Name: a modified murine heterotopic heart transplant protocol matching contemporary standards of aseptic technique, anesthesia, and analgesia
Uploaded: 2022-09-28T13:20:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Modified Murine Heterotopic Heart Transplant Protocol Matching Contemporary Standards of Aseptic Technique, Anesthesia, and Analgesia at JoVE.com

著者らは、西オーストラリア大学とハリーパーキンス医学研究所の動物ケアスタッフの素晴らしい努力に感謝し、その献身と専門知識がこれらの手術の実現可能性と成功に貢献しました。

この研究は、科学的目的のための動物の世話と使用に関する実践規範15 に従って実施され、動物倫理プロトコルRA / 3/100/1568およびAE173(それぞれ西オーストラリア大学動物倫理委員会およびハリーパーキンス医学研究所動物倫理委員会)に基づいて承認されました。このプロトコルで使用されるすべての材料、機器、および動物の詳細については、 材料表 を参照?...

<ol>
	<li>Mann, F. C., Priestley, J. T., Markowitz, J., Yater, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+the+intact+mammalian+heart.">Transplantation of the intact mammalian heart.</a> Archives of Surgery. 26 (2), 219-224 (1933).</li><li>Neptune, W. B., Cookson, B. A., Bailey, C. P., Appler, R., Rajkowski, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complete+homologous+heart+transplantation.">Complete homologous heart transplantation.</a> A.M.A. Archives of Surgery. 66 (2), 174-178 (1953).</li><li>Downie, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Homotransplantation+of+the+dog+heart.">Homotransplantation of the dog heart.</a> A.M.A. Archives of Surgery. 66 (5), 624-636 (1953).</li><li>Blanco, G., Adam, A., Rodriguezperez, D., Fernandez, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complete+homotransplantation+of+canine+heart+and+lungs.">Complete homotransplantation of canine heart and lungs.</a> A.M.A. Archives of Surgery. 76 (1), 20-23 (1958).</li><li>Abbott, C. P., Lindsey, E. S., Creech, O., Dewitt, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+technique+for+heart+transplantation+in+the+rat.">A technique for heart transplantation in the rat.</a> Archives of Surgery. 89, 645-652 (1964).</li><li>Ono, K., Lindsey, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+technique+of+heart+transplantation+in+rats.">Improved technique of heart transplantation in rats.</a> The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 57 (2), 225-229 (1969).</li><li>Corry, R. J., Winn, H. J., Russell, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primarily+vascularized+allografts+of+hearts+in+mice.+The+role+of+H-2D,+H-2K,+and+non-H-2+antigens+in+rejection.">Primarily vascularized allografts of hearts in mice. The role of H-2D, H-2K, and non-H-2 antigens in rejection.</a> Transplantation. 16 (4), 343-350 (1973).</li><li>Joffre, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevention+of+acute+and+chronic+allograft+rejection+with+CD4+CD25+Foxp3++regulatory+T+lymphocytes.">Prevention of acute and chronic allograft rejection with CD4+CD25+Foxp3+ regulatory T lymphocytes.</a> Nature Medicine. 14 (1), 88-92 (2008).</li><li>Gregori, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulatory+T+cells+induced+by+1+alpha,25-dihydroxyvitamin+D3+and+mycophenolate+mofetil+treatment+mediate+transplantation+tolerance.">Regulatory T cells induced by 1 alpha,25-dihydroxyvitamin D3 and mycophenolate mofetil treatment mediate transplantation tolerance.</a> The Journal of Immunology. 167 (4), 1945-1953 (2001).</li><li>Niimi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+technique+for+heterotopic+cardiac+transplantation+in+mice:+Experience+of+3000+operations+by+one+surgeon.">The technique for heterotopic cardiac transplantation in mice: Experience of 3000 operations by one surgeon.</a> The Journal of Heart and Lung Transplantation. 20 (10), 1123-1128 (2001).</li><li>Hasegawa, T., Visovatti, S. H., Hyman, M. C., Hayasaki, T., Pinsky, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterotopic+vascularized+murine+cardiac+transplantation+to+study+graft+arteriopathy.">Heterotopic vascularized murine cardiac transplantation to study graft arteriopathy.</a> Nature Protocols. 2 (3), 471-480 (2007).</li><li>Hoogstraten-Miller, S. L., Brown, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Techniques+in+aseptic+rodent+surgery.">Techniques in aseptic rodent surgery.</a> Current Protocols in Immunology. 82, 1-14 (2008).</li><li>Navarro, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+anesthesia:+The+art+and+science.">Mouse anesthesia: The art and science.</a> ILAR Journal. , (2021).</li><li>Adams, S., Pacharinsak, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+anesthesia+and+analgesia.">Mouse anesthesia and analgesia.</a> Current Protocols in Mouse Biology. 5 (1), 51-63 (2015).</li><li>Australian code for the care and use of animals for scientific purposes. NHMRC Available from: <a target="_blank" href="https://www.nhmrc.gov.au/about-us/publications/australian-code-care-and-use-animals-scientific-purposes">https://www.nhmrc.gov.au/about-us/publications/australian-code-care-and-use-animals-scientific-purposes</a> (2013)</li><li>Prosser, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+changes+to+tissue-resident+immunity+after+MHC-matched+and+MHC-mismatched+solid+organ+transplantation.">Dynamic changes to tissue-resident immunity after MHC-matched and MHC-mismatched solid organ transplantation.</a> Cell Reports. 35 (7), 109141 (2021).</li></ol>

マウス同所性心臓移植モデルは、主に免疫学的拒絶反応のレベルと性質に対するMHCミスマッチの影響、そして最近では移植片組織常在免疫の保持に対する移植の影響を調査するために使用される堅牢な前臨床モデルです16。当初はCorryら7 プロトコルに厳密に従っていましたが、無菌技術、鎮痛、麻酔のベストプラクティス基準を組み込むようにプロトコル?...

免疫学や移植に関する理解の多くは、動物を対象とした固形臓器移植の実験モデルに基づく研究によるものです。哺乳類における血管化心臓移植の最初の記述1以来、このようなモデルは、低体温の治療的応用2、特殊な縫合糸を使用する利点3、肺および心臓の全ホモ移植のための技術4など、幅広い領域の知識に貢献してきました。ラット5,6における心臓移植モデルの開発は、異なる育種系統の利用可能性のために免疫学的実験のためのより広い範囲を提供した。利用可能な近交系および変異マウス系統のかなり広い範囲により、Corryらは、この範囲が移植研究にもたらすかなりの利点のために、マウス異所性心臓移植の技術を開発しました。このモデルは広く使用されており、移植片拒絶反応8および治療法9のより深い理解に貢献しています。しかしながら、その最初の説明以来、この技術は、吻合部位の位置の調整などのいくつかのマイナーな技術的詳細を除いて、ほとんど変わっていない10、11。
Corryら7 の技術を実験に統合して以来、プロトコルを改善するための有望な領域、すなわち無菌技術、麻酔、および鎮痛の領域を特定しました。これらの領域の改善は、実験結果にプラスの影響を与え、動物福祉を改善することが期待されていました。これは、無菌技術が術後感染の減少に役立つため、小動物手術で使用される場合に以前に示されていました12、罹患率と死亡率に影響を与えるだけでなく、移植手術後の免疫応答を評価するために設計された実験を損なう可能性があります。麻酔および鎮痛の観点から、洗練されたレジメンの使用は、実験対象の痛みおよび苦痛を軽減することによって、動物へのコストを削減し、この手術モデルの倫理的議論のバランスをとるのに役立つ。さらに、適切な麻酔と鎮痛は、痛みに関連するストレス反応を制限し、術後の回復の質を改善し、最終的には外科的成功率を高めます13。
動物福祉と実験結果の両方を改善することを目的として、これらのギャップを埋めるための調整を伴うプロトコルが開発されました。このプロトコルは、獣医麻酔科医からの相談と、麻酔薬および鎮痛レジメンで利用される薬理学的介入の効果と効果の持続時間の両方を十分に考慮して、Corryら7 によって最初に記述されたものから適応されています。このアプローチは、適切な周術期ケアを確保するために、バランスの取れた麻酔とマルチモーダル鎮痛の原則に基づいていました14。無菌技術の適用に加えて、オピオイドブプレノルフィンと局所麻酔薬ブピバカインが先制的に投与されました。.全身麻酔は吸入麻酔薬イソフルランを用いて行った。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>2030 Rycroft irrigating cannula 30 G</td>
			<td>McFarlane</td>
			<td>56005HU</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Braided surgical silk 7-0</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bulldog clamp curved - 35 mm&#160;</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-7441-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bupivacaine 0.25%&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Castroviejo needle holder catch curved -&#160; 145 mm</td>
			<td>Haag-Streit</td>
			<td>11.62.15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chlorhexidine 5% solution</td>
			<td>Ebos</td>
			<td>JJ61371</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton-tipped applicator - 7.5 cm</td>
			<td>Dove</td>
			<td>SN109510</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol 70% solution</td>
			<td>Ebos</td>
			<td>WH130192EE</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gauze 5 x 5 cm white</td>
			<td>Aero</td>
			<td>AGS50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gelfoam 80 mm x 125 mm&#160;</td>
			<td>Pfizer</td>
			<td>7481D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hair clipper</td>
			<td>Wahl</td>
			<td>9860L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin 1,000 IU in 1 mL</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris SuperCut scissors straight - 11.5 cm&#160;&#160;</td>
			<td>Inka Surgical&#160;</td>
			<td>11550.11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane vaporiser</td>
			<td>Darvall</td>
			<td>9176</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro bulldog clamp - 3.7 cm</td>
			<td>Greman</td>
			<td>14119-G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro scissors curved 105 mm&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micropore plain paper surgical tape - 2.5 cm wide</td>
			<td>Ebos</td>
			<td>7810L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsurgical scissors - curved tip</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monofilament polyprolene suture - 5/0</td>
			<td>Surgipro</td>
			<td>P-205-X</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Myweigh i101 Precision Scale 100 g x 0.005 g</td>
			<td>Myweigh</td>
			<td>Kit00053</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle - 30 G x 0.5 inch</td>
			<td>BD</td>
			<td>BD304000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needleholder 15 cm curved &#34;super fine&#34;</td>
			<td>Surgical Specialists</td>
			<td>ST-B-15-8.2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nylene 10/0 x 15 cm on 3.8 mm 3/8 circle round bodied taper (diam 0.07mm) CV300</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round body suture forceps curved 0.3 mm 120 mm</td>
			<td>B. Braun</td>
			<td>FD281R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round body suture forceps straight 0.3 mm 120 mm</td>
			<td>B. Braun</td>
			<td>FD280R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round handled vannas spring scissors-str/12.5 cm</td>
			<td></td>
			<td>15400-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spring scissors-Cvd Sm blades</td>
			<td></td>
			<td>15001-08</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stevens scissors blunt straight 110 mm</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical backboard</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Rigid laminated cardboard. 15 x 15 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical drapes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Cut into two sizes. 25 cm x 25 cm, and 25 cm x 40 cm&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical microscope</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe - 1 mL</td>
			<td>BD</td>
			<td>592696</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe - 3 mL</td>
			<td>Leica</td>
			<td>M651</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Toothed forceps</td>
			<td>BD</td>
			<td>309657</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>University of Wisconsin Solution</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Warming pad</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Far infrared warming pad 20 x 25 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Westcott spring scissors</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yasargil clip applier bayonet</td>
			<td>Aesculap</td>
			<td>FE582K</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yasargil titanium clip perm 6.6 mm</td>
			<td>Aesculap</td>
			<td>A19FT222T</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse usage</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Strain/SEX/Weight</td>
			<td>Donor</td>
			<td>Recipent</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BALB/c, female, 19-23 g</td>
			<td>7</td>
			<td>21</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6, female, 17-20 g</td>
			<td>7</td>
			<td>0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD45.1 BALB/c, female, 17-21 g</td>
			<td>5</td>
			<td>0</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a modified murine heterotopic heart transplant protocol matching contemporary standards of aseptic technique, anesthesia, and analgesia

動物における心臓移植の実験モデルの開発は、免疫学および固形臓器移植の分野における多くの進歩に貢献してきた。異所性血管化マウス心臓移植モデルは、当初、不一致の近交系マウス系統の組み合わせを用いた移植片拒絶反応の研究に利用されていましたが、遺伝子組み換え株と治療法へのアクセスは、強力な新しい前臨床的洞察を提供することができます。基本的に、この技術の外科的方法論は、特に無菌技術、麻酔、鎮痛などの重要な要因に関して、術後の罹患率と死亡率に重大な影響を与える開発以来変わっていません。さらに、周術期管理の改善は、動物福祉と実験結果の両方を改善することが期待されています。本稿では,獣医麻酔の専門家と共同で開発したプロトコールについて報告し,周術期管理に重点を置いた手術手技について述べる.さらに、これらの改良の影響について説明し、この手順の重要な外科的ステップのトラブルシューティングについて詳しく説明します。

創傷治癒およびマウス回復の良好な結果を促進する上での外科的技術の有効性を決定するために、実験室での初期の実験は、レシピエントに対する可変免疫原性の様々な心臓移植片の生存特性を決定した。これらには、レシピエントと同じ主要組織適合遺伝子複合体(MHC)マーカーを共有する同系(n = 5)および同系(n = 5)移植片、および移植片とレシピエントが異なるMHCマーカーを有する主要なミ...

Watch this Scientific Journal Video about A Modified Murine Heterotopic Heart Transplant Protocol Matching Contemporary Standards of Aseptic Technique, Anesthesia, and Analgesia at JoVE.com

A Modified Murine Heterotopic Heart Transplant Protocol Matching Contemporary Standards of Aseptic Technique, Anesthesia, and Analgesia

本論文では、異所性血管化心臓移植の修正技術を、更新された無菌技術、鎮痛、および麻酔で説明します。

無菌技術、麻酔、および鎮痛の現代の基準に一致する修正マウス異所性心臓移植プロトコル

The development of experimental models of cardiac transplantation in animals has contributed to many advances in the fields of immunology and solid organ ...

これは心臓移植の経済的で再現性のあるモデルです。これは、顕微手術のスキルを向上させるためと、ドナーまたはレシピエントとしての遺伝子組み換えマウス系統の使用を可能にするために使用できます。この技術には、手術後の罹患率を制限するために、通常の人間の手術のすべての疼痛管理と麻酔の複雑さが広く含まれています。このモデルは、外科的に誘発された免疫、移植拒絶反応に対するミスマッチの影響、および移植寿命を研究するために重要です。このモデルの一般的な外科的アプローチは、他のマウス固形臓器移植に修正された形で適用することができる。微視的なスケールとそれに関連する時間的制約により、わずかな誤差が生じます。成功への鍵は、専門家の監督による定期的な練習であり、困難な分野に関する具体的なフィードバックを提供します。手順を実演するのは、私の研究室の研究助手であるLiu Liuさんです。外科手術を支援するのは、ウェン・フア・ファン博士、ジャス・カウルさん、シャオ・チャンさんです。マウスを麻酔して誘導室から取り出した後、バリカンを使用して腹側の腹部を密接に剃って脱毛します。ドナーの場合、生殖器から腹側胸部の上縁まで伸びる領域を剃ります。剃った領域が横方向に中央腋窩線に達することを確認してください。清潔な潤滑性のある直腸プローブを動物の直腸に挿入し、マイクロポアテープを使用して手術用ボードに固定することにより、温度を監視します。外傷性鉗子、眼瞼反射、および筋緊張によって加えられる圧力による足または尾の刺激に対する反応を観察することにより、麻酔の深さを評価します。呼吸努力を観察しながら胸壁の動きを観察して呼吸数を測定して一回換気量を評価し、原稿に記載されているように呼吸数を算出します。滅菌綿の先端のアプリケーターを使用して手術部位を消毒したら、クロルヘキシジンを手術部位の中心から端まで円を描くように3回塗布し、続いてクロルヘキシジンとエタノールを同じパターンで組み合わせます。滅菌器具を配置する場所として、外科用ボードの両側に滅菌外科用ドレープを配置して、手術野を準備します。ドレープに小さな楕円形の開口部を作った後、提案された切開部位に開窓ドレープを置きます。前に示したように動物を準備した後、目の潤滑剤を塗ります。計画された切開部位に沿って29ゲージのインスリン注射器を使用して、腹側腹部に体重ベースの用量のブピバカインを皮下注射し、計画された切開の範囲をカバーする目に見えるブレブの直線を探します。次に、滅菌外科用メスの刃を使用して、8倍の倍率で腹側正中線皮膚切開を行います。開腹術が下腹部から肋骨縁まで広がっていることを確認してください。そして、術野を最大化するためにリトラクターを挿入します。滅菌ガーゼのセグメントを温めた0.9%塩化ナトリウム溶液で湿らせ、手術部位の上側に配置します。次に、湿らせた滅菌綿棒を使用して、腸をやさしく骨抜きにします。それらをこのガーゼの上に置き、ガーゼを臓器に巻き付けます。綿の先端のアプリケーターと丸い体の縫合鉗子の組み合わせを使用して、鈍い解剖技術で周囲の組織から腹部大動脈と下大静脈を解放して動員します。クリアランスの領域が血管の腎下面の間と大動脈の分岐部の上にあることを確認してください。後腹部血管を特定した後、鉗子を使用して大動脈を脊柱から離れる方向にそっと引っ張ります。湾曲した鉗子を腹部血管の後方に通すことによって、これらの血管の両側に頭尾方向にチャネルを作ります。計画された吻合ゾーンで特定され動員された各血管を、器具で結ばれた長さの10-Oナイロンを使用して、外科医の結び目に1回追加で投げます。腹部血管の頭部と抱擁端に外科用クランプを取り付けることにより、吻合部位を循環から隔離します。クランプが完全に閉塞するのに十分な程度に両方の血管を横切ることを確認してください。利き手でない手で鉗子を使用して大動脈を安定させます。大動脈の前面で30ゲージの針を使用して大動脈切開を行います。先端のまっすぐな顕微手術ハサミを使用して大動脈切開術を延長します。腺切開術を行うには、まっすぐな鉗子を使用し、大動脈切開術の中央に沿った点で下大静脈に穏やかな前方牽引を適用します。凹面を前方に向けて湾曲した顕微手術用ハサミを使用して、大動脈切開と同じ長さの下大静脈のセグメントを取り除きます。残りの血液の開いた血管の内部をヘパリン化塩化ナトリウム溶液で洗浄します。ドナーの心臓を腹部に配置し、上行大動脈が腹部大動脈切開術の真横にあり、心臓が回転していることを確認して、2回目の吻合のために肺動脈を引き抜くことができるようにします。10-Oナイロンを使用して、大動脈切開術の12:00の位置と上行大動脈の内腔の対応する端との間にステー縫合糸を配置します。先端をまっすぐにした鉗子を顕微手術用ニードルホルダーに取り付け、その後3回外科医の結び目で結び、両端を切断して約2ミリメートルの縫合糸を残します。大動脈切開術の6:00の位置と上行大動脈の対応する側面の間に2番目のステー縫合糸を配置します。この縫合糸は、その後のランニング縫合糸のベースとしても機能するため、最終的なタイオフのために少なくとも10ミリメートルの尾を残してください。大動脈切開術の解剖学的右端と上行大動脈の対応する自由端に対抗するために、10-Oナイロンの連続ランニング縫合糸を上向きに配置します。この手順を慎重に実行し、この行には約 4 回のスローを使用します。縫合糸の自由端を遠位ステー縫合糸の周りに通過させてから、2番目の連続した縫合糸を解剖学的左側に配置して、大動脈切開の残りの自由端との配置に影響を与えます。外科医の結び目を使用して縫合糸を尾に結び、さらに2回投げます。下大静脈の12:00の位置、静脈切開、および肺動脈の内腔の対応する四肢の間にステー縫合糸を置きます。このアンカーポイントから、肺動脈の解剖学的左端とそれに対応する静脈切開術の端の間に識別できるように連続ランニング縫合糸を配置します。静脈切開術の6:00の位置と肺動脈内腔の対応する四肢に針を通します。上昇する方法で、肺動脈の残りの自由端と静脈切開術の解剖学的右に針を通します。この線に平均4回のスローを使用してから、肺動脈と静脈切開術の最終的な自由端を一緒に描きます。縫合糸の自由端をアンカーに結び、器具を使用して、外科医の結び目を2回の追加スローで結び、余分な糸を切ります。血流を妨げる血管にねじれがないか確認してください。ゲルフォームを縫合ライン上に配置します。それらの周りに約2ミリメートルのゲルフォームを2枚置き、目に見えるすべての縫合線が覆われるように成形します。コドルクランプから始めて、次にセファロクランプから始めて、血管クランプを解放します。少量の出血が予想されるため、吻合部位の上に綿の先端のアプリケーターを先制して配置して圧力をかけます。目に見える漏れを修正した後、心臓の脈動をチェックします。それがない場合は、心臓血管にねじれがないか確認し、腸を心臓の上と周囲に再配置し、乾燥しているように見える場合は、温めた塩化ナトリウム溶液で腹腔を湿らせます。連続的な中断のない技術を使用して、最初に筋肉層を縫合し、次に皮膚を縫合することにより、非吸収性の6-Oプロレンモノフィラメントを使用して腹腔を閉じます。レシピエントが手術用ボードから取り外され、麻酔薬から外れたら、1ミリリットルの温かい生理食塩水を皮下投与し、術後の回復プロトコルに従って観察のために加温した準備されたケージにレシピエントを置きます。術後100日間の同系および先天性異所性マウス心臓移植の場合、完全な回復と受け入れが観察されました。.しかし、主要な異所性マウス心臓移植の場合、術後7日という早い時期に急速な拒絶反応が観察されました。吻合中は、縫合糸が手術野のどこにあるかを把握する必要があります。そうしないと、構造物に重大な損傷を与えたり、縫合糸が絡まったりする可能性があります。解剖と吻合のこれらの顕微手術技術は、異所性腎臓移植や同所性肝移植を含む他の小型哺乳類手術モデルに非常に適用可能であり、研究者は移植片拒絶反応を研究することができます。

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

A Protocol for Collecting and Staining Hemocytes from the Yellow Fever Mosquito Aedes aegypti

A Protocol for Collecting and Staining Hemocytes from the Yellow Fever Mosquito Aedes aegypti

黄熱病の蚊から血球を収集し、染色のためのプロトコルネッタイシマカ</em

 Mosquitoes are vectors for a number  of disease-causing pathogens such as the yellow fever virus, malaria parasites  and filarial worms. Laboratories are ...

Reverse Genetics Mediated Recovery of Infectious Murine Norovirus

感染マウスノロウイルスのリバースジェネティクスを介したリカバリ

Human noroviruses are responsible for most cases of human gastroenteritis (GE) worldwide and are recurrent problem in environments where close ...

Isolation of Cortical Microglia with Preserved Immunophenotype and Functionality From Murine Neonates

マウス新生児から保護免疫表現と機能皮質ミクログリアの分離

Isolation of microglia from CNS tissue is a powerful investigative tool used to study microglial biology ex vivo. The present method details a procedure ...

Isolation, Identification, and Purification of Murine Thymic Epithelial Cells

単離、同定、およびマウス胸腺上皮細胞の精製

The thymus is a vital organ for T lymphocyte development. Of thymic stromal cells, thymic epithelial cells (TECs) are particularly crucial at multiple ...

Isolation of Murine Lymph Node Stromal Cells

ネズミリンパ節間質細胞の単離

Secondary lymphoid organs including lymph nodes are composed of stromal cells that provide a structural environment for homeostasis, activation and ...

Generation of Two-color Antigen Microarrays for the Simultaneous Detection of IgG and IgM Autoantibodies

IgGおよびIgM自己抗体の同時検出のための二色抗原マイクロアレイの生成

Autoantibodies, which are antibodies against self-antigens, are present in many disease states and can serve as markers for disease activity. The levels ...

An Optimized Protocol to Analyze Glycolysis and Mitochondrial Respiration in Lymphocytes

リンパ球における解糖およびミトコンドリア呼吸を分析するために最適化されたプロトコル

Lymphocytes respond to a variety of stimuli by activating intracellular signaling pathways, which in turn leads to rapid cellular proliferation, migration ...

Isolation of Extracellular Vesicles from Murine Bronchoalveolar Lavage Fluid Using an Ultrafiltration Centrifugation Technique

限外ろ過遠心分離法を用いたマウスの気管支肺胞洗浄液細胞小胞の分離

Extracellular vesicles (EVs) are newly discovered subcellular components that play important roles in many biological signaling functions during ...

An Immunological Model for Heterotopic Heart and Cardiac Muscle Cell Transplantation in Rats

ラットにおける異所性心臓と心筋細胞移植のための免疫学的モデル

Heterotopic heart transplantation in rats has been a commonly used model for diverse immunological studies for more than 50 years. Several modifications ...

Optimization of the Cuff Technique for Murine Heart Transplantation

マウスの心臓移植のためのカフ技術の最適化

Murine cardiac transplantation has been performed for more than 40 years. With advancements in microsurgery, certain new techniques have been used to ...