Name: efficient transfection of in vitro transcribed mrna in cultured cells using peptide-poloxamine nanoparticles
Uploaded: 2022-08-17T14:20:00
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この研究は、中国国家自然科学財団(NSFC、Grant No. 82041045 and 82173764)、中国科学技術部による病因形成および伝染病予防技術システムに関する研究(2021YFC2302500)、重慶才能:例外的な若い才能プロジェクト(CQYC202005027)、重慶自然科学財団(cstc2021jcyj-msxmX0136)の支援を受けた。著者らは、流体力学的直径(nm)と多分散度指数(PDI)を測定したXiaoyan Ding博士に感謝している。

1. 化学修飾mRNAの インビトロ 転写
注:RNaseは実験室の溶液、器具の表面、髪、皮膚、ほこりなどの環境に遍在しているため、ヌクレアーゼフリーのチューブ、試薬、ガラス製品、ピペットチップなどを使用する必要があります。使用前にベンチの表面とピペットを徹底的に清掃し、RNase汚染を避けるために手袋を着用してください。
<ol><li>DNAテンプレ?...

<ol>
	<li>Nature milestones in vaccines. Springer Nature Available from: <a target="_blank" href="https://www.nature.com/collections/hcajdiajij">https://www.nature.com/collections/hcajdiajij</a> (2020)</li><li>Barbier, A. J., Jiang, A. Y., Zhang, P., Wooster, R., Anderson, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+clinical+progress+of+mRNA+vaccines+and+immunotherapies.">The clinical progress of mRNA vaccines and immunotherapies.</a> Nature Biotechnology. 40 (6), 840-854 (2022).</li><li>Mulligan, M. 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V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Database+for+mRNA+half-life+of+19+977+genes+obtained+by+DNA+microarray+analysis+of+pluripotent+and+differentiating+mouse+embryonic+stem+cells.">Database for mRNA half-life of 19 977 genes obtained by DNA microarray analysis of pluripotent and differentiating mouse embryonic stem cells.</a> DNA Research. 16 (1), 45-58 (2009).</li><li>Houseley, J., Tollervey, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+many+pathways+of+RNA+degradation.">The many pathways of RNA degradation.</a> Cell. 136 (4), 763-776 (2009).</li><li>Kowalski, P. S., Rudra, A., Miao, L., Anderson, D. 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J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfluidic+formulation+of+nanoparticles+for+biomedical+applications.">Microfluidic formulation of nanoparticles for biomedical applications.</a> Biomaterials. 274, 120826 (2021).</li><li>Han, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+confined+impingement+jets+mixer+for+flash+nanoprecipitation.">A simple confined impingement jets mixer for flash nanoprecipitation.</a> Journal of Pharmaceutical Sciences. 101 (10), 4018-4023 (2012).</li></ol>

ここで説明するプロトコルは、定義された特性を有するIVT mRNAワクチン製剤の費用対効果が高く迅速な製造を可能にするだけでなく、遺伝子治療などの特定の治療目的に応じてPP-sNp製剤をカスタマイズする可能性も提供する。IVT mRNA/PP-sNpの生成を確実に成功させるために、いくつかの重要なステップに特別な注意を払うことが推奨されます。mRNAを扱うときは、IVT mRNAが化学修飾で調製されて?...

ワクチン接種は、感染症によって引き起こされる罹患率および死亡率を低下させるための最も効率的な医学的介入の1つとして予告されている1。ワクチンの重要性は、2019年のコロナウイルス病(COVID-19)の発生以来実証されています。不活化または弱毒化生病原体を注入するという従来の概念とは対照的に、核酸ベースのワクチンなどの最先端のワクチンアプローチは、従来の全微生物ウイルスまたは細菌ベースのワクチンに関連する潜在的な安全性の問題を回避しながら、標的病原体の免疫刺激特性を維持することに集中します。DNAおよびRNA(すなわち、 インビトロ転写 メッセンジャーRNA、IVT mRNA)ベースのワクチンは、感染症および癌を含む様々な疾患に対して予防的〜治療的可能性を示す2、3。原則として、核酸ベースのワクチンの可能性は、その生産、有効性、および安全性に関連しています4。これらのワクチンは、費用対効果が高く、スケーラブルで、迅速な生産を可能にするために、無細胞で製造することができます。
単一の核酸ベースのワクチンは、複数の抗原をコードすることができ、接種回数を減らして多数のウイルス変異体または細菌の標的を可能にし、弾力性病原体に対する免疫応答を強化する5,6。さらに、核酸ベースのワクチンは、ウイルスまたは細菌感染の自然な侵入プロセスを模倣し、B細胞およびT細胞媒介性免疫応答の両方をもたらす可能性がある。一部のウイルスまたはDNAベースのワクチンとは異なり、IVT mRNAベースのワクチンは安全性の面で大きな利点を提供します。それらは、細胞質ゾル中で所望の抗原を迅速に発現することができ、宿主ゲノムに組み込まれていないため、挿入突然変異誘発に関する懸念を排除する7。IVT-mRNAは翻訳が成功すると自動的に分解されるため、そのタンパク質発現動態は容易に制御できます8,9。重症急性呼吸器症候群コロナウイルス2(SARS-CoV-2)のパンデミックに触媒され、世界中の企業/機関からの努力により、多くの種類のワクチンが市場にリリースされました。IVT mRNAベースのワクチン技術は大きな可能性を示し、その迅速な設計と数ヶ月以内にあらゆる標的抗原に適応する柔軟な能力により、初めて以前に期待されていた成功を実証しました。臨床応用におけるCOVID-19に対するIVT mRNAワクチンの成功は、IVT mRNAワクチンの研究開発の新時代を開いただけでなく、感染症の発生に対処するための効果的なワクチンの迅速な開発のための貴重な経験を蓄積しました10,11。
IVT mRNAワクチンの有望な可能性にもかかわらず、作用部位(すなわち、細胞質)へのIVT mRNAの効率的な細胞内送達は、特に気道を介して投与されるものに対して、引き続き大きなハードル12を提起している4。IVT mRNAは本質的に非常に短い半減期(〜7時間)13を持つ不安定な分子であり、IVT mRNAはユビキタスRNase14によって分解されやすい。自然免疫系のリンパ球は、in vivo適用の場合に認識されたIVT mRNAを飲み込む傾向がある。さらに、IVT mRNAの高い負電荷密度および大きな分子量(1 x104−1 x106Da)は、細胞膜15のアニオン性脂質二重層全体にわたるその効果的な透過を損なう。したがって、IVT mRNA分子の分解を阻害し、細胞の取り込みを促進するために、特定の生体機能材料を含む送達系が必要である16。
裸のIVT mRNAがインビボ調査に直接利用されたいくつかの例外的なケースを除いて、IVT mRNAを治療的作用部位に運ぶために様々な送達系が使用される17,18。以前の研究は、送達系の助けなしに細胞質ゾルにおいて検出されるIVT mRNAがごくわずかであることが明らかにされている19。RNA送達を改善するために、プロタミン縮合から脂質封入まで、この分野での継続的な努力により、数多くの戦略が開発されています20。脂質ナノ粒子(LNP)は、臨床使用のために承認されたすべてのmRNA COVID-19ワクチンがLNPベースの送達システムを採用しているという事実によって証明されるように、mRNA送達ビヒクルの中で最も臨床的に進歩している21。しかしながら、LNPは、製剤が呼吸経路22を介して送達される場合、効果的なmRNAトランスフェクションを媒介することができず、粘膜免疫応答を誘導すること、または嚢胞性線維症またはα1-アンチトリプシン欠乏症などの肺関連疾患に対処する際のこれらの製剤の適用を著しく制限する。したがって、気道関連細胞におけるIVT mRNAの効率的な送達およびトランスフェクションを容易にする新規送達システムの開発は、この満たされていない必要性を解決するために必要とされる。
ペプチドポロキサミン自己組織化ナノ粒子(PP−sNp)送達系が、マウス23の気道における核酸の効率的なトランスフェクションを媒介し得ることが確認されている。PP-sNpは、多機能モジュラー設計アプローチを採用しており、異なる機能モジュールをナノ粒子に統合して迅速なスクリーニングと最適化を行うことができます23。PP−sNp内の合成ペプチドおよび電気的に中性な両親媒性ブロックコポリマー(ポロキサミン)は、IVT mRNAと自発的に相互作用して、コンパクトな構造および平滑な表面を有する均一に分布したナノ粒子を生成することができる23。PP-sNpは、マウス23の培養細胞および気道におけるIVT mRNA分子の遺伝子導入効果を向上させることができる。本研究は、メトリジア・ルシフェラーゼ(MetLuc−mRNA)をコードするIVT mRNAを含むPP−sNpを生成するためのプロトコールを記載する(図1)。千鳥ヘリンボーン混合設計を採用したマイクロ流体混合装置 を介した 制御された迅速な混合は、このプロトコルで利用されています。この手順は実行が簡単で、より均一なサイズのPP-sNpを生成できます。マイクロ流体ミキサーを使用したPP-sNp生産の一般的な目標は、mRNA複合体形成のためのPP-sNpを十分に制御された方法で作成し、 インビトロでの効率的で再現性のある細胞トランスフェクションを可能にすることです。本プロトコールは、MetLuc−mRNAを含むPP−sNpの調製、組み立て、および特性評価を記載する。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>BamHI</td>
			<td>Takara</td>
			<td>1010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cap 1 capping system</td>
			<td>Jinan</td>
			<td>M082</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dendritic cell-line</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>SCC142</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNA sequence</td>
			<td>Genescript</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human bronchial epithelial cells</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>SCC150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KpnI</td>
			<td>Takara</td>
			<td>1068</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LP</td>
			<td>Beyotime</td>
			<td>C0533</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lithium chloride</td>
			<td>APEXBio</td>
			<td>B6083</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Malvern Zetasizer Nano ZS90</td>
			<td>Malvern</td>
			<td>NB007605</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microfluidic chip</td>
			<td>ZHONGXINQIHENG</td>
			<td>Standard PDMS chip</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microplate readers</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>Varioskan lux</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NanoDrop One</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>ND-ONE-W (A30221)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nuclease-free water</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>AM9932</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OptiMEM</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>31985070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-streptomycin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pseudouridine</td>
			<td>APE&#215;Bio</td>
			<td>B7972</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>QIAprep Spin Miniprep Kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>27106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quanti-Luc</td>
			<td>InvivoGen</td>
			<td>Rep-qlc2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RiboRuler High Range RNA Ladder</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>SM1821</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNase-free conical tube</td>
			<td>Biosharp</td>
			<td>BS-100-M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI Medium 1640</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>C11875500BT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe pump</td>
			<td>Chemyx</td>
			<td>Fusion 101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T7 transcription Kit</td>
			<td>Jinan</td>
			<td>E131</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

efficient transfection of in vitro transcribed mrna in cultured cells using peptide-poloxamine nanoparticles

インビトロ転写 メッセンジャーRNA(mRNA)ワクチンは、コロナウイルス病2019(COVID-19)パンデミックとの戦いにおいて大きな可能性を示しています。mRNAの脆弱な特性のために、効率的で安全な送達システムをmRNAワクチンに含める必要があります。自己組織化ペプチドポロキサミンナノ粒子(PP-sNp)遺伝子送達システムは、核酸の肺送達のために特別に設計されており、成功したmRNAトランスフェクションを媒介する有望な能力を示す。ここでは、PP-sNpを調製するための改良された方法が記載されており、PP-sNpがメトリジアルシフェラーゼ(MetLuc)mRNAをカプセル化し、培養細胞をトランスフェクトする方法について詳述する。MetLuc-mRNAは、線状DNAテンプレートからの インビトロ 転写プロセスによって得られる。PP-sNpは、マイクロ流体ミキサーを用いて合成ペプチド/ポロキサミンとmRNA溶液を混合することにより製造され、PP-sNpの自己組織化を可能にする。PP−sNpの電荷は、その後、ゼータ電位を測定することによって評価される。一方、PP−sNpナノ粒子の多分散性および流体力学的サイズは、動的光散乱を用いて測定される。mRNA/PP-sNpナノ粒子を培養細胞にトランスフェクトし、培養細胞の上清をルシフェラーゼ活性についてアッセイする。代表的な結果は、 インビトロ トランスフェクションに対するそれらの能力を実証する。このプロトコルは、次世代mRNAワクチン送達システムの開発に光を当てる可能性があります。

組換えプラスミドを消化し、直鎖状DNA鋳型を作製した(図2A)。記載されたプロトコルを使用して、T7 in vitro 転写キットは、20 μL反応あたり最大80〜120μgのキャップなしMetLuc-mRNA、および100μL反応あたり50〜60μgのキャップ付きMetLuc-mRNAを製造することができる。電気泳動で分析した場合、高品質のインタクトなMetLuc-mRNAは、 図2Bに示すように、単...

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Efficient Transfection of In vitro Transcribed mRNA in Cultured Cells Using Peptide-Poloxamine Nanoparticles

自己組織化ペプチドポロキサミンナノ粒子(PP-sNp)は、イン ビトロ転写 メッセンジャーRNAをカプセル化および送達するためにマイクロ流体混合装置を使用して開発される。記載されたmRNA/PP-sNpは、 インビトロで培養細胞を効率的にトランスフェクトすることができた。

ペプチドポロキサミンナノ粒子を用いた培養細胞における in vitro 転写mRNAの効率的なトランスフェクション

In vitro transcribed messenger RNA (mRNA) vaccines have displayed enormous potential in fighting against the coronavirus disease 2019 (COVID-19) pandemic. ...

ペプチド-ポロキサミンナノ粒子は、潜在的な肺mRNA送達システムの1つです。私たちのプロトコルは、ペプチドポロキサミンナノ粒子をより高い生産性と効率で作成し、粘膜mRNAワクチンの開発を容易にします。この技術に必要な材料は低コストであり、プロトコルは短時間で完了することができます。ペプチドポロキサミンナノ粒子は、効率的なmRNAトランスフェクションを媒介する能力を有する。ペプチドポロキサミンナノ粒子は、ヒト気管支上皮細胞におけるmRNAトランスフェクションに成功し、粘膜COVID-19ワクチン、肺がんの治療、嚢胞性線維症遺伝子治療への追加応用が示唆されました。私は、個人が実験を開始する前に、関連分野、プロトコル、および多くの技術に関する基本的な知識を持っていることを期待しています。メトリディア・ルシフェラーゼのオープンリーディングフレームを合成し、pUC57ベクターにクローニングした後、BamHIとKpnIを使用して摂氏37度で1時間、線状化DNAテンプレートを調製します。原稿に記載されているように、T7転写キットとシュードウリジンを使用して、mRNA合成のために20マイクロリットル容量の反応を準備します。成分を完全に混合し、摂氏37度で3時間インキュベートします。次に、50マイクログラムのキャップされていないIVT mRNAの二次構造を摂氏65度で10分間加熱して除去します。IVT mRNAキャッピングにはCap 1キャッピングシステムを使用し、S-アデノシルメチオニンと2'O-メチルトランスフェラーゼを使用して摂氏37度で30〜60分間、7-メチルグアノシンキャップ構造を修飾してキャップ1を調製します。キャップされたIVT mRNAの濃度を紫外可視分光光度計で測定します。RNAマーカーを使用して、18%ホルムアルデヒドを含む1%ホルムアルデヒド変性アガロースゲル中のキャップされたIVT mRNAの分子サイズを分析します。T704をヌクレアーゼフリーの水に可溶化することにより、ポロキサミン704の1ミリリットルあたり10ミリグラムのストック溶液を調製します。ペプチドをヌクレアーゼフリーの水に可溶化することにより、ペプチドの1ミリリットルあたり2ミリグラムのストック溶液を調製します。調製した溶液を摂氏4度で保管する。IVT mRNAを氷上で解凍します。チューブを開く前に、チューブを300倍Gで室温で3秒間遠心分離し、IVT mRNA溶液をヌクレアーゼフリー水で希釈します。T704溶液を8マイクログラム/マイクロリットル濃度に、合成ペプチド溶液を0.555マイクログラム/マイクロリットル濃度に希釈し、T704および合成ペプチド混合溶液をそれぞれヌクレアーゼフリー水で調製する。さらに使用する前に、混合溶液を室温で15分間インキュベートします。IVT mRNA溶液を1ミリリットルのシリンジに引き込み、シリンジ先端のエアギャップや気泡を避けます。回転ブロックの横にあるカートリッジの片側にシリンジをロードします。次に、1ミリリットルのシリンジにT704と合成ペプチドミックス溶液を満たし、シリンジ先端の気泡やエアギャップを取り除きます。シリンジをポンプのもう一方の入口に配置し、ポンプの総流量を毎分4〜10ミリリットルに設定します。10ミリリットルのRNaseフリーコニカルチューブを配置して、混合IVT mRNA/PP-sNp溶液を混合装置の流路の端に収集します。ポンプを運転して混合を開始し、パラメータが正しく入力されていることを確認します。ポンプを6秒間運転した後、円錐管からIVT mRNA/PP-sNpサンプルを採取します。ヒト気管支上皮細胞および樹状細胞株をトランスフェクションの24時間前に96ウェルプレートにプレート化します。10%熱不活化ウシ胎児血清と1%ペニシリンストレプトマイシンを添加した培地で細胞を増殖させます。増殖培地を除去した後、播種した細胞をウェル当たり0.2ミリリットルのPBSで洗浄する。播種した細胞培養物を含む各ウェルに170マイクロリットルの無血清培養液を追加します。次に、0.4マイクログラムのメトリジウムルシフェラーゼmRNAを含む30マイクロリットルのIVT mRNA/PP-sNp製剤を各ウェルに滴下します。IVT mRNA/PP-sNp 製剤を含む細胞を、加湿した 5% 二酸化炭素富化雰囲気中、摂氏 37 度で 4 時間インキュベートします。トランスフェクション培地を吸引し、10%熱不活化ウシ胎児血清と1%ペニシリンストレプトマイシンを添加した0.2ミリリットルの新鮮な培養培地を加えます。前に示したように、トランスフェクトした細胞を24時間インキュベートし、各ウェルから検出する上清を収集します。セレンテラジン基質にPBSを添加して、新しいアッセイ溶液を調製する。10秒間ボルテックスして溶液を完全に混合します。採取した上清50マイクロリットルを96ウェルプレートに加える。1, 000ミリ秒の読み取り時間でマイクロプレートリーダーをセットアップし、手動または自動注入によって各ウェルに30マイクロリットルのセレンテラジン溶液を追加します。上清にセレンテラジン溶液を加えた直後に、[開始]をクリックして発光シグナルを測定します。組換えプラスミドを単離し、消化して、直鎖化DNA鋳型を生成した。インビトロ転写は、アップキャップおよびキャップされたMetLuc mRNAを産生した。メトリジウム・ルシフェラーゼmRNA/PP-sNpを導入した細胞は、市販の脂質ベースのトランスフェクション試薬、裸のメトリジウム・ルシフェラーゼmRNA、PBS、またはT7044合成ペプチド、ヒト気管支上皮細胞の混合溶液、16 HBE、および樹状細胞株DC2.4でトランスフェクトした細胞と比較して、ルシフェラーゼの発現が有意に高かった。 MetLuc mRNAを分解から保護し、外因性メトリジウムルシフェラーゼmRNAのトランスフェクション効率を促進します。キャップされていないMet-mRNAの合成構造が正常に除去されていることを確認してください。Met-mRNA T704とペプチド化合物を慎重に計算してダウンロードし、ポロキサミンナノ粒子を調製して圧縮します。透過型電子顕微鏡法は、ペプチドポロキサミンナノ粒子の形態を観察するために行うことができる。この技術は、研究者が粘膜mRNAワクチンを開発し、関連するすべての細胞の遺伝子治療製剤のハイスループットスクリーニングを可能にするのに役立ちます。

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Efficient Transfection of In vitro Transcribed mRNA in Cultured Cells Using Peptide-Poloxamine Nanoparticles

Retroviral Transduction of T-cell Receptors in Mouse T-cells

マウスT細胞におけるT細胞受容体のレトロウイルス導入

T-cell receptors (TCRs) play a central role in the immune system. TCRs on T-cell surfaces can specifically recognize peptide antigens presented by antigen ...

Genotypic Inference of HIV-1 Tropism Using Population-based Sequencing of V3

V3の人口ベースのシーケンシングを用いたHIV - 1トロピズムの遺伝子型推論

Background: Prior to receiving a drug from CCR5-antagonist class in HIV therapy, a patient must undergo an HIV tropism test to confirm that his or her ...

Seven Steps to Stellate Cells

細胞星状に7つのステップ

Hepatic stellate cells are liver-resident  cells of star-like morphology and are located in the space of Disse between  liver sinusoidal endothelial cells ...

Optimized Protocol for Efficient Transfection of Dendritic Cells without Cell Maturation

細胞の成熟せずに樹状細胞の効率的なトランスフェクションに最適化されたプロトコル

Dendritic cells (DCs) can be considered sentinels of the immune system which play a critical role in its initiation and response to infection1. Detection ...

Quantitative In vitro Assay to Measure Neutrophil Adhesion to Activated Primary Human Microvascular Endothelial Cells under Static Conditions

Quantitative In vitro Assay to Measure Neutrophil Adhesion to Activated Primary Human Microvascular Endothelial Cells under Static Conditions

定量的な<em&gt;インビトロ</em静的な条件の下で活性化された初代ヒト微小血管内皮細胞への好中球の接着を測定するために&gt;アッセイ

The vascular  endothelium plays an integral part in the inflammatory response. During the  acute phase of inflammation, endothelial cells (ECs) are ...

Using Fluorescent Proteins to Visualize and Quantitate Chlamydia Vacuole Growth Dynamics in Living Cells

Using Fluorescent Proteins to Visualize and Quantitate Chlamydia Vacuole Growth Dynamics in Living Cells

視覚化し、定量化するために蛍光タンパク質を使用しました<em&gt;クラミジア</em生細胞内&gt;液胞の成長ダイナミクス

The obligate intracellular bacterium Chlamydia elicits a great burden on global public health. C.&#160;trachomatis is the leading bacterial cause of ...

Killer Artificial Antigen Presenting Cells (KaAPC) for Efficient In Vitro Depletion of Human Antigen-specific T Cells

Killer Artificial Antigen Presenting Cells KaAPC for Efficient In Vitro Depletion of Human Antigen-specific T Cells

効率的なためキラー人工抗原提示細胞（KaAPC）<em&gt;体外</em&gt;ヒト抗原特異的T細胞の枯渇

Current treatment of T cell mediated autoimmune diseases relies mostly on strategies of global immunosuppression, which, in the long term, is accompanied ...

Highly Efficient Transfection of Human THP-1 Macrophages by Nucleofection

ヌクレオによるヒトTHP-1マクロファージの高効率トランスフェクション

Macrophages, as key players of the innate immune response, are at the focus of research dealing with tissue homeostasis or various pathologies. ...

Derivation of T Cells In Vitro from Mouse Embryonic Stem Cells

Derivation of T Cells In Vitro from Mouse Embryonic Stem Cells

T細胞の導出<em&gt;体外</em&gt;マウス胚性幹細胞からの

The OP9/OP9-DL1 co-culture system has become a well-established method for deriving differentiated blood cell types from embryonic and hematopoietic ...