Name: efficient transfection of in vitro transcribed mrna in cultured cells using peptide-poloxamine nanoparticles
Uploaded: 2022-08-17T14:20:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Efficient Transfection of In vitro Transcribed mRNA in Cultured Cells Using Peptide-Poloxamine Nanoparticles at JoVE.com

Ce travail a été soutenu par la Fondation nationale des sciences naturelles de Chine (NSFC, subvention n ° 82041045 et 82173764), le projet majeur de l’étude sur la pathogenèse et le système technologique de prévention des épidémies (2021YFC2302500) par le ministère des Sciences et de la Technologie de Chine, le projet Chongqing Talents: Exceptional Young Talents (CQYC202005027) et la Fondation des sciences naturelles de Chongqing (cstc2021jcyj-msxmX0136). Les auteurs remercient le Dr Xiaoyan Ding d’avoir mesuré le diamètre hydrodynamique (nm) et l’indice de polydispersité (PDI).

1. Transcription in vitro d’ARNm chimiquement modifié
REMARQUE: Il est nécessaire d’utiliser des tubes sans nucléase, des réactifs, de la verrerie, des pointes de pipettes, etc., car les RNases sont omniprésentes dans l’environnement, tels que les solutions de laboratoire, les surfaces d’instruments, les cheveux, la peau, la poussière, etc. Nettoyez soigneusement les surfaces de paillasse et les pipettes avant utilisation, et portez des gants pour éviter ...

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	<li>Nature milestones in vaccines. Springer Nature Available from: <a target="_blank" href="https://www.nature.com/collections/hcajdiajij">https://www.nature.com/collections/hcajdiajij</a> (2020)</li><li>Barbier, A. J., Jiang, A. Y., Zhang, P., Wooster, R., Anderson, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+clinical+progress+of+mRNA+vaccines+and+immunotherapies.">The clinical progress of mRNA vaccines and immunotherapies.</a> Nature Biotechnology. 40 (6), 840-854 (2022).</li><li>Mulligan, M. 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J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfluidic+formulation+of+nanoparticles+for+biomedical+applications.">Microfluidic formulation of nanoparticles for biomedical applications.</a> Biomaterials. 274, 120826 (2021).</li><li>Han, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+confined+impingement+jets+mixer+for+flash+nanoprecipitation.">A simple confined impingement jets mixer for flash nanoprecipitation.</a> Journal of Pharmaceutical Sciences. 101 (10), 4018-4023 (2012).</li></ol>

Le protocole décrit ici permet non seulement la production rentable et rapide de formulations de vaccins à ARNm IVT avec des propriétés définies, mais il offre également la possibilité de personnaliser la formulation PP-sNp en fonction d’objectifs thérapeutiques spécifiques, tels que la thérapie génique. Afin d’assurer la génération réussie de l’ARNm IVT / PP-sNp, il est suggéré de porter une attention particulière à certaines étapes critiques. Lorsque vous travaillez avec l’ARNm, rappelez-vous...

La vaccination a été annoncée comme l’une des interventions médicales les plus efficaces pour réduire la morbidité et la mortalité causées par les maladies infectieuses1. L’importance des vaccins a été démontrée depuis l’épidémie de maladie à coronavirus 2019 (COVID-19). Contrairement au concept traditionnel d’injection d’agents pathogènes inactivés ou vivants atténués, les approches vaccinales de pointe, telles que les vaccins à base d’acides nucléiques, se concentrent sur la préservation des propriétés immunostimulantes des agents pathogènes cibles tout en évitant les problèmes d’innocuité potentiels associés aux vaccins conventionnels à base de virus microbiens entiers ou à bactéries. Les vaccins à base d’ADN et d’ARN (c.-à-d. ARN messager transcrit in vitro, ARNm IVT) présentent un potentiel prophylactique à thérapeutique contre diverses maladies, y compris les maladies infectieuses et les cancers 2,3. En principe, le potentiel des vaccins à base d’acides nucléiques est lié à leur production, à leur efficacité et à leur innocuité4. Ces vaccins peuvent être fabriqués sans cellules pour permettre une production rentable, évolutive et rapide.
Un seul vaccin à base d’acide nucléique peut coder pour plusieurs antigènes, ce qui permet de cibler de nombreuses variantes virales ou bactéries avec un nombre réduit d’inoculations et de renforcer la réponse immunitaire contre les agents pathogènes résilients 5,6. En outre, les vaccins à base d’acides nucléiques pourraient imiter le processus d’invasion naturel d’une infection virale ou bactérienne, apportant à la fois des réponses immunitaires médiées par les cellules B et T. Contrairement à certains vaccins à base de virus ou d’ADN, les vaccins à base d’ARNm IVT offrent un énorme avantage en termes de sécurité. Ils peuvent rapidement exprimer l’antigène désiré dans le cytosol et ne sont pas intégrés dans le génome de l’hôte, ce qui évite les inquiétudes concernant la mutagénèse insertionnelle7. L’ARNm IVT est automatiquement dégradé après une traduction réussie, de sorte que sa cinétique d’expression protéique peut être facilement contrôlée 8,9. Catalysés par la pandémie de coronavirus 2 du syndrome respiratoire aigu sévère (SRAS-CoV-2), les efforts des entreprises / institutions du monde entier ont permis la mise sur le marché de nombreux types de vaccins. La technologie vaccinale à base d’ARNm IVT présente un grand potentiel et, pour la première fois, a démontré son succès précédemment attendu, en raison de sa conception rapide et de sa capacité flexible à s’adapter à n’importe quel antigène cible en quelques mois. Le succès des vaccins à ARNm IVT contre la COVID-19 dans les applications cliniques a non seulement ouvert une nouvelle ère de recherche et de développement de vaccins à ARNm IVT, mais a également accumulé une expérience précieuse pour le développement rapide de vaccins efficaces pour faire face aux épidémies de maladies infectieuses10,11.
Malgré le potentiel prometteur des vaccins à ARNm IVT, l’administration intracellulaire efficace de l’ARNm IVT au site d’action (cytoplasme) continue de poser un obstacle majeur12, en particulier pour ceux administrés par les voies respiratoires4. L’ARNm IVT est intrinsèquement une molécule instable avec une demi-vie extrêmement courte (~7 h)13, ce qui rend l’ARNm IVT très sujet à la dégradation par l’omniprésente RNase14. Les lymphocytes du système immunitaire inné ont tendance à engloutir l’ARNm IVT reconnu en cas d’application in vivo . De plus, la densité de charge négative élevée et le poids moléculaire élevé (1 x 104-1 x 106 Da) de l’ARNm IVT altèrent sa perméation efficace à travers la bicouche lipidique anionique des membranes cellulaires15. Par conséquent, un système d’administration avec certains matériaux biofonctionnels est nécessaire pour inhiber la dégradation des molécules d’ARNm IVT et faciliter l’absorption cellulaire16.
Mis à part quelques cas exceptionnels dans lesquels l’ARNm IVT nu a été directement utilisé pour des investigations in vivo, divers systèmes d’administration sont utilisés pour transporter l’ARNm IVT vers le site d’action thérapeutique17,18. Des études antérieures ont révélé que seuls quelques ARNm IVT sont détectés dans le cytosol sans l’aide d’un système d’administration19. De nombreuses stratégies ont été développées pour améliorer la livraison de l’ARN avec des efforts continus sur le terrain, allant de la condensation de protamine à l’encapsulationlipidique 20. Les nanoparticules lipidiques (LNP) sont les plus avancées cliniquement parmi les véhicules d’administration d’ARNm, comme le prouve le fait que tous les vaccins à ARNm COVID-19 approuvés pour un usage clinique utilisent des systèmes d’administration basés sur la LNP21. Cependant, les LNP ne peuvent pas arbitrer une transfection efficace de l’ARNm lorsque les formulations sont administrées par voie respiratoire22, ce qui limite remarquablement l’application de ces formulations pour induire des réponses immunitaires muqueuses ou traiter des maladies pulmonaires telles que la mucoviscidose ou le déficit en α1-antitrypsine. Par conséquent, le développement d’un nouveau système d’administration pour faciliter la livraison et la transfection efficaces de l’ARNm IVT dans les cellules liées aux voies respiratoires est nécessaire pour répondre à ce besoin non satisfait.
Il a été confirmé que le système d’administration de nanoparticules auto-assemblées peptide-poloxamine (PP-sNp) peut arbitrer la transfection efficace des acides nucléiques dans les voies respiratoires des souris23. Le PP-sNp adopte une approche de conception modulaire multifonctionnelle, qui peut intégrer différents modules fonctionnels dans les nanoparticules pour un criblage et une optimisation rapides23. Les peptides synthétiques et les copolymères blocs amphiphiles électriquement neutres (poloxamine) au sein du PP-sNp peuvent interagir spontanément avec l’ARNm IVT pour générer des nanoparticules uniformément distribuées avec une structure compacte et une surface lisse23. PP-sNp peut améliorer l’effet de transfection génique des molécules d’ARNm IVT dans les cellules en culture et les voies respiratoires de souris23. La présente étude décrit un protocole de génération d’ARNm PP-sNp contenant de l’IVT codant pour la Metridia luciferase (MetLuc-mRNA) (Figure 1). Un mélange contrôlé et rapide via un dispositif de mélange microfluidique, qui utilise la conception de mélange à chevrons décalés, est utilisé dans ce protocole. La procédure est facile à exécuter et permet la génération de PP-sNp avec des tailles plus uniformes. L’objectif général de la production de PP-sNp à l’aide du mélangeur microfluidique est de créer du PP-sNp pour la complexation de l’ARNm de manière bien contrôlée, permettant ainsi une transfection cellulaire efficace et reproductible in vitro. Le présent protocole décrit la préparation, l’assemblage et la caractérisation du PP-sNp contenant de l’ARNm MetLuc.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>BamHI</td>
			<td>Takara</td>
			<td>1010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cap 1 capping system</td>
			<td>Jinan</td>
			<td>M082</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dendritic cell-line</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>SCC142</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNA sequence</td>
			<td>Genescript</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human bronchial epithelial cells</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>SCC150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KpnI</td>
			<td>Takara</td>
			<td>1068</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LP</td>
			<td>Beyotime</td>
			<td>C0533</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lithium chloride</td>
			<td>APEXBio</td>
			<td>B6083</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Malvern Zetasizer Nano ZS90</td>
			<td>Malvern</td>
			<td>NB007605</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microfluidic chip</td>
			<td>ZHONGXINQIHENG</td>
			<td>Standard PDMS chip</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microplate readers</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>Varioskan lux</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NanoDrop One</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>ND-ONE-W (A30221)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nuclease-free water</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>AM9932</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OptiMEM</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>31985070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-streptomycin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pseudouridine</td>
			<td>APE&#215;Bio</td>
			<td>B7972</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>QIAprep Spin Miniprep Kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>27106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quanti-Luc</td>
			<td>InvivoGen</td>
			<td>Rep-qlc2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RiboRuler High Range RNA Ladder</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>SM1821</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNase-free conical tube</td>
			<td>Biosharp</td>
			<td>BS-100-M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI Medium 1640</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>C11875500BT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe pump</td>
			<td>Chemyx</td>
			<td>Fusion 101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T7 transcription Kit</td>
			<td>Jinan</td>
			<td>E131</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

efficient transfection of in vitro transcribed mrna in cultured cells using peptide-poloxamine nanoparticles

Les vaccins à ARN messager transcrit in vitro (ARNm) ont montré un énorme potentiel dans la lutte contre la pandémie de maladie à coronavirus 2019 (COVID-19). Des systèmes d’administration efficaces et sûrs doivent être inclus dans les vaccins à ARNm en raison des propriétés fragiles de l’ARNm. Un système de livraison de gènes de nanoparticules peptide-poloxamine (PP-sNp) auto-assemblé est spécialement conçu pour l’administration pulmonaire d’acides nucléiques et présente des capacités prometteuses dans la médiation d’une transfection réussie de l’ARNm. Ici, une méthode améliorée de préparation de PP-sNp est décrite pour expliquer comment le PP-sNp encapsule l’ARNm de la Metridia luciferase (MetLuc) et transfecte avec succès les cellules en culture. L’ARNm MetLuc-est obtenu par un processus de transcription in vitro à partir d’un modèle d’ADN linéaire. Un PP-sNp est produit en mélangeant un peptide synthétique / poloxamine avec une solution d’ARNm à l’aide d’un mélangeur microfluidique, permettant l’auto-assemblage de PP-sNp. La charge de PP-sNp est ensuite évaluée en mesurant le potentiel zêta. Pendant ce temps, la polydispersité et la taille hydrodynamique des nanoparticules PP-sNp sont mesurées à l’aide de la diffusion dynamique de la lumière. Les nanoparticules d’ARNm / PP-sNp sont transfectées dans des cellules en culture, et les surnageants de la culture cellulaire sont dosés pour l’activité de la luciférase. Les résultats représentatifs démontrent leur capacité de transfection in vitro. Ce protocole pourrait faire la lumière sur le développement de systèmes d’administration de vaccins à ARNm de nouvelle génération.

Le plasmide recombinant a été digéré pour produire la matrice d’ADN linéarisée (Figure 2A). En utilisant le protocole décrit, le kit de transcription in vitro T7 peut produire jusqu’à 80-120 μg d’ARNm MetLuc non coiffé par réaction de 20 μL et 50-60 μg d’ARNm MetLuc-coiffé par réaction de 100 μL. Lorsqu’il est analysé par électrophorèse, l’ARNm MetLuc intact de haute qualité doit présenter une bande unique et claire, comme le montre <strong class="xf...

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Efficient Transfection of In vitro Transcribed mRNA in Cultured Cells Using Peptide-Poloxamine Nanoparticles

Une nanoparticule peptide-poloxamine auto-assemblée (PP-sNp) est développée à l’aide d’un dispositif de mélange microfluidique pour encapsuler et délivrer in vitro de l’ARN messager transcrit. L’ARNm/PP-sNp décrit pourrait transfecter efficacement des cellules cultivées in vitro.

Transfection efficace d’ARNm transcrit in vitro dans des cellules cultivées à l’aide de nanoparticules de peptide-poloxamine

In vitro transcribed messenger RNA (mRNA) vaccines have displayed enormous potential in fighting against the coronavirus disease 2019 (COVID-19) pandemic. ...

Les nanoparticules de peptide-poloxamine sont l’un des systèmes potentiels de livraison d’ARNm pulmonaire. Notre protocole fabrique les nanoparticules peptide-poloxamine avec une productivité et une efficacité plus élevées, ce qui facilite le développement du vaccin à ARNm muqueux. Les matériaux requis par la technique sont peu coûteux et le protocole peut être complété en peu de temps.Les nanoparticules de peptide-poloxamine ont la capacité de servir de médiateur à une transfection efficace de l’ARNm. Les nanoparticules de peptide-poloxamine ont montré une transfection réussie de l’ARNm dans les cellules épithéliales bronchiques humaines, ce qui implique des applications supplémentaires pour les vaccins muqueux contre la COVID-19, le traitement des cancers du poumon et la thérapie génique de la fibrose kystique. Je m’attends à ce que la personne ait des connaissances de base dans un domaine connexe et avec le protocole et beaucoup de techniques aussi, avant de commencer à effectuer les expériences.Après avoir synthétisé le cadre de lecture ouvert de Metridia luciferase et l’avoir cloné dans le vecteur pUC57, préparez un modèle d’ADN linéarisé en utilisant BamHI et KpnI à 37 degrés Celsius pendant une heure. Préparer une réaction de volume de 20 microlitres pour la synthèse de l’ARNm à l’aide d’un kit de transcription T7 et de pseudouridine comme décrit dans le manuscrit. Bien mélanger les composants et incuber à 37 degrés Celsius pendant trois heures.Ensuite, retirez la structure secondaire de 50 microgrammes d’ARNm IVT non coiffé en le chauffant à 65 degrés Celsius pendant 10 minutes. Utiliser le système de coiffage de la coiffe de la coiffe de l’ARNm de la IVT et préparer la coiffe de la coiffe de la 7-méthylguanosine à l’aide de la S-adénosylméthionine et des 2'O-méthyltransférases à 37 degrés Celsius pendant 30 à 60 minutes. Mesurer la concentration d’ARNm IVT coiffé avec un spectrophotomètre UV-visible.À l’aide d’un marqueur d’ARN, analyser la taille moléculaire de l’ARNm IVT coiffé dans un gel d’agarose dénaturant à 1% de formaldéhyde contenant 18% de formaldéhyde. Préparer une solution mère de poloxamine 704 à 10 milligrammes par millilitre en solubilisant le T704 dans de l’eau exempte de nucléase. Préparer 2 milligrammes par millilitre de solution mère du peptide en solubilisant le peptide dans de l’eau sans nucléase.Conservez la solution préparée à 4 degrés Celsius. Décongeler l’ARNm IVT sur la glace. Avant d’ouvrir le tube, centrifuger le tube à 300 fois G pendant trois secondes à température ambiante et diluer la solution d’ARNm IVT avec de l’eau sans nucléase.Préparer T704 et la solution de mélange de peptides synthétiques en diluant la solution de T704 à huit microgrammes par concentration de microlitre et la solution de peptide synthétique à 0,555 microgramme par concentration de microlitre, avec de l’eau sans nucléase, respectivement. Incuber la solution mélangée pendant 15 minutes à température ambiante avant de l’utiliser à nouveau. Aspirez la solution d’ARNm IVT dans une seringue d’un millilitre, en évitant les trous d’air ou les bulles dans l’extrémité de la seringue.Chargez la seringue sur un côté de la cartouche, à côté du bloc rotatif. Ensuite, remplissez une seringue d’un millilitre avec T704 et une solution de mélange de peptides synthétiques, et retirez les bulles ou les espaces d’air à l’extrémité de la seringue. Placez la seringue dans l’autre entrée de la pompe et réglez la pompe avec un débit total de 4 à 10 millilitres par minute.Placez un tube conique sans RNase de dix millilitres pour recueillir la solution mixte IVT ARNm/PP-sNp à la fin du trajet d’écoulement du dispositif de mélange. Faites fonctionner la pompe pour démarrer le mélange, en vous assurant que les paramètres sont entrés correctement. Après avoir fait fonctionner la pompe pendant six secondes, prélever l’échantillon d’ARNm/PP-sNp IVT dans le tube conique.Plaquez des cellules épithéliales bronchiques humaines et une lignée cellulaire dendritique dans des plaques de 96 puits 24 heures avant la transfection. Cultiver les cellules dans un milieu de culture supplémenté avec 10% de sérum fœtal bovin inactivé par la chaleur et 1% de streptomycine à la pénicilline. Après avoir retiré le milieu de croissance, lavez les cellules plaquées avec 0,2 millilitre par puits PBS.Ajouter 170 microlitres de milieu de culture sans sérum à chaque puits contenant les cultures cellulaires plaquées. Ensuite, ajoutez 30 microlitres de formulation IVT mRNA/PP-sNp contenant 0,4 microgramme d’ARNm Metridia luciferase goutte à goutte dans chaque puits. Incuber les cellules avec la formulation IVT mRNA/PP-sNp dans une atmosphère humidifiée enrichie en dioxyde de carbone à 5% à 37 degrés Celsius pendant quatre heures.Aspirer le milieu de transfection et ajouter 0,2 millilitre de milieu de culture frais complété par 10% de sérum fœtal bovin inactivé par la chaleur et 1% de streptomycine pénicilline. Incuber les cellules transfectées pendant 24 heures comme démontré précédemment et recueillir les surnageants à détecter dans chaque puits. Préparer une solution de dosage fraîche en ajoutant du PBS au substrat de la coelentérazine.Bien mélanger la solution en tourbillonnant pendant 10 secondes. Ajouter 50 microlitres du surnageant collecté à une plaque de 96 puits. Configurez le lecteur de microplaques avec un temps de lecture de 1 000 millisecondes et ajoutez 30 microlitres de solution de coelentérazine à chaque puits manuellement ou par injection automatisée.Immédiatement après avoir ajouté la solution de coelentérazine au surnageant, cliquez sur Démarrer pour mesurer le signal de luminescence. Le plasmide recombinant a été isolé et digéré pour produire le modèle d’ADN linéarisé. La transcription in vitro a produit un ARNm de MetLuc coiffé et plafonné.Les cellules transfectées avec l’ARNm/PP-sNp de Metridia luciférase ont montré une expression significativement plus élevée de luciférase par rapport à celles transfectées avec un réactif de transfection à base de lipides disponible dans le commerce, un ARNm de Metridia luciferase nu, PBS ou peptides synthétiques T7044, une solution mixte dans des cellules épithéliales bronchiques humaines, 16 HBE, et la lignée cellulaire dendritique DC2.4 Metridia luciferase mRNA / PP-sNp a montré une expression de luciférase plus élevée que LP.suggère que le système d’administration PP-sNp est important pour protéger l’ARNm MetLuc contre la dégradation et promouvoir l’efficacité de la transfection de l’ARNm exogène Metridia luciferase. Veuillez vous assurer que la structure synthétique de l’ARNm Met non coiffé est éliminée avec succès. Calculez et téléchargez soigneusement l’ARNm Met-T704 et le composé peptidique pour préparer et compacter les nanoparticules de poloxamine.La microscopie électronique à transmission peut être réalisée pour observer la morphologie des nanoparticules de peptide-poloxamine. Cette technique aide les chercheurs à développer des vaccins à ARNm muqueux et permet un criblage à haut débit des formulations de thérapie génique pour toutes les cellules apparentées.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Efficient Transfection of In vitro Transcribed mRNA in Cultured Cells Using Peptide-Poloxamine Nanoparticles

Retroviral Transduction of T-cell Receptors in Mouse T-cells

Transduction rétrovirale des récepteurs de cellules T dans les lymphocytes T de souris

T-cell receptors (TCRs) play a central role in the immune system. TCRs on T-cell surfaces can specifically recognize peptide antigens presented by antigen ...

Recherche

Immunologie et infection

Genotypic Inference of HIV-1 Tropism Using Population-based Sequencing of V3

Inférence génotypique de tropisme du VIH-1 en utilisant la population basée séquençage du V3

Background: Prior to receiving a drug from CCR5-antagonist class in HIV therapy, a patient must undergo an HIV tropism test to confirm that his or her ...

Seven Steps to Stellate Cells

Sept étapes pour Stellate Cellules

Hepatic stellate cells are liver-resident  cells of star-like morphology and are located in the space of Disse between  liver sinusoidal endothelial cells ...

Optimized Protocol for Efficient Transfection of Dendritic Cells without Cell Maturation

Protocole optimisé pour une transfection efficace des cellules dendritiques, sans maturation cellulaire

Dendritic cells (DCs) can be considered sentinels of the immune system which play a critical role in its initiation and response to infection1. Detection ...

Quantitative In vitro Assay to Measure Neutrophil Adhesion to Activated Primary Human Microvascular Endothelial Cells under Static Conditions

Quantitative In vitro Assay to Measure Neutrophil Adhesion to Activated Primary Human Microvascular Endothelial Cells under Static Conditions

Quantitative<em&gt; In vitro</em&gt; Test pour mesurer l&#39;adhésion des neutrophiles à Activé cellules endothéliales microvasculaires humaines primaires dans des conditions statiques

The vascular  endothelium plays an integral part in the inflammatory response. During the  acute phase of inflammation, endothelial cells (ECs) are ...

Using Fluorescent Proteins to Visualize and Quantitate Chlamydia Vacuole Growth Dynamics in Living Cells

Using Fluorescent Proteins to Visualize and Quantitate Chlamydia Vacuole Growth Dynamics in Living Cells

Utilisation de protéines fluorescentes de visualiser et de quantifier<em&gt; Chlamydia</em&gt; Vacuole la dynamique de croissance dans les cellules vivantes

The obligate intracellular bacterium Chlamydia elicits a great burden on global public health. C.&#160;trachomatis is the leading bacterial cause of ...

Killer Artificial Antigen Presenting Cells (KaAPC) for Efficient In Vitro Depletion of Human Antigen-specific T Cells

Killer Artificial Antigen Presenting Cells KaAPC for Efficient In Vitro Depletion of Human Antigen-specific T Cells

Tueur antigène artificielle cellules présentatrices (KaAPC) d&#39;utilisation efficace<em&gt; In Vitro</em&gt; L&#39;épuisement des lymphocytes T humains spécifiques de l&#39;antigène

Current treatment of T cell mediated autoimmune diseases relies mostly on strategies of global immunosuppression, which, in the long term, is accompanied ...

Highly Efficient Transfection of Human THP-1 Macrophages by Nucleofection

La transfection très efficace des droits de THP-1 par les macrophages nucléofection

Macrophages, as key players of the innate immune response, are at the focus of research dealing with tissue homeostasis or various pathologies. ...

Derivation of T Cells In Vitro from Mouse Embryonic Stem Cells

Derivation of T Cells In Vitro from Mouse Embryonic Stem Cells

Dérivation des cellules T<em&gt; In Vitro</em&gt; De la souris les cellules souches embryonnaires

The OP9/OP9-DL1 co-culture system has become a well-established method for deriving differentiated blood cell types from embryonic and hematopoietic ...