L., Brown, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Techniques+in+aseptic+rodent+surgery.">Techniques in aseptic rodent surgery.</a> Current Protocols in Immunology. 82, 1-14 (2008).</li><li>Navarro, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+anesthesia:+The+art+and+science.">Mouse anesthesia: The art and science.</a> ILAR Journal. , (2021).</li><li>Adams, S., Pacharinsak, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+anesthesia+and+analgesia.">Mouse anesthesia and analgesia.</a> Current Protocols in Mouse Biology. 5 (1), 51-63 (2015).</li><li>Australian code for the care and use of animals for scientific purposes. NHMRC Available from: <a target="_blank" href="https://www.nhmrc.gov.au/about-us/publications/australian-code-care-and-use-animals-scientific-purposes">https://www.nhmrc.gov.au/about-us/publications/australian-code-care-and-use-animals-scientific-purposes</a> (2013)</li><li>Prosser, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+changes+to+tissue-resident+immunity+after+MHC-matched+and+MHC-mismatched+solid+organ+transplantation.">Dynamic changes to tissue-resident immunity after MHC-matched and MHC-mismatched solid organ transplantation.</a> Cell Reports. 35 (7), 109141 (2021).</li></ol>

מודל השתלת הלב האורתוטופית של מורין הוא מודל פרה-קליני חזק המשמש בעיקר לחקר ההשפעות של חוסר התאמה MHC על רמת ואופי הדחייה החיסונית, ולאחרונה, השפעת ההשתלה על שימור חסינות תושב רקמת השתל16. בתחילה עקבנו מקרוב אחר פרוטוקול Corry et al.7 , אך שיפרנו את הפרוטוקול כך שישלב סטנד...

אנו חייבים חלק גדול מהבנתנו באימונולוגיה ובהשתלות למחקר המבוסס על מודלים ניסיוניים של השתלת איברים מוצקים בבעלי חיים. מאז התיאור הראשון של השתלת לב וסקולרית ביונקים1, מודלים כאלה תרמו לידע בתחומים רחבים, כולל היישום הטיפולי של היפותרמיה2, היתרונות של שימוש בתפרים מיוחדים3, וטכניקותלהשתלות ריאה ולב 4. פיתוח מודלים להשתלות לב בחולדות 5,6 סיפק טווח רחב יותר לניסויים אימונולוגיים בשל זמינותם של קווי רבייה שונים. הטווח הרחב משמעותית של זני עכברים מוטנטיים ומוטנטיים זמינים הוביל את Corry et al.7 לפתח טכניקה של השתלת לב הטרוטופית מורין בשל היתרונות הניכרים שטווח זה מביא למחקר ההשתלות. מודל זה נמצא בשימוש נרחב ותרם להבנה טובה יותר של דחיית השתל8 וטיפולים9. עם זאת, מאז תיאורה הראשון, הטכניקה נותרה כמעט ללא שינוי מלבד כמה פרטים טכניים קטנים כגון התאמות למיקום של אתרים אנסטומטיים10,11.
מאז שילוב הטכניקה של Corry et al.7 בניסויים שלנו, זיהינו תחומים מבטיחים לשיפור הפרוטוקול, כלומר אלה של טכניקה אספטית, הרדמה ושיכוך כאבים. שיפורים בתחומים אלה היו צפויים להציע השפעה חיובית על תוצאות הניסויים ולשפר את רווחת בעלי החיים. זה הוכח בעבר כאשר טכניקה אספטית משמשת בניתוחים בבעלי חיים קטנים כפי שהוא מסייע בהפחתת זיהומים לאחר הניתוח12, אשר לא רק משפיע על תחלואה ותמותה, אבל יכול גם לפגוע ניסויים שנועדו להעריך את התגובה החיסונית לאחר ניתוח השתלה. מנקודת מבט של הרדמה ומשכך כאבים, השימוש במשטר מעודן מסייע להפחית את העלות לבעלי חיים ולאזן את הטיעון האתי של מודל כירורגי זה על ידי הפחתת הכאב והסבל של נבדקים ניסיוניים. יתר על כן, הרדמה מתאימה ושיכוך כאבים מגבילים את תגובת הלחץ הקשורה לכאב, משפרים את איכות ההתאוששות לאחר הניתוח, ובסופו של דבר, מגדילים את שיעור ההצלחה הניתוחית13.
במטרה לשפר הן את רווחת בעלי החיים והן את תוצאות הניסויים, פותח פרוטוקול עם התאמות כדי לגשר על פערים אלה. פרוטוקול זה הותאם מזה שתואר במקור על ידי Corry et al.7 תוך התייעצות עם רופא מרדים וטרינרי ותוך התחשבות נאותה הן בהשפעות והן במשך ההשפעות של ההתערבויות הפרמקולוגיות המשמשות במשטר ההרדמה ומשככי הכאבים. הגישה התבססה על עקרונות של הרדמה מאוזנת ושיכוך כאבים מולטימודאלי כדי להבטיח טיפול פריאופרטיבי מתאים14. בנוסף ליישום של טכניקה אספטית, אופיואיד buprenorphine ואת bupivacaine הרדמה מקומית ניתנו מראש. הרדמה כללית בוצעה באמצעות חומר הרדמה ממסים נדיפים isoflurane.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>2030 Rycroft irrigating cannula 30 G</td>
			<td>McFarlane</td>
			<td>56005HU</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Braided surgical silk 7-0</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bulldog clamp curved - 35 mm&#160;</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-7441-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bupivacaine 0.25%&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Castroviejo needle holder catch curved -&#160; 145 mm</td>
			<td>Haag-Streit</td>
			<td>11.62.15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chlorhexidine 5% solution</td>
			<td>Ebos</td>
			<td>JJ61371</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton-tipped applicator - 7.5 cm</td>
			<td>Dove</td>
			<td>SN109510</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol 70% solution</td>
			<td>Ebos</td>
			<td>WH130192EE</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gauze 5 x 5 cm white</td>
			<td>Aero</td>
			<td>AGS50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gelfoam 80 mm x 125 mm&#160;</td>
			<td>Pfizer</td>
			<td>7481D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hair clipper</td>
			<td>Wahl</td>
			<td>9860L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin 1,000 IU in 1 mL</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris SuperCut scissors straight - 11.5 cm&#160;&#160;</td>
			<td>Inka Surgical&#160;</td>
			<td>11550.11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane vaporiser</td>
			<td>Darvall</td>
			<td>9176</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro bulldog clamp - 3.7 cm</td>
			<td>Greman</td>
			<td>14119-G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro scissors curved 105 mm&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micropore plain paper surgical tape - 2.5 cm wide</td>
			<td>Ebos</td>
			<td>7810L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsurgical scissors - curved tip</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monofilament polyprolene suture - 5/0</td>
			<td>Surgipro</td>
			<td>P-205-X</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Myweigh i101 Precision Scale 100 g x 0.005 g</td>
			<td>Myweigh</td>
			<td>Kit00053</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle - 30 G x 0.5 inch</td>
			<td>BD</td>
			<td>BD304000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needleholder 15 cm curved &#34;super fine&#34;</td>
			<td>Surgical Specialists</td>
			<td>ST-B-15-8.2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nylene 10/0 x 15 cm on 3.8 mm 3/8 circle round bodied taper (diam 0.07mm) CV300</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round body suture forceps curved 0.3 mm 120 mm</td>
			<td>B. Braun</td>
			<td>FD281R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round body suture forceps straight 0.3 mm 120 mm</td>
			<td>B. Braun</td>
			<td>FD280R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round handled vannas spring scissors-str/12.5 cm</td>
			<td></td>
			<td>15400-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spring scissors-Cvd Sm blades</td>
			<td></td>
			<td>15001-08</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stevens scissors blunt straight 110 mm</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical backboard</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Rigid laminated cardboard. 15 x 15 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical drapes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Cut into two sizes. 25 cm x 25 cm, and 25 cm x 40 cm&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical microscope</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe - 1 mL</td>
			<td>BD</td>
			<td>592696</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe - 3 mL</td>
			<td>Leica</td>
			<td>M651</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Toothed forceps</td>
			<td>BD</td>
			<td>309657</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>University of Wisconsin Solution</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Warming pad</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Far infrared warming pad 20 x 25 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Westcott spring scissors</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yasargil clip applier bayonet</td>
			<td>Aesculap</td>
			<td>FE582K</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yasargil titanium clip perm 6.6 mm</td>
			<td>Aesculap</td>
			<td>A19FT222T</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse usage</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Strain/SEX/Weight</td>
			<td>Donor</td>
			<td>Recipent</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BALB/c, female, 19-23 g</td>
			<td>7</td>
			<td>21</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6, female, 17-20 g</td>
			<td>7</td>
			<td>0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD45.1 BALB/c, female, 17-21 g</td>
			<td>5</td>
			<td>0</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a modified murine heterotopic heart transplant protocol matching contemporary standards of aseptic technique, anesthesia, and analgesia

פיתוח מודלים ניסיוניים של השתלות לב בבעלי חיים תרם להתקדמות רבה בתחומי האימונולוגיה והשתלות איברים מוצקים. בעוד שמודל השתלת הלב ההטרוטופית של כלי הדם ההמוניים שימש בתחילה במחקרים על דחיית שתלים באמצעות שילובים של זני עכברים מולדים שאינם תואמים, גישה לזנים מהונדסים גנטית ולשיטות טיפוליות יכולה לספק תובנות פרה-קליניות חדשות ועוצמתיות. ביסודו של דבר, המתודולוגיה הכירורגית של טכניקה זו לא השתנתה מאז התפתחותה, במיוחד ביחס לגורמים חשובים כגון טכניקה אספטית, הרדמה ושיכוך כאבים, אשר משפיעים באופן מהותי על תחלואה ותמותה לאחר ניתוח. בנוסף, שיפורים בניהול הפריאופרטיבי צפויים לספק שיפורים הן ברווחת בעלי החיים והן בתוצאות הניסויים. מאמר זה מדווח על פרוטוקול שפותח בשיתוף פעולה עם מומחה בתחום ההרדמה הווטרינרית ומתאר את הטכניקה הכירורגית בדגש על ניהול פריאופרטיבי. בנוסף, אנו דנים בהשלכות של חידודים אלה ומספקים פרטים על פתרון בעיות בשלבים כירורגיים קריטיים עבור הליך זה.

כדי לקבוע את יעילות הטכניקה הכירורגית בקידום תוצאות טובות של ריפוי פצעים והתאוששות עכבר, ניסויים מוקדמים במעבדה קבעו את מאפייני ההישרדות של מגוון שתלי לב בעלי אימונוגניות משתנה לנמען. אלה כללו שתלים קונגניים (n = 5) וסינגנים (n = 5), החולקים את אותם סמנים מורכבים היסטו-תאימות עיקריים (MHC) כמו הנ...

Watch this Scientific Journal Video about A Modified Murine Heterotopic Heart Transplant Protocol Matching Contemporary Standards of Aseptic Technique, Anesthesia, and Analgesia at JoVE.com

A Modified Murine Heterotopic Heart Transplant Protocol Matching Contemporary Standards of Aseptic Technique, Anesthesia, and Analgesia

המאמר הנוכחי מתאר טכניקה שונה להשתלת לב הטרוטופית וסקולרית עם טכניקה אספטית מעודכנת, שיכוך כאבים והרדמה.

פרוטוקול השתלת לב הטרוטופי מורין מותאם לסטנדרטים עכשוויים של טכניקה אספטית, הרדמה ושיכוך כאבים

The development of experimental models of cardiac transplantation in animals has contributed to many advances in the fields of immunology and solid organ ...

זהו מודל חסכוני וניתן לשחזור של השתלת לב. ניתן להשתמש בו הן כדי לשפר מיומנויות מיקרוכירורגיות והן כדי לאפשר שימוש בזני עכברים מהונדסים גנטית כתורמים או כמושתלים. הטכניקה כוללת באופן רחב את כל מורכבות הטיפול בכאב וההרדמה של ניתוח אנושי רגיל כדי להגביל את התחלואה לאחר הניתוח.מודל זה הוא קריטי לחקר חסינות הנגרמת על ידי ניתוח, ההשפעה של חוסר התאמה על דחיית השתלה, ואריכות ימים של השתלות. הגישות הכירורגיות הכלליות של מודל זה יכולות להיות מיושמות בצורה שונה להשתלות איברים מוצקים אחרות בעכבר. קנה מידה מיקרוסקופי ואילוצי זמן נלווים משאירים מרווח טעות קטן.המפתח להצלחה הוא תרגול קבוע עם פיקוח מקצועי, מתן משוב ספציפי על תחומי קושי. מי שתדגים את ההליך תהיה גב' ליו ליו, עוזרת מחקר מהמעבדה שלי. מי שיסייעו להליכים הכירורגיים יהיו ד"ר וון הואה הואנג, גב' ג'אס קאור וגב' שיאו ג'אנג.לאחר הרדמה והוצאת העכבר מתא ההשראה, יש להסיר שיער על ידי גילוח הדוק של הבטן הגחונית באמצעות קוצצים. במקרה של התורם, יש לגלח את האזור המשתרע מאיבר המין ועד לשוליים העליונים של בית החזה הגחוני. יש לוודא שהאזור המגולח מגיע לקו אמצע בית השחי לרוחב.עקוב אחר הטמפרטורה על ידי החדרת בדיקה רקטלית משומנת נקייה לתוך פי הטבעת של בעל החיים ולאחר מכן לאבטח אותו ללוח הניתוח באמצעות סרט מיקרו-נקבוביות. להעריך את עומק ההרדמה על ידי התבוננות בתגובות לגירוי של הכף או הזנב מלחץ המופעל על ידי מלקחיים טראומטיים, רפלקס palpebral, טונוס שרירים. למדוד את קצב הנשימה על ידי התבוננות בתנועת דופן בית החזה תוך התבוננות במאמץ הנשימתי כדי להעריך את נפח הגאות, ולאחר מכן לחשב את קצב הנשימה כמתואר בכתב היד.לאחר חיטוי אתר הניתוח באמצעות אפליקטורים סטריליים עם קצוות כותנה, יש למרוח כלורהקסידין בתנועה מעגלית ממרכז אתר הניתוח לקצוות שלוש פעמים, ולאחר מכן שילוב של כלורהקסידין ואתנול באותה תבנית. הכינו את שדה הניתוח על ידי הצבת וילונות כירורגיים סטריליים משני צדי לוח הניתוחים כאתר להנחת מכשירים סטריליים. לאחר יצירת פתח קטן בצורת אליפסה בשפשוף, מניחים את הווילונות המנומרים באתר החתך המוצע.לאחר הכנת בעל החיים כפי שהודגם קודם לכן, יש למרוח חומר סיכה לעיניים. באמצעות מזרק אינסולין בעל 29 מד לאורך אתר החתך המתוכנן, מזריקים תת עורית מנה מבוססת משקל של bupivacaine לתוך הבטן הגחונית ומחפשים קו ישר של blebbing גלוי המכסה את היקף החתך המתוכנן. לאחר מכן, השתמש בלהב אזמל כירורגי סטרילי כדי לבצע חתך עור בקו האמצע הגחוני תחת הגדלה של פי שמונה.יש לוודא כי הלפרטומיה משתרעת על פני הבטן התחתונה עד לשוליים הקוסטליים. ולהכניס retractor כדי למקסם את שדה הניתוח. להרטיב את קטע הגזה הסטרילית עם תמיסת נתרן כלורי מחומם 0.9% ולמקם אותו בהיבט העליון של אתר הניתוח.כעת, השתמשו בצמר גפן סטרילי לח כדי לסלק בעדינות את המעיים. מקם אותם על גבי גזה זו ולעטוף את הגזה סביב האיבר. באמצעות שילוב של אפליקטורים בעלי קצוות כותנה ומלקחיים לתפרי גוף עגולים, שחררו וגייסו את אבי העורקים הבטני ואת הווריד הנבוב התחתון מהרקמות הסובבות בטכניקת דיסקציה קהה.ודא כי שטח הפינוי הוא בין ההיבט האינפרא כלייתי של כלי הדם ומעל הביפורקציה של אבי העורקים. לאחר זיהוי כלי הדם האחוריים, משכו בעדינות את אבי העורקים לכיוון הרחק מעמוד השדרה באמצעות מלקחיים. צור תעלה משני צדי כלי הדם הללו על ידי העברת המלקחיים המעוקלים אחוריים לכלי הבטן.קשרו כל כלי שיט שזוהה וגייס באזור האנסטומוטי המתוכנן באמצעות אורכים של ניילון 10-O הקשורים במכשירים לקשרי המנתח בזריקה אחת נוספת. בודד את האתר האנסטומוטי ממחזור הדם על ידי התקנת מהדק כירורגי בראש כלי הבטן ובקצות הזרוע. ודא כי מלחציים לחצות את שני הכלים במידה מספקת כדי להבטיח חסימה מוחלטת.השתמש במלקחיים ביד הלא דומיננטית כדי לייצב את אבי העורקים. בצע אאורוטוטומיה באמצעות מחט 30 מד באספקט הקדמי של אבי העורקים. האריכו את אבי העורקים באמצעות מספריים מיקרוכירורגיים ישרים.כדי לבצע אדנוטומיה, השתמש במלקחיים ישרים והחל מתיחה קדמית עדינה על הווריד הנבוב התחתון בנקודה בקו אחד עם אמצע אבי העורקים. השתמש מספריים microsurgical מעוקל עם הצד הקעור פונה קדימה כדי להסיר קטע של נבוב ורידי נחות באורך שווה לאבי העורקים. לשטוף את הפנים של כלי פתוח של הדם הנותר עם תמיסת נתרן כלורי heparinized.הכניסו את הלב התורם לבטן וודאו שאבי העורקים העולה נמצא ישירות לצד אבי העורקים הבטני והלב מסובב, כך שניתן יהיה למשוך את עורק הריאה לרוחב האנסטומוזה השנייה. באמצעות ניילון 10-O, מניחים תפר שהייה בין המיקום 12:00 של אבי העורקים לבין הגפיים המקבילות של לומן של אבי העורקים העולה. בעזרת מלקחיים ישרים במחזיק מחט מיקרוכירורגי, קשרו אותו בשלוש זריקות עוקבות של קשר מנתח וחתכו את הקצוות כדי להשאיר כשני מילימטרים של תפר.מניחים תפר שהייה שני בין מיקום 6:00 של אבי העורקים לבין ההיבט המתאים של אבי העורקים העולה. מכיוון שתפר זה ישמש גם כבסיס לתפרי הריצה הבאים, השאירו לפחות 10 מילימטרים מהזנב לקשירה הסופית. מניחים תפר ריצה רציף של ניילון 10-O בצורה עולה כדי להתנגד לקצה הימני האנטומי של אבי העורקים ולקצה החופשי המתאים של אבי העורקים העולה.בצע הליך זה בזהירות והשתמש בכארבע זריקות עבור קו זה. מעבירים את הקצה החופשי של התפר סביב תפר השהייה הדיסטלי לפני הנחת תפר ריצה רציף שני בצד שמאל אנטומי כדי להשפיע על האפפוזיציה עם הקצה החופשי הנותר של אבי העורקים. קשרו את התפר לזנב באמצעות קשר מנתח עם שתי זריקות נוספות.מניחים תפר שהייה בין המיקום 12:00 של הווריד הנבוב הנחות, הוורידים, והקיצוניות המתאימה של לומן של עורק הריאה. מנקודת עיגון זו, מניחים תפר רץ רציף באופן מובחן בין הקצה השמאלי האנטומי של עורק הריאה לבין הקצה המתאים של הוורידיה. להעביר את המחט דרך המיקום 6: 00 של venotomy ואת הגפיים המקבילות של לומן עורק ריאתי.באופן עולה, להעביר את המחט דרך הקצה החופשי הנותר של עורק הריאה ואת הזכות האנטומית של הווריד. השתמש בממוצע של ארבע זריקות עבור קו זה ולאחר מכן צייר את הקצוות החופשיים הסופיים של עורק הריאה ו venotomy יחד. קושרים את הקצה החופשי של התפר לעוגן ובעזרת מכשיר קושרים את קשר המנתח בשתי זריקות נוספות וחותכים את החוט הנוסף.בדוק את כלי הדם עבור פיתול, אשר יפריע זרימת הדם. מניחים קצף ג'ל מעל קו התפרים. מניחים סביבם שתי חתיכות של קצף ג'ל בקוטר של כשני מילימטר ומעצבים כך שכל קווי התפרים הנראים לעין יהיו מכוסים.שחררו את מהדקי כלי הדם החל מהדק ההנעה ולאחר מכן מהדק הצפלו. מכיוון שצפויה כמות קטנה של דימום, מקם מראש אפליקטורים עם קצוות כותנה מעל האתרים האנסטומטיים כדי לספק לחץ. לאחר תיקון הנזילות הגלויות, בדוק את הלב לפעימה.אם הוא נעדר, בדוק את כלי הלב עבור פיתול, ולאחר מכן למקם מחדש את המעיים מעל ומסביב ללב, ולהרטיב את חלל הצפק עם תמיסת נתרן כלורי מחומם אם נראה יבש. באמצעות טכניקה רציפה ללא הפרעה, סגור את חלל הבטן באמצעות מונופילמנט פרולן 6-O שאינו נספג על ידי תפירת שכבת השרירים תחילה, ולאחר מכן העור. לאחר הוצאת המושתל מלוח הניתוחים ומחוץ לחומר ההרדמה, יש לתת מיליליטר אחד של מלח חם תת עורית ולשים את המושתל בכלוב מוכן עם חימום להשגחה בהתאם לפרוטוקולי ההתאוששות לאחר הניתוח.החלמה מלאה וקבלה נצפו במקרה של השתלות לב מורין הטרוטופיות סינגניות וקוגנטיות במשך 100 ימים לאחר הניתוח. עם זאת, דחייה מהירה נצפתה כבר שבעה ימים לאחר הניתוח במקרה של השתלות לב הטרוטופיות הטרוטופיות גדולות. במהלך האנסטומוזות, עליך לשמור על מודעות למקום שבו התפר שלך נמצא בתחום הניתוח.אי ביצוע פעולה זו עלול להוביל לנזק קריטי למבנים או לסבך של התפר. טכניקות מיקרוכירורגיות אלה של דיסקציה ואנסטומוזה ישימות מאוד למודלים כירורגיים אחרים של יונקים קטנים, כולל השתלת כליה הטרוטופית והשתלת כבד אורתוטופית, ומאפשרות לחוקרים לחקור דחיית שתלים.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

A Protocol for Collecting and Staining Hemocytes from the Yellow Fever Mosquito Aedes aegypti

A Protocol for Collecting and Staining Hemocytes from the Yellow Fever Mosquito Aedes aegypti

פרוטוקול איסוף מכתים Hemocytes מן יתוש הקדחת הצהובה Aedes aegypti</em

 Mosquitoes are vectors for a number  of disease-causing pathogens such as the yellow fever virus, malaria parasites  and filarial worms. Laboratories are ...

Reverse Genetics Mediated Recovery of Infectious Murine Norovirus

שחזור הפוך גנטיקה מתווכת של norovirus Murine זיהומיות

Human noroviruses are responsible for most cases of human gastroenteritis (GE) worldwide and are recurrent problem in environments where close ...

Isolation of Cortical Microglia with Preserved Immunophenotype and Functionality From Murine Neonates

בידוד של קליפת המוח Microglia עם immunophenotype משומר ופונקציונאלי מילודי Murine

Isolation of microglia from CNS tissue is a powerful investigative tool used to study microglial biology ex vivo. The present method details a procedure ...

Isolation, Identification, and Purification of Murine Thymic Epithelial Cells

בידוד, זיהוי, וטיהור של תאי Murine הרתי אפיתל

The thymus is a vital organ for T lymphocyte development. Of thymic stromal cells, thymic epithelial cells (TECs) are particularly crucial at multiple ...

Isolation of Murine Lymph Node Stromal Cells

בידוד של תאי Murine לימפה צומת סטרומה

Secondary lymphoid organs including lymph nodes are composed of stromal cells that provide a structural environment for homeostasis, activation and ...

Generation of Two-color Antigen Microarrays for the Simultaneous Detection of IgG and IgM Autoantibodies

דור שני צבעים Antigen Microarrays לאיתור סימולטני של IgG ו- IgM נוגדנים עצמיים

Autoantibodies, which are antibodies against self-antigens, are present in many disease states and can serve as markers for disease activity. The levels ...

An Optimized Protocol to Analyze Glycolysis and Mitochondrial Respiration in Lymphocytes

פרוטוקול אופטימיזציה כדי לנתח הגליקוליזה מיטוכונדריאלי הנשימה לימפוציטים

Lymphocytes respond to a variety of stimuli by activating intracellular signaling pathways, which in turn leads to rapid cellular proliferation, migration ...

Isolation of Extracellular Vesicles from Murine Bronchoalveolar Lavage Fluid Using an Ultrafiltration Centrifugation Technique

בידוד של שלפוחית חוץ-תאי של נוזל שטיפה Bronchoalveolar מאתר באמצעות טכניקת צנטריפוגה אולטראפילטרציה

Extracellular vesicles (EVs) are newly discovered subcellular components that play important roles in many biological signaling functions during ...

An Immunological Model for Heterotopic Heart and Cardiac Muscle Cell Transplantation in Rats

מודל אימונוולוגי עבור הלב הטרוולפית ושריר הלב השתלת תא בחולדות

Heterotopic heart transplantation in rats has been a commonly used model for diverse immunological studies for more than 50 years. Several modifications ...

Optimization of the Cuff Technique for Murine Heart Transplantation

אופטימיזציה של טכניקת השרוול עבור השתלת לב מוריין

Murine cardiac transplantation has been performed for more than 40 years. With advancements in microsurgery, certain new techniques have been used to ...