Name: a modified murine heterotopic heart transplant protocol matching contemporary standards of aseptic technique, anesthesia, and analgesia
Uploaded: 2022-09-28T13:20:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Modified Murine Heterotopic Heart Transplant Protocol Matching Contemporary Standards of Aseptic Technique, Anesthesia, and Analgesia at JoVE.com

Forfatterne vil gjerne anerkjenne den ypperlige innsatsen til dyrepleiepersonalet ved University of Western Australia og Harry Perkins Institute of Medical Research, hvis engasjement og kompetanse bidro til muligheten og suksessen til disse operasjonene.

Denne forskningen ble utført i samsvar med Code of Practice for the Care and Use of Animals for Scientific Purpose15 og godkjent under Animal Ethics Protocols RA/3/100/1568 og AE173 (The University of Western Australia Animal Ethics Committee og The Harry Perkins Institute of Medical Research Animal Ethics Committee, henholdsvis). Se materialfortegnelsen for detaljer om alle materialer, instrumenter og dyr som brukes i denne protokollen.
1. Forbe...

<ol>
	<li>Mann, F. C., Priestley, J. T., Markowitz, J., Yater, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+the+intact+mammalian+heart.">Transplantation of the intact mammalian heart.</a> Archives of Surgery. 26 (2), 219-224 (1933).</li><li>Neptune, W. B., Cookson, B. A., Bailey, C. P., Appler, R., Rajkowski, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complete+homologous+heart+transplantation.">Complete homologous heart transplantation.</a> A.M.A. Archives of Surgery. 66 (2), 174-178 (1953).</li><li>Downie, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Homotransplantation+of+the+dog+heart.">Homotransplantation of the dog heart.</a> A.M.A. Archives of Surgery. 66 (5), 624-636 (1953).</li><li>Blanco, G., Adam, A., Rodriguezperez, D., Fernandez, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complete+homotransplantation+of+canine+heart+and+lungs.">Complete homotransplantation of canine heart and lungs.</a> A.M.A. Archives of Surgery. 76 (1), 20-23 (1958).</li><li>Abbott, C. P., Lindsey, E. S., Creech, O., Dewitt, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+technique+for+heart+transplantation+in+the+rat.">A technique for heart transplantation in the rat.</a> Archives of Surgery. 89, 645-652 (1964).</li><li>Ono, K., Lindsey, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+technique+of+heart+transplantation+in+rats.">Improved technique of heart transplantation in rats.</a> The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 57 (2), 225-229 (1969).</li><li>Corry, R. J., Winn, H. J., Russell, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primarily+vascularized+allografts+of+hearts+in+mice.+The+role+of+H-2D,+H-2K,+and+non-H-2+antigens+in+rejection.">Primarily vascularized allografts of hearts in mice. The role of H-2D, H-2K, and non-H-2 antigens in rejection.</a> Transplantation. 16 (4), 343-350 (1973).</li><li>Joffre, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevention+of+acute+and+chronic+allograft+rejection+with+CD4+CD25+Foxp3++regulatory+T+lymphocytes.">Prevention of acute and chronic allograft rejection with CD4+CD25+Foxp3+ regulatory T lymphocytes.</a> Nature Medicine. 14 (1), 88-92 (2008).</li><li>Gregori, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulatory+T+cells+induced+by+1+alpha,25-dihydroxyvitamin+D3+and+mycophenolate+mofetil+treatment+mediate+transplantation+tolerance.">Regulatory T cells induced by 1 alpha,25-dihydroxyvitamin D3 and mycophenolate mofetil treatment mediate transplantation tolerance.</a> The Journal of Immunology. 167 (4), 1945-1953 (2001).</li><li>Niimi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+technique+for+heterotopic+cardiac+transplantation+in+mice:+Experience+of+3000+operations+by+one+surgeon.">The technique for heterotopic cardiac transplantation in mice: Experience of 3000 operations by one surgeon.</a> The Journal of Heart and Lung Transplantation. 20 (10), 1123-1128 (2001).</li><li>Hasegawa, T., Visovatti, S. H., Hyman, M. C., Hayasaki, T., Pinsky, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterotopic+vascularized+murine+cardiac+transplantation+to+study+graft+arteriopathy.">Heterotopic vascularized murine cardiac transplantation to study graft arteriopathy.</a> Nature Protocols. 2 (3), 471-480 (2007).</li><li>Hoogstraten-Miller, S. L., Brown, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Techniques+in+aseptic+rodent+surgery.">Techniques in aseptic rodent surgery.</a> Current Protocols in Immunology. 82, 1-14 (2008).</li><li>Navarro, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+anesthesia:+The+art+and+science.">Mouse anesthesia: The art and science.</a> ILAR Journal. , (2021).</li><li>Adams, S., Pacharinsak, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+anesthesia+and+analgesia.">Mouse anesthesia and analgesia.</a> Current Protocols in Mouse Biology. 5 (1), 51-63 (2015).</li><li>Australian code for the care and use of animals for scientific purposes. NHMRC Available from: <a target="_blank" href="https://www.nhmrc.gov.au/about-us/publications/australian-code-care-and-use-animals-scientific-purposes">https://www.nhmrc.gov.au/about-us/publications/australian-code-care-and-use-animals-scientific-purposes</a> (2013)</li><li>Prosser, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+changes+to+tissue-resident+immunity+after+MHC-matched+and+MHC-mismatched+solid+organ+transplantation.">Dynamic changes to tissue-resident immunity after MHC-matched and MHC-mismatched solid organ transplantation.</a> Cell Reports. 35 (7), 109141 (2021).</li></ol>

Murine ortotopisk hjertetransplantasjonsmodell er en robust preklinisk modell som primært brukes til å undersøke effekten av MHC-mismatch på nivået og arten av immunologisk avstøtning og, mer nylig, effekten av transplantasjon på retensjon av transplantatvevsresident immunitet16. Mens vi i utgangspunktet fulgte Corry et al.7-protokollen , har vi raffinert protokollen for å innlemme beste praksisstandarder for aseptisk teknikk, analgesi og anestesi. Oppdateringen av ...

Vi skylder mye av vår forståelse av immunologi og transplantasjon til forskning basert på eksperimentelle modeller av solid organtransplantasjon ved hjelp av dyreforsøkspersoner. Siden den første beskrivelsen av vaskularisert hjertetransplantasjon hos pattedyr1 har slike modeller bidratt til kunnskap på vidtfavnende områder, inkludert terapeutisk anvendelse av hypotermi2, fordelene ved å bruke spesialiserte suturer3 og teknikker for total lunge- og hjertehomotransplantasjon4. Utviklingen av hjertetransplantasjonsmodeller hos rotter 5,6 ga bredere rom for immunologiske eksperimenter på grunn av tilgjengeligheten av forskjellige avlslinjer. Det betydelig bredere spekteret av tilgjengelige innavlede og mutante musestammer førte Corry et al.7 til å utvikle en teknikk for murine heterotopisk hjertetransplantasjon på grunn av de betydelige fordelene som dette området bringer til transplantasjonsforskning. Denne modellen har vært mye brukt og har bidratt til økt forståelse av transplantatavstøtning8 og terapeutikk9. Siden den første beskrivelsen har imidlertid teknikken stort sett vært uendret, bortsett fra noen mindre tekniske detaljer som justeringer av posisjonen til anastomotiske steder10,11.
Siden integreringen av teknikken til Corry et al.7 i våre eksperimenter, har vi identifisert løfteområder for å forbedre protokollen, nemlig aseptisk teknikk, anestesi og analgesi. Forbedringer på disse områdene ble forventet å gi en positiv innvirkning på eksperimentelle resultater og forbedre dyrevelferden. Dette har tidligere blitt vist når aseptisk teknikk brukes i smådyroperasjoner, da det hjelper til med reduksjon av postoperative infeksjoner12, som ikke bare påvirker sykelighet og dødelighet, men kan også kompromittere eksperimenter designet for å vurdere immunresponsen etter transplantasjonskirurgi. Fra et anestesi og smertestillende synspunkt bidrar bruken av et raffinert diett til å redusere kostnadene for dyr og balansere det etiske argumentet til denne kirurgiske modellen ved å redusere smerten og lidelsen til eksperimentelle. Videre begrenser passende anestesi og analgesi den smerteassosierte stressresponsen, forbedrer kvaliteten på postoperativ utvinning og til slutt øker den kirurgiske suksessraten13.
Med sikte på å forbedre både dyrevelferd og eksperimentelle resultater, ble det utviklet en protokoll med justeringer for å bygge bro over disse gapene. Denne protokollen er tilpasset fra det som opprinnelig ble beskrevet av Corry et al.7 med konsultasjon fra en veterinæranestesilege og med behørig hensyn til både effektene og varigheten av effektene av de farmakologiske inngrepene som brukes i anestesi- og smertestillende behandling. Tilnærmingen var basert på prinsippene om balansert anestesi og multimodal analgesi for å sikre forsvarlig perioperativ behandling14. I tillegg til aseptisk teknikk ble opioidet buprenorfin og lokalanestetikumet bupivakain gitt på forhånd. Narkose ble utført ved bruk av inhalasjonsanestesimiddelet isofluran.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>2030 Rycroft irrigating cannula 30 G</td>
			<td>McFarlane</td>
			<td>56005HU</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Braided surgical silk 7-0</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bulldog clamp curved - 35 mm&#160;</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-7441-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bupivacaine 0.25%&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Castroviejo needle holder catch curved -&#160; 145 mm</td>
			<td>Haag-Streit</td>
			<td>11.62.15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chlorhexidine 5% solution</td>
			<td>Ebos</td>
			<td>JJ61371</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton-tipped applicator - 7.5 cm</td>
			<td>Dove</td>
			<td>SN109510</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol 70% solution</td>
			<td>Ebos</td>
			<td>WH130192EE</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gauze 5 x 5 cm white</td>
			<td>Aero</td>
			<td>AGS50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gelfoam 80 mm x 125 mm&#160;</td>
			<td>Pfizer</td>
			<td>7481D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hair clipper</td>
			<td>Wahl</td>
			<td>9860L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin 1,000 IU in 1 mL</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris SuperCut scissors straight - 11.5 cm&#160;&#160;</td>
			<td>Inka Surgical&#160;</td>
			<td>11550.11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane vaporiser</td>
			<td>Darvall</td>
			<td>9176</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro bulldog clamp - 3.7 cm</td>
			<td>Greman</td>
			<td>14119-G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro scissors curved 105 mm&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micropore plain paper surgical tape - 2.5 cm wide</td>
			<td>Ebos</td>
			<td>7810L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsurgical scissors - curved tip</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monofilament polyprolene suture - 5/0</td>
			<td>Surgipro</td>
			<td>P-205-X</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Myweigh i101 Precision Scale 100 g x 0.005 g</td>
			<td>Myweigh</td>
			<td>Kit00053</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle - 30 G x 0.5 inch</td>
			<td>BD</td>
			<td>BD304000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needleholder 15 cm curved &#34;super fine&#34;</td>
			<td>Surgical Specialists</td>
			<td>ST-B-15-8.2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nylene 10/0 x 15 cm on 3.8 mm 3/8 circle round bodied taper (diam 0.07mm) CV300</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round body suture forceps curved 0.3 mm 120 mm</td>
			<td>B. Braun</td>
			<td>FD281R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round body suture forceps straight 0.3 mm 120 mm</td>
			<td>B. Braun</td>
			<td>FD280R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round handled vannas spring scissors-str/12.5 cm</td>
			<td></td>
			<td>15400-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spring scissors-Cvd Sm blades</td>
			<td></td>
			<td>15001-08</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stevens scissors blunt straight 110 mm</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical backboard</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Rigid laminated cardboard. 15 x 15 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical drapes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Cut into two sizes. 25 cm x 25 cm, and 25 cm x 40 cm&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical microscope</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe - 1 mL</td>
			<td>BD</td>
			<td>592696</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe - 3 mL</td>
			<td>Leica</td>
			<td>M651</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Toothed forceps</td>
			<td>BD</td>
			<td>309657</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>University of Wisconsin Solution</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Warming pad</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Far infrared warming pad 20 x 25 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Westcott spring scissors</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yasargil clip applier bayonet</td>
			<td>Aesculap</td>
			<td>FE582K</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yasargil titanium clip perm 6.6 mm</td>
			<td>Aesculap</td>
			<td>A19FT222T</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse usage</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Strain/SEX/Weight</td>
			<td>Donor</td>
			<td>Recipent</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BALB/c, female, 19-23 g</td>
			<td>7</td>
			<td>21</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6, female, 17-20 g</td>
			<td>7</td>
			<td>0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD45.1 BALB/c, female, 17-21 g</td>
			<td>5</td>
			<td>0</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a modified murine heterotopic heart transplant protocol matching contemporary standards of aseptic technique, anesthesia, and analgesia

Utviklingen av eksperimentelle modeller for hjertetransplantasjon hos dyr har bidratt til mange fremskritt innen immunologi og solid organtransplantasjon. Mens den heterotopiske murine hjertetransplantasjonsmodellen opprinnelig ble brukt i studier av transplantatavstøtning ved bruk av kombinasjoner av feilmatchede innavlede musestammer, kan tilgang til genetisk modifiserte stammer og terapeutiske modaliteter gi kraftig ny preklinisk innsikt. I utgangspunktet har den kirurgiske metodikken for denne teknikken ikke endret seg siden utviklingen, spesielt med hensyn til viktige faktorer som aseptisk teknikk, anestesi og analgesi, som har materiell innvirkning på postkirurgisk sykelighet og dødelighet. I tillegg forventes forbedringer i perioperativ ledelse å gi forbedringer i både dyrevelferd og eksperimentelle resultater. Denne artikkelen rapporterer om en protokoll utviklet i samarbeid med en fagekspert i veterinær anestesi og beskriver kirurgisk teknikk med vekt på perioperativ ledelse. I tillegg diskuterer vi implikasjonene av disse forbedringene og gir detaljer om feilsøking av kritiske kirurgiske trinn for denne prosedyren.

For å bestemme effektiviteten av den kirurgiske teknikken for å fremme gode resultater av sårheling og musegjenoppretting, bestemte tidlige eksperimenter i laboratoriet overlevelsesegenskapene til en rekke hjertetransplantater av variabel immunogenitet til mottakeren. Disse inkluderte kongene (n = 5) og syngene (n = 5) transplantater, som deler de samme store histokompatibilitetskompleksmarkørene (MHC) som mottakeren, og store mismatch-transplantater (n = 9), der transplantatet og mottakeren har forskjellige MHC-mark...

Watch this Scientific Journal Video about A Modified Murine Heterotopic Heart Transplant Protocol Matching Contemporary Standards of Aseptic Technique, Anesthesia, and Analgesia at JoVE.com

A Modified Murine Heterotopic Heart Transplant Protocol Matching Contemporary Standards of Aseptic Technique, Anesthesia, and Analgesia

Denne artikkelen beskriver en modifisert teknikk for heterotopisk vaskularisert hjertetransplantasjon med oppdatert aseptisk teknikk, analgesi og anestesi.

En modifisert murine heterotopisk hjertetransplantasjonsprotokoll som samsvarer med moderne standarder for aseptisk teknikk, anestesi og analgesi

The development of experimental models of cardiac transplantation in animals has contributed to many advances in the fields of immunology and solid organ ...

Dette er en økonomisk og reproduserbar modell for hjertetransplantasjon. Det kan brukes både til å forbedre mikrokirurgiske ferdigheter og tillate bruk av genetisk modifiserte musestammer som donorer eller mottakere. Teknikken inkluderer i stor grad all smertebehandling og bedøvelseskompleksitet ved normal menneskelig kirurgi for å begrense sykelighet etter operasjonen.Denne modellen er kritisk for å studere kirurgisk indusert immunitet, effekten av mismatch på transplantasjonsavstøtning og transplantasjonslevetid. De generelle kirurgiske tilnærmingene til denne modellen kan brukes i modifisert form til andre musefaste organtransplantasjoner. Mikroskopisk skala og tilhørende tidspress gir en liten feilmargin.Nøkkelen til suksess er regelmessig praksis med profesjonell veiledning, som gir spesifikk tilbakemelding på vanskelighetsområder. Demonstrere prosedyren vil være Ms Liu Liu, en forskningsassistent fra laboratoriet mitt. Assistere kirurgiske prosedyrer vil være Dr.Wen Hua Huang, Ms.Jas Kaur, og Ms.Xiao Zhang.Etter bedøvelse og fjerning av musen fra induksjonskammeret, fjern håret ved å barbere den ventrale magen nøye ved hjelp av klippere. I donorens tilfelle, barber området som strekker seg fra kjønnsorganene til den øvre marginen av ventral thorax. Forsikre deg om at det barberte området når midtaksillorlinjen sideveis.Overvåk temperaturen ved å sette inn en ren smurt rektal sonde i dyrets endetarm og deretter feste den til operasjonsbordet ved hjelp av mikroporetape. Vurder bedøvelsesdybden ved å observere responser på stimulering av poten eller halen fra trykk påført av traumatiske tang, palpebralrefleksen og muskeltonen. Mål respirasjonsfrekvensen ved å observere brystveggens bevegelse mens du observerer respirasjonsarbeidet for å vurdere tidalvolumet, og beregn deretter respirasjonsfrekvensen som beskrevet i manuskriptet.Når operasjonsstedet er desinfisert ved hjelp av sterile bomullstippede applikatorer, påfør klorhexidin i en sirkulær bevegelse fra operasjonssenteret til kantene tre ganger, etterfulgt av en kombinasjon av klorhexidin og etanol i samme mønster. Forbered det kirurgiske feltet ved å plassere sterile kirurgiske gardiner på hver side av operasjonsstyret som stedet for å plassere sterile instrumenter. Etter å ha laget en liten ovalformet åpning i drapet, plasser det fenestrerte drapet på det foreslåtte snittstedet.Etter å ha forberedt dyret som vist tidligere, bruk øye smøremiddel. Bruk en 29-gauge insulinsprøyte langs det planlagte snittstedet, injiser subkutant en vektbasert dose bupivakain i ventral abdomen og se etter en rett linje med synlig blebbing som dekker omfanget av det planlagte snittet. Deretter bruker du et sterilt kirurgisk skalpellblad for å lage et ventral midtlinjehudsnitt under åtte ganger forstørrelse.Pass på at laparotomi spenner over underlivet til costal margin. Og sett inn en retractor for å maksimere det kirurgiske feltet. Fukt segmentet av sterilt gasbind med oppvarmet 0,9% natriumkloridoppløsning og plasser det på det overordnede aspektet av operasjonsstedet.Bruk nå fuktede sterile bomullsknopper for å forsiktig utrydde tarmene. Plasser dem på toppen av denne gasbindet og pakk gasbindet rundt orgelet. Ved hjelp av en kombinasjon av bomullstippede applikatorer og runde kroppssuturtang, frigjør og mobiliser abdominal aorta og dårligere vena cava fra omgivende vev med en stump disseksjonsteknikk.Sørg for at klaringsområdet er mellom det infrarenale aspektet av karene og over bifurkasjonen av aorta. Etter å ha identifisert de bakre bukkarene, trekk forsiktig aorta i en retning bort fra vertebral kolonnen ved hjelp av tang. Lag en kanal på hver side av disse fartøyene cephalocaudalt ved å føre de buede tangene bakre til bukkarene.Ligate hvert fartøy identifisert og mobilisert i den planlagte anastomotiske sonen ved hjelp av lengder av 10-O nylon bundet med instrumenter i kirurgens knuter med ett ekstra kast. Isoler det anastomotiske stedet fra sirkulasjon ved å installere en kirurgisk klemme på bukkarets hode og coddle ender. Forsikre deg om at klemmene krysser begge fartøyene i tilstrekkelig grad for å sikre fullstendig okklusjon.Bruk tang i den ikke-dominerende hånden for å holde aorta stødig. Utfør en aortotomi ved hjelp av en 30-gauge nål på det fremre aspektet av aorta. Utvid aortotomi ved hjelp av rett-tipped mikrokirurgisk saks.For å utføre adenotomi, bruk rett tang og påfør forsiktig fremre trekkraft på den dårligere vena cava på punktet i tråd med midten av aortotomien. Bruk buet mikrokirurgisk saks med den konkave siden vendt anteriort for å fjerne et segment av dårligere vena cava av samme lengde som aortotomi. Vask interiøret i de åpne karene med gjenværende blod med heparinisert natriumkloridoppløsning.Plasser donorhjertet i magen og sørg for at den stigende aorta er direkte langs abdominal aortotomi og hjertet roteres, slik at lungearterien kan trekkes over for den andre anastomosen. Bruk 10-O nylon, plasser en oppholdsutur mellom 12:00-posisjonen til aortotomi og den tilsvarende ekstremiteten av lumen i den stigende aorta. Bruk straight-tipped tang i en mikrokirurgisk nålholder, bind den med tre påfølgende kast av en kirurgs knute og kutt endene for å forlate omtrent to millimeter sutur.Plasser en andre oppholdsutur mellom 6:00-posisjonen til aortotomi og det tilsvarende aspektet av den stigende aorta. Siden denne suturen også vil fungere som base for påfølgende løpende suturer, la det være minst 10 millimeter av halen for det ultimate slipset. Plasser en kontinuerlig løpende sutur av 10-O nylon på en stigende måte for å motsette seg den anatomiske høyre kanten av aortotomi og den tilsvarende frie kanten av den stigende aorta.Utfør denne prosedyren nøye og bruk omtrent fire kast for denne linjen. Før den frie enden av suturen rundt den distale oppholdsuturen før du plasserer en ny kontinuerlig løpende sutur ned den anatomiske venstre siden for å påvirke apposisjonen med den gjenværende frie kanten av aortotomien. Bind suturen til halen ved hjelp av en kirurgknute med to ekstra kast.Plasser en oppholdsutur mellom 12:00-posisjonen til den nedre vena cava, venotomi og den tilsvarende ekstremiteten av lumen i lungearterien. Fra dette ankerpunktet plasserer du en kontinuerlig løpende sutur mellom den anatomiske venstre kanten av lungearterien og den tilsvarende kanten av venotomien. Før nålen gjennom venotomiens 6:00-posisjon og den tilsvarende ekstremiteten av lungearteriens lumen.På stigende måte, pass nålen gjennom den gjenværende frie kanten av lungearterien og den anatomiske høyre venotomien. Bruk i gjennomsnitt fire kast for denne linjen og trekk deretter de endelige frie kantene av lungearterien og venotomi sammen. Bind av den frie enden av suturen til ankeret, og knytt kirurgens knute med to ekstra kast ved hjelp av et instrument og kutt den ekstra tråden.Sjekk fartøyene for vridning, noe som vil forstyrre blodstrømmen. Plasser gelskum over suturlinjen. Plasser to stykker omtrent to millimeter gelskum rundt dem og form slik at alle de synlige suturlinjene er dekket.Slipp vaskulære klemmer som starter med coddle klemmen og deretter cephalo klemmen. Som en liten mengde blødning er forventet, preemptively plassere bomull-tipped applikatorer over anastomotiske steder for å gi trykk. Etter å ha fikset de synlige lekkasjene, sjekk hjertet for pulsering.Hvis det er fraværende, kontroller hjertekarene for vridning, flytt deretter tarmene over og rundt hjertet, og fukt bukhulen med oppvarmet natriumkloridoppløsning hvis den virker tørr. Ved hjelp av kontinuerlig uavbrutt teknikk, lukk bukhulen ved hjelp av ikke-absorberbar 6-O prolene monofilament ved å suturere muskellaget først, etterfulgt av huden. Når mottakeren er fjernet fra operasjonsstyret og av bedøvelsen, administrer en milliliter varm saltvann subkutant og plasser mottakeren i et forberedt bur med oppvarming for observasjon i henhold til postoperative gjenopprettingsprotokoller.Full restitusjon og aksept ble observert ved syngene og kongene heterotopiske murine hjertetransplantasjoner i 100 dager etter operasjonen. Rask avstøtning ble imidlertid observert så tidlig som syv dager etter operasjonen ved større heterotopiske murinhjertetransplantasjoner. Under anastomoser må du opprettholde bevissthet om hvor suturen din er innenfor det kirurgiske feltet.Unnlatelse av å gjøre det kan føre til kritisk skade på strukturer eller floker av suturen. Disse mikrokirurgiske teknikkene for disseksjon og anastomose er svært anvendelige for andre kirurgiske modeller av små pattedyr, inkludert heterotopisk nyre- og ortotopisk levertransplantasjon, slik at forskere kan studere transplantatavstøtning.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

A Protocol for Collecting and Staining Hemocytes from the Yellow Fever Mosquito Aedes aegypti

A Protocol for Collecting and Staining Hemocytes from the Yellow Fever Mosquito Aedes aegypti

 Mosquitoes are vectors for a number  of disease-causing pathogens such as the yellow fever virus, malaria parasites  and filarial worms. Laboratories are ...

Reverse Genetics Mediated Recovery of Infectious Murine Norovirus

Reverse genetikk Mediated Gjenvinning av Infeksiøs murin Norovirus

Human noroviruses are responsible for most cases of human gastroenteritis (GE) worldwide and are recurrent problem in environments where close ...

Isolation of Cortical Microglia with Preserved Immunophenotype and Functionality From Murine Neonates

Isolering av Cortical Microglia med Bevarte Immunfenotype og funksjonalitet fra Murine Nyfødte

Isolation of microglia from CNS tissue is a powerful investigative tool used to study microglial biology ex vivo. The present method details a procedure ...

Isolation, Identification, and Purification of Murine Thymic Epithelial Cells

Isolasjon, Identifikasjon, og rensing av Muse thymisk Epitelceller

The thymus is a vital organ for T lymphocyte development. Of thymic stromal cells, thymic epithelial cells (TECs) are particularly crucial at multiple ...

Isolation of Murine Lymph Node Stromal Cells

Isolering av Murint Lymph Node stromale celler

Secondary lymphoid organs including lymph nodes are composed of stromal cells that provide a structural environment for homeostasis, activation and ...

Generation of Two-color Antigen Microarrays for the Simultaneous Detection of IgG and IgM Autoantibodies

Generering av To-farge Antigen Mikromatriser for samtidig påvisning av IgG og IgM autoantistoffer

Autoantibodies, which are antibodies against self-antigens, are present in many disease states and can serve as markers for disease activity. The levels ...

An Optimized Protocol to Analyze Glycolysis and Mitochondrial Respiration in Lymphocytes

En optimalisert protokollen til Analyser glykolyse og mitokondrie respirasjon i lymfocytter

Lymphocytes respond to a variety of stimuli by activating intracellular signaling pathways, which in turn leads to rapid cellular proliferation, migration ...

Isolation of Extracellular Vesicles from Murine Bronchoalveolar Lavage Fluid Using an Ultrafiltration Centrifugation Technique

Isolering av ekstracellulære blemmer fra Murine Bronchoalveolar Lavage – bruk en ultrafiltrasjon sentrifugering teknikk

Extracellular vesicles (EVs) are newly discovered subcellular components that play important roles in many biological signaling functions during ...

An Immunological Model for Heterotopic Heart and Cardiac Muscle Cell Transplantation in Rats

En immunologisk modell for heterotopisk hjerte og hjerte muskel celle transplantasjon i rotter

Heterotopic heart transplantation in rats has been a commonly used model for diverse immunological studies for more than 50 years. Several modifications ...

Optimization of the Cuff Technique for Murine Heart Transplantation

Optimalisering av mansjettteknikken for Murine hjertetransplantasjon

Murine cardiac transplantation has been performed for more than 40 years. With advancements in microsurgery, certain new techniques have been used to ...