Name: a modified murine heterotopic heart transplant protocol matching contemporary standards of aseptic technique, anesthesia, and analgesia
Uploaded: 2022-09-28T13:20:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Modified Murine Heterotopic Heart Transplant Protocol Matching Contemporary Standards of Aseptic Technique, Anesthesia, and Analgesia at JoVE.com

Författarna vill erkänna de fantastiska ansträngningarna från djurvårdspersonalen vid University of Western Australia och Harry Perkins Institute of Medical Research, vars engagemang och expertis bidrog till genomförbarheten och framgången för dessa operationer.

Denna forskning utfördes i enlighet med Code of Practice for the Care and Use of Animals for Scientific Purposes15 och godkändes enligt djuretiska protokoll RA/3/100/1568 och AE173 (University of Western Australia Animal Ethics Committee respektive Harry Perkins Institute of Medical Research Animal Ethics Committee). Se materialförteckningen för detaljer om alla material, instrument och djur som används i detta protokoll.
1. Förberedelse av ...

<ol>
	<li>Mann, F. C., Priestley, J. T., Markowitz, J., Yater, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+the+intact+mammalian+heart.">Transplantation of the intact mammalian heart.</a> Archives of Surgery. 26 (2), 219-224 (1933).</li><li>Neptune, W. B., Cookson, B. A., Bailey, C. P., Appler, R., Rajkowski, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complete+homologous+heart+transplantation.">Complete homologous heart transplantation.</a> A.M.A. Archives of Surgery. 66 (2), 174-178 (1953).</li><li>Downie, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Homotransplantation+of+the+dog+heart.">Homotransplantation of the dog heart.</a> A.M.A. Archives of Surgery. 66 (5), 624-636 (1953).</li><li>Blanco, G., Adam, A., Rodriguezperez, D., Fernandez, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complete+homotransplantation+of+canine+heart+and+lungs.">Complete homotransplantation of canine heart and lungs.</a> A.M.A. Archives of Surgery. 76 (1), 20-23 (1958).</li><li>Abbott, C. P., Lindsey, E. S., Creech, O., Dewitt, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+technique+for+heart+transplantation+in+the+rat.">A technique for heart transplantation in the rat.</a> Archives of Surgery. 89, 645-652 (1964).</li><li>Ono, K., Lindsey, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+technique+of+heart+transplantation+in+rats.">Improved technique of heart transplantation in rats.</a> The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 57 (2), 225-229 (1969).</li><li>Corry, R. J., Winn, H. J., Russell, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primarily+vascularized+allografts+of+hearts+in+mice.+The+role+of+H-2D,+H-2K,+and+non-H-2+antigens+in+rejection.">Primarily vascularized allografts of hearts in mice. The role of H-2D, H-2K, and non-H-2 antigens in rejection.</a> Transplantation. 16 (4), 343-350 (1973).</li><li>Joffre, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevention+of+acute+and+chronic+allograft+rejection+with+CD4+CD25+Foxp3++regulatory+T+lymphocytes.">Prevention of acute and chronic allograft rejection with CD4+CD25+Foxp3+ regulatory T lymphocytes.</a> Nature Medicine. 14 (1), 88-92 (2008).</li><li>Gregori, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulatory+T+cells+induced+by+1+alpha,25-dihydroxyvitamin+D3+and+mycophenolate+mofetil+treatment+mediate+transplantation+tolerance.">Regulatory T cells induced by 1 alpha,25-dihydroxyvitamin D3 and mycophenolate mofetil treatment mediate transplantation tolerance.</a> The Journal of Immunology. 167 (4), 1945-1953 (2001).</li><li>Niimi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+technique+for+heterotopic+cardiac+transplantation+in+mice:+Experience+of+3000+operations+by+one+surgeon.">The technique for heterotopic cardiac transplantation in mice: Experience of 3000 operations by one surgeon.</a> The Journal of Heart and Lung Transplantation. 20 (10), 1123-1128 (2001).</li><li>Hasegawa, T., Visovatti, S. H., Hyman, M. C., Hayasaki, T., Pinsky, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterotopic+vascularized+murine+cardiac+transplantation+to+study+graft+arteriopathy.">Heterotopic vascularized murine cardiac transplantation to study graft arteriopathy.</a> Nature Protocols. 2 (3), 471-480 (2007).</li><li>Hoogstraten-Miller, S. L., Brown, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Techniques+in+aseptic+rodent+surgery.">Techniques in aseptic rodent surgery.</a> Current Protocols in Immunology. 82, 1-14 (2008).</li><li>Navarro, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+anesthesia:+The+art+and+science.">Mouse anesthesia: The art and science.</a> ILAR Journal. , (2021).</li><li>Adams, S., Pacharinsak, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+anesthesia+and+analgesia.">Mouse anesthesia and analgesia.</a> Current Protocols in Mouse Biology. 5 (1), 51-63 (2015).</li><li>Australian code for the care and use of animals for scientific purposes. NHMRC Available from: <a target="_blank" href="https://www.nhmrc.gov.au/about-us/publications/australian-code-care-and-use-animals-scientific-purposes">https://www.nhmrc.gov.au/about-us/publications/australian-code-care-and-use-animals-scientific-purposes</a> (2013)</li><li>Prosser, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+changes+to+tissue-resident+immunity+after+MHC-matched+and+MHC-mismatched+solid+organ+transplantation.">Dynamic changes to tissue-resident immunity after MHC-matched and MHC-mismatched solid organ transplantation.</a> Cell Reports. 35 (7), 109141 (2021).</li></ol>

Den murina ortotopiska hjärttransplantationsmodellen är en robust preklinisk modell som främst används för att undersöka effekterna av MHC-matchning på nivån och arten av immunologisk avstötning och, mer nyligen, effekten av transplantation på bibehållandet av transplantatvävnadsresident immunitet16. Medan vi inledningsvis noggrant följer Corry et al.7-protokollet har vi förfinat protokollet för att införliva bästa praxis för aseptisk teknik, analgesi och ...

Mycket av vår förståelse av immunologi och transplantation har vi att tacka för forskning baserad på experimentella modeller av organtransplantation med hjälp av djur. Sedan den första beskrivningen av vaskulariserad hjärttransplantation hos däggdjur1 har sådana modeller bidragit till kunskap inom omfattande områden, inklusive terapeutisk tillämpning av hypotermi2, fördelarna med att använda specialiserade suturer3 och tekniker för totala lung- och hjärthomotransplantationer4. Utvecklingen av hjärttransplantationsmodeller hos råtta 5,6 gav bredare utrymme för immunologiska experiment på grund av tillgången på olika avelslinjer. Det betydligt bredare utbudet av tillgängliga inavlade och muterade musstammar ledde Corry et al.7 att utveckla en teknik för murin heterotopisk hjärttransplantation på grund av de betydande fördelar som detta sortiment ger transplantationsforskningen. Denna modell har använts i stor utsträckning och har bidragit till en större förståelse för transplantatavstötning8 och terapi9. Sedan den första beskrivningen har tekniken dock varit i stort sett oförändrad förutom några mindre tekniska detaljer som justeringar av positionen för anastomotiska platser10,11.
Sedan integrationen av Corry et al.7-tekniken i våra experiment har vi identifierat lovande områden för att förbättra protokollet, nämligen aseptisk teknik, anestesi och analgesi. Förbättringar på dessa områden förväntades ge en positiv inverkan på försöksresultaten och förbättra djurens välbefinnande. Detta har tidigare visats när aseptisk teknik används vid operationer av små djur eftersom det hjälper till att minska postoperativa infektioner12, vilket inte bara påverkar sjuklighet och dödlighet utan också kan äventyra experiment som är utformade för att bedöma immunsvaret efter transplantationskirurgi. Ur anestesi och smärtstillande synvinkel bidrar användningen av en raffinerad regim till att minska kostnaden för djur och balansera det etiska argumentet för denna kirurgiska modell genom att mildra smärta och lidande hos experimentella ämnen. Vidare begränsar lämplig anestesi och analgesi det smärtassocierade stressresponsen, förbättrar kvaliteten på postoperativ återhämtning och i slutändan ökar den kirurgiska framgångsgraden13.
I syfte att förbättra både djurskydd och försöksresultat utvecklades ett protokoll med justeringar för att överbrygga dessa luckor. Detta protokoll har anpassats från det som ursprungligen beskrivits av Corry et al.7 med samråd från en veterinärmedicinsk anestesiläkare och med vederbörlig hänsyn till både effekterna och varaktigheten av effekterna av de farmakologiska ingrepp som används i anestesi- och smärtstillande regimen. Tillvägagångssättet baserades på principerna om balanserad anestesi och multimodal analgesi för att säkerställa lämplig perioperativ vård14. Förutom tillämpningen av aseptisk teknik administrerades opioiden buprenorfin och lokalbedövningsmedlet bupivakain i förebyggande syfte. Allmän anestesi utfördes med hjälp av inhalationsanestesimedlet isofluran.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>2030 Rycroft irrigating cannula 30 G</td>
			<td>McFarlane</td>
			<td>56005HU</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Braided surgical silk 7-0</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bulldog clamp curved - 35 mm&#160;</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-7441-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bupivacaine 0.25%&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Castroviejo needle holder catch curved -&#160; 145 mm</td>
			<td>Haag-Streit</td>
			<td>11.62.15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chlorhexidine 5% solution</td>
			<td>Ebos</td>
			<td>JJ61371</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton-tipped applicator - 7.5 cm</td>
			<td>Dove</td>
			<td>SN109510</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol 70% solution</td>
			<td>Ebos</td>
			<td>WH130192EE</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gauze 5 x 5 cm white</td>
			<td>Aero</td>
			<td>AGS50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gelfoam 80 mm x 125 mm&#160;</td>
			<td>Pfizer</td>
			<td>7481D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hair clipper</td>
			<td>Wahl</td>
			<td>9860L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin 1,000 IU in 1 mL</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris SuperCut scissors straight - 11.5 cm&#160;&#160;</td>
			<td>Inka Surgical&#160;</td>
			<td>11550.11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane vaporiser</td>
			<td>Darvall</td>
			<td>9176</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro bulldog clamp - 3.7 cm</td>
			<td>Greman</td>
			<td>14119-G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro scissors curved 105 mm&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micropore plain paper surgical tape - 2.5 cm wide</td>
			<td>Ebos</td>
			<td>7810L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsurgical scissors - curved tip</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monofilament polyprolene suture - 5/0</td>
			<td>Surgipro</td>
			<td>P-205-X</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Myweigh i101 Precision Scale 100 g x 0.005 g</td>
			<td>Myweigh</td>
			<td>Kit00053</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle - 30 G x 0.5 inch</td>
			<td>BD</td>
			<td>BD304000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needleholder 15 cm curved &#34;super fine&#34;</td>
			<td>Surgical Specialists</td>
			<td>ST-B-15-8.2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nylene 10/0 x 15 cm on 3.8 mm 3/8 circle round bodied taper (diam 0.07mm) CV300</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round body suture forceps curved 0.3 mm 120 mm</td>
			<td>B. Braun</td>
			<td>FD281R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round body suture forceps straight 0.3 mm 120 mm</td>
			<td>B. Braun</td>
			<td>FD280R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round handled vannas spring scissors-str/12.5 cm</td>
			<td></td>
			<td>15400-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spring scissors-Cvd Sm blades</td>
			<td></td>
			<td>15001-08</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stevens scissors blunt straight 110 mm</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical backboard</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Rigid laminated cardboard. 15 x 15 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical drapes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Cut into two sizes. 25 cm x 25 cm, and 25 cm x 40 cm&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical microscope</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe - 1 mL</td>
			<td>BD</td>
			<td>592696</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe - 3 mL</td>
			<td>Leica</td>
			<td>M651</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Toothed forceps</td>
			<td>BD</td>
			<td>309657</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>University of Wisconsin Solution</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Warming pad</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Far infrared warming pad 20 x 25 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Westcott spring scissors</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yasargil clip applier bayonet</td>
			<td>Aesculap</td>
			<td>FE582K</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yasargil titanium clip perm 6.6 mm</td>
			<td>Aesculap</td>
			<td>A19FT222T</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse usage</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Strain/SEX/Weight</td>
			<td>Donor</td>
			<td>Recipent</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BALB/c, female, 19-23 g</td>
			<td>7</td>
			<td>21</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6, female, 17-20 g</td>
			<td>7</td>
			<td>0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD45.1 BALB/c, female, 17-21 g</td>
			<td>5</td>
			<td>0</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a modified murine heterotopic heart transplant protocol matching contemporary standards of aseptic technique, anesthesia, and analgesia

Utvecklingen av experimentella modeller för hjärttransplantation hos djur har bidragit till många framsteg inom immunologi och organtransplantation. Medan den heterotopiska vaskulariserade murina hjärttransplantationsmodellen ursprungligen användes i studier av transplantatavstötning med kombinationer av felaktiga inavlade musstammar, kan tillgång till genetiskt modifierade stammar och terapeutiska modaliteter ge kraftfulla nya prekliniska insikter. I grund och botten har den kirurgiska metoden för denna teknik inte förändrats sedan dess utveckling, särskilt med avseende på viktiga faktorer som aseptisk teknik, anestesi och analgesi, vilket gör materiella effekter på postkirurgisk sjuklighet och dödlighet. Dessutom förväntas förbättringar i perioperativ hantering ge förbättringar i både djurskydd och försöksresultat. Denna uppsats rapporterar om ett protokoll som utvecklats i samarbete med en ämnesexpert inom veterinäranestesi och beskriver den kirurgiska tekniken med tonvikt på perioperativ hantering. Dessutom diskuterar vi konsekvenserna av dessa förbättringar och ger information om felsökning av kritiska kirurgiska steg för denna procedur.

För att bestämma effektiviteten av den kirurgiska tekniken för att främja goda resultat av sårläkning och musåterhämtning bestämde tidiga experiment i laboratoriet överlevnadsegenskaperna hos en rad hjärttransplantat med varierande immunogenicitet för mottagaren. Dessa inkluderade kongena (n = 5) och syngena (n = 5) transplantat, som delar samma stora histokompatibilitetskomplex (MHC) markörer som mottagaren, och större missmatchningstransplantat (n = 9), där transplantatet och mottagaren har olika MHC-mar...

Watch this Scientific Journal Video about A Modified Murine Heterotopic Heart Transplant Protocol Matching Contemporary Standards of Aseptic Technique, Anesthesia, and Analgesia at JoVE.com

A Modified Murine Heterotopic Heart Transplant Protocol Matching Contemporary Standards of Aseptic Technique, Anesthesia, and Analgesia

Denna artikel beskriver en modifierad teknik för heterotopisk vaskulariserad hjärttransplantation med uppdaterad aseptisk teknik, analgesi och anestesi.

Ett modifierat murint heterotopiskt hjärttransplantationsprotokoll som matchar samtida standarder för aseptisk teknik, anestesi och analgesi

The development of experimental models of cardiac transplantation in animals has contributed to many advances in the fields of immunology and solid organ ...

Detta är en ekonomisk och reproducerbar modell för hjärttransplantation. Det kan användas både för att förbättra mikrokirurgiska färdigheter och möjliggöra användning av genetiskt modifierade musstammar som givare eller mottagare. Tekniken omfattar i stort sett all smärtlindring och bedövningskomplexitet vid normal mänsklig kirurgi för att begränsa sjukligheten efter operationen.Denna modell är avgörande för att studera kirurgiskt inducerad immunitet, effekten av felaktig matchning på transplantatavstötning och transplantationslivslängd. De allmänna kirurgiska tillvägagångssätten i denna modell kan tillämpas i modifierad form på andra mussolida organtransplantationer. Mikroskopisk skala och tillhörande tidsbegränsningar ger en liten felmarginal.Nyckeln till framgång är regelbunden övning med professionell tillsyn, vilket ger specifik feedback på problemområden. Att demonstrera proceduren kommer att vara Liu Liu, en forskningsassistent från mitt laboratorium. Assisterande vid de kirurgiska ingreppen kommer att vara Dr.Wen Hua Huang, Ms.Jas Kaur och Ms.Xiao Zhang.Efter bedövning och avlägsnande av musen från induktionskammaren, ta bort håret genom att raka den ventrala buken noggrant med klippare. I donatorns fall, raka området som sträcker sig från könsorganen till den övre marginalen av den ventrala bröstkorgen. Se till att det rakade området når midaxillära linjen i sidled.Övervaka temperaturen genom att sätta in en ren smord rektal sond i djurets rektum och sedan säkra den till operationskortet med mikroportejp. Bedöm bedövningsdjupet genom att observera svar på stimulering av tassen eller svansen från tryck som appliceras av traumatiska pincett, palpebralreflexen och muskeltonen. Mät andningsfrekvensen genom att observera bröstväggens rörelse medan du observerar andningsansträngningen för att bedöma tidalvolymen och beräkna sedan andningsfrekvensen enligt beskrivningen i manuskriptet.När operationsområdet desinficeras med sterila bomullsapplikatorer, applicera klorhexidin i en cirkulär rörelse från operationsområdet till kanterna tre gånger, följt av en kombination av klorhexidin och etanol i samma mönster. Förbered det kirurgiska fältet genom att placera sterila kirurgiska draperier på vardera sidan av operationskortet som plats för att placera sterila instrument. Efter att ha gjort en liten ovalformad öppning i draperiet, placera det fenestrerade draperiet vid det föreslagna snittstället.Efter att ha förberett djuret som visats tidigare, applicera ögonsmörjmedel. Använd en 29-gauge insulinspruta längs det planerade snittstället, injicera subkutant en viktbaserad dos bupivakain i den ventrala buken och leta efter en rak linje av synlig blebbing som täcker omfattningen av det planerade snittet. Använd sedan ett sterilt kirurgiskt skalpellblad för att göra ett ventralt mittlinjesnitt i huden under åtta gånger förstoring.Se till att laparotomi sträcker sig över underlivet till kostmarginalen. Och sätt in en retraktor för att maximera det kirurgiska fältet. Fukta segmentet av steril gasbindning med uppvärmd 0,9% natriumkloridlösning och placera den vid den överlägsna aspekten av operationsområdet.Använd nu fuktade sterila bomullspinnar för att försiktigt avlägsna tarmarna. Placera dem ovanpå denna gasbindning och linda gasbindningen runt orgeln. Med hjälp av en kombination av bomullsspetsade applikatorer och runda kroppssuturpincett, frigör och mobiliserar bukaortan och sämre vena cava från omgivande vävnader med en trubbig dissektionsteknik.Se till att frigångsområdet ligger mellan kärlens infrarenala aspekt och ovanför förgreningen av aortan. Efter att ha identifierat de bakre bukkärlen, dra försiktigt aortan i en riktning bort från ryggraden med pincett. Gör en kanal på vardera sidan av dessa kärl cefalocaudalt genom att passera de krökta pincetterna bakom bukkärlen.Ligate varje fartyg identifierat och mobiliserat i den planerade anastomotiska zonen med längder av 10-O nylon bunden med instrument i kirurgens knutar med ytterligare ett kast. Isolera det anastomotiska stället från cirkulationen genom att installera en kirurgisk klämma vid bukkärlets huvud och kodändar. Se till att klämmorna korsar båda kärlen i tillräcklig grad för att säkerställa fullständig ocklusion.Använd pincett i den icke-dominerande handen för att stabilisera aortan. Utför en aortotomi med en 30-gauge nål vid den främre aspekten av aortan. Förläng aortomin med hjälp av mikrokirurgisk sax med rak spets.För att utföra adenotomi, använd raka pincett och applicera mild främre dragkraft till den sämre vena cava vid punkten i linje med mitten av aortotomi. Använd böjda mikrokirurgiska saxar med den konkava sidan vänd framåt för att ta bort ett segment av sämre vena cava av samma längd som aortotemi. Tvätta insidan av de öppna kärlen av kvarvarande blod med hepariniserad natriumkloridlösning.Placera donatorhjärtat i buken och se till att den stigande aortan är direkt vid sidan av bukaortomin och hjärtat roteras, så lungartären kan dras över för den andra anastomosen. Använd 10-O nylon, placera en stag sutur mellan 12:00 position av aortotomi och motsvarande extremitet av lumen i den stigande aortan. Använd rakspetspincett i en mikrokirurgisk nålhållare, binda den med tre efterföljande kast av en kirurgs knut och skär ändarna för att lämna cirka två millimeter sutur.Placera en andra vistelsesutur mellan aortotomis position 6:00 och motsvarande aspekt av den stigande aortan. Eftersom denna sutur också kommer att fungera som bas för efterföljande löpande suturer, lämna minst 10 millimeter av svansen för den ultimata bindningen. Placera en kontinuerlig löpsutur av 10-O nylon på ett stigande sätt för att motsätta sig den anatomiska högra kanten av aortomin och motsvarande fria kanten av den stigande aortan.Utför denna procedur noggrant och använd ungefär fyra kast för denna linje. För den fria änden av suturen runt den distala vistelsesuturen innan du placerar en andra kontinuerlig löpande sutur längs den anatomiska vänstra sidan för att påverka appositionen med den återstående fria kanten av aortotemi. Bind av suturen till svansen med hjälp av en kirurgknut med ytterligare två kast.Placera en vistelsesutur mellan 12:00-positionen för den underlägsna vena cava, venotomi och motsvarande extremitet av lungartärens lumen. Från denna ankarpunkt, placera en kontinuerlig löpande sutur urskiljande mellan lungartärens anatomiska vänstra kant och motsvarande kant av venotomi. För nålen genom 6:00-positionen för venotomi och motsvarande extremitet av lungartärlumen.På ett stigande sätt, passera nålen genom den återstående fria kanten av lungartären och anatomisk höger om venotomi. Använd i genomsnitt fyra kast för denna linje och dra sedan de sista fria kanterna på lungartären och venotomi tillsammans. Knyt av suturens fria ände till ankaret och knyt kirurgens knut med ytterligare två kast med ett instrument och klipp av den extra tråden.Kontrollera kärlen för vridning, vilket skulle störa blodflödet. Placera gelskum över suturlinjen. Placera två bitar av ungefär två millimeter gelskum runt dem och forma så att alla synliga suturlinjer täcks.Släpp kärlklämmorna med början med torskklämman och sedan cephaloklämman. Eftersom en liten mängd blödning förväntas, placera i förebyggande syfte bomullsspetsade applikatorer över de anastomotiska platserna för att ge tryck. Efter att ha fixat de synliga läckorna, kontrollera hjärtat för pulsering.Om det saknas, kontrollera hjärtkärlen för vridning, flytta sedan tarmarna över och runt hjärtat och fukta bukhålan med uppvärmd natriumkloridlösning om den verkar torr. Använd den kontinuerliga icke-avbrutna tekniken och stäng bukhålan med icke-absorberbar 6-O prolene monofilament genom att suturera muskelskiktet först, följt av huden. När mottagaren har tagits bort från operationskortet och av bedövningsmedlet, administrera en milliliter varm saltlösning subkutant och placera mottagaren i en förberedd bur med uppvärmning för observation enligt postoperativa återhämtningsprotokoll.Full återhämtning och acceptans observerades vid syngena och kongena heterotopiska hjärttransplantationer i 100 dagar efter operationen. Emellertid observerades snabb avstötning så tidigt som sju dagar efter operationen vid större felmatchade heterotopiska murina hjärttransplantationer. Under anastomoser måste du upprätthålla medvetenheten om var din sutur är inom det kirurgiska området.Underlåtenhet att göra detta kan leda till kritisk skada på strukturer eller trassel av suturen. Dessa mikrokirurgiska tekniker för dissektion och anastomos är mycket tillämpliga på andra kirurgiska modeller för små däggdjur, inklusive heterotopisk njure och ortotopisk levertransplantation, vilket gör det möjligt för forskare att studera transplantatavstötning.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

A Protocol for Collecting and Staining Hemocytes from the Yellow Fever Mosquito Aedes aegypti

A Protocol for Collecting and Staining Hemocytes from the Yellow Fever Mosquito Aedes aegypti

Ett protokoll för insamling och färgning hemocyter från gula febern Mosquito Aedes aegypti</em

 Mosquitoes are vectors for a number  of disease-causing pathogens such as the yellow fever virus, malaria parasites  and filarial worms. Laboratories are ...

Reverse Genetics Mediated Recovery of Infectious Murine Norovirus

Omvänd genetik Medierad Återvinning av infektiös Murine Norovirus

Human noroviruses are responsible for most cases of human gastroenteritis (GE) worldwide and are recurrent problem in environments where close ...

Isolation of Cortical Microglia with Preserved Immunophenotype and Functionality From Murine Neonates

Isolering av kortikal Mikroglia med Konserverade immunofenotyp och funktionalitet från Murina Nyfödda

Isolation of microglia from CNS tissue is a powerful investigative tool used to study microglial biology ex vivo. The present method details a procedure ...

Isolation, Identification, and Purification of Murine Thymic Epithelial Cells

Isolering, identifiering och rening av murina Thymic epitelceller

The thymus is a vital organ for T lymphocyte development. Of thymic stromal cells, thymic epithelial cells (TECs) are particularly crucial at multiple ...

Isolation of Murine Lymph Node Stromal Cells

Isolering av murint Lymph Node stromaceller

Secondary lymphoid organs including lymph nodes are composed of stromal cells that provide a structural environment for homeostasis, activation and ...

Generation of Two-color Antigen Microarrays for the Simultaneous Detection of IgG and IgM Autoantibodies

Generation av två färger Antigen Microarrays för samtidig detektion av IgG och IgM autoantikroppar

Autoantibodies, which are antibodies against self-antigens, are present in many disease states and can serve as markers for disease activity. The levels ...

An Optimized Protocol to Analyze Glycolysis and Mitochondrial Respiration in Lymphocytes

En optimerad protokoll för att analysera Glycolysis och mitokondrie respiration i lymfocyter

Lymphocytes respond to a variety of stimuli by activating intracellular signaling pathways, which in turn leads to rapid cellular proliferation, migration ...

Isolation of Extracellular Vesicles from Murine Bronchoalveolar Lavage Fluid Using an Ultrafiltration Centrifugation Technique

Isolering av extracellulära blåsor från murina bronkoalveolär Lavage vätska med ultrafiltrering centrifugering teknik

Extracellular vesicles (EVs) are newly discovered subcellular components that play important roles in many biological signaling functions during ...

An Immunological Model for Heterotopic Heart and Cardiac Muscle Cell Transplantation in Rats

En immunologisk modell för heterotopic hjärta och hjärtmuskelcelltransplantation hos råttor

Heterotopic heart transplantation in rats has been a commonly used model for diverse immunological studies for more than 50 years. Several modifications ...

Optimization of the Cuff Technique for Murine Heart Transplantation

Optimering av manschettteknik för Murine Heart Transplantation

Murine cardiac transplantation has been performed for more than 40 years. With advancements in microsurgery, certain new techniques have been used to ...