Name: efficient transfection of in vitro transcribed mrna in cultured cells using peptide-poloxamine nanoparticles
Uploaded: 2022-08-17T14:20:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Efficient Transfection of In vitro Transcribed mRNA in Cultured Cells Using Peptide-Poloxamine Nanoparticles at JoVE.com

이 연구는 중국 국립 자연 과학 재단 (NSFC, 보조금 번호 82041045 및 82173764), 중국 과학 기술부의 병인 및 전염병 예방 기술 시스템 연구 (2021YFC2302500), 충칭 인재 : 탁월한 젊은 인재 프로젝트 (CQYC202005027) 및 충칭 자연 과학 재단 (cstc2021jcyj-msxmX0136)의 지원을 받았다. 저자들은 유체역학적 직경 (nm)과 다분산 지수 (PDI)를 측정 한 Xiaoyan Ding 박사에게 감사드립니다.

1. 화학적으로 변형된 mRNA의 시험관내 전사
참고 : RNases는 실험실 솔루션, 기기 표면, 머리카락, 피부, 먼지 등과 같은 환경에서 유비쿼터스이기 때문에 뉴클레아제가없는 튜브, 시약, 유리 제품, 피펫 팁 등을 사용해야합니다. 사용하기 전에 벤치 표면과 피펫을 철저히 청소하고 RNase 오염을 피하기 위해 장갑을 착용하십시오.
<ol><li>DNA 주형의 선형화를 수?...

<ol>
	<li>Nature milestones in vaccines. Springer Nature Available from: <a target="_blank" href="https://www.nature.com/collections/hcajdiajij">https://www.nature.com/collections/hcajdiajij</a> (2020)</li><li>Barbier, A. J., Jiang, A. Y., Zhang, P., Wooster, R., Anderson, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+clinical+progress+of+mRNA+vaccines+and+immunotherapies.">The clinical progress of mRNA vaccines and immunotherapies.</a> Nature Biotechnology. 40 (6), 840-854 (2022).</li><li>Mulligan, M. 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J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfluidic+formulation+of+nanoparticles+for+biomedical+applications.">Microfluidic formulation of nanoparticles for biomedical applications.</a> Biomaterials. 274, 120826 (2021).</li><li>Han, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+confined+impingement+jets+mixer+for+flash+nanoprecipitation.">A simple confined impingement jets mixer for flash nanoprecipitation.</a> Journal of Pharmaceutical Sciences. 101 (10), 4018-4023 (2012).</li></ol>

여기에 기술된 프로토콜은 정의된 특성을 갖는 IVT mRNA 백신 제형의 비용 효율적이고 신속한 생산을 가능하게 할 뿐만 아니라, 유전자 요법과 같은 특정 치료 목적에 따라 PP-sNp 제형을 맞춤화할 수 있는 가능성을 제공한다. IVT mRNA/PP-sNp의 성공적인 생성을 보장하기 위해, 몇 가지 중요한 단계에 각별한 주의를 기울이는 것이 좋습니다. mRNA와 함께 작업할 때, IVT mRNA가 화학적 변형으로 제조되었더라?...

예방 접종은 전염병으로 인한 이환률 및 사망률을 줄이기위한 가장 효율적인 의료 개입 중 하나로 예고되었습니다1. 백신의 중요성은 2019 년 코로나 바이러스 질병 (COVID-19)이 발병 한 이래로 입증되었습니다. 불활성화 또는 약독화된 병원체를 주입하는 전통적인 개념과는 달리, 핵산 기반 백신과 같은 최첨단 백신 접근법은 기존의 전체 미생물 바이러스 또는 박테리아 기반 백신과 관련된 잠재적 안전성 문제를 피하면서 표적 병원체의 면역 자극 특성을 보존하는 데 집중한다. DNA- 및 RNA (즉, 시험관내 전사된 메신저 RNA, IVT mRNA) 둘 다-기반 백신은 감염성 질환 및 암을 포함하는 다양한 질병에 대한 치료 잠재력에 대한 예방적 잠재력을 나타낸다 2,3. 원칙적으로, 핵산 기반 백신의 잠재력은 그들의 생산, 효능 및 안전성과 관련된다4. 이러한 백신은 비용 효율적이고 확장 가능하며 신속한 생산을 가능하게하기 위해 무세포 방식으로 제조 될 수 있습니다.
단일 핵산 기반 백신은 다중 항원을 인코딩하여 수많은 바이러스 변이체 또는 박테리아의 표적을 접종 횟수를 줄이고 탄력적 인 병원체에 대한 면역 반응을 강화할 수 있습니다 5,6. 게다가, 핵산 기반 백신은 바이러스 또는 박테리아 감염의 자연 침입 과정을 모방하여 B 세포 및 T 세포 매개 면역 반응을 가져올 수 있습니다. 일부 바이러스 또는 DNA 기반 백신과 달리 IVT mRNA 기반 백신은 안전성 측면에서 큰 이점을 제공합니다. 이들은 시토졸에서 원하는 항원을 신속하게 발현할 수 있고 숙주 게놈에 통합되지 않아 삽입 돌연변이유발에 대한 우려를 없애고7. IVT-mRNA는 성공적인 번역 후 자동으로 분해되므로 단백질 발현 동역학을 쉽게 조절할 수 있습니다 8,9. 심각한 급성 호흡기 증후군 코로나 바이러스 2 (SARS-CoV-2) 전염병에 의해 촉매 된 전 세계 기업 / 기관의 노력으로 많은 유형의 백신 시장에 출시 될 수있었습니다. IVT mRNA 기반 백신 기술은 큰 잠재력을 보여 주며, 몇 달 내에 모든 표적 항원에 적응할 수있는 신속한 설계와 유연한 능력으로 인해 이전에 예상 된 성공을 처음으로 입증했습니다. 임상 응용 분야에서 COVID-19에 대한 IVT mRNA 백신의 성공은 IVT mRNA 백신 연구 개발의 새로운 시대를 열었을 뿐만 아니라 전염병10,11의 발생을 다루기위한 효과적인 백신의 신속한 개발을위한 귀중한 경험을 축적했습니다.
IVT mRNA 백신의 유망한 잠재성에도 불구하고, 작용 부위(즉, 세포질)로의 IVT mRNA의 효율적인 세포내 전달은 특히 기도(4)를 통해 투여되는 사람들에게 계속해서 주요한 장애물(12)을 제기한다. IVT mRNA는 본질적으로 매우 짧은 반감기 (∼7 h)13을 갖는 불안정한 분자이며, 이는 IVT mRNA가 유비쿼터스 RNase14에 의해 분해되기 매우 쉽다. 선천적 면역계의 림프구는 생체내 적용의 경우에 인식된 IVT mRNA를 삼키는 경향이 있다. 더욱이, IVT mRNA의 높은 음전하 밀도 및 큰 분자량 (1 x 104-1 x 106 Da)은 세포막(15)의 음이온성 지질 이중층을 가로 지르는 그의 효과적인 투과를 손상시킨다. 따라서, IVT mRNA 분자의 분해를 억제하고 세포 흡수(16)를 촉진하기 위해 특정 생체기능성 물질을 갖는 전달 시스템이 요구된다.
네이키드 IVT mRNA가 생체내 조사를 위해 직접 활용된 몇 가지 예외적인 경우와는 별개로, 다양한 전달 시스템이 IVT mRNA를 작용부위 17,18로 운반하는데 사용된다. 이전의 연구들은 단지 몇몇 IVT mRNA들이 전달 시스템(19)의 도움 없이 시토졸에서 검출된다는 것을 밝혀냈다. 프로타민 축합에서 지질 캡슐화(20)에 이르기까지 현장에서 지속적인 노력으로 RNA 전달을 개선하기 위한 수많은 전략이 개발되었다. 지질 나노입자(LNPs)는 mRNA 전달 비히클 중에서 가장 임상적으로 진보된 것으로, 임상적으로 사용하기 위해 승인된 모든 mRNA COVID-19 백신이 LNP 기반 전달 시스템(21)을 사용한다는 사실에 의해 입증되었다. 그러나, LNPs는 제형이 호흡 경로(22)를 통해 전달될 때 효과적인 mRNA 형질감염을 매개할 수 없으며, 이는 점막 면역 반응을 유도하거나 낭포성 섬유증 또는 α1-안티트립신 결핍과 같은 폐 관련 질환을 해결하는 데 이들 제형의 적용을 현저하게 제한한다. 따라서, 이러한 미충족 문제를 해결하기 위해 기도 관련 세포에서 IVT mRNA의 효율적인 전달 및 형질감염을 용이하게 하기 위한 신규한 전달 시스템의 개발이 요구된다.
펩티드-폴록사민 자기조립된 나노입자(PP-sNp) 전달 시스템이 마우스23의 호흡기에서 핵산의 효율적인 형질감염을 매개할 수 있음이 확인되었다. PP-sNp는 다기능 모듈식 설계 접근 방식을 채택하여 다양한 기능 모듈을 나노 입자에 통합하여 신속한 스크리닝 및 최적화(23)를 수행 할 수 있습니다. PP-sNp 내의 합성 펩티드 및 전기적으로 중성인 양친매성 블록 코폴리머(폴록사민)는 IVT mRNA와 자발적으로 상호작용하여 조밀한 구조 및 매끄러운 표면(23)을 갖는 균일하게 분포된 나노입자를 생성할 수 있다. PP-sNip은 마우스(23)의 배양된 세포 및 호흡기에서 IVT mRNA 분자의 유전자 형질감염 효과를 향상시킬 수 있다. 본 연구는 Metridia luciferase (MetLuc-mRNA)를 인코딩하는 IVT mRNA를 함유하는 PP-sNp를 생성하기 위한 프로토콜을 기술한다(도 1). 비틀거리는 헤링본 혼합 설계를 사용하는 미세유체 혼합 장치를 통한 제어 및 신속한 혼합이 이 프로토콜에 활용됩니다. 이 절차는 실행하기 쉽고 더 균일 한 크기의 PP-sNp를 생성 할 수 있습니다. 미세유체 혼합기를 이용한 PP-sNp 생산의 일반적인 목표는 잘 조절된 방식으로 mRNA 복합체화를 위한 PP-sNp를 생성하고, 따라서 시험관내에서 효율적이고 재현 가능한 세포 형질감염을 가능하게 하는 것이다. 본 프로토콜은 MetLuc-mRNA를 함유하는 PP-sNp의 제조, 조립 및 특성화를 기술한다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>BamHI</td>
			<td>Takara</td>
			<td>1010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cap 1 capping system</td>
			<td>Jinan</td>
			<td>M082</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dendritic cell-line</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>SCC142</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNA sequence</td>
			<td>Genescript</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human bronchial epithelial cells</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>SCC150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KpnI</td>
			<td>Takara</td>
			<td>1068</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LP</td>
			<td>Beyotime</td>
			<td>C0533</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lithium chloride</td>
			<td>APEXBio</td>
			<td>B6083</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Malvern Zetasizer Nano ZS90</td>
			<td>Malvern</td>
			<td>NB007605</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microfluidic chip</td>
			<td>ZHONGXINQIHENG</td>
			<td>Standard PDMS chip</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microplate readers</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>Varioskan lux</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NanoDrop One</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>ND-ONE-W (A30221)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nuclease-free water</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>AM9932</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OptiMEM</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>31985070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-streptomycin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pseudouridine</td>
			<td>APE&#215;Bio</td>
			<td>B7972</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>QIAprep Spin Miniprep Kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>27106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quanti-Luc</td>
			<td>InvivoGen</td>
			<td>Rep-qlc2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RiboRuler High Range RNA Ladder</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>SM1821</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNase-free conical tube</td>
			<td>Biosharp</td>
			<td>BS-100-M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI Medium 1640</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>C11875500BT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe pump</td>
			<td>Chemyx</td>
			<td>Fusion 101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T7 transcription Kit</td>
			<td>Jinan</td>
			<td>E131</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
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efficient transfection of in vitro transcribed mrna in cultured cells using peptide-poloxamine nanoparticles

시험관 내 전사 메신저 RNA (mRNA) 백신은 코로나 바이러스 질병 2019 (COVID-19) 전염병에 맞서 싸울 수있는 엄청난 잠재력을 보여주었습니다. 효율적이고 안전한 전달 시스템은 mRNA의 깨지기 쉬운 특성으로 인해 mRNA 백신에 포함되어야 한다. 자체 조립된 펩타이드-폴록사민 나노입자(PP-sNp) 유전자 전달 시스템은 핵산의 폐 전달을 위해 특별히 설계되었으며 성공적인 mRNA 트랜스펙션을 매개하는 데 유망한 능력을 표시합니다. 여기서, PP-sNap을 제조하기 위한 개선된 방법이 PP-sNap이 어떻게 메트리디아 루시퍼라제(MetLuc) mRNA를 캡슐화하고 배양된 세포를 성공적으로 형질감염시키는지에 대해 상세히 설명한다. MetLuc-mRNA는 선형 DNA 주형으로부터 시험관내 전사 과정에 의해 수득된다. PP-sNp는 미세 유체 혼합기를 사용하여 합성 펩타이드 / 폴록사민과 mRNA 용액을 혼합하여 PP-sNp의 자체 조립을 가능하게하여 생산됩니다. PP-sNp의 전하는 후속적으로 제타 전위를 측정함으로써 평가된다. 한편, PP-sNp 나노입자의 다분산도 및 유체역학적 크기는 동적 광산란을 이용하여 측정된다. mRNA/PP-sNp 나노입자는 배양된 세포로 형질감염되고, 세포 배양물로부터의 상청액은 루시퍼라제 활성에 대해 분석된다. 대표적인 결과는 시험관내 형질감염에 대한 그들의 능력을 입증한다. 이 프로토콜은 차세대 mRNA 백신 전달 시스템 개발에 빛을 비출 수 있습니다.

재조합 플라스미드를 분해하여 선형화된 DNA 주형을 생성하였다(도 2A). 기술된 프로토콜을 사용하여, T7 시험관내 전사 키트는 20 μL 반응 당 최대 80-120 μg의 캡핑되지 않은 MetLuc-mRNA 및 100 μL 반응 당 50-60 μg의 캡핑된 MetLuc-mRNA를 생산할 수 있다. 전기영동으로 분석할 때, 고품질의 무손상 MetLuc-mRNA는 도 2B에 표시된 바와 같이 단일하고 명확한 밴드?...

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Efficient Transfection of In vitro Transcribed mRNA in Cultured Cells Using Peptide-Poloxamine Nanoparticles

자체 조립된 펩타이드-폴록사민 나노입자(PP-sNp)는 미세유체 혼합 장치를 사용하여 개발 되어 시험관 내 전사된 메신저 RNA를 캡슐화하고 전달합니다. 기술된 mRNA/PP-sNip는 배양된 세포를 시험관내에서 효율적으로 형질감염시킬 수 있었다.

펩티드-폴록사민 나노입자를 사용하여 배양된 세포에서 시험관내 트랜스크립션된 mRNA의 효율적인 형질감염

In vitro transcribed messenger RNA (mRNA) vaccines have displayed enormous potential in fighting against the coronavirus disease 2019 (COVID-19) pandemic. ...

펩티드-폴록사민 나노입자는 잠재적인 폐 mRNA 전달 시스템 중 하나이다. 우리의 프로토콜은 펩타이드-폴록사민 나노 입자를 더 높은 생산성과 효율로 만들어 점막 mRNA 백신의 개발을 용이하게합니다. 이 기술에 필요한 재료는 저렴하며 짧은 시간에 프로토콜을 완료 할 수 있습니다.상기 펩타이드-폴록사민 나노입자는 효율적인 mRNA 형질감염을 매개하는 능력을 갖는다. 펩타이드-폴록사민 나노입자는 인간 기관지 상피 세포에서 성공적인 mRNA 형질감염을 나타냈으며, 이는 점막 COVID-19 백신, 폐암 치료 및 낭포성 섬유증 유전자 치료에 대한 추가 적용을 의미합니다. 나는 개인이 실험을 시작하기 전에 관련 분야와 프로토콜 및 많은 기술에 대한 기본 지식을 가질 것으로 기대합니다.메트리디아 루시퍼라아제의 개방 판독 프레임을 합성하고 pUC57 벡터에 클로닝한 후, 섭씨 37도에서 1시간 동안 BamHI 및 KpnI를 사용하여 선형화된 DNA 주형을 제조하였다. 원고에 기재된 바와 같이 T7 전사 키트 및 슈두리딘을 사용하여 mRNA 합성을 위한 20-마이크로리터 부피의 반응을 준비한다. 성분을 철저히 혼합하고 섭씨 37도에서 3 시간 동안 배양하십시오.이어서, 캡핑되지 않은 IVT mRNA 50 마이크로그램의 2차 구조를 섭씨 65도에서 10분 동안 가열하여 제거한다. IVT mRNA 캡핑에 Cap 1 캡핑 시스템을 사용하고, 섭씨 37도에서 30-60분 동안 S-아데노실메티오닌 및 2'O-메틸트랜스퍼라제를 사용하여 7-메틸구아노신 캡 구조를 변형하여 Cap 1을 제조합니다. 캡핑된 IVT mRNA의 농도를 UV-가시광선 분광광도계로 측정합니다.RNA 마커를 사용하여 18% 포름알데히드를 포함하는 1% 포름알데히드 변성 아가로스 겔에서 캡핑된 IVT mRNA의 분자 크기를 분석합니다. T704를 뉴클레아제가 없는 물에 가용화하여 폴록사민 704의 밀리리터당 10 밀리그램 스톡 용액을 준비합니다. 펩티드를 뉴클레아제가 없는 물에 가용화하여 펩티드의 밀리리터 원액당 2 밀리그램을 준비한다.준비된 용액을 섭씨 4도에서 보관하십시오. IVT mRNA를 얼음에서 해동합니다. 튜브를 열기 전에 튜브를 실온에서 3 초 동안 300 배 G로 원심 분리하고 IVT mRNA 용액을 뉴 클레아 제가없는 물로 희석하십시오.T704 용액을 마이크로리터당 8마이크로그램으로 희석하고 합성 펩타이드 용액을 마이크로리터당 0.555마이크로그램으로 각각 뉴클레아제가 없는 물로 희석하여 T704 및 합성 펩타이드 혼합 용액을 준비합니다. 추가 사용 전에 혼합 용액을 실온에서 15분 동안 인큐베이션한다. IVT mRNA 용액을 1 밀리리터 주사기에 넣고 주사기 팁의 공극이나 기포를 피하십시오.주사기를 회전 블록 옆에있는 카트리지의 한쪽면에 넣습니다. 그런 다음 1 밀리리터 주사기에 T704 및 합성 펩타이드 혼합 용액을 채우고 주사기 끝의 기포 또는 에어 갭을 제거합니다. 주사기를 펌프의 다른 입구에 놓고 분당 4-10 밀리리터의 총 유량으로 펌프를 설정하십시오.혼합 장치의 유로 끝에 혼합 IVT mRNA / PP-sNp 용액을 수집하기 위해 10 밀리리터 RNase가없는 원추형 튜브를 놓습니다. 펌프를 실행하여 혼합을 시작하고 매개 변수가 올바르게 입력되었는지 확인하십시오. 6초 동안 펌프를 가동한 후 원뿔형 튜브에서 IVT mRNA/PP-sNp 샘플을 수집합니다.인간 기관지 상피 세포 및 수지상 세포주를 형질감염 24시간 전에 96-웰 플레이트에 플레이트시켰다. 10% 열 불활성화 태아 소 혈청과 1% 페니실린 스트렙토마이신이 보충된 배양 배지에서 세포를 성장시킵니다. 성장 배지를 제거한 후, 플레이팅된 세포를 웰당 0.2 밀리리터 PBS로 세척한다.170 마이크로리터의 무혈청 배양 배지를 플레이팅된 세포 배양물을 포함하는 각 웰에 첨가한다. 그런 다음 0.4마이크로그램의 메트리디아 루시퍼라아제 mRNA를 포함하는 30마이크로리터의 IVT mRNA/PP-sNp 제형을 각 웰에 현명하게 추가합니다. IVT mRNA / PP-sNp 제형으로 세포를 섭씨 37 도의 가습 된 5 % 이산화탄소가 풍부한 분위기에서 4 시간 동안 배양합니다.형질주입 배지를 흡인하고 10% 열 불활성화 태아 소 혈청과 1% 페니실린 스트렙토마이신이 보충된 신선한 배양 배지 0.2밀리리터를 추가합니다. 앞서 입증된 바와 같이 형질감염된 세포를 24시간 동안 인큐베이션하고, 각 웰로부터 검출될 상청액을 수집한다. 코엘렌테라진 기질에 PBS를 첨가하여 새로운 분석 용액을 준비합니다.10 초 동안 와동하여 용액을 완전히 혼합하십시오. 수집된 상청액 50 마이크로리터를 96-웰 플레이트에 첨가한다. 1, 000 밀리 초의 판독 시간으로 마이크로 플레이트 리더를 설정하고 수동 또는 자동 주입으로 각 웰에 30 마이크로 리터의 콜렌 테라 진 용액을 첨가하십시오.상청액에 코엘렌테라진 용액을 첨가한 직후, 시작을 클릭하여 발광 신호를 측정합니다. 재조합 플라스미드를 단리하고 소화시켜 선형화된 DNA 주형을 생성하였다. 시험관내 전사는 상향 캡핑되고 캡핑된 MetLuc mRNA를 생성하였다.메트리디아 루시퍼라아제 mRNA/PP-sNp로 형질감염된 세포는 시판되는 지질 기반 형질주입 시약, 네이키드 메트리디아 루시퍼라아제 mRNA, PBS 또는 T7044 합성 펩타이드, 인간 기관지 상피 세포의 혼합 용액, 16 HBE 및 수지상 세포주 DC2.4로 형질감염된 세포에 비해 유의하게 더 높은 루시퍼라아제 발현을 나타냈습니다. MetLuc mRNA를 분해로부터 보호하고 외인성 메트리디아 루시퍼라제 mRNA의 형질감염 효율을 촉진합니다. 캡이 없는 Met-mRNA의 합성 구조가 성공적으로 제거되었는지 확인하십시오. Met-mRNA T704와 펩타이드 화합물을 신중하게 계산하고 다운로드하여 폴록사민 나노입자를 준비하고 압축합니다.투과전자현미경을 수행하여 펩타이드-폴록사민 나노입자의 형태를 관찰할 수 있다. 이 기술은 연구자들이 점막 mRNA 백신을 개발하고 모든 관련 세포에 대한 유전자 치료 제형의 고처리량 스크리닝을 가능하게 하는 데 도움이 됩니다.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Efficient Transfection of In vitro Transcribed mRNA in Cultured Cells Using Peptide-Poloxamine Nanoparticles

Retroviral Transduction of T-cell Receptors in Mouse T-cells

마우스 T - 세포에서 T - 세포 수용체의 Retroviral 전달

T-cell receptors (TCRs) play a central role in the immune system. TCRs on T-cell surfaces can specifically recognize peptide antigens presented by antigen ...

연구

면역학 및 감염병학

Genotypic Inference of HIV-1 Tropism Using Population-based Sequencing of V3

V3의 HIV - 1 Tropism의 Genotypic 추론 사용 인구를 기반 시퀀싱

Background: Prior to receiving a drug from CCR5-antagonist class in HIV therapy, a patient must undergo an HIV tropism test to confirm that his or her ...

Seven Steps to Stellate Cells

셀을 별 모양으로 일곱 단계

Hepatic stellate cells are liver-resident  cells of star-like morphology and are located in the space of Disse between  liver sinusoidal endothelial cells ...

Optimized Protocol for Efficient Transfection of Dendritic Cells without Cell Maturation

세포 성숙없이 돌기 세포의 효율적인 Transfection을 위해 최적화된 프로토콜

Dendritic cells (DCs) can be considered sentinels of the immune system which play a critical role in its initiation and response to infection1. Detection ...

Quantitative In vitro Assay to Measure Neutrophil Adhesion to Activated Primary Human Microvascular Endothelial Cells under Static Conditions

Quantitative In vitro Assay to Measure Neutrophil Adhesion to Activated Primary Human Microvascular Endothelial Cells under Static Conditions

정량<em&gt; 체외</em정적 조건에서 활성화 된 기본 인간의 미세 혈관 내피 세포에 호중구 부착을 측정하는&gt; 분석

The vascular  endothelium plays an integral part in the inflammatory response. During the  acute phase of inflammation, endothelial cells (ECs) are ...

Using Fluorescent Proteins to Visualize and Quantitate Chlamydia Vacuole Growth Dynamics in Living Cells

Using Fluorescent Proteins to Visualize and Quantitate Chlamydia Vacuole Growth Dynamics in Living Cells

시각화 및 정량하기 위해 형광 단백질을 사용하여<em&gt; 클라미디아</em&gt; 액포 성장 역학 살아있는 세포에서

The obligate intracellular bacterium Chlamydia elicits a great burden on global public health. C.&#160;trachomatis is the leading bacterial cause of ...

Killer Artificial Antigen Presenting Cells (KaAPC) for Efficient In Vitro Depletion of Human Antigen-specific T Cells

Killer Artificial Antigen Presenting Cells KaAPC for Efficient In Vitro Depletion of Human Antigen-specific T Cells

효율적인위한 킬러 인공 항원 제시 세포 (KaAPC)<em&gt; 체외</em&gt; 인간의 항원 특이 T 세포의 고갈

Current treatment of T cell mediated autoimmune diseases relies mostly on strategies of global immunosuppression, which, in the long term, is accompanied ...

Highly Efficient Transfection of Human THP-1 Macrophages by Nucleofection

Nucleofection에 의해 인간의 THP-1 대 식세포의 고효율 형질

Macrophages, as key players of the innate immune response, are at the focus of research dealing with tissue homeostasis or various pathologies. ...

Derivation of T Cells In Vitro from Mouse Embryonic Stem Cells

Derivation of T Cells In Vitro from Mouse Embryonic Stem Cells

T 세포의 유도<em&gt; 체외</em&gt; 마우스 배아 줄기 세포에서

The OP9/OP9-DL1 co-culture system has become a well-established method for deriving differentiated blood cell types from embryonic and hematopoietic ...